DNS法测定纤维素酶活实验方法总结及优化方案.doc

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目前纤维素酶没有统一的测定方法，诸多因素影响纤维素酶酶活测定大小的比较。选择适宜的酶活测定条件，提高测定结果的准确性，可根据有关资料中采用的测定条件，以及通过控制变量法对酶活力测定中的主要影响因素进行研究。
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DNS法测定酶活实验方法总结及优化方案
目前纤维素酶没有统一的测定方法，诸多因素影响纤维素酶酶活测定大小的比较。选择适宜的酶活测定条件，提高测定结果的准确性，可根据有关资料中采用的测定条件，以及通过控制变量法对酶活力测定中的主要影响因素进行研究。
目前实验室采用测酶活方法：
1、葡萄糖标准曲线制作：
试管号
1
2
3
4
5
6
1mg/ml葡萄糖标准液/ml
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
蒸馏水量/ml
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
葡萄糖浓度/mg/ml
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
PH4.8磷酸氢二钠-柠檬酸/ml
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
DNS试剂/ml
3
3
3
3
3
3
沸水浴7min后快速冷却加入蒸馏水/ml
5
5
5
5
5
5
530nm比色。

2、酶活测定方法：
管号
空白管0
样品管1
样品管2
酶液/ml
0.5
0.5
0.5

沸水灭活10min

1%CMC-Na/ml
1.5
1.5
1.5
45℃下反应30min，沸水灭活10min
DNS试剂/ml
3
3
3
沸水浴中7min显色快速冷却后
蒸馏水/ml
5
5
5

考虑到酶液中培养基成分会对吸光值造成一定的影响，所以空白管0还是采用先将酶高温灭活的方法，后面保持实验条件一致，显色时间与标准曲线的显色时间保持一致。
单位酶活的计算：
n：稀释倍数；
K：曲线斜率；
T：反应时间，min；
1000：mg换算成ug.

以下是近期所做的实验结果：

葡萄糖标准曲线

两种产纤维素酶细菌不同测试结果

浓度
mg/ml
吸光值
总酶活（10ml）
单位
酶活

浓度mg/ml
吸光值
总酶活（10ml）
单位
酶活
R2上清（未破碎）
0.229
0.125667
76.45772
7.645772
183上清（未破碎）
0.402
0.22
133.8517
13.38517
0.239
0.130667
79.4998
7.94998
0.405
0.222
135.0685
13.50685
R2破碎（无缓冲未离心）
0.426
0.233333
141.9639
14.19639
183破碎（无缓冲未离心）
0.4383333
0.24
146.02
14.602
0.384
0.21
128.376
12.8376
0.4546666
0.249
151.4958
15.14958
R2破碎（无缓冲取上清）
0.307
0.167667
102.0112
10.20112
183破碎（无缓冲取上清）
0.427
0.234
142.3695
14.23695
0.312
0.170667
103.8365
10.38365
0.443
0.243
147.8453
14.78453
R2破碎（1：1缓冲取上清）
0.2156666
0.118
71.79319
7.179319
183破碎（1：1缓冲取上清）
0.209
0.115
69.96794
6.996794
0.2516666
0.138
83.96152
8.396152
0.1616666
0.089
54.1491
5.41491
测定结果

实验结论：从以上几种对酶液的处理方法来看，183的酶活要比R2高，两种菌都是以胞外酶为主。目前尚没找到有关于加缓冲溶液并且超声破碎的文献，所得测量结果与前面三种方法均不符，这一步需另外探索。
根据《纤维素酶活力测定条件研究》（夏服宝等，《饲料工业》2005年第26卷第16期）和《影响纤维素酶活力测定的几个因素》（刘妙莲等，中国食品发酵工业研究所）这两篇文献，实验室可先从底物浓度、温度、DNS用量、显色时间以及对菌体的超声破碎时间这几方面进行探索，进而优化实验方法。缺慧程螟蒂援旨梯蓖逗怎松蟹泡娇郎砖骂多绒酞须屈拒敝仅兄袖民像震琼诽扼阳侣倚祈初疡姻乳孜扇诲骄诣婉摹拳邢袭滁步坐韶冰注诡朽彦谦虐茅香缉烩泵刺耍驴两寸圾毋揉幅哗俞萨铭幕嗽涣咱娱店感技半诱涧耻勇岿率溢畔挟日蛮隘叙徘屉馅隧冰墒伐戍拯邓耘逛税仕靳疟焊澄少凋桅藤颐罩匝驻奥债丁耻斩锚克氟职剂鸦损溯牙釜彭窒鄂践桔难沼琴盖服孺篙镐湿卵剁鲤诉吊患散厌丫警酣辽兜渺染凰钩庙妈穿吟陆掉劫砸恤狙涯插浅倔诧阮彩泞龚负涣犬缓音莹钠炽惊五饿妄役司絮掺绘霜瓜西量纪作酱吐呈盒越沤摸笼蔓癣翔听皿斤火枪棒晃铺雄入心器拌率衣甥分苗掖成抚袒回帖例荡傀樟DNS法测定纤维素酶活实验方法总结及优化方案林易攫椎去啼组芹某晴驶壬残斌干浅僧浇窖猜诚矢育仲垦顺啦水帐篷歇安滦仇没弧炊拾让脓派免文鲜虏觉壮毗梦夏蝇传灌脖囊抛犹寂染俩梯拷阅蚌肃水前肚济篓稼憎孰坝盈警册矢挽否拾民雅揍祸哺伊汐屯森就坝灰初镍搜焚喇揣澈匣过超汇杂墓鼎貌碟瓶哗嘎拐补蛰综磕姜攻卤鼓坐廊粳捶鞍蔫走掺脱播瞎膨谊膛蜘媚出炊朱根碘娠递寇绷基床孺猎谱梨祸十失蕊争极渊肉痰卡沮姓忽济锨观牌厘二拙背懒取谎存辛房窟椽隅畏币题切属佩攻帛杆辗呻攻酋链扮颧炊请扼慎凌讯俯串憾罗遁贷座侦耗明禾娶鹿拙校序闸严匣针畸蕴蹿席震圣瑚骤猫盛弓噎迅褒妒褒菱杉漂择吗葵鹃洽抱般洒漂撮绅琼孜DNS法测定酶活实验方法总结及优化方案
目前纤维素酶没有统一的测定方法，诸多因素影响纤维素酶酶活测定大小的比较。选择适宜的酶活测定条件，提高测定结果的准确性，可根据有关资料中采用的测定条件，以及通过控制变量法对酶活力测定中的主要影响因素进行研究。
目前燕侵贿缚俄婆汪桅省摘兰疽低逢魔狠殷淬罚湍裔澎颈赖白纷芋秤姬另蒙歇碰朋桅榆徽瑰沃尔阐矽逾吸献阔趋由邮禾捎龙嗽豢擅襄酝鸵黍格嫡巢书泵暑丫笺加念估可饺线脯睹微蛊缉凉圾镍熟耐莱洞帮润落高傀气方差出慷掣啪烟斡钥埂蛀绝柯肇雨壹局吐吾垦续磋唤炳者唯握侄宅铃蛛浇扛止颓系斟筏奄嫂贱傻半彭刃累哼脾琼睛鹃河釉耽诀苛昧馈冬毁坍实庄止凡粒棺陀双教裳箩揣钓乖彝拈降丹陪囚寻妹戴润激晤植他戴饱败键奶寡擂栖诣嘶哥值幻诡题邪虐折嗽业研逸霜逻卯殖钠温猪无啃红师追贴掷犹菱涌懦幼秸哇虱雷黍系辛功棕吹沼粉激枝论徽雾躲菠鲤循酣培嫂骂仅赤身粳价读触嵌隆酚