大豆远缘嫁接诱变技术规程黑龙江质量技术监督局.doc

ICS 67.080.20
B 31
备案号：
DB23
黑龙江省地方标准
DB 23/ TXXXX—2012

大豆远缘嫁接诱变技术规程
Technical Procedures of Distant-Grafting Mutagenesis in Soybean
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（本稿完成日期：20141205）
2012 - XX - XX发布
2012 - XX - XX实施
    黑龙江省质量技术监督局   发布

目 次
目 次 Ⅰ
前言 Ⅱ
大豆远缘嫁接诱变技术规程 1
1 范围 1
2 规范性引用文件 1
3 砧木的选择和培育 1
3.1 砧木的选择 1
3.2 砧木的培育 1
4 砧木和大豆接穗的接龄 1
4.1 砧木的接龄 1
4.2 大豆接穗的接龄 1
5 嫁接 1
5.1 砧木钻孔 2
5.2 接穗修整 2
5.3 接穗插入 2
5.4 黏土包埋 2
6 嫁接后管理 2
6.1 遮荫 2
6.2 补水 2
6.3 去除自生根 2
6.4 去除砧木主茎 2
6.5 后期管理 2
7 突变体鉴定 2
附　录　A 3
前  言
本标准依据GB/T 1.1-2009的起草规则编写。
本标准由黑龙江省质量技术监督局提出。
本标准由中国科学院东北地理与农业生态研究所农业技术中心与黑龙江省农业科学院牡丹江分院共同起草。
本标准主要起草人：潘相文、张秋英、孙晓环、王燕平。

大豆远缘嫁接诱变技术规程
1　 范围
本标准规定了大豆远缘嫁接诱变技术体系中砧木的选择和培育、砧木和大豆接穗的接龄、嫁接技术、嫁接后的管理及突变体鉴定等。
本标准适用于大豆远缘嫁接技术。
2　 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 1352 大豆
GB 4285 农药安全使用标准
GB/T 8321 农药合理使用准则(所有部分)
NY/T 495 东北地区大豆生产技术规程
NY/T 496 肥料合理使用准则 通则
3　 砧木的选择和培育
3.1　 砧木的选择
宜选用大姜、洋姜、百合、甘薯、马铃薯、山药等块根或块茎类植物，以及蓖麻、向日葵、芝麻、玉米、高粱等粗茎植物，另外西葫芦、南瓜等亦可作砧木使用。
3.2　 砧木的培育
选用当地耕层土壤过筛后与干净的河沙按2∶1混合均匀作为砧木栽培的基质，在适宜土壤水分和温度下，将砧木的块根、块茎或种子播于基质中，覆土3 cm～5 cm。出苗后，及时补充水分和肥料。对于有些砧木常产生簇生苗（如甘薯苗），需要分根移栽到新的基质中继续培养。砧木培养过程中肥料施用按照NY/T 496的规定执行。
4　 砧木和大豆接穗的接龄
4.1　 砧木的接龄
正常情况下，砧木苗龄要比大豆接穗早30 d～45 d，以直径0.8 cm～1.0 cm为宜。接龄因播种时期和砧木类型有所不同。
4.2　 大豆接穗的接龄
宜在大豆出苗后7 d～9 d嫁接。
5　 嫁接
5.1　 砧木钻孔
嫁接时，先用竹片刮走砧木主茎附近的表层土，在到离地面最近的茎节，用酒精棉消毒过的手术刀片垂直切掉部分节痕，然后迅速用消毒过的末端削为楔形的竹签以30 °～45 °倾斜角单方向旋转钻一个孔，以竹签的尖端刚好到达茎髓腔为宜，孔的大小和深度应根据接穗幼苗茎的粗细和接穗削成的楔形长度来确定。孔的深度为1.0 cm～1.5 cm，直径为0.2 cm～0.3 cm。
5.2　 接穗修整
选取生长健壮的大豆幼苗，根系用清水冲洗干净后用滤纸拭干，用壁纸刀片从着生根毛的最上部向下削成楔形，3 刀～5 刀完成，楔形的长度一般为1.0 cm～1.5 cm。
5.3　 接穗插入
拔出竹签后，立即将削好的接穗一次性用力均匀地插入砧木的孔中，以接穗末端刚好接触孔的底部为宜。
5.4　 黏土包埋
接穗插入砧木的孔中之后，立刻用湿度为60%～70%的黏土包埋接合处，并固定接穗。
6　 嫁接后管理
6.1　 遮荫
包埋接合处后把嫁接体转移到遮荫棚中，放置30 d～45 d，透光率逐步增大，直至接近自然光照。遮阴时间根据接穗与砧木的愈合程度以及砧木的生长发育状况来确定，但一般不少于30 d。
6.2　 补水
一般每天补水一次。
6.3　 去除自生根
嫁接7 d后，每天检查接穗的自生根，若有，则及时用手术刀片剔除，直到嫁接后的45 d，保证接穗完全寄生在砧木上。
6.4　 去除砧木主茎
停止去除接穗自生根后，切除砧木主茎离表土层10 cm以上的部分。
6.5　 后期管理
去除砧木主茎后5 d，将嫁接体转移到正常生长条件下，直到接穗完全成熟，并收获G0代种子。
7　 突变体鉴定
在嫁接后的G1～G3代都会出现不同类型的突变体。不同嫁接后代的种植参照NY/T 495、GB 4285、GB/T 8321和NY/T 496的规定执行。嫁接后代可采用形态鉴定、品质鉴定或分子鉴定等手段找到所需要的突变体。突变体类型按照GB 1352的规定执行。突变体鉴定参见附录A。

附　录　A
（资料性附录）
突变体鉴定
A
A.1 形态学鉴定
将嫁接后收获的种子（G0）按组合播于盛有耕层土的塑料桶中，同时播种原接穗种子作为对照。出苗后开始陆续调查茎色、茸毛色、叶形、叶色、花色、花期、结荚习性、育性、分枝数、熟期等形态性状。收获后获得G1代种子，考察籽粒大小、籽粒颜色、种脐颜色等形态性状，根据性状表现鉴定出这些形态性状的突变体。在G2和G3代采用同样的方法对这些形态性状进行调查，并鉴定形态性状的突变体。
A.2 品质鉴定
用近红外品质分析仪对G1～G3代收获的种子及原接穗种子测定蛋白质和油含量；用高效液相色谱仪测定维生素E、皂甙和异黄酮含量；用氨基酸分析仪测定各种氨基酸含量。通过比较分析，确定差异明显的品质性状突变体。
A.3 分子鉴定
用CTAB法提取G1～G3代及原接穗幼嫩叶片总DNA，用RFLP、RAPD、SSR等引物进行PCR扩增，扩增产物经琼脂糖电泳后在凝胶成像仪上照相，根据扩增条带的多态性差异确定突变体。