58食品微生物学检验菌落总数测定.pdf

中中华华人人民民共共和和?家家标标准准GB 4789.22010 食品安全?家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 National food safety standard Food microbiological examination?Aerobic plate count 中中 华华 人人 民民 共共 和和?卫卫 生生 部部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施GB 4789.22010 I 前 言 本标准代?GB/T 4789.2-2008?食品卫生微生物学检验 菌落总数测定?本标准?GB/T 4789.2-2008相比，?要修改如?修改了标准的中英文?修改了菌落总数计算公式中的解释?修改了?养?和试剂?删除了第二法 菌落总数PetrifilmTM 测试?法?本标准的附录A是规范性附录?本标准所代?标准的历次?本发布情况?GB 4789.2-1984?GB 4789.2-1994?GB/T 4789.2-2003?GB/T 4789.2-2008?GB 4789.22010 1 食品安全?家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 1 范围 本标准规定了食品中菌落总数?Aerobic plate count?的测定方法?本标准适用于食品中菌落总数的测定?2 术语和定义 2.1 菌落总数 aerobic plate count 食品检样经过处理，在一定条件?如?养?养温度和?养时间等?养?，所得每g?mL?检样中形成的微生物菌落总数?3 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及?养设备外，?他设备和材料如?3.1 恒温?养箱?36 1，30 1?3.2 冰箱?2 5?3.3 恒温水浴箱?46 1?3.4 天平?感量?0.1 g?3.5 均质器?3.6 振荡器?3.7 无菌吸管?1 mL?0.01 mL 刻度?10 mL?0.1 mL 刻度?或微量移液器及吸头?3.8 无菌锥形瓶?容量 250 mL?500 mL?3.9 无菌?养皿?直?90 mm?3.10 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸?3.11 放大镜或/和菌落计数器?4?养?和试剂 4.1 平板计数琼脂?养?附录 A 中 A.1?4.2 磷酸盐缓冲液?附录 A 中 A.2?GB 4789.22010 2 4.3 无菌生理盐水?附录 A 中 A.3?5 检验程序 菌落总数的检验程序?1?1 菌落总数的检验程序 6 操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品?取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min10000 r/min 均质 1 min2 min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍?式均质器拍打 1 min2 min，制成 1:10 的样品匀液?6.1.2 液体样品?以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶?瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠?中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液?36 1 4片 具2 具 检 样 25 g(mL)样品+225 mL 稀释液，均质 10 倍系列稀释 选择 2 个3 个适宜稀释度的样品匀液，各取 1 mL 分别加入无菌?养皿内?养 计数各平板菌落数 计算菌落总数 每皿中加入 15 mL20 mL 平板计数琼脂?养?，混匀 报 告 GB 4789.22010 3 6.1.3 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL，沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中?注意吸管或吸头尖端?要触及稀释液面?，振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使?混合均匀，制成 1:100 的样品匀液?6.1.4 按 6.1.3 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液?每递增稀释一次，换用 1 次 1 mL 无菌吸管或吸头?6.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择 2 个3 个适宜稀释度的样品匀液?液体样品可包括原液?，在进行 10 倍递增稀释时，吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿?时，分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照?6.1.6 及时将 15 mL20 mL 冷?至 46 的平板计数琼脂?养?可放置于 46 1 恒温水浴箱中保温?倾注平皿，并转动平皿使?混合均匀?6.2?养 6.2.1?琼脂凝固?，将平板翻转，36 1?养 48 h2 h?水产品 30 1?养 72 h3 h?6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂?养?表面弥漫生长的菌落时，可在凝固?的琼脂表面覆盖一薄层琼脂?养?约 4 mL?，凝固?翻转平板，按 6.2.1 条件进行?养?6.3 菌落计数 可用肉眼?察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量?菌落计数以菌落形成单?colony-forming units，CFU?表示?6.3.1 选取菌落数在 30 CFU300 CFU 之间?无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数?于 30 CFU 的平板记录?体菌落数，大于 300 CFU 的可记录?多?可计?每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数?6.3.2?中一个平板有较大?状菌落生长时，则?宜采用，而应以无?状菌落生长的平板作?该稀释度的菌落数?若?状菌落?到平板的一半，而?余一半中菌落分布又很均匀，?可计算半个平板?乘以2，代表一个平板菌落数?6.3.3 当平板?现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作?一个菌落计数?7 结果与报告 7.1 菌落总数的计算方法 7.1.1 若只有一个稀释度平板?的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作?每 g?mL?样品中菌落总数结果?7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式?1?计算?1?式中?N样品中菌落数?C平板?含适宜范围菌落数的平板?菌落数之和?n1第一稀释度?稀释倍数?平板个数?n2第二稀释度?高稀释倍数?平板个数?d稀释因子?第一稀释度?dnnCN)1.0(21+=GB 4789.22010 4 示例?稀释度 1:100?第一稀释度?1:1000?第二稀释度?菌落数?CFU?232，244 33，35?述数据按7.2.2数?修约?，表示?25000或2.5104?7.1.3 若所有稀释度的平板?菌落数均大于 300 CFU，则对稀释度?高的平板进行计数，?他平板可记录?多?可计，结果按平均菌落数乘以?高稀释倍数计算?7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于 30 CFU，则应按稀释度?的平均菌落数乘以稀释倍数计算?7.1.5 若所有稀释度?包括液体样品原液?平板均无菌落生长，则以小于 1 乘以?稀释倍数计算?7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均?在30 CFU300 CFU之间，?中一部分小于30 CFU或大于300 CFU 时，则以?接近 30 CFU 或 300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算?7.2 菌落总数的报告 7.2.1 菌落数小于 100 CFU 时，按?四舍五入?原则修约，以整数报告?7.2.2 菌落数大于或等于 100 CFU 时，第 3?数?采用?四舍五入?原则修约?，取前 2?数?，?面用 0 代?数?也可用 10 的指数形式来表示，按?四舍五入?原则修约?，采用两?有效数?7.2.3 若所有平板?蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延?7.2.4 若空白对照?有菌落生长，则此次检测结果无效?7.2.5?重取样以 CFU/g?单?报告，体?取样以 CFU/mL?单?报告?dnnCN)1.0(21+=24727022.054410)21.0(235332442322=+=GB 4789.22010 5 附录A?规范性附录?养?和试剂 A.1 平板计数琼脂?plate count agar，PCA?养?A.1.1 成分 胰蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 2.5 g 葡萄糖 1.0 g 琼 脂 15.0 g 蒸馏水 1000 mL pH 7.00.2 A.1.2 制法 将?述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH?分装试管或锥形瓶，121 高压灭菌15 min?A.2 磷酸盐缓冲液 A.2.1 成分 磷酸二氢钾?KH2PO4?34.0 g 蒸馏水 500 mL pH 7.2 A.2.2 制法 贮?液?取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏水中，用大约175 mL的1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1 000 mL?贮?于冰箱?稀释液?取贮?液1.25 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，分装于适宜容器中，121 高压灭菌15 min?A.3 无菌生理盐水 A.3.1 成分 氯化钠 8.5 g 蒸馏水 1 000 mL A.3.2 制法?取8.5氯化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 高压灭菌15 min?