DB34_T 3719-2020染井吉野樱组培育苗技术规程(高清正版）.pdf

ICS 65.CCS B21安2020-1020.01 1 徽染Tech11-27 发布 徽染井吉hnical regu布 安省吉野樱ulations fo安徽省市场地 樱组培or tissue cu 场监督管理方培育苗ulture of 理局 发方DB 技术规Prunus 发 布3标34/T 37规程 yedoensi2020-34 准192020 s-12-27 实准 0 实施DB 34/T 37192020 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽省林业高科技开发中心提出。本文件由安徽省林业局归口。本文件起草单位：安徽省林业高科技开发中心、界首市佳祺农业开发有限公司、安徽天润建筑工程集团有限公司、芜湖市雨田润农业科技股份有限公司、安徽林业职业技术学院、合肥市包河区林业工作站、安徽省农科院农业工程研究所、皖西盐肤木研究所、利辛县东方美景园林绿化工程有限公司。本文件主要起草人：许早时、朱谦、任杰、汪耀、许娟、沈国良、纪坤、殷勇、姚瑶、刘若森、李春生、李葵阳、孙刚、孟可、孔伶俐、李媛、张作坊、胡仲华、江鸿超、雷经洋。DB 34/T 37192020 2 染井吉野樱组培育苗技术规程 1 范围 本文件规定了良种染井吉野樱（Prunus yedoensis）组培育苗中外植体材料的选择、消毒灭菌、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗、移植、苗期管护、质量标准、包装标签和运输、档案记录管理等技术要求。本文件适用于染井吉野樱组培育苗生产作业。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 3095 环境质量标准 LY/T 2289 林木种苗生产经营管理档案 LY/T 2290 林木种苗标签 危险化学品安全管理条例 中华人民共和国国务院令第645号 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 植物组培 plant tissue culture 将从植物体分离出的符合需要的组织、器官或细胞及原生质体等材料，通过无菌操作接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株的技术。3.2 接种 inoculation 将消毒后的外植体或干净培养材料在无菌条件下接入培养容器内培养基中的过程。3.3 消毒 disinfection 通过物理、化学方法去除物体表面大部分有害病原微生物（孢子除外）的过程。3.4 灭菌 sterilization 通过物理和化学方法杀灭一切微生物（包括孢子等）的过程。3.5 外植体 explant 从自然生长的活体植物上获取的用于建立植物组培快繁体系的起始材料。3.6 初代培养 primary culture DB 34/T 37192020 3 直接从机体取下的细胞、组织和器官等材料的培养。3.7 继代培养 subculture 将培养材料从老培养基中转接入新鲜培养基中继续培养的过程。3.8 生根培养 rooting culture 将继代增殖后的无根芽苗转接至生根培养上诱导生根培养得到完整的植株的过程。3.9 炼苗 acclimatization 炼苗是在保护地育苗的情况下，采取放风、降温、适当控水等措施对幼苗强行锻炼的过程。4 外植体材料的选择 4 月6 月从染井吉野樱健壮母株上截取半木质化的腋芽茎段或顶芽等器官作为组培快繁体系的外植体材料。5 消毒灭菌 5.1 洁净 用 1%2%的洗衣粉水浸泡 20 min 30 min，用软毛刷去除外植体表面的尘土等杂质，再用流动的自来水冲洗 2 h4 h。5.2 消毒 洁净后的外植体材料至超净工作台上用质量分数 70%75%乙醇消毒 8 s15 s 后，用无菌水清洗 3 次6 次。5.3 灭菌 用 15%次氯酸钠溶液浸泡 8 min 15 min，用玻璃棒搅拌；无菌水冲洗 4 次6 次，最后用无菌纱布或无菌滤纸吸干外植体表面水珠后待用。消毒剂按照 GB 3095 及中华人民共和国国务院令第645号的规定执行。6 初代培养 诱导培养基为 MS+BA 0.5 mg/L1.0 mg/L+NAA 0.02 mg/L+TDZ 2.0 mg/L 3.0 mg/L+蔗糖20 g/L 30 g/L+琼脂 5.5 g/L6.5 g/L。将经过消毒处理后的染井吉野樱腋芽茎段或顶芽切成 1.5 cm2.5 cm小段接种至上述培养基中。先在 22 25 条件下全暗培养 5 d7 d，然后置于每天光照 10 h12 h，光照强度 1500 lx2000 lx 的培养室中培养，25 d 左右继代一次，直至诱导形成丛生芽。7 继代培养 继代培养基为1/2MS+BA0.5 mg/L0.8 mg/L+NAA0.05 mg/L0.08 mg/L+蔗糖20 g/L30 g/L+琼脂5.5 g/L6.5 g/L。将4.3获得的丛生芽分切成芽块至继代增殖培养基中，置于每天光照10 h12 h，DB 34/T 37192020 4 光照强度约2000 lx，培养温度2225 的条件下培养，多次反复切割进行继代增殖培养，直至得到健壮丛生芽。8 生根培养 生根培养基为1/2MS+NAA0.01 mg/L0.02 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂5.5 g/L 6.5 g/L。将4.4获得的高度约为2.5 cm3.5 cm的健壮芽分切接种至生根培养基中，接种后先在2225左右条件下暗培养 0 d5 d，然后置于光照10 h12 h，光照强度2000 lx，温度为2225 左右的培养室中培养30 d 35 d 即可出瓶。9 炼苗 9.1 生根苗移植条件 在培养容器中生长的根、茎、叶俱全的完整植株，苗高3.5 cm5.5 cm，基部长出3 根5根不定根时，即可进行炼苗。9.2 炼苗方法 将培养容器松开容器盖放置在有散射光的温室中3 d5 d，温度控制在（255）。10 移植 10.1 移植时间 生根瓶苗一般在春季（3月5月）或秋季（9月11月）炼苗移植为宜。10.2 栽培基质 泥炭土、园土及珍珠岩按 5：3：2 的比例混配，用 75可湿性多菌灵粉剂 1000 倍溶液喷透混匀，装入穴盘中并稍压实待用。10.3 洗苗 取出组培苗，放入自来水中将表面培养基漂洗干净，并用 75可湿性多菌灵粉剂 1500 倍溶液浸泡 20 min30 min，最后用自来水冲洗一次。操作过程中注意轻拿轻放。10.4 移植方法 在穴盘基质上打孔，孔径 1 cm 左右，孔深 3 cm。将洗净的组培苗植入孔中，保持根系舒展。10.5 摆放 穴盘苗按移植日期在温室苗床上整齐摆放。11 苗期管理 11.1 缓苗期管理 DB 34/T 37192020 5 缓苗期大约 15 天左右。温度应控制在 1530；每天定期给幼苗喷雾保湿，叶片周围湿度保持在 7590；遮光率 70左右。11.2 幼苗期管理 待15 d 长出新叶、新根后便进入温室正常管理。温室大棚相对湿度保持在 6070。11.3 施肥 移植 4 周8 周内，每周可喷施高氮型叶面肥（N：P：K=40：20：20）)一次，稀释浓度为 2000倍液。8 周后视植株生长情况，调整施肥的肥料种类、浓度和次数。12 质量标准 12.1 组培苗质量标准 在培养容器中生根培养 30天35 天，生根苗达表1合格苗标准即可出瓶。表1 染井吉野樱组培生根苗质量标准 类目 质量要求 株形 苗粗壮、挺直有活力，叶片大小协调 根系 有不定根 3条5 条，根长适中色白健壮 苗高 3 cm8 cm 叶色及数量 叶正常，叶色具母本特性，有光泽，4片6 片 整齐度 同一培养周期，90以上的苗高度一致 有无污染 无污染或培养基少量点状污染 有无病虫害 无 12.2 组培穴盘苗的质量标准 温室培育40 d 后，穴盘苗达表2合格苗标准即可出圃。表2 染井吉野樱穴盘苗质量标准 类目 质量要求 株形 苗矮壮墩实、挺拔，株形饱满、完整 根系 有完整而发达的根系，根系充满穴盘孔 苗高 10 cm15 cm 叶色及数量 叶色泽正常，具母株品种特性，4片6 片 整齐度 同一批次 95以上的苗高度一致 纯度 变异率低于 5 有无病害 无 有无虫害 无 13 包装、标签和运输 13.1 包装 DB 34/T 376 13.1.1 组13.1.2 琼过 25泡沫13.1.3 无纸箱包装，13.1.4 穴宜使用托盘13.2 标签注明树植物检疫证理等的苗木13.3 运输装车时到达目的地14 档案记在林木映生产经营按照 LY/T 7192020 组培苗产品按琼脂苗包装：琼沫箱应加冰袋无琼脂苗包装超过 25泡穴盘苗包装：盘。签 树种、品种、证明编号、苗批木进行备注）输 时切勿倒置，用地。记录管理 木种苗生产经营种苗的来源 2289 的规定照客户（或者琼脂苗保留在袋。为防止上：生根组培苗泡沫箱应放冰穴盘装在小纸苗龄、原产地批号、备注。按照 LY/T用厢式货车运经营活动中形成源、产地、数量定执行。者订单）要求在培养容器中上下倒置，运苗洗去琼脂后冰块。纸箱内，再将地、产地、（对于进口苗T 2290 的规运输以避免日成的具有保存量、质量与销求包装。中，培养容器运输时可使用后，先装入小将小纸箱装入 质量指标、苗木、转基因规定执行。日晒、雨淋，运存价值的文字销售去向、销器整齐摆放于用托盘。小塑料盒（袋入大纸箱内，生产日期、因材料繁殖的 运输途中温度字、图表、声销售日期等内 于泡沫箱，箱袋），再放在每箱装 3 个林木种子生的苗木、授权度保持 10声像等不同形内容，保证生箱外再用纸箱在泡沫箱里，箱个4 个穴盘生产经营许可品种苗木以及25，应在形式的记录，能生产经营过程包装，超箱外再用，运输时可证编号、及药剂处在 5 d 内能真实反程可追溯。