GB 5009.205-2013食品中二噁英及其类似物毒性当量的测定.pdf

中中华华人人民民共共和和?家家标标准准 GB 5009.2052013 2013-11-29 发布 2014-06-01 实施 食品安全?家标准 食品中二噁英及?类似物毒性当量的测定 GB 5009.2052013 I 前 言?标准代替 GB/T 5009.2052007?食品中?噁英及?类似物毒性?量的测定?标准?GB/T 5009.2052007 相比?要?化如?增加了加?溶剂萃?ASE?方法?增加了WHO于2005?修?后的多?代?苯并?噁英及?和?噁英?多?联苯毒性?量因子?GB 5009.2052013 1 食品安全?家标准 食品中二噁英及?类似物毒性当量的测定 1 范围?标准规定了食品中17种2,3,7,8-?代的多?代?苯并?噁英?PCDDs?多?代?苯并?PCDFs?和12种?噁英?多?联苯?DL-PCBs?含量及?噁英毒性?量?TEQ?的测定方法?标准适用于?录A的表A.1中规定的食品中17种2,3,7,8-?代多?代?苯并?噁英及多?代?苯并?PCDD/Fs?和12种DL-PCBs含量及?TEQ的测定?2 原理?用高?气相色谱?高?质谱联用技术?在质谱?率大于10 000的条?通过精确质量测量监测目标化合物的?个离子?获得目标化合物的特?性响?以目标化合物的同?素标记化合物?定量内标?采用稳定性同?素稀释法准确测定食品中2,3,7,8?代的PCDD/Fs和DL-PCBs的含量?并以各目标化合物的毒性?量因子(TEF)?所测得的含量相?后累加?得到?品中?噁英及?类似物的毒性?量?TEQ?3 试剂和材料 3.1 有机溶剂 注?以?有机溶剂均?农?浓缩10 000倍后?得检出?噁英及?类似物?3.1.1?C3H6O?3.1.2?烷?C6H14?3.1.3?苯?C7H8?3.1.4?烷?C6H12?3.1.5?烷?CH2Cl2?3.1.6?醚?C4H10O?3.1.7?醇?CH3OH?3.1.8?壬烷?C9H20?3.1.9?辛烷?C8H18?3.1.10?酸?CH3COOCH2CH3?3.1.11?醇?CH3CH2OH?3.2 标准溶液 3.2.1 PCDD/Fs标准溶液 注?标准?荐使用EPA1613-1997规定的标准溶液?各实验室?据?体情况选用相?的标准品?如果需要制备储备溶液?该在通风橱中进行?并?戴?毒面罩?GB 5009.2052013 2 3.2.1.1 校?和时间窗口确定的标准溶液?CS3WT溶液?用壬烷配制?含有?然和同?素标记PCDD/Fs?定量内标?净化标准和回收率内标?的溶液?用于方法的校?和确证?并?以用于DB5 MS毛?管柱(或等效柱)时间窗口确定和2,3,7,8-TCDD?离度的检查?见?录B的表B.1?3.2.1.2 净化标准溶液?用壬烷配制的37Cl4-2,3,7,8-TCDD溶液?浓度?40 g/L 2 g/L?3.2.1.3 同?素标记定量内标的储备溶液?用壬烷配制的13C12-PCDD/Fs溶液?见?录B的表B.2?3.2.1.4 回收率内标标准溶液?用壬烷配制的13C12-1,2,3,4-TCDD和13C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD溶液?见?录B的表B.3?3.2.1.5 精密度和回收率检查标准溶液?PAR?用壬烷配制的含?然PCDD/Fs溶液?见?录B的表B.4?用于方法建立时的初始精密度和回收率试验?IPR?及过程精密度和回收率试验?OPR?3.2.1.6 保留时间窗口确定的标准溶液(TDTFWD)?用于确定规定毛?管柱中四?代化合物出峰?序?同时用于检查在规定的色谱柱中2,3,7,8-TCDD和2,3,7,8-TCDF的?离度?见?录B的表B.6?3.2.1.7 校?标准溶液?含有?然和同?素标记的PCDD/Fs 系列校?溶液?见?录B的表B.7?中CSL?浓度更?的?然PCDD/Fs校?溶液?用于质谱系?校?测定校?标准溶液?以获得?然?标记PCDD/Fs的相对响?因子?RRF?外?CS3用于?建立RRF的?常校?和校?曲线校验(VER)?CS1用于检查HRGC-HRMS必?备的灵敏度?于食品要求的灵敏度更?以使用CSL进行灵敏度检查?3.2.2 DL-PCBs标准溶液 注：?标准?荐使用EPA1668A规定的标准溶液?各实验室?据?体情况选用相?的标准品?如果需要制备储备溶液?该在通风橱中进行?并?戴?毒面罩?3.2.2.1 时间窗口确定和定量内标标准溶液?用壬烷配制的含同?素标记DL-PCBs的溶液?见?录B的表B.8?3.2.2.2 同?素标记的净化内标标准溶液?用壬烷配制含13C12-2,4,4-TrPCB?13C12-2,3,3,5,5-PePCB和13C12-2,2,3,3,5,5,6-HPCB溶液?见?录B的表B.9?3.2.2.3 同?素 标 记 的 回 收 率 内 标 标 准 溶 液?用 壬 烷 配 制 含13C12-2,2,5,5-TePCB?13C12-2,2,4,5,5-PePCB?13C12-2,2,3,4,4,5-HxPCB和13C12-2,2,3,3,4,4,5,5-OctaPCB溶液?见?录B的表B.10?3.2.2.4 精密度和回收率检查标准溶液(PAR)?用壬烷配制的含?然DL-PCBs溶液?见?录B的表B.11?用于方法建立时的初始精密度和回收率试验?IPR?及过程精密度和回收率试验?OPR?3.2.2.5 校?标准溶液?含有?然?目标化合物?和同?素标记?定量内标?净化标准和回收率内标?的DL-PCBs 系列校?溶液?见?录B的表B.12?中CS3用于?建立RRF的?常校?和校?曲线校验(VER)?CS1用于检查HRGC-HRMS必?备的灵敏度?3.2.2.6 高灵敏度检查的标准溶液?然DL-PCBs的溶液?浓度0.2 g/L?见?录B的表B.13?3.2.2.7 校?检查的标准溶液?浓度相?于CS3?含同?素标记?仅?然DL-PCBs的溶液?50 g/L?见?录B的表B.14?3.3 样品净化用吸附剂 注：?品净化用?剂?在制备后尽快使用?如果经过?段较长时间的保?检验?活性?在装有氧化铝和硅胶等容器?标识?制备?期或开封?期?如果标识?认?废?剂?新制备?于?在PCBs?染?题?有时适合于PCDD/Fs测定的试剂?定适合DL-PCBs的测定?该经过检查证实没有?扰后使用?3.3.1 氧化铝 注：如果内标化合物的回收率能达到要求?则?在酸性氧化铝或碱性氧化铝中选择?种用于?品提?液净化?但所有?品?包括初始精确度和回收率检查试验?均?使用同?类型的氧化铝?3.3.1.1 酸性氧化铝?在130 C?少加热活化12 h?GB 5009.2052013 3 3.3.1.2 碱性氧化铝?在600 C?少加热活化24 h?加热温度?能超过700?否则?能力降?活化后保?在130 的密?烧瓶中?在烘烤后五?内使用?3.3.2 硅胶 3.3.2.1 规格?75m250m 或相?等?的硅胶?3.3.2.2 活性硅胶?使用前?硅胶?别用?醇?烷清洗?在180?少烘烤1 h或150?少烘烤4 h?最多6 h?在?燥器中冷?保?在带螺帽密封的玻璃瓶中?3.3.2.3 酸化硅胶?44%?质量?数?56 g活性硅胶置于250 mL?塞磨口旋转烧瓶中?在玻璃棒搅拌?加入44 g硫酸?将烧瓶用旋转蒸发器旋转1 h2 h?使之混和均匀无结块?置?燥器内?保?3周?3.3.2.4 碱化硅胶?33%?质量?数?100g活性硅胶置于250 mL?塞磨口旋转烧瓶中?在玻璃棒搅拌?滴加入49 g NaOH溶液?1 mol/L?将烧瓶用旋转蒸发器中旋转1 h2 h?使之混和均匀无结块?将碱化硅胶置?燥器内保?3.3.2.5 硝酸银硅胶?10 g硝酸银置于100 mL烧杯中?加水40 mL溶解?将该溶液转移?250 mL旋转烧瓶中?慢慢加入90 g活性硅胶?在旋转蒸发器中旋转1 h2 h?使之?燥并混和均匀?出后?在?燥器中冷?置于褐色玻璃瓶内保?3.3.3 弗罗?土 3.3.3.1 规格?150m250m?使用前?500 g?装入索氏提?器中?用适量?烷:?烷?1:1?体?比?提?24 h?3.3.3.2 含水1%?质量?数?的弗罗?土?弗罗?土99.0 g?加水1.0 mL?搅拌均匀?用带聚氟?烯螺帽的玻璃瓶封装?3.3.4 混合活性炭?9.0 g Carbopak C?荐使用Supelco 1-0258?或?他相?的类型?和41.0 g Celite 545?荐使用Supelco 2-0199?或?他相?的类型?充?混和?含活性炭?18%?质量?数)?在130 中?少活化6 h?在?燥器中保?3.4?他材料 3.4.1 无水硫酸钠?Na2SO4?优?纯?3.4.2 硫酸?H2SO4?优?纯?3.4.3 氢氧化钠?NaOH?优?纯?3.4.4 硝酸银?AgNO3?优?纯?3.4.5 草酸纳?Na2C2O4?优?纯?3.4.6 玻璃棉?使用前以?烷及?烷回流48 h?用?气?后?置于棕色瓶内备用?3.4.7 凝胶色谱填料?Bio-Beads S-X3?38m75m?3.4.8 硅藻土?选用?加?溶剂萃?用?3.5 参考基质 玉米?或?他植物?质中?检出PCDD/Fs和DL-PCBs?最理想的情况?于?境中PCBs的广泛?在?植物?中?能?在背景水?的PCBs?作?质时要求?背景水?得超过?录C表C.1中的检测限的值?4 仪器和设备 4.1 高?气相色谱-高?质谱仪(HRGC-HRMS)?GB 5009.2052013 4 4.2 气相色谱柱?同的目标物?选用?同的气相色谱柱?a)用于 PCDD/Fs 检测?DB-5ms?5%?苯?-95%?聚硅氧烷?柱?60 m0.25 mm0.25 m 或等效色谱柱?RTX-2330?90%?-10%苯?聚硅氧烷?,60 m0.25 mm0.1 m 或等效色谱柱?b)用于 DL-PCBs 检测?DB-5ms 柱?60 m0.25 mm0.25 m 或等效色谱柱?4.3?匀?器?4.4?肉机?4.5 冻?机?4.6 旋转蒸发器?4.7?气浓缩器?4.8 超声波清洗器?4.9 振荡器?4.10 索氏提?器?4.11?感量?0.1 mg?4.12 恒温?燥箱?用于烘烤和贮?剂?能够在 105 250?围内保持恒温?5?4.13 玻璃层析柱?带聚四氟?烯柱塞?150 mm8 mm?300 mm15 mm?4.14 全自?品净化系?选用?配备酸碱复合硅胶柱?氧化铝和活性炭净化柱?4.15 凝胶色谱系?GPC?选用?手?或自?系?玻璃柱?内?15 mm20 mm?内装 50 g S-X3 凝胶?4.16 高效液相色谱仪?HPLC?选用?包括泵?自?进?器?通转换阀?检测器和馏?收集器?配备 Hypercarb?100 mm4.6 mm?5 m?或相?色谱柱?4.17 加?溶剂萃?仪?选用?5 试样制备?净化 5.1 样品采集?保存 5.1.1?场采集的?品用避?材料如铝箔?棕色玻璃瓶等包装?置冷冻箱中?输到实验室?10 以?温保?5.1.2 液体或固体?品?如鱼?肉?蛋?奶等经过匀?使?匀质化后?使用冷冻?燥或无水硫酸钠?燥?混匀?脂类?品?直接用?烷溶解后进行净化?离?5.2 试样制备 5.2.1 溶剂和提?液的旋转蒸发浓缩 5.2.1.1 连接旋转蒸发器?将水浴锅预热?45?在试验开始前?预?将 100 mL?烷:?烷?1:1?体?比?作?提?溶剂浓缩?以清洗整个旋转蒸发仪系?如有必要?对经浓缩后的溶剂以及收集瓶中的溶剂进行检验?以便对?染状况进行检查?在?个浓缩?品之间?次用 2 mL3 mL 溶剂洗涤旋转蒸发仪接口?用烧杯收集废液?5.2.1.2 将装有?品提?液的?形瓶连接到旋转蒸发器?缓慢抽真空?5.2.1.3 将?形瓶降?水浴锅中?调节转?和水浴的温度?或真空度?使浓缩在 15 min20 min 内完成?在?确的浓缩?度?流入废液收集瓶中的溶剂流量?保持稳定?溶剂?能有爆?或?见的?腾?象发生?注：如果浓缩过快?能会使?品损失?5.2.1.4?形瓶中溶剂?2 mL 时?将?形瓶?水浴锅中移开?停?旋转?缓慢并小心地向旋转蒸发仪中?气?确保打开阀门时?要?快?以免?品?出?形瓶?用 2 mL 溶剂洗涤接口?用烧杯收集废液?5.2.2 索氏提?GB 5009.2052013 5 5.2.2.1 提?前?在索氏提?器中装入?支空的纤维素或玻璃纤维提?套筒?以?烷:?烷?1:1?体?比?提?溶剂?预提?8 h 后?出晾?5.2.2.2 将?列处理好的?品装入提?套筒中?录 D?D.1?高度以?超过溢流管?限?在提?套筒中加入适量13C12标记的定量内标的储备溶液?3.2.1.3?用玻璃棉盖?品?衡 30 min 后装入索氏提?器?以适量?烷:?烷?1:1?体?比?溶剂提?18 h24 h?回流?度?制在 3 次/h4 次/h?鱼?肉?蛋?奶等?品?50 g200 g?品?精确到 0.001 g?经过冷冻?燥后?准确?算含水量?据估?的?染水?适量试?精确到 0.001 g?加无水硫酸钠研磨?制成能自?流?的粉?将粉?全部转移?处理好的提?套筒?置于索氏抽提器中进行提?奶酪等固体乳制品?品?将奶酪直接研成?后?量?他固体乳制品直接?量?适量试?通常?10 g?精确到 0.001 g?置研钵中?加无水硫酸钠?研磨成?燥的?以自?流?的粉?无水硫酸钠?海?混合物使用量?于试?的?量及含水量?将粉?全部移?处理好的提?套筒?用沾有?烷的棉签将研钵?表面皿和研磨棒擦净?该棉签?同?入套筒中进行提?注：?知?品含量或估?含量较高时?适?减少用于?析的试?量?所有试?空?试验?初始精密度及回收率试验?IPR?过程精密度及回收率试验?OPR?有相同的?析过程?以便检查?染来源及损失情况?5.2.2.3 提?后?将提?液转移到?形瓶中?旋转蒸发浓缩?5.2.2.4?形瓶中的?留物用少量?烷溶解以进行?面的净化?如需要考察净化过程的回收率则加入净化标准溶液?3.2.1.2?但?常的?析中该?骤?省略?5.2.2.5 若结果?需?脂肪含量?则需要测定?品的脂肪含量?测定脂肪含量后?以加少量?烷溶解?以备进行净化处理?5.2.2.6 脂肪含量的测定?浓缩前准确?形瓶?将溶剂浓缩?后准确?形瓶?次?结果的差值?试?的脂肪量?按式?1?算脂肪含量?%100211mmX?1?式中?X1脂肪含量?%?m1试?的脂肪量?单?克?g?m2试?的质量?单?克?g?5.2.3 液液萃?5.2.3.1 依情况准确量?液体奶?品 200 mL300 mL?转移?大小合适的?液漏斗中?加入适量13C12标记的定量内标的储备溶液?3.2.1.3?5.2.3.2 按 20 mg/g?品的比例?草酸钠?加少量水溶解后?将该溶液加入?品?充?振摇?5.2.3.3 加入?品等体?的?醇?再进行振摇?5.2.3.4 在?品-?醇溶液中加入?5.2.3.3 等体?的?醚:?烷?2:3?体?比?振摇 1 min?静置?层后?转移出有机相?然后在水相中加入?品原始体?相同的?烷?振摇 1 min?静置?层后?转移出有机相?合并有机相?浓缩?小于 75 mL?5.2.3.5 转移提?液?250 mL?液漏斗中?加入 30 mL 蒸馏水振摇?去水相?5.2.3.6 转移?层有机相?250 mL 烧瓶中?加入适量无水硫酸钠?振摇?静置 30 min 后?用?张经过?苯淋洗过的滤纸过滤?滤液置于?形瓶中?5.2.3.7 将提?液转移到?形瓶中?旋转蒸发浓缩?如需测定脂肪含量?则按 5.2.2.6?骤进行脂肪含量的测定?GB 5009.2052013 6 5.2.3.8?形瓶中的?留物用少量?烷溶解以进行?面的净化?如需要考察净化过程的回收率则加入净化标准溶液?3.2.1.2?但?常的?析中该?骤?省略?5.2.4 加速溶剂萃?5.2.4.1 提?前?将所用萃?以?烷:?烷?1:1?体?比?进行清洗?5.2.4.2 将?列处理好的?品装入萃?中?萃?中?预?入醋酸纤维素过滤膜?在萃?中加入适量13C12标记的定量内标的储备溶液?3.2.1.3?密?后?于萃?仪?以?烷:?烷?1:1?体?比?溶剂提?参考条?温度?150?压力?10.3MPa?1500 psi?循?1 次?静态时间?10 min?鱼?肉?蛋等含水量较高?品?50 g200 g?品?精确到 0.001 g?经过冷冻?燥后?准确?算含水量?据估?的?染水?适量试?精确到 0.001 g?置研钵中?研磨成粉状?加入硅藻土?混匀后?全部转移?处理好的萃?液体乳?品?准确?80 g100 g?品?精确到 0.001 g?经过冷冻?燥后?置研钵中?研磨成粉状?加入硅藻土?混匀后?全部转移?处理好的萃?燥?品?研磨成粉后?据估?的?染水?适量试?精确到 0.001 g?置研钵中?加入硅藻土?混匀后?全部转移?处理好的萃?每个?品所对?硅藻土用量?于所?用的萃?的体?和所?的该?品研磨后的体?5.2.4.3 提?后?进?处理按5.2.2.35.2.2.6?骤进行?5.2.5?他?适量黄?等?脂试?置烧杯中?加热?50 60?使?脂明显地?离出来?融化的?脂经?燥的滤纸或者?小段玻璃棉过滤到另?容器中?中准确?脂?品适量?精确到 0.001 g?用?烷溶解后?加入适量13C12标记的定量内标?5.3 试样净化 5.3.1 酸化硅胶净化 5.3.1.1 在浓缩的?品提?液中加入 100 mL?烷?并加入 50 g 酸化硅胶?用旋转蒸发仪在 70 条?旋转加热 20 min?5.3.1.2 静置 8 min10 min 后?将?烷倒入?形瓶中?5.3.1.3 用 50 mL?烷洗瓶中硅胶?收集?烷于 5.3.1.2 的?形瓶中?复 3 次?用旋转蒸发仪浓缩?2 mL5 mL?如果酸化硅胶的?色较深?则?复?述过程?直?酸化硅胶?黄色?5.3.2 混合硅胶柱净化 5.3.2.1 层析柱的填充?内?15 mm 的玻璃柱?部填以玻璃棉后?依次装入 2 g 活性硅胶?5 g碱性硅胶?2 g 活性硅胶?10 g 酸化硅胶?2 g 活性硅胶?5 g 硝酸银硅胶?2 g 活性硅胶和 2 g 无水硫酸钠?法装柱?轻敲层析柱?使?布均匀?见?录 D?D.3?5.3.2.2 用 150 mL?烷预淋洗层析柱?液面降?无水硫酸钠层?方?2 mm 时?关?柱阀?去淋洗液?柱?形瓶?检查层析柱?如果出?沟流?象?新装柱?5.3.2.3 将?浓缩的提?液加入柱中?打开柱阀使液面?降?液面降?无水硫酸钠层时?关?柱阀?5.3.2.4 用 5 mL 的?烷洗涤原?形瓶?5.3.1.3?2 次?将洗涤液?并加入柱中?打开柱阀?使液面降?无水硫酸钠层?5.3.2.5 如果仅测定 PCDD/Fs?则用 350 mL?烷洗脱?如果同时测定 PCDD/Fs 和 DL-PCBs?则用400 mL?烷洗脱?收集洗脱液?GB 5009.2052013 7 5.3.2.6 将收集在?形瓶中的洗脱液用旋转蒸发仪浓缩?3 mL5 mL?供?净化用?5.3.3 氧化铝柱净化 注：?标准中使用的?种氧化铝柱仅是?剂用量?同?氧化铝柱 1?25 g 碱性氧化铝?氧化铝柱 2?2.5 g 碱性氧化铝?见?录 D?D.4?5.3.3.1 氧化铝柱 1 5.3.3.1.1 层析柱填充?内?15 mm 的玻璃柱?部填以玻璃棉后?依次装入 25 g 氧化铝?10 g无水硫酸钠?法装柱?轻敲层析柱?使?剂?布均匀?5.3.3.1.2 用 150 mL?烷预淋洗层析柱?液面流?氧化铝?方?2 mm 时?关?柱阀?去淋洗液?检查层析柱?如果出?沟流?象?新填柱?5.3.3.1.3 加入经过混合硅胶柱净化的提?液?并用 5 mL?烷?次洗涤原?形瓶?5.3.2.6?将洗涤液合并后?柱?复洗涤?次?5.3.3.1.4 用 60 mL?烷清洗烧瓶后淋洗氧化铝柱?去淋洗液?5.3.3.1.5 仅测定 PCDD/Fs 时?用 200 mL?烷:?烷?98:2?体?比?淋洗?扰?去淋洗液?柱?形瓶?用 200 mL?烷:?烷?1:1?体?比?洗脱?收集洗脱液?加入 3 mL 的辛烷或壬烷?供 PCDD/Fs?析用?5.3.3.1.6 同时测定 PCDD/Fs 和 DL-PCBs 时?柱?形瓶?用 90 mL?苯洗脱,收集洗脱液?加入 3 mL 的辛烷或壬烷?供 DL-PCBs?析用?柱?置另?形瓶?再用 200mL?烷:?烷?1:1?体?比?洗脱?收集洗脱液?加入 3 mL 的辛烷或壬烷?供 PCDD/Fs?析用?5.3.3.1.7 将收集在?形瓶中的各洗脱液?别用旋转蒸发仪浓缩?3 mL5 mL?供?净化用?5.3.3.2 氧化铝柱 2 层析柱填充?a?内?6 mm7 mm 的玻璃柱?部填以玻璃棉后?依次装入 2.5 g 氧化铝和 2 g 无水硫酸钠?法装柱?轻敲层析柱?使?剂?布均匀?b?用 20 mL?烷预淋洗层析柱?去淋洗液?检查层析柱是否有沟流?如果出?沟流?新填柱?c?加入经氧化铝柱 1 净化的提?液?PCDD/Fs 部?使?完全渗入柱内?d?用 4 mL?烷:?烷?98:2?体?比?洗原?形瓶?5.3.3.1?将?洗?来的溶液?倒入柱内?让?完全渗入柱内?复?次?e?用 40 mL 的?烷:?烷?98:2?体?比?包括烧瓶清洗?淋洗?去淋洗液?柱?形瓶?f?用 30 mL?烷:?烷?1:1?体?比?淋洗液洗脱 PCDD/Fs?收集洗脱液?加入 3 mL 的辛烷或壬烷?g?用 30 mL?烷:?烷?99:1?体?比?预淋洗层析柱?去淋洗液?柱?形瓶?检查层析柱是否有沟流?象?如果出?沟流?新装柱?k?加入浓缩后的经氧化铝柱 1 净化的提?液?DL-PCBs 部?让?完全渗入柱内?l?用 5 mL?烷:?烷?1:1?体?比?洗涤原?形瓶?5.3.3.1?次?品?完全渗入柱内?将?洗?来的溶液?倒入柱内?使?完全渗入柱内?m?用 15 mL?烷:?烷?1:1?体?比?洗脱?收集洗脱液?加入 3 mL 的辛烷或壬烷?n?将收集在?形瓶中的各洗脱液?别用旋转蒸发仪浓缩?3 mL5 mL?右?供进?测定或净化用?5.3.4 凝胶渗透柱净化 GB 5009.2052013 8 注?用于去除?品提?液中类脂的备选净化方法?必要时选择?5.3.4.1 在层析柱?部填?玻璃棉?装入 50 g Bio-Beads S-X3 凝胶?用?苯?洗后?保?在?烷:?酸?1:1?体?比?中?注?凝胶柱?置时?溶剂?得流空?5.3.4.2 在?品提?液?通常浓缩?3 mL5 mL?中加少量?烷?注入层析柱?使?品提?液完全渗入柱内?5.3.4.3 用 10 mL?烷:?酸?1:1?体?比?次洗涤原?形瓶?转入柱内?5.3.4.4 用 100 mL?烷:?酸?1:1?体?比?淋洗?去淋洗液?柱?形瓶?5.3.4.5 用 90 mL?烷:?酸?1:1?体?比?洗脱?得到的洗脱液中含 PCDD/Fs 和 DL-PCBs?5.3.5 活性炭柱净化 注：PCDD/Fs 和非邻?代的 DL-PCBs 备选的净化方法?必要时选择?5.3.5.1 活性炭柱制备?5 mL?次性玻璃移液管?除?端?3.8 cm 处并挫磨锐缘处?适量玻璃棉置入并以?只 1 mL 玻璃移液管于刻度?0?处塞紧?依次填入 0.5 mL 活性硅胶?0.7 mL Carbon/Celite545?0.5 mL 活性硅胶?适量玻璃棉置入并塞紧?使用前用?列溶剂依次淋洗?4 mL?苯?2 mL?烷:?醇:?苯?75:20:5?体?比?和 4 mL?烷:?烷?1:1?体?比?5.3.5.2 净化?以 2.5 mL?醇及 2.5 mL?烷?烷?1:1?体?比?溶液依次将活性炭柱?口端向?淋洗?次?去淋洗液?倒置柱管?口端向?将浓缩到?1 mL 的提?液?进行除脂处理?小心移入活性炭柱?然后用 1 mL?烷?烷?1:1?体?比?溶液洗涤原瓶?次?并移入活性炭柱内?液面流?玻璃棉时?用?球?出柱内溶剂?再次倒置管柱?口端向?用 25 mL?苯洗脱柱子?用 50 mL?形瓶收集洗脱液?5.3.5.3 收集的洗脱液加入 3 mL 的辛烷或壬烷?将收集的洗脱液?别用旋转蒸发仪浓缩?3 mL5 mL?5.3.6 弗罗?土柱净化 注?PCDD/Fs 备选的净化方法?必要时选择?5.3.6.1 层析柱填充?直?15 mm 的玻璃柱?部填?玻璃棉后?依次装入 2 g 无水硫酸钠?15 g 弗罗?土?2 g 无水硫酸钠?以?烷湿法装柱?轻敲层析柱?使?剂?布均匀?5.3.6.2 用 200 mL?烷淋洗?被活化的弗罗?土柱?液面?距无水硫酸钠层?2 mm 时?关?柱阀?去淋洗液?5.3.6.3 加入浓缩后的提?液?进行除脂处理?打开柱阀?5.3.6.4 用?烷洗涤原?形瓶 2 次?合并?弗罗?土柱中?5.3.6.5 用 200 mL?烷淋洗?扰?去淋洗液?柱?形瓶?5.3.6.6 用 300 mL?烷洗脱?收集洗脱液?5.3.6.7 将3 mL辛烷或壬烷加入收集的洗脱液中?将收集的洗脱液用旋转蒸发仪浓缩?3 mL5 mL?5.3.7 全自动样品净化系统自动净化分离 注：全自?品净化系?的自?净化?离原理?传?的柱色谱方法相同?该系?使用?次性商?化净化柱?依次?多层硅胶柱?碱性氧化铝柱和活性炭柱?整个净化过程通过?算机按设定程序?制往复泵和阀门进行?5.3.7.1?于全自?品净化系?提供的净化柱?在容量?题?在处理高脂肪含量时需要预?使用酸化硅胶去除?品中的大部?脂肪?以通过在全自?品净化系?中增加?个大容量酸化硅胶柱解?也?以合并采用任选?骤 5.3.1?5.3.2 或 5.3.4 或?合方法手?去除?品中的大部?脂肪?予以解?注?品回收率出?常时?对全自?品净化系?流?进行校?5.3.7.2 按仪器使用说明要求?连接净化层析柱?5.3.7.3 将各净化柱按?序连接在全自?品净化系?按程序配好各洗脱溶液并连接好管路?设定?算机洗脱程序?参见?录 D?D.5?GB 5009.2052013 9 5.3.7.4 将经酸化硅胶或者凝胶渗?色谱处理的浓缩提?液转移到全自?品净化系?的进?管?5.3.7.5 按照洗脱流程?序洗脱?参见?录 D?D.5?对?品进行净化?离?别收集 PCDDs/Fs和 DL-PCBs?5.3.7.6 将收集的各洗脱液?别用旋转蒸发仪浓缩?3 mL5 mL?5.3.8?他?了将 PCDD/Fs 和 DL-PCBs?质材料中充?地?离出来?据?质材料或?扰?的?体情况选用?同的?剂进行净化?制备酸化硅胶以除去?品中的脂肪?凝胶渗?色谱?用来除去那些能导?气相色谱柱柱效降?的大?子?扰物?如蜂蜡等酸碱?能破坏的大?子?必要时?用手?层析柱对提?液进行初?净化?酸性?中性和碱性硅胶?氧化铝和弗罗?土?用于消除非极性和极性的?扰物质?活性炭柱能将 PCDD/Fs 以及非邻?代的 PCB77?PCB126 和 PCB169?他同类物质和?扰物质?离?在必要时使用?除了非邻?代的 PCB77?PCB126 和 PCB169 外?他 DL-PCBs?般?需要活性炭柱净化?HPLC?以特?性地?离某些类似物和同系物?通常在用酸化硅胶或凝胶渗?色谱除去?品中的类脂后?使用3?层析柱净化?混合型硅胶柱和?同的氧化铝柱?PCDD/Fs和DL-PCBs净化流程?见?录D?D.2?也?以采?他备选净化方法?合使用?无论采用何种?合?在进行净化前?实验室?证实?选择的净化过程能满足方法的要求?5.4 微量浓缩?溶剂交换 5.4.1 提?物的溶剂交换 5.4.1.1 将浓缩的提?液转移到带聚四氟?烯硅胶垫的棕色螺口瓶中?置于?气浓缩器?浓缩?在 45 的?温条?进行?注?气流过大会引起?品损失?气流?调节到能够使溶剂表面轻微振?5.4.1.2 如果需要?有必要将提?物用?气?恒?5.4.1.3 如果属于提?液净化溶剂更换?按以?骤操作?a)如果采用凝胶色谱系?(GPC)净化?需在凝胶色谱系?(GPC)进?前用?烷将提?液体?调?5.0 mL?如果用 HPLC 净化?则需在 HPLC 进?前将提?液浓缩?1.0 mL?b)如果用层析柱?硅胶?活性炭或弗罗?土?进行净化?则需将提?物溶剂转换成?烷?并定容?1.0 mL?5.4.2 净化后的微量浓缩?溶剂交换 如果提?液浓缩后用于 HRGC/HRMS?析?则将净化?离后得到的各流?别用旋转蒸发仪浓缩?3 mL5 mL?再在?气?浓缩?1 mL2 mL?然后在?气流?定量转移?装有 0.2 mL 的锥形衬管的进?瓶中?并用?烷洗涤浓缩蒸馏瓶?并转入锥形衬管中?浓缩?100 L?别加入适量 PCDDs/Fs 和 DL-PCBs 回收率内标溶液?壬烷?用辛烷代替?定容?继续在?小的?气流?浓缩?溶剂只含壬烷或辛烷?品溶液的最?体?据情况调整?大?20 L?将进?瓶密封?并标记?品编号?室温?暗处保?供 HRGC/HRMS?析用?如果?品?进行 HRGC/HRMS?析?则于?-10?保?PCDD/Fs和DL-PCBs的?析流程?参见?录D的?D.2?6 PCDD/Fs 色质分析 6.1 HRGC/HRMS 条件 6.1.1 GC 的色谱条件?荐筛选色谱柱?DB-5ms 柱或等效柱?柱长 60 m?内?0.25 mm?液膜厚度 0.25 m?对于GB 5009.2052013 10 2,3,7,8-TCDF 的确证?荐使用 DB-235ms 柱或等效柱?柱长 30 m?内?0.25 mm?液膜厚度 0.25 m?也?以使用 RTX-2330 或等效柱?柱长 50 m60 m?内?0.25 mm?液膜厚度 0.20 m?注?了得到最佳的?离度和灵敏度?需要优化 GC 色谱条?优化后?标准溶液?空?IPR 及 OPR 检查和?品检测都?采用相同的 GC 条?采用DB-5ms色谱柱或等效柱的?荐条?a?进?口温度?280?b?传输线温度?310?c?柱温?120?保持1 min?以43 /min升温?率升?220?保持15 min?以2.3/min升温?率升?250?以0.9/min升温?率升?260,以20/min升温?率升?310?保持9 min?d?载气?恒流?0.8 mL/min?采用RTX-2330色谱柱或等效柱的?荐条?供选择使用?a?进?口温度?280?b?传输线温度?260?c?柱温?90?保持1.5 min?以25/min升温?率升?180?再以2 /min升温?率升?260?保持30 min?d?载气?恒流?1 mL/min?6.1.2 质谱参数 6.1.2.1?率?在?率10 000 的条?进?PCDD/Fs 单标或目标化合物?相邻?没有?扰的混标溶液?监测?录 C 的表 C.3 规定的各化合物?个精确质量数的离子?得到?选择离子流?6.1.2.2 质量校?PCDD/Fs?析的?行时间?能超过质谱仪的质量稳定期?是?于质谱仪在高?模式?行时?万?之几的质量数偏移?如?万?之五质量数?能对仪器的性能产生?影响?需要对偏移的质量进行校?以采用参考气?全氟煤?PFK?或全氟?胺?FC43?的质量数锁定进行质量偏移校?锁定的质量数?于?录 C 的表 C.3 各窗口中监测的精确质量数?析过程中调节进入 HRMS 中参考气的量?要求监测的锁定质量数信号强度?得超过检测器满量程的 10%?注?过量的参考气?能引起噪声?增加对离子源的?染?导?清洗离子源的频率增加?6.1.2.3 选择?个参考气离子碎片?如接?m/z 304?TCDF?的 m/z 304.9824?PFK?信号?调整质谱以满足最小所需的 10 000?率?10%峰谷?离?率?大于或等于 10 000?精确的 m/z?录 C的表 C.3 中的理论 m/z 之间的偏差?小于?万?之五?6.1.2.4 在?定的 GC 条?进?1 L 或 2 L CS1 校?溶液?录 B 的表 B.7?考察离子丰度比?最小水?信噪比及?对保留时间?a?测定各目标化合物峰面?算?录 C 的表 C.3 中规定的精确质量数离子的丰度比?并?录C 的表 C.4 中理论值比较?并符合质量?制的要求?否则需要调谐质谱仪?新测定?使?符合规定?并对质谱仪的?率进行确认?b?各窗口有必要进行连续监测?确保在 GC?行中能够监测全部 PCDD/Fs?各窗口中监测的精确质量数离子参见?录 C 的表 C.3?如果仅测定 2,3,7,8,-TCDD 和 2,3,7,8-TCDF?则将窗口修改?包括四?和五?构体?苯醚和锁定质量数?c?HRGC/HRMS?满足?录 C 的表 C.1 最?检测限要求?进?CS1 时 PCDD/Fs 和标记化合物的信噪比?大于 10:1?d?13C12-1,2,3,4-TCDD 在 DB-5 柱?的?对保留时间?大于 25.0 min?6.1.3 保留时间窗口确定 采用优化的升温程序?进?时间窗口确定的标准溶液?录 B 的表 B.5?出了时间窗口确定的标准溶液流出?序?最?出峰?最后出峰?如果仅检测 2,3,7,8-TCDD 和 2,3,7,8-TCDF?则无?进行时间GB 5009.2052013 11 窗口确定试验?6.1.4?构体确认 6.1.4.1 采用?析程序及优化的?析条?进?属性检查的标准溶液?录 B 的表 B.8?进行?构体确认?6.1.4.2 在相?的色谱柱的四?窗口色谱?别?算距 2,3,7,8-TCDD?如?录 D 的?D.6?和 TCDF最?的?构体 GC 色谱峰?叠?比?6.1.4.3 在相?的色谱柱的四?窗口色谱?确认相距最?的?构体?2,3,7,8?代化合物色谱峰的?部?叠?如?录 D 的?D.6?小于 25%如果?叠超过 25%?调整?析条?并?新测试或更换GC 柱?新进行校?按式?2?算峰谷高比?100%xHVy?2?式中?HV峰谷高比?x2,3,7,8-TCDD?1,2,3,7/1,2,3,8-TCDD 的峰谷高度?单?毫米?mm?y 2,3,7,8-TCDD 的峰高?单?毫米?mm?6.1.5 同位素稀释的校正 注?在?品提?前?将?录 B 的表 B.2 中含有 15 个 2,3,7,8?代的同?素标记 PCDD/Fs 定量内标溶液加到?品中?见 5.2.2.2?5.2.3.1?5.2.4.1?5.2.5?6.1.5.1?校?标准溶液的?析结果?制?然化合物?标记化合物的 RRF 对浓度的校?曲线或采用线性回?方程?算?5 个校?标准溶液测定各化合物的相对响?因子(RRF)?6.1.5.2?据?录 C 的表 C.3 中第?和第?个精确质量数离子的的响?峰面?按式?3?算各化合物相对于?标记化合物的 RRF?n21121c)AA(c)AA(RRF11nn?3?式中?n1APCDD/Fs 的第?个质量数离子的的峰面?n2APCDD/Fs 的第?个质量数离子的的峰面?1c 校?标准中目标化合物的浓度?单?微克每升?g/L?11A标记化合物的第?个质量数离子的峰面?12A标记化合物的第?个质量数离子的峰面?nc校?标准中定量内标化合物的浓度?单?微克每升(g/L)?6.1.5.3 在?定的条?别进?CS1CS5 校?标准溶液?3.2.1.7?算各标准溶液中目标化合物的 RRF?6.1.5.4 线性试验?在测试的 5 个标准溶液的浓度?围内?如果各化合物的 RRF 结果稳定?系数小于 20?则?以采用 RRF 的均值进行?算?否则?采用 5 个浓度校?标准溶液的校?曲线?6.1.6 内标校正 注：适合于没有直接对?13C 标记的稳定性同?素化合物的 OCDF 的测定以及定量内标?净化标准回收率的测定?GB 5009.2052013 12 6.1.6.1 响?因子(RF)?a?OCDF 的 RF 按式?4?算?s21is21c)AA(c)AA(RFisisss?4?式中?s1AOCDF 的第?个质量数离子的峰面?s2AOCDF 的第?个质量数离子的峰面?isc校?标准中13C12-OCDD 的浓度?单?微克每升?g/