UPLC-Q-Orbitrap HRMS法结合分子网络分析吴茱萸汤的化学成分.pdf

第37 卷第2 期2024年4月文章编号：10 0 4-8 8 2 0(2 0 2 4)0 2-0 2 40-0 9研究简报烟台大学学报（自然科学与工程版）Journal of Yantai University(Natural Science and Engineering Edition)Vol.37 No.2Apr.2024doi:10.13951/ki.37-1213/n.220817UPLC-Q-Orbitrap HRMS 法结合分子网络分析吴茱英汤的化学成分迟呈林,李彩红,李文静,李宗超,刘荣霞（烟台大学药学院，分子药理和药物评价教育部重点实验室（烟台大学），新型制剂与生物技术药物研究山东省高校协同创新中心，山东烟台2 6 40 0 5)摘要：采用UPLC-Q-OrbitrapHRMS技术结合分子网络，全面快速地分析和鉴定吴莱萸汤中的化学成分。使用Waters Acquity UPLC HSS T3 型色谱柱(150 mm2.1 mm,1.8 m)进行色谱分离，离子源为HESI,在正、负离子模式下进行数据采集。随后，将质谱数据导入GNPS平台生成分子网络对化合物进行分类，再将质谱数据导入CompoundDiscover3.2软件进一步对化合物进行鉴定。最终在吴茱萸汤中共鉴定出10 0 个化合物，其中以黄酮类、生物碱类、有机酸类、类、糖类化合物为主,还有少量的苯丙素类、苯酚类、苷类化合物。其分析方法和结果对中药复杂体系的成分表征具有借鉴价值。关键词：吴莱萸汤；高分辨质谱；分子网络；成分表征中图分类号：R917.2文献标志码：A吴茱萸汤为经典中医方剂，配方以吴茱萸为主，生姜助之，人参、大枣为辅,四味药为该方的君臣佐使1,现代常用于治疗偏头痛、呕吐、消化不良、高血压、抑郁、心血管等疾病2-7 。目前,方中吴茱萸、生姜、人参和大枣各自的化学成分研究均已有报道3-7 ,但关于吴茱萸汤整方的化学成分研究鲜有报道,为了阐明吴茱萸汤中的化学成分，有必要建立一种可靠有效的分析方法。中药的化学成分结构复杂、极性相差大且难挥发，用常规的分析方法较难实现对其化学成分的全面表征。超高效液相色谱四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱（UPLC-Q-Orbitrap HRMS）技术可以快速地分析出中药复杂体系中化学成分的结构，现已被广泛应用。分子网络在全球天然产物社会分子网络（Glob-al natural products social molecular networking,GNPS)数据库平台建立,依据结构相似的化合物能产生相似的碎片，通过算法获得二级质谱的相似程度,按照相似程度的大小整合在可视化的网络中,通过比较节点间二级质谱的异同，推导结构类似化合物 。分子网络策略在化学成分定性、定量表征及质量控制，指导活性化合物的分离、提取工艺的优化以及疾病诊断和个性化治疗等方面具有广泛应用9 。因此,本研究采用UPLC-Q-OrbitrapHRMS 技术结合分子网络,对吴茱黄汤的化学成分进行分析，为吴茱萸汤的药效物质研究奠定基础。1仪器与材料Waters Acquity I-class UPLC 系统（美国 Waters收稿日期：2 0 2 2-0 8-2 9基金项目：国家自然科学基金资助项目（8 19 7 3513）。通信作者：刘荣霞（），教授，博士，主要研究方向为中药分析。第2 期公司），Q-ExactiveTMOrbitrapHRMS系统（美国Ther-moFisherScientific公司），台式离心机（ST8R型，美国ThermoFisherScientific公司），超声波清洗器（SK 2 50 H P型，上海科导超声仪器有限公司），万分之一天平（XPE204型,瑞士Mettler-Toledo公司）,甲酸（色谱级，上海阿拉丁生化科技股份有限公司），乙腈、甲醇（色谱级，德国默克公司），吴茱、生姜、人参、大枣，均购于北京同仁堂烟台分店。2方法2.1供试品溶液制备将4味药材（吴茱萸-生姜-人参-大枣，质量比1:2:1:1)的粉末放入具塞锥形瓶中,加入10 倍体积的7 5%甲醇，在室温下超声（2 40 W,25Hz)30min，离心(130 0 0 r/min,10 min），上清液过0.2 2 m微孔滤膜，即得供试品溶液。2.2色谱及质谱条件2.2.1色谱条件采用Waters Acquity UPLC HSST3色谱柱（150 mm2.1mm,1.8m）,流动相是体积分数为0.0 5%的甲酸水溶液（A相），乙腈：甲醇（4:1）（B 相）,流速0.4mL/min,柱温40,进样量2 L,梯度洗脱条件:0 2 min,4%B;28min,4%10%B;8 12 min,10%20%B;12 18 min,20%30%B;18 25 min,30%B50%B;25 32min,50%B70%B;30 35 min,70%B90%B;35 38 min,90%B。2.2.2质谱条件采用加热型电喷雾离子源（HE-SI）,扫描方式为Full MS/dd-MS（T o p 5），正负离子模式分别进行，分辨率为7 0 0 0 0 FWHM（Fu l l M S）、17500FWHM(dd-MS）,扫描范围8 0 12 0 0 m/z,喷雾电压+3.8-2.8 kV,鞘气流速35arbs，辅助气流速10 arbs，毛细管温度32 5，离子源温度350,归一化碰撞能量:2 0、40、6 0 eV。2.3数据分析2.3.1分子网络将采集到的质谱数据先进行格式转换,随后台进行数据处理后上传至GPNS数据库平台。将处理后的结果上传至Cytoscape软件上进行可视化，对比相关节点相似程度，对其进行分类，推测出与已知化合物结构相似的类似物或其他未知物。2.3.2?化合物鉴定将UPLC-Q-Orbitrap HRMS 采集的原始数据导人Compound Discover3.2软件进行初步分析，定制相应的工作流程，结合mzCloud、mzVault、C h e m s p i d e r 数据库进行碎片匹配，设置化合物匹配打分大于8 0,相对分子质量理论值和实际迟呈林，等：UPLC-Q-OrbitrapHRMS法结合分子网络分析吴莱萸汤的化学成分正、负离子模式下的基峰色谱图(图1)。1001806040200100806040200Fig.1Base peak chromatogram of Wu-Zhu-Yu decoction将采集到的数据导入GPNS平台，再经Cyto-scape软件处理,得到其分子网络（图2）。其中,每个节点代表1个化合物，不同颜色节点分别代表不同化合物类别,灰色代表未知化合物，节点之间连线表示2 个化合物具有相似的碎片离子,距离越近代表碎片离子相似性越高，同一类化合物分子会在一个分子网络中聚集成簇10 。最后对每个节点的保留时间、精确相对分子质量以及二级碎片进行分析，确定了六类化合物，包括糖类、类、生物碱类、黄酮类、有机酸类和苯酚类。正离子模式下主要得到枯类化合物簇，从中解析了一系列枯类化合物。以m/z605.4392、785.5035、47 1.2 0 12 三个化合物为例，通过对比其精确相对分子质量和保留时间，以及吴萸汤质谱分析提取到的化合物的二级碎片信息，推断241值误差在510-以内为条件,筛选出吴茱萸汤中存在的化合物。3 结 果3.1吴茱英汤分子网络分析分子网络可以依据化合物的二级质谱，将同类化合物聚集成簇，从而将吴茱萸汤中的成分类别清晰展现。因此，本研究首先按照“2.2”项下的色谱和质谱条件对吴茱汤提取物进行分析,采集其在48121652024283236t/min(a)正离子模式48图1吴茱英汤基峰色谱图12162024283236t/min(b)负离子模式242m/z605.4392为人参皂Rk2，m/z 7 8 5.50 35为人参皂苷Rg3,m/z471.2012为柠檬苦素。其中人参皂苷Rk2与人参皂苷Rg3的母核结构均为人参三醇,仅仅在侧链以及与苷元相连的糖上有细小差别,因此二者在分子网络中的位置十分接近；而柠檬苦素属于三衍生物,在结构上与前两者差别较大,被聚集到相距较远的类簇中。由此可知,分子网络对于识别同类化合物在结构上的差异具有高灵敏度的特点。HO-OHHHO人参皂首Rk2烟台大学学报（自然科学与工程版）析了一系列糖类化合物。以m/z341.0960、281.0950、341.116 2 三个化合物为例，结合保留时间与质谱数据,推断其分别为海藻糖、木二塘、纤维二糖。对它们的结构进行对比分析,发现其均为两个单糖分子组成的二糖,结构相似,因此它们在分子网络中的位置十分接近。此外，黄酮类化合物在分子网络中也聚集成簇，簇中心的m/z609.1893被推断为新橙皮苷,含有 C6-C3-C6 的基本结构。止离子模式OH605.4392第36 卷负离子模式下主要得到糖类化合物簇，从中解471.2012HOHIOH;785.5035HOHOHHOH1OH!HOOHQHOH人参皂首Rg3QHHOm.OHHOHOHO新橙皮苷柠檬苦素HOQHHOMOHOH!OH海藻糖负离子模式341.0960281.0950341.1162609.1893OHiOHOHOHo木二塘HOHO.iHOOH纤维二糖OHOH糖类3.2化合物鉴定在分子网络的分类结果指导下，进一步通过类Fig.2Molecular network of Wu-Zhu-Yu decoction生物碱图2 吴茱英汤分子网络CompoundDiscover3.2对质谱数据进行分析，最终从吴茱萸汤中鉴定出共计10 0 个化合物：黄酮类黄酮有机酸苯酚类未知物第2 期33个、生物碱类2 2 个、类9 个、有机酸类2 1个、糖类6 个、苯丙素类4个、苯酚类3个、苷类2 个,结类分子式别CisH1406CisHi406C21H20013C26H28:014C2iH20011C26H28:014C21H20010C21H20012C27H30016CisHi204C21H20012C2iH20O11C27H30016CisHioOs黄C2iH20O11酮C27H32014类CisHioO6C16H1207C2iH20011C2:H34015C28H32016C2:H34015CisH1oO4Ci5H1204CisHi2OsCisH10O4C22H2209CisH1oO7CisHi205迟呈林，等：UPLC-Q-OrbitrapHRMS法结合分子网络分析吴莱萸汤的化学成分Tab.1 Identification of chemical components of Wu-Zhu-Yu decoction实测相对分子质量291.078 8289.079 1481.0897565.147 1449.099 8565.147 0433.105 2465.0950609.153 1257.073 3465.095 0449.099 8611.152 1269.052 8449.099 9581.178 5287.047 4317.058 1449.099 9611.188 9625.167 7609.189 3255.057 7257.073 1273.068 2255.0579431.125 8301.042.5273.068 0243果见表1。表1吴茱英汤化学成分鉴定结果类化合物名称分子式别表儿茶素C16H1204黄儿茶素C16H1404酮杨梅素Ci7H2G04类夏佛塔苷C17H2403草苷CioHi3NO2伞花耳草苷CsHuNO2牡荆苷C7H7NO2金丝桃苷CoH6N20芦丁CoHoNO异廿草素CioHi3NsO3异皮苷CioHisNO木犀草苷CHiNO3榭皮素-3-0-葡萄糖-7-0-鼠李糖苷金雀异黄酮三叶豆荠柚皮苷山奈酚异鼠李素山酚-7-O-B-D-葡萄糖苷橙皮水仙苷新橙皮苷白杨素甘草素(S)-柚皮素大豆武元芒柄花苷榭皮素柚皮素查耳酮实测相对分子质量267.073 5271.088 9295.1828277.172 1180.094 5118.0788139.047 6123.0479148.068 3252.1016166.115 3168.073 8CioHoNO160.0685Ci2H16N20205.1260生物CioHisNO2碱类Ci5H24N202CiglIizN:OC:HiNCHiNOCnHi4N2Ci2Hi6N2Ci3Hi4N20C:HiNOCHsNOSCi7H17NO3C:HiNO化合物名称刺芒柄花素美迪紫檀素6-姜酚6-姜烯酚去甲猪毛菜碱甜菜碱葫芦巴碱烟酰胺5-甲氧基吲哚2-脱氧腺苷大麦芽碱吡哆醇6-甲氧基喹啉N,N-二甲腦激胺182.110 3甲基辛福林265.183 4氧化苦参碱304.136 9吴茱英碱122.0891苯乙胺122.0527苯甲酰胺3-(2-甲基氨基乙175.115 6基)吲哚189.131 0N,N-二甲基色胺215.110 6骆驼蓬灵134.05254-羟基吲哚152.009 02-羟基苯并噻唑N-反式-对香豆酰284.120 5酪胺134.052.52-吲哚酮244类别类C42H72013C42H72013C36H60O7C20H2:O3C30H4604CsHmN:O2CrHi206CH:O7CH.OsCsH.O4C:H:O4有机酸CioH7NO3类CoH:O4C7H7NO2C13Hi7NO2C12H13NO2CrH1204烟台大学学报（自然科学与工程版）表1(续)实测相对类分子式化合物名称分子质量CisH240221.182 5C42H72013783.494 9C30H48O3457.359 7C26H3008471.201 2785.503 5785.495 4605.439 2317.203 7471.339 2146.084 9191.062 7191.026 3169.020 8129.0260167.041 5CoHeO4143.026 6190.042 4181.042 2138.0477220.126 1204.094 7159.072 8第36 卷实测相对分子式别C:He04石竹素C9H:O3人参皂苷Rg2CH:O3熊果酮酸C:Hi404有CioHio04柠檬苦素机CoH1604酸人参皂苷Rg3CisH2004类人参皂苷F2Ci6H3004人参皂苷Rk2Ci2H22011咖啡油醇C6H1206甘草次酸CoH1206糖4-胍基丁酸类CioHi:O,右旋奎宁酸Ci2H22011柠檬酸CisH32016没食子酸Ci6Hi:O,柠康酸苯CoH.O3丙尿黑酸C1oHi20素曲酸C21H24064-羟基喹啉-2-甲CoHeO3酸苯酚咖啡酸CoHioO3类吡啶-4-乙酸C21H20O6利太林酸CoHi3N:Os3-吲哚丁酸类C23:H24O12庚二酸化合物名称分子质量167.026 5165.0472163.046 5173.088 5193.057 3187.104 2265.136 0285.2144341.096 0179.062.7179.062.7281.095 0341.1162505.167 9353.095 0163.031 6149.088 6373.156 6127.031 6167.062 9369.125 7244.0853493.1255邻苯二甲酸4-羟基肉桂酸苯并二氢呋喃-2-羧酸辛二酸阿魏酸王二酸脱落酸十六碳二酸海藻糖D-果糖D-半乳糖木二糖红维二糖麦芽三糖新绿原酸7-羟基香豆素反式茴香脑牛劳子苷元焦性没食子酸香草乙酮姜黄素阿糖胞苷柚皮素 5-O-D葡萄糖苷3.3化合物裂解规律分析3.3.1黄酮类化合物裂解途径分析谱图,共鉴别出黄酮类化合物33个，以生姜的主要活性成分6-姜酚（图3)和四味药材中的共有成分芦结合二级质丁（图4)两个化合物为例,对其裂解途径进行分析。6-姜酚的分子式为Ci,H2.04,正离子模式下,得到第2 期m/z295.1685的准分子离子CizH2604，二级质谱中的碎片离子主要有m/z179.0698，m/z177.0906,m/z145.0646,m/z137.0595。结合文献 ,推测6-姜酚有三种裂解方式:第一种,碰撞诱导解离,失去一个一CH，和一个一C.HisO2形成m/z137.0595的碎片离子C.H,0,+；第二种，137.0595200901/套/15010050050OHHOCi7H2704*m/z295.168 5迟呈林，等：UPLC-Q-OrbitrapHRMS法结合分子网络分析吴茱萸汤的化学成分250OH-CH:CuHi302*m/z 177.090 6245失去一个一C,H10形成m/z179.0698的碎片离子CioHO,*;第三种,先失去一个一C.Hi4O,形成m/z177.0906的碎片离子CHi30,*,随后失去一个一CH,0形成m/z145.0646的碎片离子CioH,O+,裂解过程见图3。117.069.7177.090 6145.064 6122.036 0100CH3,-C:H15O2m/z137.0595H+-Cll160HOCioHiO3m/z179.0698-C.H1402OH179.069 8150200m/zHOC:H,O2*259.1685250OH2OH300CioH,o+m/z 145.064 6图36-姜酚二级质谱图及裂解途径Fig.3 Secondary mass spectrum and cleavage pathway of 6-gingerol芦丁的分子式为C2z,H3oO16,负离子模式下,得到m/z609.1531的准分子离子Cz7H2gO16-,在二级质谱中的碎片离子主要有m/z301.0342，m/z151.0026。结合一级、二级质谱与文献12-3，推测芦丁经过碰撞诱导解离,失去一个一Ci2H2oO。形成m/z301.0342的碎片离子CisH0,-。随后通过逆狄尔斯-阿尔德裂解,失去一个一CgH,，形成m/z151.0026的特征碎片C,H,04-,裂解途径见图4。3.3.2生物碱类化合物裂解途径分析结合二级质谱图,共鉴别出生物碱类化合物2 2 个，以吴茱的主要活性成分吴萸碱（图5）为例，对其裂解途径进行分析。吴茱萸碱的分子式为CiHizN,O,正离子模式下，得到m/z304.1469的准分子离子C i g H i s N,O+。二级质谱中的离子碎片主要有m/z 171.091 5,m/z 161.070 7,m/z 144.080 8,m/z134.0599,推测吴茱碱有两种裂解方式：第一种，在碰撞诱导解离后被裂解为两部分，形成/z134.0599的CgHgNO+和m/z171.091 5的C.H,N,*的产物离子;第二种,断裂后形成m/z161.0707的C,H,N,0+和m/z144.0808的C i o H.o N*的产物离子,这与文献报道一致14-16 ,裂解过程见图5。3.3.3类化合物裂解途径分析结合二级质谱图,共鉴定出类化合物9 个，在此以人参中的代表成分人参皂苷Rg2（图6）为例,对其裂解途径进行分析。246烟台大学学报（自然科学与工程版）第36 卷30025020015010050OHHOOH0OHOOHOHOHOHC27H29016m/z 609.153 1271.024 6301.034 2255.0297243.0292151.002 6100200-HOHC12H200300.0273300400m/zHOOH0CisH,O7m/z 301.034 2609.153 1500600-H+OHOH-C:H.O3OH-H+HOOHCH;04m/z 151.002 6图4芦丁二级质谱图及碱裂解途径Fig.4 Secondary mass spectrum and cleavage pathway of rutin2015501/105050134.0599116.049 4171.091 4106.065 0144.080 8100150304.146 9161.070.7200m/zNH十250H300HCHHiN2*m/z 171.091 5Ci9Hi7N;tm/z 304.146 9图5吴茱英碱二级质谱图及碱裂解途径Fig.5 Secondary mass spectrum and cleavage pathway of evodiamine人参皂苷Rg2属于原人参三醇型人参皂苷，分子式为C42HzO13，在负离子模式下，得到m/z783.4949的准分子离子C4zH,O13-。在二级质谱中的碎片离子主要有m/z637.4315，m/z475.3810。结合文献17-18 1,推测人参皂苷Rg2裂解方式为一C.HloO4、一C.HloO,的葡萄糖残基分步中性丢失，分别生成m/z637.4315C36Ha10，-和C.HgNO+m/z 134.059 9H2CioHioN+m/z 144.080 8m/z475.3819的特征碎片C3oHs,04=。具体裂解过程见图6。4 讨 论本研究在优化色谱条件时，分类考察了三种有机相种类：甲醇、乙腈、乙腈：甲醇（4:1）,最终发现有机相为乙腈：甲醇(4:1)时的色谱峰形与出峰时间C,HoN2O+m/z161.0707第2 期迟呈林，等：UPLC-Q-OrbitrapHRMS法结合分子网络分析吴莱萸汤的化学成分247475.3810637.431 580060095.08531107.085 4400119.085 42000HOOH一HHOOHOITC42H/O13m/z783.4949较好;此外,发现在基峰色谱图中2 8 min 时间段内出峰密集，因此需要适当地放缓梯度的变化；最后,还在流动相中加入体积分数为0.0 5%的甲酸溶液改善峰形。在优化质谱条件时，考察了归一化碰撞能量，文献中常用15、30、45eV,但在这个能量下,吴茱萸汤成分的二级质谱碎片并不丰富，鉴定出的化合物种类也较少，因此，将其适当加大到2 0、40,60eV,成功地鉴定出更多种类的化合物。由于糖类化合物结构相似,难以分辨,而分子网络可以根据结构的相似性将化合物聚集成簇,本研究利用分子网络首次发现吴茱萸汤的分子网络中集聚了大量糖类化合物,对吴茱汤中糖类化合物的分析具有指导意义。此外，该技术对吴茱萸汤中的生物碱类、黄酮类、类、苯酚类等化合物信息的收集也比较全面。5小结采用UPLC-Q-OrbitrapHRMS技术结合分子网络,对吴茱萸汤的化学成分进行系统分析,成功鉴定出该方中的10 0 个化合物组分,其中包括：黄酮类33个、生物碱类2 2 个、有机酸类2 1个、类9 个、糖类6 个、苯丙素类4个、苯酚类3个和苷类2 个，为阐明其药效物质基础提供了依据。109.101 1203.1792100200-Ht-CgH1004HCHO6HOC36H61Om/z637.4315图6 人参皂苷Rg2二级质谱图及裂解途径Fig.6 Secondary mass spectrum and cleavage pathway of ginsenoside Rg2国现代中药,2 0 11,13(11):49-51.7 张起辉吴茱萸化学成分的研究D沈阳：沈阳药科大学,2 0 0 6.8 袁恩,邓敏芝，周立分，等UPLC-LTQ-OrbitrapMS结合分子网络技术鉴别铁线莲属植物中三枯皂苷类成分J.中草药,2 0 2 0,51（2 4):6 157-6 16 7.9程桃芳，金慧子，刘昌孝，等LC-MS/MS分子网络及其对中药研究的启发J中草药,2 0 18,49（2）:2 6 5-2 7 3.300OH1111O400HO参考文献：1莫夏敏，陈仁寿东汉至民国时期文献的经典名方吴茱萸汤考证J中国实验方剂学杂志,2 0 2 1,2 7（8）：33-42.2 张保国,丛悦,刘庆芳吴茱英汤现代药效学研究与临床应用J中成药,2 0 10,32（10）：17 7 5-17 7 8.3WANG Q,SHAN Y,CHEN Y,et al.Studies on thechemical constituents of Evodia rutaecarpa and Evodia rutaecar-pa passed with Liquorice and biological activities J.PlantaMedica,2012,78(11):1202-1203.4BLANCO M,NOMBELA F,CASTELLANOS M,et al.Statin treatment withdrawal in ischemic stroke:a controlled ran-domized study J.Neurology,2007,69(9):904-910.5高健，吕邵娃，人参化学成分及药理作用研究进展J中医药导报,2 0 2 1,2 7（1）：12 7-130,137.6张采,李佳,张永清大枣化学成分研究概况J中500-C.HioQs600HOC 30Hsi04m/z 475.381 0700800HOOHHH24810ZHAI Z,TAO X,ALAMI M M,et al.Network phar-macology and molecular docking combined to analyze the molec-ular and pharmacological mechanism of pinellia ternata in thetreatment of hypertension J.Current Issues in Molecular Biol-gy,2021,43(1):65-78.11 张雪红，甘春芳，洪艳艳。6-姜酚的有机波谱分析J化工技术与开发,2 0 0 5,34（6)：40-42,46.12FA T IM A H F,M A R T H A R D,K U SU M A WA T I A.D e-teksi dan identifikasi senyawa flavonoid ekstrak etanol kulit ba-tang tanaman majapahit(crescentia cujete)dengan LCMSJ.CHEESA:Chemical Engineering Research Articles,2020,3(2):88-98.13李自红，魏悦,范毅，等芦丁的电喷雾离子阱质谱分析J.分析试验室,2 0 15,34（2)：18 6-18 9.14 XU H R,NIU H B,HE B S,et al.Comprehensivequalitative ingredient profiling of Chinese herbal formula Wu-Zhu-Yu decoction via a mass defect and fragment filtering ap-烟台大学学报（自然科学与工程版）proach using high resolution mass spectrometry J.Molecules,2016,21(5):664.15赵晓梅,程宇欣，梁彩霞，等。基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的吴茱萸化学成分分析J中国实验方剂学杂志，2021,27(6):113-126.16 CHEN H W,JIAN M,WANG W P,et al.Desorptionelectrospray ionization mass spectrometry for 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combined with molecular network is used for the comprehensiveand rapid analysis and identification of the chemical components in Wu-Zhu-Yu decoction.Waters Acquity UPLCHSS T3 column(150 mm 2.1 mm,1.8 m)is performed for chromatographic separation.Heated electrospray i-onization source(HESI)is applied for data acquisition in positive and negative ion modes.The acquired massspectrometry data are imported into the GNPS platform to generate a molecular network.Meanwhile the data are im-ported into Compound Discover 3.2 software for further compound identification.In this research,the componentsof Wu-Zhu-Yu decoction are quickly classified and a total of 100 compounds are finally identified in Wu-Zhu-Yudecoction,including flavonoids,alkaloids,organic acids,terpenoids,sugars,phenylpropanoids,phenols,andglycosides.In this study,molecular network combined with HRMS technique is utilized for the rapid classificationand characterization of the chemical components of Wu-Zhu-Yu decoction,which is valuable for the characterizationof complex systems of Traditional Chinese Medicine.Keywords:Wu-Zhu-Yu decoction;high-resolution mass spectrometry;molecular network;component character-ization(责任编辑周雪莹)