GB 31658.22-2022 食品安全国家标准 动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法-（高清版）.pdf

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准动物性食品中-受体激动剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法04中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准备案号：XXXX-XXXX67.050X31658.222022National food safety standardDetermination of-agonists residues in animal derived foodby liquid chromatography-tandem mass spectrometric methodGB2022?09?20发布2023?02?01实施发 布国 家 市 场 监 督 管 理 总 局中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部CCS代替 GB/T?222862008、GB/T?213132007G B 前言本文件按照G B/T 标准化工作导则第部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草.本文件代替G B/T 动物源性食品中多种受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法、G B/T 动物源性食品中受体激动剂残留检测方法液相色谱质谱/质谱法.本文件与G B/T 相比,主要变化如下:a)修改文本格式为食品安全国家标准文本格式;b)增加了范围中的检测组织(见第章);c)增加了范围中的药物种类(见第章);d)灵敏度进一步提高,待测物在猪、牛、羊的肌肉、肝脏和肾脏中的检测限为 g/k g,定量限为 g/k g.本文件与G B/T 相比,主要变化如下:a)修改文本格式为食品安全国家标准文本格式;b)增加了范围中的检测组织(见第章);c)增加了范围中的药物种类(见第章).本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:G B/T 、G B/T .G B 食品安全国家标准动物性食品中 受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法范围本文件规定了动物性食品中受体激动剂残留检测的制样和液相色谱串联质谱测定方法.本文件适用于猪、牛、羊的肌肉、肝脏和肾脏中克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、西马特罗、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、班布特罗、克仑丙罗、妥布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗、克仑潘特和羟甲基克仑特罗共 种受体激动剂单个或混合物残留量的检测.规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.G B/T 分析实验室用水规格和试验方法术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.原理试料中残留的受体激动剂,酶解、高氯酸沉淀蛋白后,经乙酸乙酯、叔丁基甲醚萃取,固相萃取柱净化,液相色谱串联质谱法测定,内标法定量.试剂和材料 试剂以下所用试剂,除特别注明外均为分析纯试剂,水为符合G B/T 规定的一级水.乙腈(CHC N):色谱纯.甲醇(CHOH):色谱纯.甲酸(HC OOH):色谱纯.高氯酸(HC l O):.氨水(NHHO).乙酸乙酯(CHC OO CH):色谱纯.叔丁基甲醚CHO C(CH):色谱纯.葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶(G l u c u r o n i d a s e/a r y l s u l f a t a s e):U/U/m L.溶液配制 m o l/L乙酸铵缓冲液:取乙酸铵 g,溶解于 m L水中,用乙酸调p H至 .m o l/L高氯酸溶液:取高氯酸 m L,用水稀释至 m L.m o l/L氢氧化钠溶液:称取 g氢氧化钠,用适量水溶解冷却后,用水稀释至 m L.甲酸溶液:取甲酸m L,用水稀释至 m L.氨化甲醇溶液:取氨水m L,用甲醇稀释至 m L.G B 甲酸乙腈溶液:取甲酸m L,用乙腈稀释至 m L.甲酸溶液:取甲酸m L,用水稀释至 m L.甲醇 甲酸溶液(,V/V):取甲醇 m L和 甲酸溶液 m L,混匀.标准品 受体激动剂:克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、西马特罗、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、班布特罗、克仑丙罗、妥布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗、克仑潘特和羟甲基克仑特罗,含量均 ,见附录A.同位素内标:克仑特罗 D、盐酸莱克多巴胺 D、沙丁胺醇 D、西马特罗 D、齐帕特罗 D、氯丙那林 D、特布他林 D、西布特罗 D、盐酸马布特罗 D、盐酸班布特罗 D、克仑丙罗 D、盐酸妥布特罗 D和羟甲基克仑特罗 D,含量均 .见附录A.标准溶液的配制 混合标准储备液:精密称取克仑特罗等标准品约 m g,用甲醇溶解并定容至 m L容量瓶中,配制成浓度为 m g/m L的标准储备液.以下保存,有效期 个月.混合内标储备液:精密称取克仑特罗 D等同位素内标约 m g,用甲醇溶解并定容至 m L容量瓶中,配制成浓度为 m g/m L的内标储备液.以下保存,有效期 个月.混合标准工作液:精密量取m g/m L的混合标准储备液 L,于 m L容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为 g/m L的标准工作液.以下保存,有效期个月.混合内标工作液:精密量取m g/m L的混合内标储备液 L,于 m L容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为 g/m L的内标工作液.以下保存,有效期个月.材料 混合型阳离子交换固相萃取柱:m g/m L,或相当者.微孔滤膜:m.仪器和设备 液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾离子源(E S I).分析天平:感量 g.天平:感量 g.恒温振荡水浴摇床.涡旋混合器.高速离心机.振荡器.氮吹仪.固相萃取装置.试样的制备与保存 试样制备取适量新鲜或解冻的空白或供试样品,并均质.a)取均质后的供试样品,作为供试试样;b)取均质后的空白样品,作为空白试样;c)取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.试样保存 以下保存.G B 测定步骤 酶解与提取称取试料g(准确至 g),于 m L离心管内,加 m o l/L乙酸铵缓冲溶液m L、葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶 L,涡旋混匀,避光水浴振荡 h,放置至室温,备用.萃取、净化与浓缩取备用液,加 n g/m L内标工作液 L,涡旋混匀,r/m i n离心 m i n,取上清液,加 m o l/L高氯酸溶液m L,涡旋混匀,用高氯酸调p H至 ,r/m i n离心m i n后,将上清液用 m o l/LN a OH溶液调p H至 .加乙酸乙酯 m L,中速振荡m i n,r/m i n离心m i n,取上层有机相.下层水相中再加入叔丁基甲醚 m L,中速振荡m i n,r/m i n离心m i n,取上层有机相,合并,下氮气吹干,用甲酸溶液m L溶解,备用.取混合型阳离子交换固相萃取柱,依次用甲醇、甲酸溶液各m L活化,取备用液过柱,依次用甲酸溶液、甲醇各m L淋洗,抽干,用氨化甲醇溶液m L洗脱;洗脱液在 下氮气吹干.残余物中加入甲醇 甲酸溶液(,V/V)m L,充分溶解,过 m微孔滤膜,供液相色谱串联质谱仪测定.标准曲线的制备精密量取混合标准工作液、混合内标工作液适量,用甲醇 甲酸溶液(,V/V)稀释成浓度为n g/m L、n g/m L、n g/m L、n g/m L、n g/m L和 n g/m L的系列标准工作液,含内标均为n g/m L,供液相色谱串联质谱法测定.以待测药物特征离子色谱峰的峰面积与对应内标物特征离子色谱峰的峰面积比值为纵坐标,相应的标准溶液浓度比为横坐标,绘制标准工作曲线,求回归方程和相关系数.测定 液相色谱参考条件a)色谱柱:五氟苯基柱(mm mm,m),或相当者.b)流动相:A相为 甲酸溶液,B相为 甲酸乙腈溶液.流动相梯度为m i n m i n保持B;m i nm i n,B线性变化到 B,m i n m i n,保持 B,m i n m i n保持B.c)流速:m L/m i n.d)进样量:L.e)柱温:.串联质谱参考条件a)离子源:电喷雾离子源;b)扫描方式:正离子扫描;c)检测方式:多反应离子监测(MRM);d)电喷雾电压:V;e)离子源温度:;f)辅助气:p s i;g)辅助气:p s i;h)气帘气:p s i;i)碰撞气:M e d i u m.待测药物定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量参考值见表.G B 表待测药物定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量参考值药物定性离子对m/z定量离子对m/z去簇电压V碰撞能量e V克仑特罗 克仑特罗 D 莱克多巴胺 莱克多巴胺 D 沙丁胺醇 沙丁胺醇 D 西马特罗 西马特罗 D 齐帕特罗 齐帕特罗 D 氯丙那林 氯丙那林 D 特布他林 特布他林 D 西布特罗 西布特罗 D 马布特罗 马布特罗 D 溴布特罗 班布特罗 班布特罗 D 克仑丙罗 克仑丙罗 D 妥布特罗 妥布特罗 D 利托君 克仑赛罗 马喷特罗 克仑潘特 羟甲基克仑特罗 羟甲基克仑特罗 D 注:内标以市场上购得的实际同位素内标为准;溴布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗和克仑潘特采用莱克多巴胺同位素内标定量,如果市场上有种药物一一对应的同位素内标,优先采用.G B 测定法 定性测定在同样的测试条件下,试样溶液的保留时间与标准溶液保留时间的偏差应在 之内;试样溶液中的离子相对丰度与标准溶液中的离子相对丰度相比,符合表的要求.表试样溶液中离子相对丰度的允许偏差范围相对丰度,允许偏差,定量测定取试样溶液和标准工作液,作单点或多点校准,按内标法定量.系列标准工作液及试样溶液中目标物的响应值均应在仪器检测的线性范围内.在上述液相色谱串联质谱条件下,标准溶液中各特征离子质量色谱图见附录B中的图B.空白试验取空白试料,除不添加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.结果计算和表述试样中受体激动剂残留量按标准曲线或公式()计算.XAVA isCsCismAisAsC is ()式中:X 试样中受体激动剂残留量的数值,单位为微克每千克(g/k g);A 试样溶液中受体激动剂的峰面积;As 标准溶液中受体激动剂的峰面积;Ais 试样溶液中受体激动剂对应内标的峰面积;A is 标准溶液中受体激动剂对应内标的峰面积;CS 标准溶液中受体激动剂浓度的数值,单位为纳克每毫升(n g/m L);Cis 试样溶液中受体激动剂内标浓度的数值,单位为纳克每毫升(n g/m L);C is 标准溶液中受体激动剂内标浓度的数值,单位为纳克每毫升(n g/m L);V 溶解最终残余物体积的数值,单位为毫升(m L);m 供试试样质量的数值,单位为克(g).检测方法的灵敏度、准确度和精密度 灵敏度本方法对猪、牛、羊的肌肉、肝脏和肾脏的检测限为 g/k g,定量限为 g/k g.准确度本方法对于猪、牛、羊的肌肉、肝脏和肾脏中受体激动剂在 g/k g g/k g添加浓度上的回收率为 .精密度本方法批内相对标准偏差,批间相对标准偏差.G B 附录A(资料性)药物中英文名称、化学分子式和C A S号A 待测药物中英文名称、化学分子式和C A S号见表A .表A 待测药物中英文名称、化学分子式和C A S号中文名称英文名称化学分子式C A S号盐酸克仑特罗C l e n b u t e r o lH y d r o c h l o r i d eC H C lNO 盐酸莱克多巴胺R a c t o p a m i n eH y d r o c h l o r i d eC H C l NO 沙丁胺醇S a l b u t a m o lC H NO 西马特罗C i m a t e r o lC H NO 盐酸齐帕特罗Z i p a t e r o lH y d r o c h l o r i d eC H C l NO 氯丙那林C l o r p r e n a l i n eC H C l NO 硫酸特布他林T e r b u t a l i n eH e m i s u l f a t es a l tC H NO/HS O 西布特罗C i m b u t e r o lC H NO 盐酸马布特罗M a b u t e r o lH y d r o c h l o r i d eC H C lFNO 溴布特罗B r o m b u t e r o lC H B rNO 盐酸班布特罗B a m b u t e r o lH y d r o c h l o r i d eC H C l NO 盐酸克仑丙罗C l e n p r o p e r o lH y d r o c h l o r i d eC H C lNO 盐酸妥布特罗T u l o b u t e r o lH y d r o c h l o r i d eC H C lNO 利托君R i t o d r i n eC H NO 盐酸克仑赛罗C l e n c y c l o h e x e r o lH y d r o c h l o r i d eC H C lNO 盐酸马喷特罗M a p e n t e r o lH y d r o c h l o r i d eC H C lFNO 盐酸克仑潘特C l e n p e n t e r o lH y d r o c h l o r i d eC H C lNO 盐酸羟甲基克仑特罗H y d r o x y M e t h y lC l e n b u t e r o lH y d r o c h l o r i d eC H C lNO A 同位素内标中英文名称、化学分子式和C A S号见表A .表A 同位素内标中英文名称、化学分子式和C A S号中文名称英文名称化学分子式C A S号克仑特罗 DC l e n b u t e r o l DC HC lDNO 盐酸莱克多巴胺 DR a c t o p a m i n e Dh y d r o c h l o r i d eC H DC l NO 沙丁胺醇 DS a l b u t a m o l DC H DNO 西马特罗 DC i m a t e r o l DC H DNO 齐帕特罗 DZ i p a t e r o l DC H DNO 氯丙那林 DC l o r p r e n a l i n e DC HDC l NO特布他林 DT e r b u t a l i n e DC H DNO 西布特罗 DC i m b u t e r o l DC H DNO 盐酸马布特罗 DM a b u t e r o l Dh y d r o c h l o r i d eC H DC lFNO 盐酸班布特罗 DB a m b u t e r o l Dh y d r o c h l o r i d eC H DC l NO 克仑丙罗 DC l e n p r o p e r o l DC HC lDNO 盐酸妥布特罗 DT u l o b u t e r o l Dh y d r o c h l o r i d eC H DC lNO 羟甲基克仑特罗 DH y d r o x y M e t h y lC l e n b u t e r o l DC H DC lNO G B 附录B(资料性)受体激动剂特征离子质量色谱图标准溶液中受体激动剂及内标特征离子质量色谱图见图B .G B G B 图B 标准溶液中受体激动剂及内标特征离子质量色谱图(n g/m L)