miR-592靶向调控PRDM5影响肾细胞癌侵袭转移及自噬的机制研究.pdf

医学分子生物学杂志,2024,21(3):239-246 J Med Mol Biol,2024,21(3):239-246DOI:10.3870/j.issn.1672-8009.2024.03.008资助项目:2022 年济南市卫生健康委员会科技计划项目(No.2022-1-30)通讯作者:王文祯(电话:[phone],E-mail:853188132 )This work was supported by a grant from the 2022 Jinan Municipal Health Commission Science and Technology Plan Project(No.2022-1-30)Corresponding author:WANG Wenzhen(Tel:[phone],E-mail:853188132 )miR-592 靶向调控 PRDM5 影响肾细胞癌侵袭转移及自噬的机制研究李顺来1,宋晓琳2,姜亭起1,王文祯11济南市第五人民医院泌尿外科 济南市,2500002山东省立第三医院手术室 济南市,250000【摘要】目的 探究 miR-592 靶向调控 PR 结构域锌指蛋白 5(PR domain zinc finger protein 5,PRDM5)影响肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)侵袭转移及自噬的机制。方法RT-qPCR、蛋白质印迹检测RCC 组织和细胞中 miR-592、PRDM5 mRNA 和蛋白水平。A498、786-O 细胞分为 anti-miR-NC 组、anti-miR-592 组、anti-miR-592+si-NC 组、anti-miR-592+si-PRDM5 组。RNA 免疫共沉淀(RIP)检测 miR-592 和PRDM5 的结合;CCK-8、Transwell 实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;透射电镜观察自噬小体形成;蛋白质印迹检测细胞 PRDM5、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、Beclin1、微管相关蛋白 1 轻链 3(LC3)/水平。建立移植瘤裸鼠模型,分析敲低 miR-592 表达对移植瘤生长的影响。结果 RCC 组织和细胞中PRDM5 mRNA 和蛋白水平降低,miR-592 水平增加(P0.05)。敲低 miR-592 表达后,细胞 A450 nm、迁移和侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9 水平降低,自噬小体数量、Beclin1、LC3/水平增加(P 0.05)。敲低PRDM5 表达能部分逆转敲低 miR-592 对细胞增殖、侵袭及自噬的影响(P0.05)。敲低 miR-592 表达能够抑制裸鼠移植瘤生长(P0.05)。结论miR-592 通过靶向抑制 PRDM5 表达,促进 RCC 细胞增殖、侵袭转移能力,并抑制自噬能力。【关键词】miR-592;PR 结构域锌指蛋白 5;肾细胞癌;侵袭转移;自噬【中图分类号】R392.11Effect of miR-592 on Migration,Invasion and Autophagy of RenalCell Carcinoma via Targeting PRDM5LI Shunlai1,SONG Xiaolin2,JIANG Tingqi1,WANG Wenzhen11Department of Urology,Fifth Peoples Hospital of Jinan,Jinan,250000,China2Operating Room,Third Hospital of Shandong Province,Jinan,250000,China【Abstract】Objective To explore the effect of miR-592 on the migration,invasion and auto-phagy of renal cell carcinoma(RCC)via targeting PR domain zinc finger protein 5(PRDM5).Methods RT-qPCR and Western blotting were used to detect the expression levels of miR-592 andPRDM5 mRNA and protein in RCC tissues and cells.A498 and 786-O cells were divided into 4groups:anti-miR-NC group,anti-miR-592 group,anti-miR-592+si-NC group and anti-miR-592+si-PRDM5 group.RNA immunoprecipitation(RIP)was used to determine the combination of miR-592 and PRDM5.CCK-8,wound-healing assay and transwell test were used to analyse the cell pro-liferation,migration and invasion.Transmission electron microscopy was used to observe the autoph-agosome formation.Western blotting was used to detect the expression levels of PRDM5,matrix met-alloproteinase(MMP)-2,MMP-9,Beclin1,microtubule-associated protein 1 light chain 3(LC3)/.Nude mice model of transplanted tumors was established to analyze the effect of knoc-king down miR-592 on the growth of transplanted tumors.Results PRDM5 mRNA and protein expres-sion levels in the RCC tissues and cells were decreased(P0.05).After knocking down the expres-sion of miR-592,the cell A450value,the number of migrated and invaded cells,the expression levelsof MMP-2 and MMP-9 were decreased,while the number of autophagosomes,the expression levels ofBeclin1 and LC3 II/I were increased(P0.05).Knocking down the expression of PRDM5 could par-tially reverse the effect of miR-592 knock-down on cell proliferation,invasion and autophagy(P0.05).Knocking down the expression of miR-592 could inhibit the growth of transplanted tumors innude mice(P0.05).Conclusion miR-592 promotes the proliferation,invasion and migration ofRCC cells,and inhibits autophagy by targeting the expression of PRDM5.【Key words】miR-592;PR domain zinc finger protein 5;renal cell carcinoma;invasion andmetastasis;autophagy肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是起源于肾实质泌尿小管上皮系统的恶性肿瘤,其中肾透明细胞癌占成人 RCC 的 80%90%,是 RCC的主要病理亚型1。由于 RCC 无明显症状且缺乏有效的早期诊断标志物,大多数患者就诊时已发生远处转移或复发,从而导致患者总生存率显著降低2。微小 RNA(microRNAs,miRNAs)是一种长度约为 20 nt 的非编码 RNA,已发现 miRNAs 能够与 mRNA 的 3非翻译区结合,并可充当 mRNA的海绵3。研究表明 miR-592 表达与包括 RCC 在内的多种癌症进展密切相关4。如 miR-592 在宫颈癌中高表达,抑制 miR-592 表达能够抑制癌细胞HeLa 和 SiHa 的增殖、迁移和侵袭5。miR-592 在胃癌中高表达,且 miR-592 表达与胃癌患者 TNM分期和淋巴结转移有关6。miR-592 的过度表达与RCC 患者淋巴结转移、TNM 分期和总生存率低显著相关,miR-592 的过表达能够促进786-O 和 Caki-1 细胞增殖、迁移和侵袭7。PR 结构域锌指蛋白 5(PR domain zinc finger protein 5,PRDM5)是PRDM 家族的转录调节子,因其启动子包含容易被甲基化的 CpG 岛,故具有肿瘤抑制活性8。研究发现 PRDM5 在多种恶性肿瘤中表达异常,能够降低癌细胞的增殖、转移能力,提高化疗敏感性9。如 PRDM5 在乳腺癌组织中表达下调,且其表达水平与患者 TNM 分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移等明显相关10。过表达 PRDM5 能够抑制肺腺癌786-O 细胞的增殖,并抑制裸鼠移植瘤生长11。PRDM5 在 胃 癌 组 织 和 细 胞 中 表 达 下 调,上 调PRDM5 能够抑制胃癌细胞的增殖和转移,提高胃癌细胞对氟尿嘧啶的敏感性12。然而 PRDM5 在RCC 中研究较少,且 miR-592 和 PRDM5 是否具有靶向调控关系尚不清楚。因此,本研究拟探讨 miR-592 和 PRDM5 的调控关系,PRDM5 在 RCC 组织和细胞中的表达水平以及 miR-592 和 PRDM5 对 RCC 细胞侵袭、转移及自噬的影响,以期为治疗 RCC 提供依据。1 材料与方法1.1 临床资料选取 2020 年 2 月 2021 年 5 月在济南市第五人民医院行手术治疗的 80 例 RCC 患者为研究对象。收集患者的 RCC 组织、癌旁组织标本及病历资料(包括患者年龄、性别、肿瘤直径、TNM 分期、分化程度、淋巴结转移等信息)。纳入标准:年龄:28 80 岁;组织病理学诊断为 RCC;行根治性手术治疗;术前未经放疗、化疗。排除标准:其他恶性肿瘤者;临床资料不全者。所有患者均对本研究知情同意,本研究经过济南市第五人民医院伦理委员会批准(20210814)。1.2 材料及仪器正常人肾上皮细胞系(HK-2)及 RCC 细胞系(A498、Caki-2、786-O、769-P)(中国科学院上海细胞生物学研究所);裸鼠(北京唯尚立德生物科技有限公司,实验动物许可证号:SCXK(京)2021-0010);Trizol 溶液(美国 Invitgen 公司);反转录 试 剂 盒(日 本 TaKaRa 公 司);miR-592、PRDM5 引物(上海华大基因科技有限公司);慢病毒 质 粒 pHRi-anti-miR-592、pHRi-anti-miR-NC、pHRi-si-PRDM5、pHRi-si-NC(上海吉玛制药技术有限公司);PRDM5、基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、Beclin1、微管相关蛋白 1 轻链 3(microtubule associated protein1 light chain 3,LC3)/抗体(美国 Cell Signa-ling Technology 公司)。酶标仪(美国 Fermentas 公司);低温高速离心机(上海卢湘仪离心机仪器有限公司);倒置显微镜(日本 Olympus 公司)。1.2 生物数据库分析 PRDM5 的表达使用 GEPIA 数据库分析 PRDM5 在正常肾组织和 RCC 组织中的表达情况,及 PRDM5 表达对患者总体生存期的影响。1.3RT-qPCR 检 测 RCC 组 织 和 细 胞 系 中 miR-592、PRDM5 mRNA 表达 采用 Trizol 试剂从患者 RCC 组织和细胞系中提取总 RNA 并反转录为 cDNA,使用 SYBR Green 法进行扩增,以 GAPDH 作为内参。反应条件:94 预变性60 s 后进行 11 个温度递减循环(94 20 s,65 60 40 s,每个循环递减 0.5,72 1.5 min),随后进行 29 个恒温循环(94 20 s,60 40 s,2 90 s)。使用 2-CT法计算 miR-042李顺来,等.miR-592 靶向调控 PRDM5 影响肾细胞癌侵袭转移及自噬的机制研究592、PRDM5 mRNA 相对水平。1.4 蛋白质印迹检测 RCC 组织中 PRDM5 蛋白表达取患者 RCC 组织,提取并测定蛋白浓度,蛋白稀释后进行电泳,转 PVDF 膜,脱脂奶粉中封闭2 h,分别加入 PRDM5 一抗(1 2 000)4 过夜。经 TBST 洗涤后,加入二抗(1 5 000)4 孵育 2h,加入 ECL 显色剂显色,凝胶成像仪拍照,分析各组蛋白相对 GAPDH 的表达量。1.5 细胞转染与分组将 A498、786-O 细胞分为 anti-miR-NC 组(转染 pHRi-anti-miR-NC)、anti-miR-592 组(转 染pHRi-anti-miR-592)、anti-miR-592+si-NC 组(转染 pHRi-anti-miR-592 和 pHRi-si-NC)、anti-miR-592+si-PRDM5 组(转 染 pHRi-anti-miR-592 和pHRi-si-PRDM5)。根据 LipofectamineTM3000 说明书,将质粒和 Lipofectamine 3000 混合溶液加入A498、786-O 细胞中。转染 4 h 后更换培养基,24h 后通过 RT-qPCR 检测是否转染成功。1.6 生物信息学预测和双荧光素酶实验使用 Targetscan 数据库预测 miR-592 和 PRDM5的结合位点,并扩增上述片段。分别构建野生型质粒 luc-PRDM5-WT 和突变型质粒 luc-PRDM5-MUT。将两种质粒分别与 miR-592 mimic 及 mimic NC 混合,利 用 Lipofectamine 3000 分 别 将 其 转 染 至A498、786-O 细胞,转染 48 h 后,按试剂盒要求检测各组细胞裂解物的相对荧光素酶活性。1.7 RNA 免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)检测 miR-592 和 PRDM5 蛋白的结合收集各组 A498、786-O 细胞,按照 MagnaRIPTMRNA-Binding Protein Immunoprecipitation Kit说明处理细胞。加入 RIP 裂解液裂解细胞,获得细胞裂解液上清;制备磁珠-抗体复合物,加入 RIP洗涤缓冲液重悬磁珠,漩涡震荡后弃上清,重复 4次;加入 RIP 免疫沉淀缓冲液和细胞裂解液上清于磁珠-抗体复合物中,4 旋转孵育过夜,短暂离心,加入 RIP 洗涤缓冲液清洗,漩涡震荡后弃上清,重复 6 次,以去除非特异性的吸附;加入蛋白酶 K 消化磁珠-抗体复合物,以去除蛋白质,加入苯酚 氯仿 异戊醇(125 24 1),并抽提 RNA,将获得的 RNA 溶于 DEPC 水中,RT-qPCR 检测 miR-592 相对水平。1.8 CCK-8 法检测细胞增殖能力将各组 A498、786-O 细胞培养 24、48、72 h后,将原培养液更换成含有 10%CCK-8 溶液的新鲜培养液。并置于37 下孵育1 h。采用酶标仪检测各样品在 450 nm 处的吸光度(absorbance,A)值。1.9 Transwell 实验检测细胞迁移和侵袭能力Transwell 小室平铺一层基质胶(迁移实验不铺胶),上室加入无血清培养基培养的 A498、786-O 细胞,下室加入含有10%胎牛血清的培养基,并置于37 下孵育24 h。经甲醛固定、结晶紫染色后,显微镜(200)下观察并统计穿膜细胞数。1.10 透射电镜检测细胞自噬小体形成将各组 A498、786-O 细胞接种于 6 孔板,培养 48 h 后收集细胞,用 2.5%戊二醛于 4 固定过夜,然后用 1%四氧化锇固定 2 h、经梯度乙醇和丙酮脱水、丙酮和 812 包埋剂渗透包埋、60 聚合48 h,制成50 70 nm 的超薄切片,经铀铅双染色、室温干燥过夜,于透射电镜(25 000)下观察各组细胞自噬小体的形成情况。1.11 蛋白质印迹检测细胞中 PRDM5、MMP-2、MMP-9、Beclin1、LC3/蛋白表达 取各组 A498、786-O 细胞,测定细胞 PRDM5、MMP-2、MMP-9、Beclin1、LC3/蛋白相对水平。另取 A498、786-O 细胞,使用不同浓度(0、2.5、5、10、20 mol/L)的甲基化抑制剂 5-氮-2脱氧胞苷(5-Aza-2 DC)处理后,测定 PRDM5 蛋白相对水平。方法同 1.4。1.12 裸鼠移植瘤模型构建及指标检测将 20 只裸鼠随机分为 anti-miR-NC 组(注射转染 pHRi-anti-miR-NC 的 786-O 细胞)、anti-miR-592 组(注射转染 pHRi-anti-miR-592 的 786-O 细胞)、anti-miR-592+si-NC 组(注射转染 pHRi-anti-miR-592 和 pHRi-si-NC 的 786-O 细胞)、anti-miR-592+si-PRDM5 组(注射转染 pHRi-anti-miR-592和 pHRi-si-PRDM5 的 786-O 细胞),每组 5 只。裸鼠右肩皮下注射 0.2 mL 已转染慢病毒的 786-O 细胞悬液(1 107个/mL)。1 次/10 d,共 3 次。实验结束后处死裸鼠,取出肿瘤组织,测定移植瘤体积和重量。取各组裸鼠肿瘤组织,测定 MMP-2、MMP-9、Beclin1、LC3/蛋白相对水平。方法同 1.4。1.13 统计学处理采用 SPSS 16.0 软件进行统计分析。患者临床病理参数为计数资料,以例数(n)表示,多组间比较采用卡方(2)检验;计量数据均符合正态分布,以 x s 表示,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用 LSD/t 检验。142医学分子生物学杂志,2024,21(3):239-246 J Med Mol Biol,2024,21(3):239-2462 结果2.1 数据库分析 RCC 组织中 PRDM5 的表达GEPIA 数据库结果显示,RCC 组织中 PRDM5表达水平低于正常组织(P 0.05,图 1A),且PRDM5 表达水平越低,患者生存期越短(P 0.05,图 1B)。2.2 患者 RCC 组织中 miR-592、PRDM5 的表达RT-qPCR、蛋白质印迹结果显示,与癌旁组织比较,RCC 组 织 中 miR-592 水 平 明 显 升 高,PRDM5 mRNA 和蛋白水平明显降低(P 平均值,n=53)。结果显示,miR-592 表达水平与患者 TNM 分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(P0.05,表 1)。A:GEPIA 数据库分析 RCC 中 PRDM5 表达;B:GEPIA数据库分析 PRDM5 表达与患者预后的关系。图 1 数据库分析 RCC 组织中 PRDM5 的表达A:RT-qPCR 检测 RCC 组织中 miR-592、PRDM5 mRNA 水平;B:蛋白质印迹检测 RCC 组织中 PRDM5 蛋白水平。与癌旁组织比较,P6016(59.26)31(58.49)性别0.7550.385 男18(66.67)30(56.60)女9(33.33)23(43.40)肿瘤直径(cm)0.6350.425 510(37.04)15(28.30)517(62.96)38(71.70)TNM 分期36.0800.001 期22(81.48)7(13.21)期5(18.52)46(86.79)分化程度 低、中分化11(40.74)37(69.81)6.2990.012 高分化16(59.26)16(30.19)淋巴结转移12.6740.001 有12(44.44)44(83.02)无15(55.56)9(16.98)2.3 RCC 细胞系中 miR-592、PRDM5 的表达RT-qPCR 和蛋白质印迹结果显示,与 HK-2 比较,A498、Caki-2、786-O、769-P 中 miR-592 水平明显升高,PRDM5 mRNA 和蛋白水平明显降低(P0.05,图 3A、B)。使用不同浓度的甲基化抑制剂(5-Aza-2 DC)处理后,与 0 mol/L 组比较,2.5、5、10、20 mol/L 组 PRDM5 蛋白水平明显升高(P0.05,图 3C)。242李顺来,等.miR-592 靶向调控 PRDM5 影响肾细胞癌侵袭转移及自噬的机制研究A:RT-qPCR 检测细胞 miR-592、PRDM5 mRNA 水平;B、C:蛋白质印迹检测细胞 PRDM5 蛋白水平。1:HK-2;2:A498;3:Caki-2;4:786-O;5:769-P;与 HK-2 组或 0 mol/L 组比较,P0.05。图 3 RCC 细胞系中 miR-592、PRDM5 的表达2.4 低表达 miR-592 对 RCC 细胞增殖、侵袭转移及自噬的影响 CCK8、Transwell 实验、透射电镜结果显示,与anti-miR-NC 组比较,anti-miR-592 组细胞培养72 h 后的 A 值、细胞迁移和侵袭数量明显减少,自噬小体数量明显增多(P0.05,图4A G)。蛋白质印迹结果显示 MMP-2、MMP-9 蛋白水平明显降低,Beclin1、LC3/蛋白水平明显升高(P0.05,图4H)。A:CCK-8 实验;B:细胞迁移数;C:细胞侵袭数;D、E:Transwell 实验(迁移、侵袭,200);F:透射电镜观察自噬小体形成(25 000,箭头指示自噬小体);G:自噬小体数量;H:蛋白质印迹检测 MMP-2、MMP-9、Beclin1、LC3/蛋白相对水平。1:anti-miR-NC 组;2:anti-miR-592 组。与 anti-miR-NC 组比较,P0.05。图 4 低表达 miR-592 对 RCC 细胞增殖、侵袭转移及自噬的影响2.5 miR-592 靶向负调控 PRDM5 的表达Targetscan 结果显示,miR-592 与 PRDM5 存在结合位点(图 5A)。荧光素酶报告基因实验显示,与 miR-NC 组比较,miR-592 组野生型 PRDM5 荧光素酶活性明显降低(P 0.05,图 5B)。RIP 结果显示,与 IgG RIP 组比较,PRDM5 RIP 组miR-592 的富集水平明显升高(P0.05,图 5C)。RT-qPCR、蛋白质印迹结果显示,与 anti-miR-NC 组比较,anti-miR-592 组 miR-592 水平明显降低,342医学分子生物学杂志,2024,21(3):239-246 J Med Mol Biol,2024,21(3):239-246PRDM5 mRNA 和蛋白水平明显升高(P0.05);与anti-miR-592+si-NC 组 比 较,anti-miR-592+si-PRDM5 组 miR-592 水平明显升高,PRDM5 mRNA 和蛋白水平明显降低(P0.05,图5D、E)。A:miR-592 与 PRDM5 的结合位点;B:荧光素酶实验;C:RIP 检测 miR-592 与 PRDM5 的结合;D:RT-qPCR 检测细胞 miR-592、PRDM5 mRNA 水平;E:蛋白质印迹检测 PRDM5 蛋白水平.1:anti-miR-NC 组;2:anti-miR-592 组;3:anti-miR-592+si-NC 组;4:anti-miR-592+si-PRDM5 组。与 anti-miR-NC 组比较,P 0.05;与 anti-miR-592+si-NC 组比较,#P0.05。图 5 miR-592 靶向负调控 PRDM5 的表达2.6低表达 PRDM5 部分逆转了低表达 miR-592 对 RCC细胞增殖、侵袭转移及自噬的影响 CCK8、Transwell 实验、透射电镜及蛋白质印迹结果显示,与 anti-miR-592+si-NC 组比较,anti-miR-592+si-PRDM5 组细胞培养 72 h 后的 A 值、细胞迁移和侵袭数量明显增多,自噬小体数量明显减少,MMP-2、MMP-9 蛋白水平明显升高,Beclin1、LC3/蛋白水平明显降低(P0.05,图6)。A:CCK-8 实验;B:细胞迁移数;C:细胞侵袭数;D、E:Transwell 实验(迁移、侵袭,200);F:透射电镜观察自噬小体形成(25 000,箭头指示自噬小体);G:自噬小体数量;H:蛋白质印迹检测 MMP-2、MMP-9、LC3/、Beclin1 蛋白相对水平。1:anti-miR-592+si-NC 组;2:anti-miR-592+si-PRDM5 组。与 anti-miR-592+si-NC 组比较,P0.05。图 6 低表达 PRDM5 部分逆转了低表达 miR-592 对 RCC 细胞增殖、侵袭转移及自噬的影响442李顺来,等.miR-592 靶向调控 PRDM5 影响肾细胞癌侵袭转移及自噬的机制研究2.7 miR-592 靶向 PRDM5 对裸鼠移植瘤生长及 MMP-2、MMP-9、Beclin1、LC3/水平的影响 与 anti-miR-NC 组比较,anti-miR-592 组肿瘤体积和重量明显减小,MMP-2、MMP-9 蛋白水平明显降低,Beclin1、LC3/蛋白水平明显升高(P0.05)。与 anti-miR-592+si-NC 组比较,anti-miR-592+si-PRDM5 组肿瘤体积和重量明显增大,MMP-2、MMP-9 蛋白水平明显升高,Beclin1、LC3/蛋白水平明显降低(P0.05,图 7)。A:裸鼠移植瘤观察;B:肿瘤体积;C:肿瘤质量;D:蛋白质印迹检测 MMP-2、MMP-9、Beclin1、LC3/蛋白相对水平。1:anti-miR-NC 组;2:anti-miR-592 组;3:anti-miR-592+si-NC 组;4:anti-miR-592+si-PRDM5组。与 anti-miR-NC 组比较,P0.05;与 anti-miR-592+si-NC 组比较,#P0.05。图 7 miR-592 靶向 PRDM5 对裸鼠移植瘤生长及 MMP-2、MMP-9、Beclin1、LC3/水平的影响3 讨论miR-592 通过调控靶基因的表达参与癌细胞的侵袭和转移,在多种肿瘤中发挥促癌作用13。在RCC 组织中,miR-592 呈现高表达状态,并且其表达水平与患者的不良生存预后呈正相关;敲低miR-592 表达可抑制 RCC 细胞的增殖并促进细胞凋亡14。与上述研究一致,本研究发现 miR-592在 RCC 组织及细胞系 A498、Caki-2、786-O、769-P 中高表达;miR-592 水平与患者 TNM 分期、分化程度、淋巴结转移情况有关。细胞实验结果显示,敲低 miR-592 表达可抑制 A498、786-O 细胞的增殖、侵袭转移,并提高细胞自噬能力。此外,敲低miR-592 表达能够抑制裸鼠移植瘤的发展。这些结果表明,miR-592 在 HCC 细胞中发挥了促癌作用。PRDM5 是 PRDM 家族的成员,在癌症中具有双重作用。一方面,PRDM5 作为肿瘤抑制基因,能够抑制多种肿瘤的生长和侵袭,包括食管鳞状细胞癌15、卵巢癌16、结直肠癌17;另一方面,PRDM5 也能够促进黑色素瘤18和急性髓系白血病19细胞的增殖和迁移,增强体内异种移植瘤的肿瘤发生。然而,关于 PRDM5 对 RCC 的影响的研究相对较少。通过 GEPIA 数据库的分析,我们发现 PRDM5 在 RCC 组织中呈现低表达状态,且其表达水平越低,患者的生存期就越短。本研究进一步证实,PRDM5 mRNA 和蛋白水平在 RCC 组织及细胞系中均显著降低。此外,我们发现 miR-592 能够靶向负调控 PRDM5 的表达。敲低 PRDM5 表达可以部分逆转敲低 miR-592 对细胞增殖、侵袭转移和自噬的影响。这些结果表明,PRDM5 在 RCC 中发挥了抑癌作用。肿瘤的复发和转移与细胞侵袭转移及自噬能力密切相关20-21。本研究结果显示,敲低 miR-592 表达通过抑制 MMP-2、MMP-9 表达,降低细胞侵袭能力。同时,通过上调自噬相关蛋白 Beclin1、LC3/表 达,提 高 细 胞 自 噬 能 力。然 而,敲 低PRDM5 表达能部分逆转敲低 miR-592 对上述蛋白水平的影响。这表明 miR-592 和 PRDM5 在调控542医学分子生物学杂志,2024,21(3):239-246 J Med Mol Biol,2024,21(3):239-246RCC 细胞的侵袭和自噬能力方面具有重要作用(图 8)。图 8 miR-592 靶向 PRDM5 影响 RCC 细胞增殖、侵袭转移及自噬能力的可能机制 综上所述,miR-592 通过靶向抑制 PRDM5 表达,促进 RCC 细胞增殖、侵袭转移能力,并抑制自噬能力。这为 RCC 的治疗提供了新的思路和潜在的靶点。参考文献1 CUI Q Q,WANG C,LIU S,et al.YBX1 knockdown inducesrenal cell carcinoma cell apoptosis via Kindlin-2J.CellCycle,2021,20(22):2413-2427.2 LIU Y D,LV H Y,LI X Y,et al.Cyclovirobuxine inhibitsthe progression of 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