农业农村部公告第627号-1-2022 饲料中环丙氨嗪的测定.pdf

2022?12?19发布2023?03?01实施饲料中环丙氨嗪的测定46中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准备案号：XXXX-XXXX65.120BDetermination of cyromazine in feeds中华人民共和国农业农村部发 布农业农村部公告第 627 号12022CCS农业农村部公告第 号 前言本文件按照G B/T 标准化工作导则第部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由农业农村部畜牧兽医局提出.本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(S A C/T C)归口.本文件起草单位:河南省兽药饲料监察所.本文件主要起草人:吴宁鹏、张盼盼、韩立、彭丽、李慧素、李华岑、韩楠、史秀玲、韩俊伟、孟蕾、杨洁、袁聪、张崇威、陈阳、吴志明.农业农村部公告第 号 饲料中环丙氨嗪的测定范围本文件规定了饲料中环丙氨嗪的高效液相色谱和液相色谱串联质谱测定方法.本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中环丙氨嗪的测定.本文件高效液相色谱法检出限为 m g/k g,定量限为 m g/k g;液相色谱串联质谱法检出限为 m g/k g,定量限为 m g/k g.规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.G B/T 分析实验室用水规格和试验方法G B/T 动物饲料试样的制备术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.高效液相色谱法 原理试样中的环丙氨嗪用乙腈三氯乙酸溶液提取,经混合型阳离子交换柱净化,高效液相色谱仪测定,外标法定量.试剂或材料除另有规定外,仅使用分析纯试剂.水:G B/T ,一级.乙腈:色谱纯.甲醇:色谱纯.三氯乙酸溶液:称取三氯乙酸 g,加水溶解并稀释至 mL.提取液:取三氯乙酸溶液()mL,加乙腈()稀释至 mL.m o l/L盐酸溶液:取盐酸mL,加水稀释至 mL.氨水乙腈溶液:取氨水mL,加乙腈稀释至 mL.磷酸盐缓冲液:称取磷酸氢二钾 g、磷酸二氢钾 g,加水 mL溶解,混匀.流动相:磷酸盐缓冲液()甲醇()乙腈().环丙氨嗪标准储备溶液(m g/mL):准确称取环丙氨嗪标准品(C A S号:,含量)m g(精确至 m g)于 mL容量瓶中,加甲醇()溶解并定容.以下保存,有效期为个月.环丙氨嗪标准中间工作溶液(g/mL):准确移取环丙氨嗪标准储备溶液()mL于 m L容量瓶中,加甲醇()稀释并定容.保存,有效期为个月.环丙氨嗪标准工作溶液:准确移取适量标准中间工作溶液()于 mL容量瓶中,用流动相()稀释,配制成浓度分别为 g/mL、g/mL、g/mL、g/mL、g/mL、农业农村部公告第 号 g/mL的标准系列溶液.临用现配.混合型阳离子交换固相萃取柱:m g/mL,或性能相当者.微孔滤膜:m,有机系.仪器设备 高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器.电子天平:感量 m g和 m g.涡旋混合器.涡旋振荡器.离心机:转速不低于 r/m i n.固相萃取装置.氮吹仪.样品按G B/T 的规定制备试样,至少 g,粉碎使其全部通过 mm孔径的分析筛,充分混匀,装入密闭容器中,备用.试验步骤 提取平行做份试验.称取试样g(精确至 g)于 mL离心管中,准确加入提取液()m L,涡旋混匀,振荡提取 m i n,于 r/m i n离心 m i n,移取上清液至另一 mL离心管.残渣用提取液 mL重复提取次,合并次上清液,混匀,备用.净化混合型阳离子交换固相萃取柱()依次用甲醇()、水和提取液()各mL活化.准确移取备用液()mL过柱,用水、甲醇()和 m o l/L盐酸溶液()各mL依次淋洗,抽干.用氨水乙腈溶液()mL洗脱,收集洗脱液,于 氮吹至干.准确移取流动相()m L溶解残余物,混匀,过微孔滤膜(),待测.测定 液相色谱参考条件色谱柱:亚乙基桥杂化颗粒键合C,柱长 mm,内径 mm,粒径m,或性能相当者.柱温:.检测波长:n m.流速:mL/m i n.进样量:L.流动相:.标准系列溶液和试样溶液测定在仪器的最佳条件下,分别取标准工作溶液()和试样溶液()上机测定.在上述色谱条件下,环丙氨嗪标准溶液色谱图见附录A.定性以保留时间定性,试样溶液中环丙氨嗪保留时间应与标准系列溶液(浓度相当)中环丙氨嗪的保留时间一致,其相对偏差在 之内.定量以环丙氨嗪的浓度为横坐标,以其色谱峰面积(响应值)为纵坐标,绘制标准曲线,标准曲线的相关系数应不低于 .试样溶液中环丙氨嗪的响应值应在标准曲线测定的线性范围内.如超出线性范围,应将试样用流动相稀释(n倍)后,重新进样分析.单点校准时,试样溶液与标准溶液中待测物的响应值均应在仪器检测的线性范围内(相差不超过).农业农村部公告第 号 试验数据处理试样中环丙氨嗪的含量以质量分数计.多点校准按公式()计算,单点校准按公式()计算.wVV Vm n()式中:w 试样中环丙氨嗪含量的数值,单位为毫克每千克(m g/k g);从标准曲线查得的试样溶液中环丙氨嗪浓度的数值,单位为微克每毫升(g/mL);V 提取液总体积的数值,单位为毫升(mL);V 净化时所用提取液体积的数值,单位为毫升(mL);V 氮气吹干后所用复溶液体积的数值,单位为毫升(mL);m 试样质量的数值,单位为克(g);n 上机测定的试样溶液超出线性范围后,进一步稀释的倍数.wAsVV AsVm n()式中:A 试样溶液中环丙氨嗪的色谱峰面积;As 标准溶液中环丙氨嗪的峰面积;s 环丙氨嗪标准溶液浓度,单位为微克每毫升(g/mL).测定结果用平行测定的算术平均值表示,结果保留位有效数字.精密度在重复性条件下,次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的.液相色谱串联质谱法 原理试样中的环丙氨嗪用乙腈三氯乙酸溶液提取,经混合型阳离子交换柱净化,液相色谱串联质谱仪测定,基质匹配标准曲线校正,外标法定量.试剂或材料除另有规定外,仅使用分析纯试剂.水:G B/T ,一级.乙腈:色谱纯.甲醇:色谱纯.三氯乙酸溶液:称取三氯乙酸 g,加水溶解并稀释至 mL.提取液:取三氯乙酸溶液()mL,加乙腈()稀释至 mL.m o l/L盐酸溶液:取盐酸mL,加水稀释至 mL.氨水乙腈溶液:取氨水mL,加乙腈()稀释至 mL.甲酸溶液:取甲酸mL,加水稀释至 mL.甲酸乙腈溶液:取乙腈()mL,加 甲酸溶液()稀释至 mL.环丙氨嗪标准储备溶液(m g/mL):准确称取环丙氨嗪对照品(C A S号:,含量)m g(精确至 m g)于 mL容量瓶中,用甲醇()溶解并定容.以下保存,有效期为个月.环丙氨嗪标准中间工作溶液(g/mL):准确移取环丙氨嗪标准储备溶液()mL于 m L容量瓶中,用甲醇()稀释并定容.保存,有效期为个月.环丙氨嗪标准工作溶液:准确移取适量标准中间工作溶液()于 mL容量瓶中,用 甲酸乙腈溶液()稀释,配制成浓度分别为 n g/mL、n g/mL、n g/mL、n g/mL、n g/mL农业农村部公告第 号 和 n g/mL的标准系列溶液.临用现配.混合型阳离子交换固相萃取柱:m g/mL,或性能相当者.微孔滤膜:m,有机系.仪器设备 液相色谱串联质谱仪:配电喷雾离子源.电子天平:感量 m g和 m g.涡旋混合器.涡旋振荡器.离心机:转速不低于 r/m i n.固相萃取装置.氮吹仪.样品按G B/T 的规定制备试样,至少 g,粉碎使其全部通过 mm孔径的分析筛,充分混匀,装入密闭容器中,备用.选取类型相同,均匀一致、且在待测物保留时间处,仪器响应值小于方法定量限 的饲料样品,作为空白样品.试验步骤 提取平行做份试验.称取试样g(精确至 g)于 mL离心管中,准确加入提取液()m L,涡旋混匀,振荡提取 m i n,于 r/m i n离心 m i n,移取上清液至另一 mL离心管.残渣用提取液 mL重复提取次,合并次上清液,混匀,备用.净化混合型阳离子交换固相萃取柱()依次用甲醇()、水和提取液()各mL活化.准确移取备用液()mL过柱,用水、甲醇()和 m o l/L盐酸溶液()各mL依次淋洗,抽干.用氨水乙腈溶液()mL洗脱,收集洗脱液,于 氮吹至干.准确移取 甲酸乙腈溶液()mL溶解残余物,混匀,过微孔滤膜(),待测.基质匹配标准溶液的制备取 空白试样,按 和 处理得到氮气吹干的空白基质,分别准确移取环丙氨嗪工作溶液()各 mL溶解残余物,配制成浓度分别为 n g/mL、n g/mL、n g/mL、n g/mL、n g/m L和 n g/mL的基质匹配标准系列溶液,待测.测定 液相色谱参考条件色谱柱:硅胶基质双键键合C,柱长 mm,内径 mm,粒径 m,或性能相当者;柱温:;进样量:L;流动相A:甲酸溶液();流动相B:乙腈(),梯度洗脱程序见表.表梯度洗脱程序时间m i n流速m L/m i nAB 农业农村部公告第 号 质谱参考条件离子源:电喷雾电离,正离子模式(E S I);检测方式:多反应监测(MRM);离子源喷雾电压:k V;喷雾器温度:;鞘气:A r b;辅助气:A r b;多反应监测(MRM)离子对、射频电压及碰撞能量见表.表环丙氨嗪的多反应监测(MRM)离子对、射频电压及碰撞能量的参考值被测物名称监测离子对,m/z射频电压,V碰撞能量,e V环丙氨嗪 a a为定量离子对.基质匹配标准系列溶液和试样溶液测定在仪器的最佳条件下,分别取环丙氨嗪基质匹配标准系列溶液()和试样溶液()上机测定.环丙氨嗪基质匹配标准溶液定量离子色谱图见附录B.定性在相同试验条件下,试样溶液与基质匹配标准系列溶液()中待测物质的保留时间的相对偏差应在 之内.根据表选择的环丙氨嗪定性离子对,比较试样图谱中待测物定性离子的相对离子丰度与浓度接近的基质标准溶液中对应的定性离子的相对离子丰度,若偏差不超过表规定的范围,则可判定为试样中存在环丙氨嗪.表定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对离子丰度 最大允许偏差 定量以环丙氨嗪的浓度为横坐标、色谱峰面积(响应值)为纵坐标,绘制标准曲线,标准曲线的线性相关系数不低于 .试样溶液与标准溶液中待测物的响应值均应在仪器检测的线性范围内,如超出线性范围,应重新试验或将试样溶液和基质匹配标准溶液用 甲酸乙腈溶液()作相应稀释(n倍)后重新测定.单点校准定量时,试样溶液中待测物的浓度与基质匹配标准溶液浓度相差不超过.试验数据处理试样中环丙氨嗪的含量以质量分数计.多点校准按公式()计算;单点校准按公式()计算.wVVVm n()式中:由基质匹配标准曲线查得的试样溶液中环丙氨嗪浓度的数值,单位为纳克每毫升(n g/mL).wAsVVA sVm n()式中:A s 基质匹配标准溶液中环丙氨嗪的峰面积;s 基质匹配标准溶液中环丙氨嗪浓度的数值,单位为纳克每毫升(n g/mL);平行测定结果用算术平均值表示,结果保留位有效数字.农业农村部公告第 号 精密度在重复性条件下,次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的.农业农村部公告第 号 附录A(资料性)环丙氨嗪标准溶液色谱图环丙氨嗪标准溶液色谱图见图A .图A 环丙氨嗪标准溶液色谱图(g/m L)农业农村部公告第 号 附录B(资料性)环丙氨嗪基质匹配标准溶液定量离子色谱图环丙氨嗪基质匹配标准溶液定量离子色谱图见图B .图B 环丙氨嗪基质匹配标准溶液定量离子色谱图(g/m L)