大鼠多重脑震荡后用良bielschowsky还原银法标记神经元脑干轴索的变化研究.doc

附件附件 2 2 昆明医科大学昆明医科大学 “大学生创新性实验计划”项目申请表 项 目 类 别项 目 类 别：学校资助项目 学院资助项目 项 目 名项 目 名 称：称：大鼠多重脑震荡后用改良大鼠多重脑震荡后用改良 Bielschowsky 还原银法标记还原银法标记神经元、脑干轴索的变化研究神经元、脑干轴索的变化研究 项目申请人：项目申请人：郭剑龙郭剑龙 所 在所 在(院院)系系：法医学院法医学院 专专业：业：法医学法医学 申请人电话：申请人电话：指 导 教指 导 教 师：师：于建云于建云 单位和职称：单位和职称：法医学院法医学院 （专家）（专家）联联 系系 电电 话：话：填填 表表 日日 期：期：2023 年年 11 月月 19 日日 昆明医科大学教务处制 一、项目团队情况一、项目团队情况 项目申请人项目申请人 姓名 郭剑龙 性别 男 民族 汉族 出生日期 1991.11 所在院系 法医学院 专业 法医学 年级 2023 级 电话 项目组其他成员（不涉及申请人和指导教师）项目组其他成员（不涉及申请人和指导教师）姓名 性别 年级 所在院系 专业 分工 署名 郭冠麟 男 2023级 法医学院 法医学 试剂配制及染色 高海兆 男 2023级 法医学院 法医学 Bielschowsky 银染 何光凯 男 2023级 法医学院 法医学 Bielschowsky 银染 黄曾杰 男 2023级 法医学院 法医学 MCC 模型复制 指导教师指导教师 姓名 于建云 性别 男 民族 汉 出生日期 19627 学历 博士 专业 法医病理学 所在院系 法医学院 职务 高等教育研究所所长、脑损伤研究室主任 职称 专家 研究方向 脑损伤 电话 当前从事的教学、研究工作简介 于建云，男，1962 年 7 月生，外科学博士，法医学二级专家，硕士研究生导师。昆明医科大学法医病理学科带头人，校级骨干教师。现任高等教育研究所所长、脑损伤研究室主任，国家自然科学基金项目函评专家（年至今），中华病理学会云南省分会委员，中华神经外科学会云南省分会委员，中华行为医学与脑科学杂志编委，昆明医科大学学报编委，美国神经科学与脑外伤学会会员，云南省解剖学会常务理事，云南省高等医学教育学会常务理事兼常务副秘书长，中国高等法医学教育学会理事。从事教学、科研及教育管理 28 年，先后副主编、参编全国法医病理学、法医学规划教材 11 部，发表学术论文 104 篇。获云南省教学成果一等奖 3 项，全国高等医学教育研究优秀研究成果一、二等奖各一项。先后主持完毕国家自然科学基金及云南省自然科学基金项目共 6 项。二、项目简介二、项目简介 用于建云脑损伤研究室的单摆闭合性脑损伤打击装置与大鼠脑震荡（CC）判类回归方程，建立多重脑震荡（MCC）大鼠模型，采用改良 Bielschowsky 还原银法显示鼠脑皮层神经元及脑干轴索，并采用 Image-Pro Plus 6.0 高清楚图文分析系统，根据不同观测研究对象性质，分别用神经元及其突触、神经细胞、轴突的数密度（NA）测量；轴突平均直径（D）、轴突横穿点密度（QA）测量；脑水肿细胞间隙平均面积（A）、细胞平均中心距离（Z）测量等，进行分析，将得出的结果与先前研究的单重脑震荡后轴索银染结果相比较，从而得出单重和多重脑震荡后大鼠皮层神经元及轴索改变特点，并延长实验时间，探讨 MCC 大鼠皮层神经元及轴索在伤后 64 天的改变情况，以进一步了解三重脑震荡鼠神经生物学基础。三、研究目的三、研究目的 （简要陈述所申请研究项目最后要达成的目的）（1）预期得出改良 Bielschowsky 还原银法在多重脑震荡后显示鼠脑皮层神经元及脑干轴索的优缺陷。（2）得出多重脑震荡后 64 天大鼠皮层神经元及脑干轴索银染改变的特点，并与先前研究的单重脑震荡相比较，得出单重脑震荡和多重脑震荡后大鼠皮层神经元及脑干轴索银染改变的特点。（3）预期培养 5 名本科生脑震荡研究方面的知识，石蜡切片及银染方面的知识、Image-Pro Plus 6.0 高清楚图文分析系统在记录结果中的应用以及记录学研究方法方面的知识。（4）发表论文 1 篇。四、立论依据四、立论依据 （涉及项目研究意义、国内外研究现状分析、请附重要参考文献及出处）（1 1）研究意义）研究意义 随着竞技运动的广泛开展与普及，它在给运动参与者带来极大快乐的同时，也给他（她）们带来了巨大的运动性损伤与痛苦。因运动导致的脑损伤（Sport-related traumatic brain injury,sTBI）是发生在竞技运动特别是在拳击、跆拳道、橄榄球、垒球、足球、曲棍球、棒球、篮球等运动员互相紧密接触、竞技性剧烈的运动项目中最为常见的一类损伤1,2,3,4。其中，大多数 sTBI 属于不 同 限 度 的 脑 震 荡，又 称 为 运 动 性 脑 震 荡（Sports-Related Cerebral Concussion,SRCC），Weber.J 等5（1999）报道在各种运动损伤中，SRCC 的发病率高达 80%以上，故 SRCC 是最多见的运动性损伤类型。通常，一般人的一生只也许发生一次脑震荡（Cerebral Concussion,CC/brain concussion,BC），而在一个爱慕运动的参与者身上，则也许在短时间内发生多次的 SRCC。1973 年，Richard Schneider 发现当一名运动员在经历一次 CC 尚未恢复时，又遭受第二次 SRCC 后，会出现更为严重的神经与学习记忆方面的障碍，甚至死亡，1984年美国 Saunders 和 Harbaugh 一方面将这一现象定义为二次冲击综合征（Second Impact Syndrome，SIS）1,2。经临床与流行病学观测发现，在一些竞技性强、运动员密切接触的运动项目中，运动员极易发生多次性脑震荡（multiply cerebral concussion，MCC）并产生二次冲击综合征（SIS），在遭受过 SRCC 的运动员，其 SIS 发生率将上升 6-9.3 倍，其严重限度与受伤的间隔时间有关9.10。于建云等在先前长期 CC 大鼠研究基础上，初次在国内建立了三重大鼠脑震荡（3MCC）模型（即天天打击一次、连续打击 3 次的 MCC 鼠模型），先前于建云等用 Bielchowsky 银染法染色单重脑震荡(PCC/BC)大鼠，光镜显示:单重脑震荡后鼠脑干轴索结构变化表现为直径增粗,或呈串珠状、畸形状或收缩球样改变,或染色不均,间质水肿等;透射电镜显示:轴索超微结构在 BC/CC 后 3 h 髓鞘开始水肿并出现不同限度的分离,纤维周边及胶质细胞水肿,毛细血管扩张淤血或闭塞、血小板血栓形成等。BC 后 12 h 开始出现部分轴索的溶解,BC 后 432 d 髓鞘水肿腔隙明显、增厚显著,直到伤后 64 d 脑干神经轴索仍未恢复正常11,12。于建云等使用 Bielchowsky 银染法染色研究三重脑震荡后神经元和轴索的变化，得出 1-24d 皮层、海马和脑干网状结构神经元不同限度固缩变性,以 2d 组为重；轴索不同限度的肿胀、变形、排列紊乱、收缩球形成；轴索直径平均值均大于对照组,以 2、4d 组最为明显13。先前的研究显示三重脑震荡后脑损伤更为严重21，22，24，但是前期的银染研究时间较为短，未观测到 24 天以后的变化，本实验填补了此处空白。在研究神经组织的形态方面,特别是显示各种神经末梢则以银染法较为抱负,最大特点是在镜下可控制其反映限度或效果。神经组织的浸染,最细的末梢也能清楚显示出,而结缔组织着色很淡14,15,16,17。银染通过不断改良和改善方法，神经末梢及轴突的染色重要分为 Golgi cox 法和 Bielchowsky 银染法两大类14。然而 Golgi cox 法的不稳定性和 Bielchowsky 银染法的耗时过长的缺陷使得该技术被新兴技术所取代。有报道说改良 Bielschowshy 还原银法在显示神经终末较为抱负，该法最大特点是在显微镜下可控制其反映限度,最细的神经终末也能清楚地显示17,18,19。多重脑震荡后大鼠神经元及轴索 64 天用银染方法染色的变化如何呢，本实验填补了此处空白。（2）国内外研究现状及发展动态 对 SIS 的结识，至今才 20 数年的历史1,2。关于多次性脑震荡（MCC）研究的学术用语也非常烦多，有的将其称为反复性脑外伤（Repetitive trauma brain injury，RTBI）、反复性头部损伤（Repeat head injury，RHI）、多次性头损伤（Multiple head injuries,MHI）等等。由于 MCC 临床病理研究材料难以获得，国外大量研究仅仅停留在临床病例观测，临床心理测试及疗效评价方面。国外学者多从临床与流行病学研究的角度，对遭受 SRC 及 SIS 患者的临床表现，易感因素分析，神经认知与电生理检测、神经精神改变与心理情感变化等方面就行了较多的观测分析。结果发现 MCC(RTBI)以青年人多见，令人不解的是 SRCC 虽属轻微脑损伤，但部分 MCC(RTBI)患者则会出现更严重和持久的 PCS，其中神经行为改变与认知障碍较为突出，且随着 CC 次数的递增，发生 SIS 所需的外部力量越来越小；严重者会在第二次 CC 后发生死亡，个别病例尸解时以急性脑充血、肿胀和难控性高颅内压为主，无颅内占位性病变，常规的 CT 和 MRI 影像学检查难有阳性发现1,2，3,4,5,6,7,8,9,10。国内于建云等（2023）在国家基金支持下，在先前长期 CC 大鼠研究基础上，初次在国内建立了三重大鼠脑震荡（3MCC）模型（即天天打击一次、连续打击 3 次的 MCC 鼠模型），并通过空间参考记忆与工作记忆等认知行为、感觉门控，胆碱能神经、多巴胺能神经和 5-羟色胺能神经变化的研究，获得了大量极故意义的发现20,21,22,23,24。特别是严格采用了于建云等（2023）研制的实验大鼠轻中型闭合脑损伤分级昏迷指标与判别多元回归方程，严格控制轻型脑损伤（CC）鼠才被选为入组实验动物，有效地保证了实验结果的效度与信度，结果发现 MCC 鼠存在有认知行为、神经元与轴索变性、部分递质的相关合成限速酶等方面存在某种损伤累计效应，与临床观测结果非常一致，符合 MCC 为闭合性、轻微脑损伤，缺少明显的神经病理学改变，很少发生死亡的特点，是目前较抱负的 SIS 机制研究大鼠模型。综上所述，本研究用金属单摆闭合性脑损伤打击装置复制多重脑震荡大鼠模型，采用改良 Bielschowsky 还原银法，显示鼠脑皮层神经元及脑干轴索,得出多重脑震荡后 64 天大鼠皮层神经元及轴索银染改变的特点，及其与单重脑震荡大鼠的区别。重要参考文献重要参考文献 1.Kelly J.Sports-related recurrent brain injuryUnited State.MMWR Morb Mortalwkly RepJ.1997 1997 Mar 14;46(10):224-7。2.Nicholas M.Wetjen,Mark A.Pichelmann,John L.D Atkinson.Second Impact Syndrome:Concussion and Second Injury Brain ComplicationsJ.Am Coll Surg,2023.211(4):553-557。3.Ravdin LD,et al.Assessment of congnitive recovery following sports related head trauma in boxersJ.Clin J sport Med.20232023 Jan;13(1):21-27。4.Pieter W,Zemper ED.Incidence of reported cerebral concusion in adult taekwondo athletes.J-R-Soc-HealthJ.19981998 Oct;118(5):272-279。5.Weber J,Jaksche H.Craniocerebral trauma in sport with recommendations for prevention sportverletz-sportschadenJ.1999 Mar;13(1):30-35。6.Echemendia,Ruben J.,Margot D.et al.Neuropsychological Test Performance Prior To and Following Sports-Related Mild Traumatic Brain Injury.Clinical Journal of Sport MedicineJ.20232023 1;11(1):23-31。7.Cobb S,Bttin B.Second-impact syndrome(review).Jsch NursJ.2023.2023.Oct;20(5)262-7 8.Ferguson RJ.Postconcussion syndrome following sports-related head injury:expeclationas etiology.Neuro-psychologyJ.19991999 Oct;13(4):582-589。9.Zemper ED.Two year prospective study of related risk of a second cerebral concussion.Am-J-Phys-Med-RehabilJ.2023 Sep;82(9):653-9。10.Collins MW,et al.Cumulative effects of concussion in high school athletes.NeurosurgeryJ.20232023 Nov;51(5):1175-81。11.吴春云,郭泽云,于建云等.脑震荡对大鼠脑干轴索和髓鞘的影响.昆 明 医 学 院 学 报J.2023,(4):1-5。12.于建云，李树华，高林波.脑震荡大鼠脑干神经纤维组织病理与超微结构损伤后 64天动态改变观测.神经解剖学杂志.2023 24(5):478482.13.于建云(通讯作者)，李俊祥，李娟娟。三重脑震荡鼠模型建立及组织病理学动态改变观测。中华神经外科疾病研究杂志J，2023，9（4）：337-340。14.孟云莲.现代组织学和细胞学技术 M.武汉 武汉大学出版社 2023.15.郑翔 马玉琼 章为.避免 Golgi 银染标本表层产生铬银沉淀的一个方法 J.解剖学杂志 2023 31(6):871-872.16.王飞石 杨飞鹏 陈晓萍.常规石蜡包埋法在改良 Golgi 银染法中的应用.科 技 通 报.Jan.2023(Vol.27 No.1):57-60.17.杨少芳.改良 Bielschowsky 法对神经末梢的显示.解剖科学进展.2023,11(4):382 18.曾赛凡,张声.固绿髓鞘染色法和 Bielschowsky 神经轴突染色法在诊断中枢神经脱髓鞘假瘤中的应用.临床与实验病理学杂志.2023 Apr;19(2):216-217.19.王京景.改善的 Bielschow sky 氏法对神经末梢的显示.中国组织化学与细胞化学杂志.2023Vol.10(2)Jun:239-240.20.高林波，于建云（通讯作者），石泉，等.多重脑震荡鼠平衡运动与认知行为的变化J.中国行为医学科学，20232023，15（）：970-973。21.江乐盛，于建云（通讯作者），高林波，等.多重脑震荡对大鼠 8-14 天空间认知行为的影响J.中华神经外科疾病研究杂志,20232023，5（6）408-410。22.李娟娟，于建云（通讯作者），郭泽云等。多重脑震荡大鼠 5羟色胺能神经纤维变化。解剖学杂志，20232023，30（6）753758。23.于建云（通讯作者），李俊祥，郭泽云等。实验大鼠轻中型闭合脑损伤分级的昏迷指标与量化标准研究。法医学杂志，2023,1(24):8-11。24.于建云(通讯作者)，李俊祥，李娟娟，郭泽云，高林波，许冰莹，吴春云。三重脑震荡鼠模型建立及组织病理学动态改变观测。中华神经外科疾病研究杂志，2023，9（4）：337-340。五、研究方案五、研究方案 1.研究内容和拟解决的问题 研究内容 1）建立多重脑震荡（MCC）大鼠模型。2)多重脑震荡大鼠模型进行改良 Bielschowsky 还原银法染色。3）选取合适的银染方法进行多重脑震荡后 1 天组、2 天组、4 天组、8天组、16 天组、24 天组、48 天组、64 天组大鼠皮层神经元及脑干轴索银染；与先前研究的单重脑震荡相比较，得出单重脑震荡和多重脑震荡后大鼠皮层神经元及脑干轴索银染改变的特点。4）培养 5 名本科生脑震荡研究方面的知识，石蜡切片及银染方面的知识、Image-Pro Plus 6.0 高清楚图文分析系统在记录结果中的应用以及记录学研究方法方面的知识。拟解决的问题 1)得出改良 Bielschowsky 还原银法在多重脑震荡后显示鼠脑皮层神经元及脑干轴索的优缺陷。2）得出多重脑震荡后 64 天大鼠皮层神经元及脑干轴索银染改变的特点，并与先前研究的单重脑震荡相比较，得出单重脑震荡和多重脑震荡后大鼠皮层神经元及脑干轴索银染改变的特点。3）培养 5 名本科生脑震荡研究方面的知识，石蜡切片及银染方面的知识、Image-Pro Plus 6.0 高清楚图文分析系统在记录结果中的应用以及记录学研究方法方面的知识。2拟采用的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析（1 1）拟采用的研究方法、技术路线）拟采用的研究方法、技术路线 MCCMCC 模型复制及入组实验动物标准控制：模型复制及入组实验动物标准控制：1 1）对照组设立：）对照组设立：所有实验均随机设立相等数量的大鼠作为正常对照组；全实验过程中具体记录动物死亡率及解剖记录死亡因素。2 2）MCCMCC 模型复制及分组：模型复制及分组：用先前研制并已反复使用的单摆闭合性大鼠脑损伤复制仪，给体重 26010 克的正常 SD 大鼠（雌雄各半）额顶部予钝性震荡打击，产生一过性意识障碍，每隔一天打击一次，共打击三天，将符合标准的大鼠随机分为 1 天组、2 天组、4 天组、8 天组、16 天组、24 天组、48 天组、64 天组。3 3）大鼠脑震荡叛别标准：）大鼠脑震荡叛别标准：参照于建云等先前建立的大鼠轻中型脑损伤判类多元回归方程进行大鼠单纯性脑震荡类别量化鉴定。每次打击后必须符合以下 5 条定性标准：A.撞击后即刻出现一过性呼吸暂停，但不超过 20 秒；B.出现短暂的角膜反射、针刺疼痛反射、外耳道刺激反映消失，但不超过 3 分钟；C.意识恢复后无运动障碍和反射异常；D.无颅内出血；E.全脑肉眼观无损伤改变。银染样品制备：银染样品制备：定期麻醉，经心腔原位灌注处杀固定、取脑、石蜡切片者用 10%中性甲醛固定，酶标免疫组化者用 4%多聚甲醛缓冲液固定。大脑再经相应灌注液固定后石蜡切片。分别自嗅束后缘、脑垂体后缘各切一刀将脑分为 3 块，待做银染工作。改良改良 BielschowskyBielschowsky 氏银染法：氏银染法：1）氨银溶液配制：20%硝酸银水溶液 30 ml,无水乙醇 20 ml,两液混合后出现棕黄色沉淀,逐滴加入浓氨水,形成的沉淀溶解,再滴加 5 滴浓氨水,过滤后使用,临用时配制。2）染色环节:切片常规脱蜡至水；蒸馏水洗 1min,进入已先加热至 37 温箱内 20%硝酸银水溶液浸染 25 min,蒸馏水洗 2 min；10%福马尔林溶液还原至切片呈黄色,蒸馏水洗 3 min；氨银液滴染 5 min；10%福马尔林液还原至切片呈棕黑色 1 min；0.2%氯化金水溶液调色 5 s,蒸馏水洗 2 min；5%硫代硫酸钠水溶液定影 2min,水洗 5 min；乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。染色切片变化观测：染色切片变化观测：对各实验组前额叶皮质、顶叶皮质、扣带皮质、基底前脑、海马、丘脑、下丘脑、基底节、杏仁核、小脑、脑干等陈述与非陈述性记忆密切相关脑区的神经元、神经轴突与突触进行显色以备体视学半定量测量。体视学半定量参数的拟定：体视学半定量参数的拟定：采用 Image-Pro Plus 6.0 高清楚图文分析系统，根据不同观测研究对象性质，分别采用神经元及其突触、神经细胞、轴突的数密度（NA）测量；轴突平均直径（D）、轴突横穿点密度（QA）测量；脑水肿细胞间隙平均面积（A）、细胞平均中心距离（Z）测量等，排除了人为影响因素。数据表达及记录学方法：数据表达及记录学方法：所有数据均采用均数标准差(XS)表达。数据检查应用 SPSS 10.0 软件包或 PEMS 软件包解决，组间比较采用方差分析；凡结果 p 0.05 被认为有记录学意义。（2 2）实验方案实验方案 在实验前进行预实验，由指导老师手把手教会实验操作方法；严格按照研究方法、技术路线进行操作，每次三人为一组，互相监督，保证实验的稳定性及可反复性，由指导老师全程监督实验的操作与进展。假如有解决不了的问题，及时与上级指导老师联系，保证实验能有效、真实得进展。（3 3）可行性分析：可行性分析：理论可行性：理论可行性：先前研究发现脑震荡会导致弥漫的轴索损伤，根据神经轴突损伤后华勒氏变性原理，损伤远端的轴突与突触亚细胞改变和再生修复极也许是 SIS 的神经病理学与康复的重要物质基础。而银染较为成熟的直观的显示神经末梢、轴突以及轴索的变化的一种方法。技术可行性：技术可行性：前期的研究证实于建云课题组使用的金属单摆脑震荡复制仪及脑震荡判别方程式是相称成功的制作了脑震荡模型，而改良Bielschowsky 银染法是较为成熟银染方法，故保证了实验技术条件的可行性。3本项目的创新之处 于建云等在先前长期 CC 大鼠研究基础上，初次在国内建立了三重大鼠脑震荡（3MCC）模型（即天天打击一次、连续打击 3 次的 MCC 鼠模型），此模型为国内首创，具有领先的优点。于建云等人的研究证实单重及多重脑震荡后神经元及脑干轴索有变性改变，然而对于三重脑震荡后 64 天神经元和脑干轴索的用银染法染色后的变化情况，至今为止尚未有报道，本实验填补了此处空白。本实验采用 Image-Pro Plus 6.0 高清楚图文分析系统，根据不同观测研究对象性质，分别采用神经元及其突触、神经细胞、轴突的数密度（NA）测量；轴突平均直径（D）、轴突横穿点密度（QA）测量；脑水肿细胞间隙平均面积（A）、细胞平均中心距离（Z）测量等，排除了人为影响因素。4年度研究计划和预期进展 2023 年 1 月2023 年 12 月：购买实验试剂、实验动物、实验材料等，复制大鼠多重脑震荡模型，完毕改良 Bielchowsky 还原银法染色，完毕切片的制作。2023 年 1 月2023 年 12 月：对 Bielchowsky 还原银法染色切片进行显微摄影、图文分析，得出神经元及其突触、神经细胞、轴突的数密度（NA）测量结果；轴突平均直径（D）、轴突横穿点密度（QA）测量结果；脑水肿细胞间隙平均面积（A）、细胞平均中心距离（Z）测量结果，并对数据进行记录学分析，撰写论文，结题。5预期研究成果与提交成果方式 得出改良 Bielschowsky 还原银法显示鼠多重脑震荡后皮层神经元及脑干轴索的优缺陷。得出多重脑震荡后大鼠皮层神经元及脑干轴索银染改变的特点，并与先前研究的单重脑震荡相比较，得出单重脑震荡和多重脑震荡后大鼠皮层神经元及脑干轴索银染改变的特点。培养 5 名本科生脑震荡研究方面的知识，石蜡切片及银染方面的知识、Image-Pro Plus 6.0 高清楚图文分析系统在记录结果中的应用以及记录学研究方法方面的知识。发表论文 1 篇。六、研究基础六、研究基础 1.与本项目有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩（涉及发表的论文论著等）于建云专家从事教学、科研及教育管理 28 年，先后副主编、参编全国 法医病理学、法医学规划教材 11 部，发表学术论文 104 篇。获云南省教学成果一等奖 3 项，全国高等医学教育研究优秀研究成果一、二等奖各一项。先后主持完毕国家自然科学基金及云南省自然科学基金项目共 6项。2.工作条件 法医病理教研室具有相关实验条件：进口石蜡切片机及冰冻切片机、全自动照相显微镜及图像分析系统，常规组化和免疫组化室。本实验需要于建云专家脑损伤研究室的大力支持：于建云专家长期从事大鼠脑震荡的研究，建立标准大鼠行为学实验室及脑损伤研究室，创建多重脑震荡大鼠模型，实验条件齐备，可指导完毕模型制作及银染。3.尚缺少的条件和拟解决的途径 在整个实验过程中也许碰到的最大问题是人为误差和质量控制问题，为解决这一问题我们拟采用：.科学的流水线分工合作方式，即每一个关键性研究环节均由具有专长的研究人员负责指导实行；.严格的按既定的实验环节操作，消除操作中的随意性；.实验和对照动物对每个实验者均保持双盲；.对个别新实验方法的熟悉和掌握采用少量预实验的方式给予解决。由于研究经费的紧张，本实验最也许碰到的问题是购买试剂、实验动物及发表文章交版面费时导致的超支。超支时可从于建云专家课题组给予扶持。七、经费预算七、经费预算 编号编号 预算支出项目预算支出项目 支出金额（万元）支出金额（万元）1 实验动物 0.12 2 试剂及实验材料 0.10 3 版面费 0.08 4 5 备注：经费重要用于项目研究所需的资料费、实验材料费、调研费、差旅费、会议费、论文版面费等必要开支，不得用于支出劳务费等人员经费。八、完毕课题所在实验室的意见八、完毕课题所在实验室的意见*实验室意见：实验室设备能满足该课题的完毕。实验室主任（签章）：年 月 日 *研究项目若系调查分析研究，不需要实验仪器设备者，不需填写该项。九、审核意见九、审核意见 指导老师意见：（署名）：年 月 日 申请人所在学院审核意见：（请对本申请书中各项内容的真实性、经费预算的合理性及本学院所能提供的支持条件等签署具体意见）（签章）：年 月 日 昆明医科大学大学生创新性实验计划评审专家委员会意见：（请就是否批准立项及理由、具体资助额度签署具体意见）组长（署名）：年 月 日 校大学生创新性实验计划工作领导小组意见 批准 不批准 该项目为昆明医科大学大学生创新性实验计划资助立项项目，资助金额 元。昆明医科大学大学生创新性实验计划领导小组办公室（教务处代章）年 月 日