基于代谢组学探究疏调气机汤治疗甲状腺功能减退症的作用机制.pdf

实验研究 基金项目:云南省高校中西医结合防治甲状腺病重点实验室(.)云南省科技厅科技计划项目应用基础研究计划(.)云南省“万人计划”名医专项(.)云南省科技人才与平台计划(.)云南中医药大学第二附属医院中医特色专科(内分泌科)建设项目作者简介:郭爽女硕士生研究方向:中药药理研究与应用:.通信作者:范源男博士教授研究方向:内分泌代谢疾病的药效学:.基于代谢组学探究疏调气机汤治疗甲状腺功能减退症的作用机制郭爽张利军龙小妹古建兴刘海鹏范源(.云南中医药大学中药学院云南 昆明.云南中医药大学第二附属医院云南 昆明.云南中医药大学第一附属医院云南 昆明)摘要:目的 采用非靶向代谢组学方法分析甲状腺功能减退症大鼠血清标志物探究疏调气机汤对甲状腺功能减退症的治疗作用机制 方法 对适应性喂养 周后大鼠进行随机分组分为造模组和正常组造模组大鼠持续 丙硫氧嘧啶灌胃给药造模正常组灌胃同等体积饮用水 造模结束后检测血清指标是否符合临床疾病诊断标准并结合造模期间大鼠状态判定造模成功 将造模成功大鼠进行分组分为模型对照组、阳性药(优甲乐)组、疏调气机汤低浓度组、疏调气机汤中浓度组、疏调气机汤高浓度组分别给药 周正常组、模型对照组以同等体积饮用水灌胃 周后大鼠腹主动脉取血离心取上清 试剂盒检测及非靶向代谢组学检测 结果 疏调气机汤可明显降低甲减大鼠促甲状腺激素()水平可明显升高游离三碘甲状腺原氨酸()、游离甲状腺素()表达水平(.)代谢组学分析血清标记物正常组与模型对照组比较共有 个显著差异代谢物其中 个代谢物水平上调 个代谢物水平下调疏调气机汤高剂量组与模型对照组比较共有 个显著差异代谢物其中有 个代谢物水平上调 个代谢物水平下调代谢物多以生物碱类、缩氨酸类、聚酮类为主 分析代谢路径主要与心碳循环、氨基酸生物合成、胆汁分泌相关 结论疏调气机汤对甲状腺功能减退症大鼠具有良好的治疗作用为疏调气机汤治疗甲减的临床用药与治疗提供实验依据为甲减的中医疗法提供新思路关键词:疏调气机汤甲状腺功能减退症代谢组学名老中医经验中图分类号:.文献标志码:文章编号:():./.(.):.药学研究 .().(的离子峰对正负离子数据进行总峰面积归一化并整合使用 软件进行模式识别数据经 ()预处理后进行后续数据分析.统计学分析所有实验数据均采用统计学方法处理采用 .统计软件多组间数据差异显著性方差分析.为差异有统计学意义 结果.大鼠模型建立体重及进食量变化每天记录大鼠体重同时称重两次灌胃之间 饲料重量计算差值观察大鼠进食情况 造模期间正常组与模型对照组大鼠体重均增加但模型对照组体重增长呈均匀线性增长正常组每天无明显增长趋势模型对照组大鼠进食量明显小于正常组且随着造模时间增加进食量差异越明显(见表).大鼠血清指数水平变化大鼠给药 周后血清 检测指标表达水平与正常组相比疏调气机汤对甲减大鼠 存在明显的降低作用可显著增加、表达水平(见图)表 大鼠体重、进食表时间/体重/进食量/正常组模型对照组正常组模型对照组.正常组 模型对照组.阳性药组.疏调气机汤低浓度组.疏调气机汤中浓度组.疏调气机汤高浓度组图 给药后大鼠血清指标含量变化柱状图 注:与模型对照组相比.为上调.为下调作为筛选标准选取显著差异代谢物 正常组与模型对照组比较共有 个显著差异代谢物其中 个代谢物药学研究 .正离子.负离子图 个样品的正、负离子色谱峰.图 大鼠血清样本、评分图水平上调 个代谢物水平下调根据 值排序比较模型对照组与正常组血清潜在标记物对前 个代谢物进行信息汇总(见表)疏调气机汤高剂量组与模型对照组比较共有 个显著差异代谢物其中有 个代谢物水平上调 个代谢物水平下调选择前 个血清潜在标记物作热图以明显表示其变化(见图)颜色越红表示相对表达量越高越蓝表示相对表达量越低.代谢通路分析根据“.”项下分析所得对血清潜在标记物进行分类(见图)对 分析所得前 条作用通路作气泡图(见图)结果显示血清潜在标记物主要为生物碱类()、缩氨酸类()、聚 酮 类()、脂 肪 酰 基 类()、异戊二烯脂类()等主要作用通路为中心碳循环、氨基酸生物合成、胆汁分泌等信号通路图 大鼠血清差异代谢物聚类热图图 差异代谢物 分类环形图图 富集通路气泡图 讨论相关研究表明部分中药方剂对甲减具有良好的治疗作用:海藻玉壶汤可明显改善甲状腺肿大保护肝肾功能右归丸可明显改善甲减阳虚证大鼠症状起到温肾壮阳、滋补精血的作用芪桂汤通过调节下丘脑垂体甲状腺轴发挥其补肾助阳、益气健脾功效对甲减大鼠起到治疗作用经实验结果显示疏调气机汤能明显降低大鼠血清 表达水平升高、表达水平改善甲减药学研究 .表征存在较好的治疗效果 相关文献表明、可视为甲减的最佳生物标记物即表明本实验所用血清标记物可作为治疗效果评估的指标表 前 血清标记物信息()代谢物名称分子式 .()().注:.正常组.模型对照组 疏调气机汤具有疏肝理气、健脾补肾辅以活血清热、化痰消积功效方中柴胡疏肝解郁、调达气血香附、郁金疏肝行气增强柴胡之功丹参活血祛瘀川芎活血行气茯苓与白术健脾益气、燥湿利水薄荷疏肝行气枳实破气宽中增强疏调气机之功仙灵脾温补肾阳与茯苓、白术调护先后天之本生甘草调和诸药缓和药性白芍养血敛阴、平肝柔肝与甘草配伍则“酸甘化阴”更能发挥其柔肝养血缓急之作用 诸药共奏疏肝解郁、调补脾肾、理气和血之功效适用于肝气郁结、气机失畅、脾肾不足之疾病在本研究中疏调气机汤对甲减大鼠血清内代谢组分析主要代谢物 分别是花生四烯酸、二十二碳六烯酸()、麦角克碱、半乳糖醛酸、酮戊二酸 花生四烯酸是人体大脑和视神经发育的重要物质在体内可诱导血小板聚集和刺激脂多糖具有抗炎、影响脂代谢等作用 在大脑及神经发育中起到作用具有抗炎、促凋亡等药理作用麦角克碱临床常用于治疗闭经、月经不调、雄性激素低下等疾病治疗半乳糖醛酸具有抗氧化等活性酮戊二酸为三羧酸循环的中间产物具有抗癌、抗氧化等药理作用以上变化说明疏调气机汤在治疗甲减的治疗机制中可影响三羧酸循环、神经递质代谢、脂代谢等提示疏调气机汤对甲减的治疗作用多以调节抗炎、抗氧化代谢为主综上疏调气机汤对甲减具有良好的治疗作用通过对大鼠血清潜在标记物分析疏调气机汤可调节部分血清标记物变化可在一定程度上影响大鼠代谢起到抗炎等药物活性进而发挥治疗作用利用血清标记物对机制进行预测涉及多条作用机制其具体机制还需深入探究 本实验为甲减临床治疗及疏调气机汤应用提供实验数据可为后续相关实验提供新思路参考文献:.:.():.庞国明武楠倪青.成人原发性甲状腺功能减退症病证结合诊疗指南.世界中医药():.王晓飞李元阁侯锦春等.甲状腺功能减退症中医治疗进展.实用中医内科杂志():.张大宝张怡民张春燕等.国医大师张震疏调气机汤治疗中医郁病探讨.云南中医中药杂志():.张大宝陈振艺秦竹.国医大师张震疏调人体气机汤方义浅析.亚太传统医药():.王豪.甲状腺功能减退症的中医辨证论治.家庭医学():./.():.赵慎非黄莉莉黄鸣清等.昆布散对甲状腺肿大大鼠甲状腺功能及氧化应激的影响.药学研究():.黄昕彤.基于/信号通路探讨甲减阳虚证模型大鼠肾损伤的发病机制及右归丸干预作用.武汉:湖北中医药大学.王梅陈冬云.芪桂汤对甲减模型大鼠机体神经内分泌与自身免疫及甲状腺激素合成因子影响.四川中医():.(下转第 页)药学研究 .():.():.():./.():.():.()().()():.:.():./.():.():.():.():.(收稿日期:)(上接第 页).?.()():.():.张大宝张春燕张怡民等.基于疏调气机汤治疗中医关格的探讨.云南中医中药杂志():.():.():.():.:.():.():.():.:.():./.():.()():.(收稿日期:)药学研究 .