拉萨大黄中曲札茋苷的提取工艺研究.pdf

64JIANGXI JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE中药研究拉萨大黄中曲札茋苷的提取工艺研究周剑 方芳 刘建文 付彬彬 龚云麒 刘军锋（昆药集团股份有限公司 昆明650100）摘要目的：研究拉萨大黄中曲札茋苷的最佳提取工艺。方法：采用单因素实验考察提取溶剂、提取方法、提取时间、提取次数、溶剂用量对曲札茋苷提取率的影响，并利用正交试验以溶剂用量、提取时间及提取次数设计三因素三水平试验对曲札茋苷的提取工艺进行优化。结果：优选得到的最佳工艺以乙醇为提取溶剂，加热回流提取，最优条件为：8 倍量 95%乙醇，提取 4 次，每次 3h。曲札茋苷的提取转移率为 96.95%。经验证，理论值与实际值接近，偏差为 0.71%。结论：优选的曲札茋苷提取工艺合理可行。关键词曲札茋苷；单因素实验；正交试验；提取工艺中图分类号：R284.2 文献标志码：A拉萨大黄 Rheum lhasaenseA.J.LietP.K.Haiao属于亚大黄，是传统藏药1。新修晶珠本草中记载：“亚大黄，苦、涩、锐、寒，清腑热，泻疫疠、消肿、愈疮。”具有治疗腑热、胆热、腹痛、便秘、伤口不愈等作用2。拉萨大黄主要分布在中国陕西、四川、湖北、贵州、云南、河南等地3。白 皮 杉 醇-3-O-D-吡 喃 葡 萄 糖 苷（Piceatannol-3-O-D-glucopyranoside，PG），又名曲札茋苷，是拉萨大黄主要有效成分，是植物体内产生的天然二苯乙烯类物质，具有抗炎4、抗肿瘤5、保护心血管6等作用。传统提取方法有煎煮法、渗滤法、蒸馏法、回流法7。目前对曲札茋苷的提取工艺研究较少，本实验采用单因素实验与正交试验相结合的方式，以曲札茋苷提取转移率为考察指标，对曲札茋苷的提取工艺参数进行优化，为拉萨大黄的工业化提取提供参考，也为曲札茋苷的进一步研究提供基础。1 仪器与材料1.1 仪器高效液相色谱仪（岛津 LC-2030）；电子天平（梅特勒托利多公司，XSE205DU）；电热套、循环冷却水真空泵(巩义市予华仪器有限公司)；旋转蒸发器（瑞士 Buchi，R-3）。1.2 原料及对照品拉萨大黄干燥根，产自西藏自治区，23 年生拉萨大黄的根部，经中科院昆明植物所鉴定为蓼科植物拉萨大黄 Rheum lhasaenseA.J.LietP.K.Haiao，批号 20110505。曲札茋苷标准品（批号 20140104，昆药集团股份有限公司药物研究院自制）。2 方法2.1 对照品溶液制备精密称取曲札茋苷对照品 19.8mg，用甲醇定容于100mL容量瓶中，取对照品溶液0.25、0.5、1、2、2、1、2、5mL 分 别 置 100、100、100、50、25、10、10、10mL 量瓶中，加甲醇稀释成一系列浓度梯度的溶液，分别进行 HPLC 检测，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。2.2 色谱条件以十八烷基键合硅胶为填充剂，以水为流动相A，乙腈为流动相B，按表 1 中的梯度洗脱，流速为1mL/min，柱温为 30，检测波长为 319nm，进样体积 20L。理论塔板数按曲札茋苷峰计算应不低于 2000。表1 洗脱梯度时间/min流动相 A/%流动相 B/%085152570303060403585154085152.3 提取转移率计算提取转移率（%）=（CV）/（MN）100%式中：C 为提取液中曲札茋苷的浓度，V 为提取液的体积，M 为拉萨大黄药材重量，N 为药材中曲札茋苷含量2.4 曲札茋苷提取工艺单因素实验法考察2.4.1提取溶剂对曲札茋苷转移率及含量的影响 精密称取拉萨大黄药材粉末 50g，分别加入 6倍量药材的水、50%乙醇、95%乙醇回流提取 3 次，基金项目：昆明市科技局科技计划项目（2019-1-N-25318000002052）。通信作者：刘军锋，博士，正高级工程师。E-mail:。65江西中医药 2023 年 09 月第 9 期总第 54 卷第 489 期中药研究每次 2h，合并提取液，减压浓缩，定容至 250mL，测定曲札茋苷的含量，计算提取转移率。2.4.2 提取方法对曲札茋苷转移率及含量的影响 精密称取拉萨大黄药材粉末 50g，加入 8 倍量药材的95%乙醇，分别采用热回流提取、超声波提取、冷浸进行提取3次，每次2h。合并提取液，减压浓缩，定容至250mL，测定曲札茋苷的含量，计算提取转移率。2.4.3提取时间对曲札茋苷转移率及含量的影响 精密称取拉萨大黄药材粉末 50g，加入 8 倍量药材的 95%乙醇回流提取 3 次，每次提取时间分别为 1、2、3、4h，合并提取液，减压浓缩，定容至 250mL，测定曲札茋苷的含量，计算提取转移率。2.4.4提取次数对曲札茋苷转移率及含量的影响 精密称取拉萨大黄药材粉末 50g，以 8 倍量药材的 95%乙醇回流提取 2h，分别提取 2、3、4、5 次，合并提取液，减压浓缩，定容至 250mL，测定曲札茋苷的含量，计算提取转移率。2.4.5溶剂用量对曲札茋苷转移率及含量的影响 精密称取拉萨大黄药材粉末 50g，分别以 5、6、7、8 倍量药材的 95%乙醇回流提取 3 次，每次提取 2h，合并提取液，减压浓缩，定容至 250mL，测定曲札茋苷的含量，计算提取转移率。2.5 曲札茋苷提取工艺正交试验以提取转移率为指标，采用热回流提取法，分别对溶剂用量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）3 个因素进行考查，根据单因素实验结果，每因素选取 3个水平，按 L9（33）进行正交试验，影响因素及水平见表 2。表2 影响因素水平水平溶剂用量 A提取时间 B提取次数 C1612272338343 结果提取溶剂、提取时间、料液比是影响曲札茋苷提取率的重要因素，不同因素对提取率的影响不同，通过单因素实验考察每个因素的重要性，确定各因素水平的设定范围。3.1 标准曲线以对照品的浓度（g/mL）为横坐标，以峰面积的平均值为纵坐标进行线性回归计算，得到线性回归方程：Y=43.164X+2.7561，r=0.9999（n=9），且曲札茋苷在 0.495198g/mL 线性关系良好。3.2 提取溶剂对曲札茋苷转移率的影响测定不同提取溶剂对曲札茋苷转移率及含量的影响，结果见图 1。结果显示，随着乙醇浓度的增加，曲札茋苷提取转移率逐渐升高，当采用 95%乙醇提取时，曲札茋苷的转移率基本达到了最高值，从经济性方面考虑，采用 95%乙醇是最合理的，既能达到最大的转移率，也能解决溶剂回收的问题，从而降低生产的经济成本。/%图1 提取溶剂对曲札茋苷转移率的影响3.3 提取方法对曲札茋苷转移率及含量的影响测定不同提取溶剂对曲札茋苷转移率的影响，结果见图 2。结果显示，热回流提取法提取曲札茋苷转移率达到了 97.40%，效果最佳。此外，从实际生产条件来讲，最终确定热回流进行提取。/%图2 提取方法对曲札茋苷转移率的影响3.4 提取时间对曲札茋苷转移率及含量的影响测定提取时间对曲札茋苷转移率的影响，结果见图 3。结果显示，在 2h 以内，曲札茋苷提取转移率逐渐升高，2h 时达到最大值，可以看出提取时间对曲札茋苷的提取影响较大，但在 2h 以后，转移率变化差别不大。综合考虑生产需求，确定提取 2h 为最佳提取时间。1h2h3h4h/%图3 提取时间对曲札茋苷转移率的影响66JIANGXI JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE中药研究3.5 提取次数对曲札茋苷转移率及含量的影响测定提取次数对曲札茋苷转移率的影响，结果见图 4。结果显示，随着提取次数的增加，曲札茋苷提取转移率逐渐升高，在提取 5 次时转移率最大，可以看出提取次数对曲札茋苷的提取影响较大。综合考虑生产需求，提取 3 次为最佳提取次数。/%图4 提取次数对曲札茋苷转移率的影响3.6 溶剂用量对曲札茋苷转移率及含量的影响测定溶剂用量对曲札茋苷转移率的影响，结果见图 5。结果显示，随着溶剂用量的增加，曲札茋苷的转移率逐渐增加，当溶剂用量为 7 倍时，曲札茋苷转移率基本达到了最大值，随后增长缓慢，考虑使用 7 倍溶剂作为最佳溶剂用量。/%图5 溶剂用量对曲札茋苷转移率的影响3.7 正交试验结果与分析以曲札茋苷转移率为指标，通过极差 R 和均值 K 的比较，优化曲札茋苷的最佳提取工艺，结果见表 3。结果显示，以曲札茋苷转移率为指标，极值最大的是 5.913，可以看出提取工艺中主要的影响因素是溶剂用量（A），各因素影响顺序是 ACB，方差分析显示无显著性影响。经过正交试验设计可知，最佳提取工艺 A3B3C3。即溶剂用量为 8 倍，提取时间为 3h，提取次数为 4 次。表3 正交实验表ABC曲札茋苷转移率/%实验 111184.36实验 212291.78实验 313394.15实验 421395.49实验 522186.71实验 623296.36实验 731294.85实验 832395.86实验 933197.32均值 K190.09791.56789.463均值 K292.85391.45094.330均值 K396.01095.94395.167R5.9134.4935.704表4 方差分析表因素偏差平方和自由度F 比F 临界值显著性溶剂倍数52.53121.2753.110无提取次数39.35920.9553.110无提取时间15.97520.3883.110无误差164.78083.8 验证实验分别称取 3 份拉萨大黄粗粉 2kg，加入 8 倍体积的 95%乙醇，加热回流提取 4 次，每次 3h，合并滤液，减压浓缩，测定曲札茋苷的含量，计算提取转移率分别为 97.12%，96.20%，97.54%，平均为 96.95%，RSD 值为 0.71%，表明工艺具有良好的稳定性。4 讨论本实验以拉萨大黄为原料，研究了曲札茋苷的提取工艺。分析曲札茋苷转移率的极差 R 和均值 K，提取次数、溶剂用量对曲札茋苷转移率的影响较显著。综合考虑采用加 8 倍量 95%乙醇，提取 4 次，每次 3h。验证试验结果可见小试最佳的工艺一定程度适合于生产工艺，为中试提供了相应的数据支持，该提取工艺为后续的生产及中药材的开发利用提供了一定的借鉴意义。参考文献1肖培根,陈碧珠,王立为,等.大黄属的植物亲缘关系、化学成分与疗效间联系性的初步研究 J.药学学报,1980,15(1):33-39.2罗达尚.新修晶珠本草 M.成都:四川科学技术出版社,2004.3郑俊华,果德安.大黄的现代研究 M.北京:北京大学医学出版社,2007:702-703.4任超,王萍,黄茜,等.曲札茋苷在制备治疗和/或预防炎性肠病的药物中的应用:CN108434165AP.2019-12-13.5陈云建,杨兆祥,张建文,等.曲札茋苷在制备治疗癌症药物中的应用:CN104666320AP.2017-06-16.6胡琳,何金星,胡群,代家红,等.曲札茋苷在制备防治心脑缺血疾病制剂中的应用及其制备方法:CN101787061AP.2013-07-03.7栾彦虎.探析中药提取工艺对药品质量的影响 J.化工管理,2017(29):31.（收稿日期：2022-11-10）编辑：曾文雪