款冬花多糖的研究进展.pdf

265款冬花多糖的研究进展款冬花多糖的研究进展任佳妮，黄玉妹，滕建北*（广西中医药大学，南宁 530200）基金项目：壮瑶药协同创新中心（桂教科研201320号）、广西壮瑶药重点实验室（桂科基字201432号）、广西壮族自治区民族药资源与应用工程研究中心（桂发改高技函20202605号）、广西中医药重点学科壮药学（GZXK-Z-20-64）第一作者：任佳妮，在读硕士研究生，研究方向为中药学*通讯作者：滕建北，教授，硕士研究生导师，研究方向为中药品种、品质与资源研究【摘 要】款冬花作为一种疗效确切的传统中草药，对其有效成分的分离纯化及作用机制的深入了解是目前研究的重点。多糖是生物体内重要的生命活性物质，其不仅能够提高机体的免疫力，还有一定的抗肿瘤、抗氧化、降血脂作用。款冬花多糖为款冬花的主要活性成分之一，而蜜制后的款冬花润肺止咳的疗效大大提升，因此本文对款冬花多糖的药理作用及其提取、分离、纯化技术等方面进行系统综述，对进一步研究款冬花多糖提供帮助。其中从款冬花多糖的提取率可知微波辅助提取法和水提醇沉法的对款冬花多糖的提取率较高，约为13%。纯化多糖除蛋白时用的是LS-206型树脂吸附法，除蛋白、脱色的效果佳且多糖保留率较高。纯化后的款冬花多糖主要由Xyl，Ara，Glc，Rha，Man，Gal和GalUA糖组成。【关键词】款冬花多糖；提取分离；纯化；药理活性Research progress of Farfarae Flos polysaccharidesRen Jiani，Huang Yumei，Ten Jianbei*（Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530200）【Abstract】As a traditional Chinese herbal medicine with definite curative effect，the separation and purification of its effective components and in-depth understanding of the mechanism of action are the focus of current research.Polysaccharides are important life active substances in the body，which can not only improve the immunity of the body but also have certain anti-tumor，anti-oxidation and lipid-lowering effects.The polysaccharide of Tussilago farfara L.is one of the main active components of Tussilago farfara L，and the effect of Farfarae Flos on moistening lung and relieving cough after honey preparation is greatly improved.Therefore，this paper systematically reviews the pharmacological effects of Tussilago farfara L.polysaccharide and its extraction，separation and purification technology，so as to provide help for further study of Tussilago farfara L polysaccharide.From the extraction rate of polysaccharide，it can be seen that the microwave assisted extraction method and the water extraction and alcohol precipitation method have the higher extraction rate of polysaccharide of Tussilago farfara L，about 13%.LS-206 resin adsorption method was used to remove protein from purified polysaccharides，which showed good effect of protein removal and decolorization and high polysaccharide retention rate.The purified polysaccharides were mainly composed of Xyl，Ara，Glc，Rha，Man，Gal and GalUA sugars.【Keywords】Farfarae Flos polysaccharides；Extraction and separation；purification；Pharmacological activities1 款冬花多糖简介款冬花为桔梗目菊科植物款冬Tussilago farfara L.的干燥未开花蕾。始见于神农本草经。本经中记载：款冬花对“寒束肺经之饮邪喘、嗽最宜”。气清香，味微苦而辛。作为清肺排毒汤中的一味主要成分，在抗击此次新冠疫情的行动中，发挥了重要作用。款冬花黄酮类作为止咳平喘的主要活性成分收载于各版中国药典，并规定本品含款冬酮（C23H34O5）不得少于0.070%。款冬中所含的PAs具有温和的肝毒性，如款冬其他研究Identification&SourceGendingSwhyenz 266中所含生物碱中肾形千里光碱，千里光非宁对ICR小鼠有肝毒性，在最高给药剂量下水提物则无明显肝脏毒性。因此将款冬中的有效成分和毒性成分分离尤为重要。款冬中所含多糖是款冬花的主要活性成分之一，且款冬的新鲜叶片，或款冬多糖，是治疗热咳、干咳的良药，但随着款冬花不良反应的报导1-2（基因毒性、诱导肝损伤），对款冬花多糖的分离纯化具有重要的研究意义。2 款冬花多糖的药理作用2.1 抗肿瘤款冬多糖对肿瘤细胞有明显的抑制作用。罗强2等曾得出款冬花多糖可有效抑制肺癌A549细胞的生长且增殖抑制效应具有剂量依赖性，并可诱导肿瘤细胞凋亡，且凋亡小体的数量与多糖浓度呈正相关的结论。款冬花多糖是抗肿瘤、抗白血病的有效药物，且能提高机体免疫力。2.2 抗氧化活性自由基作为人生命活动的正常代谢产物，当自由基浓度超过生理限度时，多余的自由基将成为攻击脂质、蛋白质、脱氧核苷酸等大分子物质的有害物，从而加速生物体的氧化和衰老。翁新楚3等认为衡量抗氧化剂的抗氧化活性强弱有2个指标；捕捉自由基的速度。捕捉自由基的效率。中药抗氧化活性的测定方法有：铁离子还原法；-胡萝卜素-亚油酸法；PCL法；DPPH分析方法；清除羟自由基（OH）的作用；超氧阴离子自由基（O2-）清除能力测定等。李婉婷4分别对传统的水提法和超声法提取的款冬花多糖进行了抗氧化能力测定，结果表明，超声提取的多糖对O2-、DPPH、NO2-、OH的清除率均略高于传统水提多糖，且纯化后的多糖抗氧化活性明显提高。款冬花多糖有良好的抗氧化活性，在天然抗氧化剂和食品领域有巨大的开发潜力。2.3 款冬花多糖衍生物的抗氧化活性近年来对款冬花衍生物的制备及其抗氧化性的研究发现，进行化学修饰后的款冬花多糖的抗氧化性均有不同程度的提高5，张琳6等采用氯磺酸-吡啶法来制备TFPsS。该方法硫酸化修饰效果好且产物可回收无污染。其中王国全7等合成的款冬花硒多糖的用量在5 mg/mL时对NO2-的清除效果与Vc相近。尤凡8以款冬花粗多糖为原料，合成了甲基化和硫酸酯化的款冬花多糖。在对甲基化多糖和硫酸酯化的多糖进行纯化后，分别测定了衍生物的抗氧化能力，结果表明，款冬花多糖衍生物对O2-、OH、DPPH的清除能力均强于款冬花多糖。款冬除花蕾外，其叶中也含有多糖，刘晓辉9等人发现，款冬叶中的多糖类成分能够提高免疫抑制小鼠的脾脏系数和胸腺系数、血清和肝组织酸性磷酸酶活力、血清溶菌酶活力，且效果优于总黄酮、总皂苷，叶中的总多糖还具有降脂的作用，可通过提高T-SOD和GSH含量、降低MDA含量达到抗氧化的显著效果，且抗氧化功效与给药剂量呈正相关10。2.4 其他活性中药多糖还有其他作用如抗突变，抗凝血活性、预防理化因素，抗辐射等。研究发现，中药多糖参与了抑制凝血因子与血小板聚集的过程。3 款冬花多糖的制备款冬花多糖的低提取方法随着近年来超声提取、微波辅助提取、超高压提取法等以提取的多糖以质优、提取率高而逐渐代替了传统方法，提取流程如图1所示。图1 款冬花多糖提取流程不同提取方法提取真空干燥浓缩、醇沉阴干、粉碎加入有机溶剂脱脂分离、纯化除蛋白、脱色粗多糖上清液沉淀1款冬花滤渣上清液沉淀款冬花粉末 款冬花多糖粗多糖2粗多糖1沉淀2267款冬花多糖的研究进展3.1 提取分离3.1.1 溶剂提取法款冬花多糖的主要成分是含有糖醛酸的多糖，为大极性化合物分子，因此可用相似相溶原理来提取，如水，酸，碱等极性强的溶剂。用碱液作溶剂时应适当控制其pH值，浓度高会致使多余的碱液分解还原糖，增加脱色工艺的工作量。宋逍11等人对款冬花多糖进行了碱提取，在pH值=9.5，61，85 min的条件下加入约20倍量的水（mL/g），款冬花渣多糖的提取率为4.211%。多糖的取率在用碱提的条件下较高，可能是含酸性糖醛酸的多糖较难溶于水，而碱水提取可有效提高多糖的提取率。赵鹏等人采用水提醇沉法12提取款冬花多糖，优化后的最佳条件为：温度84，液料比为21（mL/g），提取6.2 h，采用苯酚-硫酸法测得的多糖含量为13.81。3.1.2 强化提取法超声波可在液体中产生空化作用和机械作用，使提取液渗入细胞内部，加速多糖溶解和释放。吕培霖13 等对产自甘肃的冬花进行了超声提取并采用单因素试验优化了提取因素，在50、频率为50 kHz、提取40 min、料液比为120时，多糖得率11.21%，其中提取时间对冬花得率的影响最大。宋逍14等采用微波辅助法提取款冬花多糖，在最优条件下的平均得率为14.806，是已知的提取方法中提取率较高的。3.1.3 生物提取法宋逍15等用单一的纤维素酶来提取款冬花多糖，提取率为3.25%。其他种类的酶提取款冬花多糖及其提取率是否会有提高尚有待研究。夏平16等采用单因素试验和正交试验对纤维素-果胶酶复合的方法提取桑叶多糖进行了研究，桑叶多糖的收率提高了38.63%。3.1.4 膜分离提取法半透膜的选择透过性是膜分离技术的核心，以压力为推动力的膜分离技术能对多糖分子进行更细致的分离，无二次污染、易于自动化的特点已逐渐走入人们的视野。马利华17等采用超滤技术纯化牛蒡子多糖，效果显著。多糖的纯度可达73.27%。3.1.5 含量测定常用的含量测定方法分为两类，第一类是利用多糖缩合反应测定，另一类是直接测定多糖本身含量。吕培霖18等用UV-Vis对来源于不同产地的款冬花栽培品和野生品中多糖含量分别做了测定，其中多糖含量范围在0.9752.50。贺润丽19对产自不同地区的款冬花栽培品和野生品进行了4个方面的考察，分别为款冬酮的含量、芦丁含量、干燥花蕾的净重、色泽。总体来看，野生品的款冬酮含量高于栽培品，其中以山西榆社、宁武、广灵的野生药材品质较优。4 面临问题及展望款冬花作为临床常用的传统中药材具有多层次、多靶点、远期疗效好等特点，随着现代研究对款冬花的深入研究，一些未知的疗效也被发掘。款冬花多糖抗癌的主要活性成分未见报道，其抗癌功效依赖的是单一成分还是多种成分相互作用的结果也不得而知，其具体的抗癌功效未在临床试验中得到验证，对抗癌机制的深入研究也备受关注。应着力展开款冬花多糖的临床研究和分子水平的研究，运用现有的技术和分析手段，明确其与功能相关的活性中心的构效关系，为人工合成和修饰款冬花多糖提供药理学基础。款冬花疗效确切，有着药食两用的开发前景，李改艳20等将款冬花多糖的抗氧化活性运用到食品领域。尝试用款冬花多糖为原料来制备功能饮料，并得到了合适的工艺路线，测得该多糖功能饮料也具有明显的抗氧化活性。应着力寻找和扩大款冬花多糖的新用途，使其在延缓人类衰老，增强人体免疫力等方面发挥作用。参考文献1ARTUR ADAMCZAK，BOGNA OPALA，AGNIESZKA GRYSZCZY SKA，et al.Content of pyrrolizidine alkaloids in the leaves of coltsfoot（Tussilago farfara L.）in PolandJ.Acta Societatis Botanicorum Poloniae，2013，82（4）：289-293.2CATHARINE AVILA，IAN BREAKSPEAR，JASON HAWRELAK，SES SALMOND，SUE EVANS.A systematic review and quality assessment of case reports of adverse events for borage（Borago officinalis），coltsfoot（Tussilago farfara）and comfrey（Symphytum officinale）J.Fitoterapia，2020，142.3罗强，李迎春，任鸿，等.款冬花多糖对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响J.河北北方学院学报（自然科学版），2013，（4）：63-66.4翁新楚，吴侯.抗氧化剂的抗氧化活性的测定方法及其评价J.中国油脂，2000，25（6）：119.5李婉婷.款冬花多糖提取及分离纯化工艺研究D.西北大学，2010.6李彦宏.基于药理学的中药多糖分子修饰研究J.中国农村卫生，2019，11（4）：48.7张琳，张善文，赵鹏.款冬花多糖硫酸化修饰条件的优化J.西安：西北药学杂志，2013，28（5）：475-478.8王国全，赵鹏，张丽华，等.微波辅助合成款冬花硒多糖的研究J.临床医学研究与实践，2018，31（31）：1-3，6.其他研究Identification&SourceGendingSwhyenz 2689尤凡.款冬花多糖的化学修饰与体外抗氧化作用研究D.西安：西北大学，2014.10刘晓辉，高超，丁婷婷，沈明浩.款冬叶3种功效成分对小鼠免疫调节作用实验研究J.轻工学报，2018，33（2）：35-41.11田晓雨，高超，沈明浩.款冬叶总多糖提取优化及其降脂抗氧化作用研究J.食品科技，2017，42（10）：205-211.12宋逍，赵鹏.花渣碱法提取款冬多糖工艺的响应面法优化J.中国医药导报，2016，13（34）：17-20.13赵鹏，李稳宏，朱骤海，等.款冬花多糖提取工艺的研究J.中成药，2010，32（1）：58-61.14吕培霖，李成义，郑明霞，等.款冬花多糖提取工艺研究J.中国中医药信息杂志，2009，16（S1）：35-36.15宋逍，段玺，唐志书，等.微波辅助提取款冬花多糖的工艺及抗氧化活性研究J.中国医学创新，2016，13（23）：27-30.16宋逍，赵鹏，张丽华，等.响应面优化酶法提取款冬花多糖工艺研究J.安徽医药，2016，20（12）：2 230-2 233.17夏平，谢何青.复合酶法提取桑叶中多糖的工艺条件优化J.安徽农业科学，2009，37（1）：198-199.18马利华，秦卫东，陈学红，等.膜技术分离纯化牛蒡多糖的研究J.食品工业科技，2009（01）：231-234.19吕培霖，晋玲，郑明霞.不同产地款冬花多糖含量测定J.现代中西医结合杂志，2009，18（15）：1 758-1 759.20贺润丽，张哲，裴香萍，等.不同产地款冬花药材质量比较研究J.中国中医药信息杂志，2014，21（6）：76-80.壮文摘要Identification&SourceGendingSwhyenz 308壮文摘要Gij Fazcanj Baenaj Damqgouz Gij Dohdangz Go gvanjdunghvah（款冬花多糖的研究进展）Yin Gyahniz，Vangz Yimei，Dwngz Genbwz*（Gvangjsih Cunghyihyoz Dayoz，Gvangjsih Nanzningz 530200）【Cwzyau】Go gvanjdunghvah dwg cungj ywdoj conzdungj ywbingh yaugoj haemq cinj he，dangqnaj doiq de yenzgiu cungdenj dwg fwnhliz cunzva gij mizyauq cwngzfwn de caeuq haeujlaeg liujgaij gij cozyung gihci de.Dohdangz dwg ndaw swnghvuzdij gij vuzciz swnghming hozsing youqgaenj he，mboujdan ndaej daezsang gij menjyizliz aen gihdij，doiq dingj baezfoeg、gang yangjva、gyangq hezcih lij miz itdingh cozyung.Dohdangz gvanjdunghvah dwg go gvanjdunghvah gij cujyauq hozsing cwngzfwn ndaw de cungj ndeu，go gvanjdunghvah aeu dangzrwi bauci le gij yauqgoj nyinh bwt dingz ae ndaej daihdaih daezsang，ndigah bien faenzcieng neix doiq gij dohdangz go gvanjdunghvah ywleix cozyung caeuq daezaeu、fwnhliz、cunzva gisuz daengj fuengmienh guh hidungj gyoebgangj，doiq caenh itbouh damqgouz gij dohdangz go gvanjdunghvah daezhawj bangcoh.Ndaw de gij dohdangz daj go gvanjdunghvah daezaeu beijlwd ndaej rox，yungh gij fuengfap veizboh bangbouj daezaeu caeuq gij fuengfap suijdiz cunzcinzfaz doiq dohdangz go gvanjdunghvah daezaeulwd haemq sang，daihgaiq dwg 13.Cunzva dohdangz cawz danbwz seiz dwg yungh LS-206 hingz sucihgizfufaz，cawz danbwz、duetsaek ndei caiqlij dohdangz baujlouzlwd haemq sang.Cunzva le gij dohdangz go gvanjdunghvah cujyauq youz Xyl，Ara，Glc，Rha，Man，Gal caeuq GalUA dangz gyoebbaenz.【Aenswz Gvanhgen】Gij dohdangz go gvanjdunghvah；daezaeu fwnhliz；cunzva；ywleix hozsingGij Fazcanj Baenaj Damqgouz Mbaw Goyinzging（银杏叶的研究进展）Huz Gyauhgyauh，Denz Vei（Gvangjsih Cunghyihyoz Dayoz，Gvangjsih Nanzningz 530200）【Cwzyau】Mbaw goyinzging ndaw de gij vayoz cwngzfwn cujyau dwg vangzdungzlei、dezneicijlei、fwnhlei daengj.Saedniemh yenzgiu biujmingz，gij ywleix hozsing coyung mbaw goyinzging cujyau dwg cengqbongq sailwed、gang hezsiujbanj gyonjcomz、gang hezsonh、gang yangjva、gyangqdaemq hezcih、gang dungmwz couhyang yingva、hawj baeg bingzdingh、demgiengz gij nwngzlig hagsib ndaejgeiq daengj.Mbaw goyinzging doiq gij bingh sailwed sim uk miz ywbingh yaugoj yienhda，de cauhbaenz gijyw ndaej lailai yungh youq yw caeuq fuengzre gij bingh sailwed sim uk，linzcangz gwnz ciengzciengz yungh gij yw aeu mbaw goyinzging guh haenx daeuj yw binghcihhezcwngsang、binghhezyazsang、bouxlaux aen uk goengnaengz cang ai、binghnaujcungfungh caeuq gij houyizcwng de daengj.Seizneix dawz gyawj geij bi daeuj gij vwnzyen gvendaengz mbaw goyinzging gij vayoz cwngzfwn、ywleix hozsing daengj fuengmienh cingjleix baenz gij gyoebgangj neix，caiqlij doiq mbaw goyinzging gij wngqyungh cenzgingj caeuq yenzgiu guh le damqra caeuq daezhawj le lijlun baengzgawq，vih haifat leihyungh de daezhawj sihlu moq.【Aenswz Gvanhgen】Mbaw goyinzging；yenzgiu cincanj；gang dungmwz couhyang yingvaGij Fazcanj Baenaj Yienhdaih Damqgouz Gofuswj（附子的现代研究进展）Yangz Yajginh，Veiz Veiningz，Vuz Gangjyenz，Vangz Yauyinh，Yingh Feihyij，Hoz Sizyen（Gvangjsih Cunghyihyoz Dayoz，Gvangjsih Nanzningz 530200）【Cwzyau】Gofuswj miz“fuk yiengz gouq mingh cungj yw ceiq ak”gij mingzdaeuz neix，doiq lai cungj bingh naek miz gij ywbingh yaugoj yienhda.Gofuswj cujyau faenbouh youq Swconh、Huzbwz、Huznanz daengj dieg，ndaw de suenq Swconh Swngj Gyanghyouz Si ok gij conhfuswj dwg ywdoj cingqndei.Yienhdaih yenzgiu fatyienh ndaw gofuswj hamz miz swnghvuzgenj、vuengzdoengz、dohdangz、youjgihsonh、youjgihgenj、danbwzciz、cunzanh daengj lai cungj cwngzfwn，ndaw de sanghcijhingz swnghvuzgenj dwg gij mizyauq cwngzfwn ceiq youqgaenj，de gawq ndaej doiq rengzsim naiqnyieg、fungheiqsingq binghsimdaeuz、gvanhsinhbing、binghhezyazdaemq、yiuhgwz doengh gij bingh neix miz ywbingh cozyung yienhda，hix ndaej doiq sinhhezgvanj hidungj、saenzging hidungj、siuvaq hidungj、swnghciz 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