可溶性α-Klotho蛋白和β2-微球蛋白在重型颅脑损伤患者中的变化及其临床意义分析.pdf

论著（收稿日期：2 0 2 3-0 3-2 0）664脑与神经疾病杂志2 0 2 3年第31卷第11期Senataxin and DNA-PKcs causes DNA damage accumulation andneurodegeneration in spinal muscular atrophyJj.Nucleic Acids Res,2018,46:8326-8346.11Zhou H,Zhou J,Li H,et al.Paraoxonase 3 gene polymorphisms areassociated with occupational noise-induced deafness:A matchedcase-control study from ChinaJJ.PLoS One,2020,15(10):e0240615.12 Lu H,Zhu J,Zang Y,et al.Cloning,high level expression of humanparaoxonase-3 in Sf9 cells and pharmacological characterization ofits productJJ.Biochem Pharmacol,2005,70(7):1019-1025.13 Saeed M,Siddique N,Hung WY,et al.Paraoxonase clusterpolymorphisms are associated with sporadic ALSJ.Neurology,2006,67(5):771-776.14Cronin S,Greenway MJ,Prehn JH,et al.Paraoxonase promoterand intronic variants modify risk of sporadic amyotrophic lateralsclerosisJJ.J Neurol Neurosurg Psychiatry,2007,78(9):984-986.15Slowik A,Tomik B,Wolkow PP,et al.Paraoxonase genepolymorphisms and sporadic ALSJJ.Neurology,2006,67(5):766-770.16Valdmanis PN,Kabashi E,Dyck A,et al.Association of paraoxonasegene cluster polymorphisms with ALS in France,Quebec,andSwedenJ.Neurology,2008,71(7):514-520.17Landers JE,Shi L,Cho TJ,et al.A common haplotype within thePON1 promoter region is associated with sporadic ALSJJ.AmyotrophLateral Scler,2008,9(5):306-314.18 Morahan JM,Yu B,Trent RJ,et al.A gene-environment study of theparaoxonase 1 gene and pesticides in amyotrophic lateral sclerosis.Neurotoxicology,2007,28(3):532-540.19 Zawislak,D,Ostrowska M,Golenia A,et al.The-A162Gpolymorphism of the PON1 gene and the risk of sporadic amyotrophiclateral sclerosis J.Neurol Neurochir Pol,2010,44(3):246-250.20 Ricci C,Battistini S,Cozzi L,et al.Lack of association of PONpolymorphisms with sporadic ALS in an Italian populationJ.Neurobiol Aging,2011,32(3):552.e7-13.21 Ticozzi N,LeClerc AL,Keagle PJ,et al.Paraoxonase gene mutationsin amyotrophic lateral sclerosisJJ.Ann neurol,2010,68(1):102-107.22Chen Y,Huang 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4）作者单位：36 2 0 0 0 福建，中国人民解放军联勤保障部队第9 10 医院急诊医学部（林建聪、李奕鑫、张晶），门诊部（洪蓉蓉）通信作者：洪蓉蓉，Email：2 7 58 0 9 1110 q q.c o mmCc665脑与神经疾病杂志2 0 2 3年第31卷第11期观察组患者2-MG水平都高于对照组（P0.05）；观察组2-MG水平在不同的时间点的水平差异有统计学意义，且呈现出随治疗时间增加水平下降的趋势（P0.05）。在不同的时间点，死亡亚组患者血清可溶性-Klotho蛋白水平均高于生存亚组（P0.05）；在第5天及第7 天，生存亚组患者2-MG水平明显低于死亡亚组（P0.05）。结论重型颅脑损伤能够引起血清可溶性-Klotho蛋白以及2-MG水平升高，对其动态监测有助于预后判断。【关键词】重型颅脑损伤；-Klotho蛋白；2-微球蛋白；预后中图分类号：R651.1文献标识码：A文章标号：10 0 6-351X（2 0 2 3）11-0 6 6 4-0 5Analysis of the changes of soluble a-Klotho protein and 2-microglobulin in patients with heavycraniocerebral injury and their clinical significanceLin Jiancong,Li Yixin,Zhang Jing,Hong RongrongDepartment of Emergency Medicine,the 910 Hospital of the PLA Joint Logistic Support Force,Fujian 362000,Chinaorresponding author:Hong Rongrong,Email:2758091110qq.coAbstract Objective To investigate the changes of soluble -Klotho protein and 2-microglobulin(MG)in patients with heavy craniocerebral injury and their clinical significance.Methods One hundred and ten patientswith heavy craniocerebral injury who were admitted to our hospital from September 2019 to March 2022 were selectedas the observation group,and another 110 volunteers who underwent health examination in our hospital during thesame period were selected as the control group.The patients in the observation group were divided into a survivalsubgroup(81 cases)and a death subgroup(29 cases)according to their survival outcomes at 28 d of hospitalization.Clinical data of patients were collected to compare the differences in levels of soluble -Klotho protein and 2-MGbetween the survival subgroup,the death subgroup and the control group.Results There were statistically significantdifferences in MAP,GCS score,white blood cell count,platelet count,neutrophil count,hemoglobin,albumin,ureanitrogen,creatinine,and APACHE I score when comparing the survival and death subgroups(P 0.05).At differenttime points,the serum soluble -Klotho protein levels of patients in the observation group were higher than those inthe control group(P0.05);the levels of serum soluble -Klotho protein in the observation group were also differentat different time points(P0.05).At differenttime points,the 2-MG levels of patients in the observation group werehigher than those in the control group(P0.05);the levels of 2-MG in the observation group were also differentat different time points and showed a trend of decreasing levels with increasing treatment time(P0.05).The serumsoluble-Klotho protein levels of patients in the death subgroup were higher than those in the survival subgroupat different time points(P0.05);on days 5 and 7,the 2-MG levels of patientsin the survival subgroup were significantly lower than those in the death subgroup(P0.05).Conclusion Heavycraniocerebral injury can cause an increase in serum soluble -Klotho protein and 2-MG levels,and its dynamicmonitoring can help to determine the prognosis.Key wordsHeavy craniocerebral injury;-Klotho protein;2-microglobulin;Prognosis颅脑损伤是大脑受伤引起的大脑疾病，据估计全球每年接近50 0 万的颅脑损伤患者，病死率高达30%2-3。手术治疗是主要且有效的治疗方式，术后患者的康复水平对于预后结局具有重要影响，因此及时准确的诊断和预测疾病进展具有重要意义。资料和方法1.研究对象选取2 0 19 年9 月至2 0 2 2 年3月内在中国人民解放军联勤保障部队第9 10 医院收治的110 例重型颅脑损伤患者为观察组，另选同期在本院进行健康体检的志愿者110 例为对照组。根据观察组患者住院2 8 d的生存结局分为存活亚组（8 1例）以及死亡亚组（2 9 例）。其中观察组男性8 9 例，女性2 1例，年龄19 6 3岁，平均年龄（49.58.9）岁；对照组男性7 9 例，女性31例，年龄2 1 6 2 岁，平均年龄(50.2 9.7)岁。纳入标准：年龄18 岁且临床资料完整；经颅脑CT、M RI等检查确诊为重型颅脑损伤；患者及家属知晓并签署知情同意书，且经本院医学伦H7有统计学意义（P0.05）数、血红蛋白、白蛋白、尿素氮、肌酐以及APACHE I评分上差异哥昏迷量表（GCS）评分、白细胞计数、血小板计数、中性粒细胞计格拉斯注：生存亚组和死亡亚组相比较，在平均动脉压（MAP）分（分）-2.2890.0123.1 4.531.3 6.7APACHE II评(umol L-l6.8230.00192.4 18.166.8 12.4肌酐mmol I-3.2710.017.6 2.35.4 1.3尿素氮(mmol L0.0520.96712.56 2.7912.52 2.75血糖mmol:I-3.2760.00129.11 8.9926.71 3.86白蛋白(g L)-2.7310.0198(91,:113109(98,117)血红蛋白2.2560.05中性粒细胞计15.2（12.3，18.4）13.0（10.4，15.8)数(10.L-)(1012.L-14.4360.00183（7 6,9 598.(82,113血小板计数(10.L2.7930.0510.283.4513.47 2.69白细胞计数0.2650.7924.5 1.44.4 1.3GCS评分（分）-5.2730.0525.33.625.73.7BMI(kg/m)0.050.22124/565/16性别（男/女）-0.8650.0549.3 9.248.69.7年龄（岁）值生存亚组（n=81）死亡亚组（n=29）P值项目统计表1观察组两亚组患者一般资料比较（元s）666脑与神经疾病杂志2 0 2 3年第31卷第11期理委员会讨论通过。排除标准：既往明确诊断有脑梗死等脑部疾病；患有先天性免疫缺陷疾病；患有精神性疾病。2.研究方法临床资料收集：包括姓名、性别、年龄、体质量指数（BMI）、既往病史、人院时急性生理和慢性健康状况评估II（a c u t e p h y s i o l o g y a n d c h r o n i c h e a l t hevaluation，A PA CH E）评分，格拉斯哥昏迷量表（GCS）评分及血细胞分析、血生化等临床检测指标。观察组患者于人院治疗的第1、3、5、7 天分别采集静脉血3ml,对照组于体检当天采集静脉血3ml,然后进行离心（30 0 0 rpm/min，10 mi n，离心半径0.5cm。），保留上清液，置于-8 0 冰箱中保存。血细胞分析及血生化指标检测：抽取静脉血6ml，取3ml置于抗凝剂充分摇匀，采用全自动血细胞分析仪（美国贝克曼）检测；另取3ml置人促凝管，离心取上清，采用全自动生化分析仪（美国贝克曼）检测。血清可溶性-Klotho蛋白以及 2-MG水平的检测：采用酶联免疫吸附法（ELISA），-Klotho蛋白试剂盒及2-微球蛋白（micrroglobulin，M G）试剂盒均购自Abcam公司，酶标仪为北京爱立斯生物科技有限公司的RT-6100酶标仪。生存结局定义：将住院2 8 d内死亡或者病情加重自动离院的患者定义其生存结局为死亡，将病情好转的定义为生存。3.统计学方法采用SPSS22.0统计学软件进行数据处理分析，符合正态分布的计量资料用（s）表示，两组间比较采用独立样本t检验。非正态分布的计量资料以M（P2 5,P7 5）表示，两组间比较采用非参数检验。计数资料用%表示，采用检验。以P0.05为差异有统计学意义。结果1.观察组两亚组患者一般资料比较（表1）2.观察组与对照组血清可溶性-Klotho蛋白以及2-MG水平检测结果（表2 3）在不同的时间点，观察组患者血清可溶性-Klotho蛋白水平均高于对照组（P0.05）；观察组血清可溶性-Klotho蛋白水平在不同时间点水平差异有统计学意义（P0.05）。表2观察组与对照组血清可溶性-Klotho蛋白水平比较(ng Ll)组别n第1天第3天第5天第7 天对照组110 136.2 12 3.36 136.2 12 3.36 136.2 12 3.36136.21 23.3观察组110 17 4.58 34.12 2 0 3.7 8 39.2 418 7.8 330.7 2 17 3.0 2 2 8.0 5a值-9.732-15.518-14.028-10.576P值0.050.050.050.05注。与前一天相比:aP0.05表3观察组与对照组2-MG蛋白水平比较（mgL）组别n第1天第3天第5天第7 天对照组1101.73 0.391.73 0.391.73 0.391.73 0.39观察组1102.64 0.802.51 0.75a2.32 0.69a2.13 0.58a值-10.724-9.677-7.807-6.002P值0.050.050.050.05注：与组内前一天相比，“P0.05在不同的时间点，观察组患者2-MG蛋白水平都高于对照组（P0.05）；观察组2-MG蛋白水平在不同的时间点的水平差异有统计学意义，且呈现出随治疗时间增加水平下降的趋势（P0.05）。3.生存亚组与死亡亚组血清可溶性-Klotho蛋白检测结果（表4）667脑与神经疾病杂志2 0 2 3年第31卷第11期表4生存亚组与死亡亚组血清可溶性-Klotho蛋白水平比较(ng L-)组别第1天第3天第5天第7 天生存亚组8 117 1.0 2 2 2.0 518 9.0 2 32.1117 8.0 8 2 1.3517 1.32 31.35死亡亚组2 9 18 6.37 2 8.42 2 2 5.7 6 39.7 6 19 5.32 2 7.4118 8.9 334.58t值-2.298-3.8712.6722.032P值0.050.050.050.05注：在不同的时间点，死亡亚组患者血清可溶性-Klotho蛋白水平均高于生存亚组（P0.050.050.050.05）；在第5 7 天，生存亚组患者2-MG水平明显低于死亡亚组（P0.05）讨论重型颅脑损伤是一种常见的临床疾病，其伤后颅脑内组织及细胞存在复制的病理反应。常规的脑部CT等影像学检测手段存在滞后性，神经功能测定等手段灵敏度低，受限于患者本身的生命状态 4-5。故寻求可靠的便于检测的预后相关指标具有重要意义。在本研究中，对本院收治的重型颅脑损伤患者进行研究分析，通过生存亚组和死亡亚组相比较，在MAP、G CS评分、白细胞计数、血小板计数、中性粒细胞计数、血红蛋白、白蛋白、尿素氮、肌酐以及APACHE评分上，差异有统计学意义（P0.05）。这些结果表明，与免疫相关的炎症因子以及蛋白的水平可能与重型脑损伤患者的预后具有重要相关性，比如在白细胞、血小板、中性粒细胞计数等，这提示作者在进行重型脑损伤患者的术后治疗中，应密切关注患者的免疫水平，增强其免疫力。在不同的时间点，观察组患者血清可溶性-Klotho蛋白水平均高于对照组（P0.05）；观察组血清可溶性-Klotho蛋白水平在不同时间点的水平差异有统计学意义（P0.05）。在不同的时间点，死亡亚组患者血清可溶性-Klotho蛋白水平均高于生存亚组（P0.05）。Klotho蛋白是Klotho基因编码的跨膜蛋白，分泌性Klotho蛋白具有抗炎症，参与免疫调节等重要功能 6-7 。有研究表明，在小鼠实验中，-Kloth蛋白参与能量调控，与糖尿病以及肥胖症等代谢性疾病相关，关于具体相关调节机制目前仍在研究中 8-9 。在急性缺血性脑卒中、阿尔茨海默病等疾病的早期均有可溶性Klotho蛋白水平的显著增高，这可能与代偿性反应有关 10-1。任斌等 2 在重型颅脑损伤的研究中发现，患者的血清可溶性-Kloth蛋白表达水平明显升高,且在第3天时达到顶峰,表明-Kloth蛋白水平对于预测患者预后具有一定的价值。2-MG是由淋巴细胞、血小板及白细胞生产的低分子量的蛋白质，由9 9 个氨基酸构成。2-MG的产生速率稳定，并且能够被肾小球选择性过滤，因此其浓度相对稳定，2-MG的研究也多与早期肾损伤相关 13-15。一项研究表明，2-MG与炎症、动脉硬化具有重要关联，当炎症发生时，大量的T淋巴细胞生产分泌并释放的2-MG上升，故2-MG与免疫过度也相关 16-17 。近年来，几项研究发现，2-MG能够对脑部免疫具有影响的功能，它可以通过调节神经再生和突触的可塑性从而改变影响大脑的认知功能 18 在本研究中，发现在不同的时间点，观察组患者2-MG水平均高于对照组（P0.05）；观察组2-MG水平在不同的时间点的水平也有差异性，且呈现出随治疗时间增加水平下降的趋势（P0.05）；在第5 7 天，生存亚组患者2-MG水平明显低于死亡亚组（P0.05）。综上，重型颅脑损伤能够引起血清可溶性-Klotho蛋白以及2-MG的水平升高，对其动态（收稿日期：2 0 2 3-0 3-13）668脑与神经疾病杂志2 0 2 3年第31卷第11期监测有助于判断预后。本研究受限于单一队列及样本量，相关结论仍需进一步研究。利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突作者贡献声明月林建聪、李奕鑫：负责整体文章设计和文章写作；张晶、洪蓉蓉：负责数据收集和分析参考文献1Marklund N,Bellander BM,Godbolt AK,et al.Treatments andrehabilitation in the acute and chronic state of traumatic braininjuryJ.J Intern Med,2019,285(6):608-623.2Cardoso AL,Fernandes A,Aguilar-Pimentel JA,et al.Towardsfrailty biomarkers:Candidates from genes and pathways regulated inaging and age-related diseasesJJ.Ageing Res Rev,2018,47:214-277.3Chen G,Liu Y,Goetz R,et al.-Klotho is a non-enzymaticmolecular scaffold for FCF23 hormone signalingJJ.Nature,2018,553(7689):461-466.4Brett BL,Gardner RC,Godbout J,et al.Traumatic brain injuryand risk of neurodegenerative disorderJJ.Biol 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