HPV临床常用检测方法.doc

由于HPV不能在体外细胞培养，故不能用简便的血清血检测进行HPV的诊断和分型。临床上用于检测HPV的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和PCR等，其中以PCR方法的敏感性最高，是目前应用最多感染的HPV型别、含量、持续时间决定病变的发展与预后,是进行HPV检测的主要内容。目前主要是通过应用分子生物学方法进行HPV DNA的检测。1、现有的HPV实验室主要检测手段: 聚合酶链反应(PCR, Polymerase Chain Reaction):扩增位于两段已知序列之间的DNA片断的方法。该法有较高的敏感度,可进行HPV分型,缺点是对实验室环境要求较高,容易发生样本间的交叉污染,从而导致假阳性率高。 核酸杂交检测有较好的特异性和敏感度,还可以进行HPV DNA的分型,各种核酸杂交检测方法有一定的优缺点。A核酸印迹原位杂交适用于HPV分型和HPV DNA分子量鉴定,虽然灵敏度高,但因操作复杂,需要新鲜组织标本,不便在临床上大规模使用。B斑点印迹其敏感度和特异性均低于核酸印迹原位杂交法,虽然经济实用,但实验过程存在有放射性污染,是环保所不能轻视的问题。C原位杂交（in situ hybridization，一种核酸杂交技术，可用来测定基因或特定核苷酸序列在核酸分子的所在部位，检测重组体DNA） 通过非放射性探针对石蜡组织进行检测,能作定位检测,假阳性率低,但灵敏度不高,大大降低了临床使用价值。D杂交捕获法(Hybrid Capture) 杂交捕获试验是利用化学发光对抗体捕获的信号加以放大。首先使DNA双链释放并分解成为可以杂交的核苷酸单链,DNA单链与RNA组合探针结合为RNA-DNA杂合体,特异性抗体将RNA-DNA杂合体捕获,偶联有碱性磷酸酶的第二抗体与RNA-DNA杂合体结合,碱性磷酸酶使酶底物发光,根据光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNA-DNA杂合体的含量。能检测13种高危型HPV,包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。各种检测方法的比较各种检测方法的比较方法学灵敏度特异性技术特点细胞学（Cytology）低低操作容易，成本较低，准确度较差斑点印迹（Dot blot）中中有一定放射性核酸印迹原位杂交（southern blot hybridization）高高标准、麻烦，不宜大规模使用原位杂交（In Situ hybridization）高中蜡块组织包埋内检测HPV杂交捕获（HC、HC2）高中无放射性，易使用，高、低危型间有交叉反应，且不能分型普通多聚酶链反应（PCR）很高中取材容易，但目前已应用试剂的只能检测少数单一型别，如6、11、18等，且由于技术上的问题存在假阳性2、最新推出的HPV的实验室检测技术高灵敏度高危型HPV分型多色荧光实时PCR试剂：为欧洲著名分子生物学研究机构专门针对宫颈癌筛查而全新设计的高危型HPV分型多色荧光实时PCR检测试剂，可同时检测高危型中最主要的16、18、31/33、35/45型。了解宫颈疾病人乳头状瘤病毒（HPV）感染患者中HPV亚型分布情况及高危型HPV的年龄分布。方法采用专利Invader酶切信号放大法，利用Cervista HPV HR Cervisat核酸杂交基因分型试剂检测宫颈脱落细胞HPV的14个亚型DNA。HPV型组亚型备注A5/A651，56，66A718，39，45，59，68A916，31，33，35，52，58HPV基因分型检测试剂盒（PCR-反向点杂交法）【产品用途】 对人乳头瘤病毒（HPV）的感染情况进行定性检测并加以分型，能够检测23种HPV基因型，直接提示感染HPV的基因型；包括18种高危和5种低危型，可用于临床HPV感染的辅助诊断。【产品优势】1.精确分型：能同时对23种HPV基因型进行精确分型，包括18种高危型和5种地位型；2.效率高：单次检测标本数量可达96份；3.性能好：特异性强、重复性好，均高于98%；4.设备通用：如普通PCR仪和杂交仪，适应于大、中、小型实验室；5.内部质控：具有真正意义上的内部质控，检测结果更加准确；6.可以检测多种临床标本。【技术方法】 采用PCR和反向点杂交法相结合的基因芯片技术【检测原理】将大量不同序列的探针分子固定于支持物的不同位置上，然后与已做标记的样本进行杂交，通过检测杂交信号的强度和分布来进行分析。【检测标本】 宫颈脱落细胞、液基细胞学标本、疣体组织、石蜡组织切片等【临床意义】1.宫颈病变及宫颈癌的筛查；2.对于未明确诊断意义的非典型鳞状细胞（ASCUS）患者的分流管理；3.预测病变恶化或术后复发的风险，有效指导术后追踪；4.指导HPV疫苗的研究及使用。