细胞培养用具的清洗、消毒方法.doc

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细胞培养用品的清洗与消毒v2.0
一、清洗
1、玻璃类
流程：浸泡→刷洗和烘干→浸酸→冲洗
要求：清洗后的玻璃器皿干净透明无油迹，水滴不成股流下
具体操作：
新买：5%稀盐酸浸泡过夜1→自来水冲洗→洗洁精刷洗2→自来水冲洗（晾干或烘干50℃）→浸酸（一天一夜）3~4→自来水冲洗25遍→蒸馏水洗5次→双蒸水洗3次（或再用单蒸水冲洗5次）→干热灭菌（将温度升至150℃后关闭烘箱密闭3h，待冷却至常温）6→待使用
已用：用后马上浸入洗洁精中浸泡一天7（带毒应浸入消毒水）→洗涤剂刷洗后自来水冲洗（晾干或烘干50℃）→浸酸（一天一夜）→自来水冲洗25遍→蒸馏水洗5次→双蒸水洗3次（或再用单蒸水冲洗5次）→干热灭菌（将温度升至150℃后关闭烘箱密闭3h，待冷却至常温）→待使用
注意：
1. 新的初次使用的玻璃器皿，在生产及运输过程中，玻璃表面带有大量的干固的灰尘，且玻璃表面常呈碱性及带有一些对细胞有害的物质等,用5％稀盐酸液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质
2. 刷洗要适度，过度会损害器皿表面光泽度
3. 清洁液对玻璃器皿无腐蚀作用，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质。浸泡时器皿要充满清洁液，勿留气泡或器皿露出清洁液面
4.浸泡时间：一般为过夜，不应少于6小时
5. 最好用洗涤装置如用手工操作需流水冲洗十次以上，每次水须灌满及倒干净，然后用蒸馏水清洗3-5次，晾干（或烘干）备用
6.或高压蒸汽灭菌（湿热法），容器水分烘干→牛皮纸包内、报纸包外将容器口扎紧→121℃，30min高压灭菌→待使用
7. 用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液面
2、塑料类
具体操作：
新买：一次性无菌塑料制品打开包装即可使用
已用：用后立即用流水冲洗→洗涤剂浸泡3小时后刷洗（用纱布或棉签）→自来水冲洗→5%稀盐酸浸泡过夜→双蒸水煮沸2~3次 （10min/次）→包装烘干（50℃）→待使用
3、橡胶类
具体操作：
新买/已用：用后立即用流水冲洗→洗涤剂浸泡3小时后刷洗（用纱布或棉签）→自来水冲洗→5%稀盐酸浸泡过夜→双蒸水煮沸2~3次 （10min/次）→包装烘干（50℃）→待使用
4、镊子、剪刀
具体操作：
洗涤剂刷洗→自来水冲洗5~6次→75%医用酒精浸泡3小时→酒精棉球1擦拭→待使用
注意：1.酒精棉球应用双蒸水配置
5、不锈钢除菌滤器
具体操作：
洗涤剂刷洗滤器→流水冲洗15min→蒸馏水冲洗2~3次（或浸泡24h）→三蒸水冲洗2~3次（或24小时）→干燥→备用
6、金属滤网
具体操作：
自来水冲洗→蒸馏水冲洗→三蒸水冲洗→干燥→备用
二、消毒
1.紫外线：用于空气，操作台表面和不能使用其它法进行消毒的培养器皿。消毒时间：30~60min（至少）
2.高压蒸气灭菌法（湿热）：15磅，121℃，20min
培养用液、橡胶制品 l0磅l0min
布类、玻璃制品、金属器械等 15磅20min
3.干烤：160℃，2h（适用于玻璃器皿等）
注意：消毒后不要立即打开箱门，以防止冷空气骤然进入引起玻璃炸裂，影响消毒效果。
4.75%酒精：主要用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面处理，一般要求为70%~75%的乙醇，用蒸馏水配制
5. 抗生素：主要用于培养用液灭菌或预防培养物污染。
常用的抗生素：青霉素（浓度是100μg /ml）
链霉素（100μg/ml）
附酸液配制：
酸液配制：重铬酸钾（g）∶浓硫酸（ml）∶蒸馏水（ml）
强清洁液 63∶1000∶200
次强清洗液 120∶200∶1000
弱清洁液 （常用） 100∶100∶1000
（危险！请勿单独配制此溶液）
具体以配置10000ml常用清洁液为例介绍如下操作：
1.先在搪瓷盆或塑料盆中加入蒸馏水8000ml，
2.称取1000g重铬酸钾，用玻璃棒搅拌直至溶解（可加热以辅助溶解）,
3.待重铬酸钾液冷却后，缓慢加入1000ml浓硫酸，边加边用玻璃棒搅动，以混合液温度不过快上升和不出现重铬酸钾结晶为度。
4.配好后倒入洗液缸中备用。
要求：
1新配制的清洁液呈棕红色。当使用时间过久，清洁液的颜色变暗、发绿或混浊时，应弃去（深埋地下），配制新的。
2配制、盛装清洁液的容器应防酸、耐热、有较大的开口，一般用瓷缸、玻璃制品或耐酸塑料制品。
注意：
1.配制时应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护好面部及身体裸露部分
2.配制过程中可使重铬酸钾溶于水中，然后慢慢加浓硫酸。并不停的用玻璃棒搅拌，使产生的热量挥发，
3.配制溶液应选择塑料制品
4.配成后清洁液一般为棕红色
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