GeneXpert-质量控制.doc

GeneXpert 质量控制(针对于所有的Cepheid 检测试剂)

GeneXpert系统是针对于一次性使用、充分整合及组合式检测试剂盒的全封闭式操作系统。在每个检测试剂盒（每个病人样本检测）内均有控制和检查系统。其作用是检查试剂、病人样本、裂解、扩增、以及检测试剂盒本身完整性。

使用Cepheid 检测盒进行检测的每个病人样本，其在检测的每一个步骤过程中均包含了内部控制检查，且这种检查并不局限于某一天。日常使用的外部质量控制并不能提供在每个特定的病人（样本）在Cepheid检测盒检测中的，超越内部质量控制系统额外信息。

内部控制被用在了每一个病人样本上（见下表）

1. 样本处理控制（SPC）：它控制每个病人标本中的联合提取和联合扩增，控制样本的处理步骤包括裂解和提取、核酸的完整性检查以及试剂冻干珠的复溶。因为每个特定的测试被视为有1个或者其他的序列变异，所以在基因分型实验中，样本的功能作为自带的内部控制，监测正常的和突变的基因序列。
• 如果在一个阴性样本中，SPC 检测失败，将会显示一个“无效”的结果报告。
• 如果没有信号出现在基因分型的测试中，将会显示一个“无效”的结果报告。

2. 扩增控制（AC）：这种控制能监测酶的完整性和可能存在的PCR抑制剂，因为每个特定的测试将会被视为有1个或者其他的序列变异，所以在基因分型实验中，样本的功能作为自带的内部控制，将监测正常的和突变的基因序列。确保实验所需的最小数量的人类样本细胞，能被联合提取的和联合扩增，获得的目标靶向基因将被用来以确保样本的收集、准备。
• 如果在一个阴性样本中，扩增控制失败，将会显示一个“无效”的结果报告。
• 如果没有信号出现在基因分型的测试中，将会显示一个“无效”的结果报告。

3. 试剂控制（探针检查）：这个监控检查的是探针的完整性和试剂盒内部各类试剂的溶合重建状态。
•根据不同的测试，将有2-6个特异性的荧光测量标准，如果探针检查失败，将会显示一个“错误”的结果报告

4. 仪器系统控制：这个监控检查光路、温度、模块和每个试剂盒的机械完整性。
• 热力和机械检查运行，如果系统控制失败，将会显示一个“错误”的结果报告

5. 结果的可靠性：
• 对多重性的基因遗传和感染性疾病进行检测，采用相关的运算方法对每个扩增分析物进行分析，当相应的运算方法不被满足的情况下，将显示“错误”或者“无效”的报告

当上述控制发现不符合规范标准，针对于病人样本和测试运行，一个错误的代码，没有结果或者无效的结果会明确的被显示出来。而在一个单独的试剂盒内运行一个外部控制并不能预测特定的测试样本。

外部控制可以提供有关于运输，批号，储存条件，操作能力和同类比较的有价值信息。因此，当面对许多变化，包括新的运输方式、或经历了重要的服务活动，或每隔30天后，在每一个实验室里，对于性能测试的验证，外部控制依然是被推荐的。Cepheid 承认，这些都是基于科学依据，相应的验证性研究和临床试验而得出的结论。
最终的决定和责任依然取决于实验室负责人，实验应遵循和适用于当地的法规。

Xpert检测试剂盒中的全部控制过程示意表格*

程序步骤或条件控制
ＳＰＣ
ＡＣ
探针检测
系统
最后结果
预试验是试验时的自检
超声波降解控制

X
错误
PCR的加热，冷却和光学

X
错误
样本处理控制
冻干珠复溶
X
X
X

错误或者无效
细胞裂解
X

无效
ＤＮＡ提取
X

无效
抑制剂的存在
X
X

无效
合适的样本

X

无效
探针检查控制
ＰＣＲ反应管填充

X

错误
荧光信号团检测

X

错误
冻干珠复溶

X

错误
PCR
热循环

X
错误
引物或目标退火
X
X

无效
PCR抑制剂
扩增
X
X

无效
*特定的利用控制依赖于对目标的分析