微生物学实验报告-实验室环境和人体表面微生物检查1.doc

<p>实验室环境和人体表面的微生物检查
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&nbsp; 作者：郭森
&nbsp; 地址：山东大学生命科学学院微生物楼341微生物实验室
摘要：这次我们在实验室里进行了培养基的制作和一些简单的微生物接种，目的是熟悉微生物实验的操作并了解无菌操作的重要性。首先我们组一共制作了十二个肉膏蛋白胨琼脂平板培养基，对微生物实验的基本操作有了一定的接触和掌握；之后，分别对制作的平板培养基作了保留空白、放置空气和用棉棒沾取环境获取微生物等处理；经过大约两天左右的恒温培养，可以观察到除了空白对照以外，其他十一个培养基都生长着各式各样的菌落。该现象表明，在空气、地面等环境和人体表面环境中存在着大量的微生物。所以，无菌操作是微生物实验中极其重要的一个环节。
关键词：实验室环境；人体表面：肉膏蛋白胨琼脂平板；微生物接种；恒温培养
前言：这次实验要确定我们周围环境和人身体表面的确存在着大量的微生物，并对其进行初步的观察，同时熟悉一下微生物实验的操作。众所周知，微生物无处不在，从看似很脏的地面到透明无色的空气再到我们的身体上都分布着数不清的各种各样的微生物，因此我们从环境获取微生物，希望从这些环境中微生物的数量和形态观察出实验室环境中微生物的大体情况，体会无菌操作的重要性。这次实验我们是采取将看不见的微生物“放大”成子细胞群体即菌落的方法确认和观察微生物的，即使用牛肉膏蛋白胨平板培养基，其中四个分别暴露在空气中保持不同的时间，其他是使用消毒后的棉棒分别在地面、实验台、手指、空腔内壁、无菌水、自来水和纸币上沾取后，在酒精灯旁按压到培养基平板上，之后将所有培养基放到恒温培养箱中恒温培养大约两天的时间。本实验报告先介绍了本次实验的实验材料与方法，然后是对实验的结果与分析进行描述，最后是总结性的小结部分。
1 材料与方法
1、1 材料
1、1、1 培养基
肉膏蛋白胨琼脂平板。
1、1、2 溶液和试剂
无菌水。
1、1、3 仪器和其他用品
灭菌棉签（装在试管内），试管架，煤气灯或酒精灯，记号笔和废物缸等。
1、2 步骤和方法
1、2、1 培养基的制作
1、2、1、1 称量
制作十二个肉高蛋白琼脂平板，约需要称量水200ml，蛋白胨2g，氯化钠1g，牛肉膏0.6g，琼脂3~4g。
1、2、1、2 熔化
按上述顺序将材料分别放到一大烧杯中混合加热至其熔化。
1、2、1、3 调节PH值
待琼脂熔化后，调节溶液PH至7.0~7.2。
1、2、1、4 转移灭菌
将溶液从烧杯中转移至锥形瓶中，塞上棉塞加牛皮纸包裹后同洗净的培养基和放有棉塞的试管一同放入高压灭菌锅里，灭菌20min左右。
1、2、1、5 接种
最后，将锥形瓶中溶液在酒精灯火焰旁转移至灭菌后的培养皿中，等待其冷却固定后便可接种。
1、2、2 微生物的获取和接种
1、2、2、1 编号并保留空白
将做好的十二个培养基分别编号1~12，保留其中第一个作为空白对照。
1、2、2、2 分梯度制作空气培养基
按时间顺序每隔五分钟打开9、10、11、12号培养基，分别是18：10，打开9号培养基，18：16，打开10号培养基，18：21，打开11号培养基到18:29合上培养皿，12号培养基大约18：26打开，9、10、12号培养基一直到实验结束（约18：35）才合上。
1、2、2、3 接种环境中微生物
将第9号培养基打开后使用灭菌处理后的棉棒沾一下地面，再在火焰旁在2号培养基上按一下，之后分别使用同样的方法，用无菌棉棒获取了实验台、纸币、口腔、自来水和手指上的微生物，培养基编号分别为3、4、5、7、8五个，6号培养基直接将一根头发放到培养基上；在以上过程中，分别按顺序打开10、11、12三个培养基，使其均暴露于空气中，时间从短到长分别是12、11、10、9号培养基。
1、2、3 微生物恒温培养
将十二个培养基均放入恒温培养箱中在37°C条件下恒温培养两天左右，即可进行观察。
2 结果与分析
2、1 实验结果
见表1，见图1~12
&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;表1 实验室和环境和人体表面微生物恒温培养结果统计表
培养基
1
空白
2
地面
3
实验台
4
纸币
5
口腔
6
头发
菌落数量

看不清单独数量但是成一连续带状，边缘不规则
菌落连成一大片，有大约3个单独的菌落
散落的大约有30~40个，其他的聚在一起成条状大概有100个
严格意义上讲只有1个
成放射状聚集，已经分不清了
菌落形态
（见图1）
菌落较简单，呈乳白色，部分透明，部分呈黄色；有明显边缘；表面粗糙
（见图2）
半透明状，菌
苔痕迹较薄，不规则；边缘厚；表面光滑（见图3）

呈白色小点状，有突起，分散（见图4）
整体为规则的圆形，分环，由内而外依次为白色 透明 白色（见图5）
菌落沿发丝分布，发根处和中间居多，呈白色放射状（见图6）
简要说明
因为是对照所以无明显现象
地面微生物较多，较杂，因此混在一起，颜色显乳白色，并且形态不规则，表面粗糙
实验台虽比不上地面微生物多，但毕竟长期接触同学们的衣袖，因此微生物也较多，但显然与地面的不同
纸币上的微生物主要是从摸过纸币的人的手里的，但貌似很单一，说明纸币上可能存在着一定的生存竞争
除该微生物菌落之外的一大片应该是食物残渣或大菌落，显然口腔要干净得多
因为当时直接把头发放了上去，所以只能观察出微生物沿头发丝分布的情况和微生物的大体颜色
培养基
7
自来水
8
手指
9
空气
10
空气
11
空气
12
空气
菌落数量
4个左右，但大小差别较大
聚集成约9大块菌落，小菌落10个左右
60个左右，与10、11、12号培养基均差别明显
40个左右，与
11号培养基差别不很明显
30个左右，与12号培养基差别明显
20个左右
菌落形态
菌苔厚，聚集成大块，形状不规则，呈乳白色（见图7）
菌苔厚，不规则，呈乳白色，边缘具纤毛（见图8）
在试验10的基础上增加两种黄色柠檬切面：放射型，环形菌落（见图9）
在试验11的基础上，增加两种：橙色点状；橙色形状不规则，放射型（见图10）
在试验12的基础上，增加两种：白色，规则圆形，分环；白色，表面纤毛，边缘不明（见图11）
能识别3种菌落：黄色规则圆形；白色，表面有纤毛，边缘透明；白色，规则 &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 圆形，边缘有纤毛（见图12）
简要说明
自来水中微生物看起来数量较少而且活动性不是很强
人手指上微生物与自来水中微生物较相似，但有明显纤毛，说明手指上微生物活动性强
9号培养基放置的时间最长，要早于10号培养基5分钟，因此菌落种类最多数量最大，也最能在大体上说明环境中微生物的
10号培养基是早于11号培养基5分钟放置的，菌落种类和数量与11号培养基差别不是很明显，
11号培养基只暴露了8分钟，时间稍长于12号培养基，不过有两种新菌种出现，说明空气中微生物的活动性很强种类很多
12号培养基是最后打开的，因此时间比其他三个都要短，菌落数量和种类也明显少于前三个培养基，但出现的三种微生物有两种带有纤毛，说明其运动性很强

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2、2 结果分析
实验结果可以看出，地面上的微生物种类自然是最多的，而且数量庞大，其菌落表面粗糙，可见有很多无荚膜的种类存在，比较混杂；实验台虽然数量明显不如地面，但其种类却也很多，菌苔中间薄周围厚，猜测微生物正在扩散中；
像口腔、纸币、自来水、手指上也有大量的微生物，只是数量明显较少，而且种类比较单一，但基本上都有乳白色的菌落，所以猜测有放线菌存在，只是暂时无法确定；而空气中的微生物种类很多，但是数量只能说短时间内的并不多，但根据实验时间的增长，微生物的数量也迅速的增加，可以看出我们平时所在的空气中的微生物是非常丰富的，微生物无处不在，另外，有很多乳白色、黄色、橘黄色的菌落，所以应该有放线菌，但其他颜色的不知，在形状上，有成环状和放射状的菌落猜测是因为扩散造成的现象。
3 小结
本次实验是我们进行的第一次微生物实验，实验的主要目的是初步熟悉微生
物实验的各项操作，观察实验室环境与人体表面微生物的形态，树立“无菌操作”的概念。实验的结果见表1和观察时记录的图片。这次实验中有不少不规范或者错误的地方：首先，我们在倒平板培养基的时候对培养基中培养液的量没有很好的把握，有些培养基中培养液较多而有些又有点少，时间一长便会对实验结果造成很大影响；然后，我们在获取头发丝上的微生物时，直接将头发丝放到了培养皿中，这是一个明显的错误，应该用无菌棉棒蘸一下头发再把棉棒按到培养皿上；给培养皿做记录时，没有按照规范的划两条线记录，因此后来观察时有些麻烦，无法立即确认每个培养皿；放置空气培养基时，时间安排有些没有及时记录，导致有些模糊。虽然第一次实验有失误，但总体来说还很顺利，实验目的也基本上达到了。所以，以后做下面的实验时，我们会更加认真仔细，努力让自己掌握微生物实验的各种技能和技巧。

参考文献
[1] 沈萍，陈向东 &nbsp;《微生物学实验》（第4版） 高等教育出版社 2007年11月第4版</p>