乙肝五项检测操作规程.doc

乙肝五项检测(乳胶法)(一)检测目的乙型肝炎病毒标志物(HBsAgHBsAh、HBeAg、HBeAb、HbcAb)检测。(二)测定原理 HBsAg、HBsAh、HBeAg均采用双抗体(原)夹心法原理。用抗HBsAg多克隆抗体包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的抗HBs鲰单克隆抗体HBsAh，应用双抗体夹心法原理，定性检测血清血浆中HBsAg；用HBsAg重组抗原和链霉亲和素一BSA包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的HBs如重组抗原和生物素一BSA及其他试剂，应用双抗体夹心法原理，定性检测血清血浆标本中HBsAb；用抗HBeAg单克隆抗体(Ehl)包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的抗HBeAg单克隆抗体(Eh2)。应用双抗体夹心法原理，用于定性检测血清或血浆中HBeAg。 HBsAg、HBsAb、HBeAg测试时，将血清血浆标本滴人试剂板加样处标本在毛吸效应下向E层析，如标本中含有相应的待测物质，在测试区(T)内会出现一条红色条带，则是阳性结果。如标本中不含有相应的待测物质，则测试区(T)将没有红色条带，是阴性结果。无论待测物质是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内(c)。质控区内(c)所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。 HBeAh、HBcAh采用竞争法原理。用HBeAg重组抗原包被硝酸纤维素膜，配以乳胶标记的鼠抗HBeAg单克隆抗体。应用竞争抑制法原理，定性检测血清血浆巾HBeAI，；用HBcAg重组抗原包被硝酸纤维素膜，配以乳胶标记的HBcAb单克隆抗体，应用竞争抑制法原理，定性检测血清血浆中HB。Ah。 测试HB。Ah、HBcAb时，将血清血浆标本滴入试剂板加样处，随之标本在毛吸效应下向上层析。如标本中含有相应的抗体则同膜上测试区(T)的单克隆抗体竞争与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。如标本中没有相应的抗体，预包被在乳胶颗粒上的相应抗原则同膜上测试区(T)的单克隆抗体全部结合。阳性标本，测试区(T)将没有红色条带；阴性标本，测试区(T)会出现明显的红色条带c无论相应的抗体是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内(c)。质控医内(c)所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准 (三)操作步骤 具体方法参照试剂盒说明书。举例如下： 在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书使用前将试剂板和血清血浆标本恢复至室温(2030)。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温)，在l小时内应尽快地使用。 1.将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清血浆标本，逐滴垂直加入于试剂板的五个加样子L中(每孔2。3滴)。 2.加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在15分钟时读取测试结果。在20分钟后读取的结果无效 (四)结果判定 由于前三个项目HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗体(原)夹心法原理，后两个项日HBeAb、HbcAb使用竞争法原理。因此前一：个项日与后两个项目判读方法是不同的请注意区别。 l .HBsAg、HBsAb、HbeAg (1)阳性(+)：两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)。阳性结果表明：标本中含有待测物质。 (2)阴性(一)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内无红色条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。 (3)无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。 (4)注意：在进行HBsAg、HBsAb、HbeAg测试时，测试区(T)内的红色条带可显现出颜色深浅的现象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应该判为阳性结果。 2 HBeAb、HBcAb (1)强阳性(+)：仅质控区(c)出现一条红色条带在测试区(T)内无红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。 (2)弱阳性(+)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内有非常弱的红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。 (3)阴性(一)：两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(c)。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。 (4)无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。 (五)注意事项 l.请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定无效。 2.乳胶法乙肝五项检测试剂板(血清血浆)只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的存在，不能确定血样中病毒的含量。 3.由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的干扰物质，检测结果可能有错误。对可疑结果应作相应的进一步检测。 (六)生物安全防护 1.在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险品。 2.如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。 3.操作前一定要做好自身防护(穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套)。 4.HBV对低温、干燥、紫外线、70乙醇均有耐受性。煮沸10010分钟、高压蒸汽灭菌12115分钟或f热1602小时均可灭活HBV。510gL次氯酸钠30分钟，1：4000福尔马林3772小时，O 5过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性。 (七)临床意义 1. HBsAg阳性：血清HBsAg阳性，表示受检者处于HBV的感染状态。HBsAg也可从许多乙肝检验对象体液和分泌物中测出，如唾液、精液、乳汁、阴道分泌物等。 2. HBsAh阳性：多见于乙型肝炎处于恢复期，或既往曾感染过HBV，现在已恢复，而且对HBV有一定的免疫力；同时，HBsAh阳性是对接种乙肝疫苗后产生效果，即接种免疫成功的指标。 3. HBeAg阳性：见于HBV感染的早期，表示血液中含有较多的病毒颗粒，提示肝细胞有进行性损害和高度传染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于预测肝炎病情，HBeAg持续阳性，易转为慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均为阳性的孕妇，可以将乙型肝炎传播病毒给新生儿，其感染的阳性率为7090。 4. HBeAh阳性：多见于HBeAg转阴的检验对象，意味着HBV部分被清除或抑制，病毒复制减少，传染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌检验对象可检出HBeAb；在HBsAg和HBsAh阴性时，如能检出HBeAh和HhcAh，也能确诊为乙型肝炎近期感染。 5. HBcAhlgG阳性：高滴度表示正在感染iBV，低滴度则是既往感染过HBV的指标，具有流行病学的意义。 6. HBcAbIgM阳性：是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示检验对象血液有较强传染性。同时，HBcAhIgM阳性还见于慢性活动性乙型肝炎。 （注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）