甘蔗宿根性与宿根发株期生理的关系-学位论文.doc

论文（设计）题目：甘蔗宿根性与宿根发株期生
理的关系
院 － 系：生命科学与技术学院
专 业：生物科学
年 级：2009
学生姓名：刘金堂
学 号：200913050175
导师及职称：覃伟（实习研究员）
王栋（讲师）
日 期：2012年11月
目 录

一、开题报告
二、开题记录表
三、任务书
四、指导记录
五、指导教师评定表
六、专家评定表
七、答辩委员会评定表
八、答辩记录表
九、诚信承诺书

红河学院本科生毕业论文（设计）开题报告
姓名
刘金堂
性别
男
学号
200913050175
院－系
生命科学与技术学院
专业
生物科学
年级
2009
论文题目
甘蔗宿根性与宿根发株期生理的关系
教师推荐题目 □自拟题目
题目来源
教师科研
题目类别
应用研究
指导教师
覃伟/王栋
选题的目的、意义(理论意义、现实意义):
宿根蔗是指上一造甘蔗收获后，留在土中的蔗蔸上的侧芽在适宜的环境条件下，萌发出土长成为新的植株，经过人工栽培而成为新的一造甘蔗[1]。宿根性是指新植或上代甘蔗收斩后，宿根发株的快慢强弱和数量，最终成茎率，有效茎数和产蔗量高低的统称[2]。宿根性是稳产高产的重要基础。宿根蔗栽培是世界各蔗糖生产国家和地区甘蔗生产的主要种植制度。美国夏威夷宿根蔗的面积占总植蔗面积的80%～85%，菲律宾宿根蔗的面积占总植蔗面积的60%～70%，巴西宿根蔗的面积占总植蔗面积的80%～90%，我国的蔗区常年50%～70%以上[3]。因此，开展强宿根甘蔗宿根发株期生理特性研究，对了解强宿根甘蔗宿根发株期的生理特性和强宿根甘蔗新品种的筛选评价具有重要意义。
栽培宿根蔗具有早生快发、提早成熟、省工省种、成本低、早分蘖、早拔节、生长期长、植株高大、有效茎多、高产稳产、早熟高糖、增产潜力大、错开农时和耐旱耐涝等许多优点，在甘蔗生产中占有极其重要的地位，为世界产蔗糖国家所重视。但近年来，宿根蔗的产量偏低不稳，宿根年限也缩短，宿根面积有减少趋势，究其原因主要是受品种退化、管理措施不当等原因的综合影响。提高甘蔗宿根性育种研究已越来越受到人们的重视[4-7]。当前, 因地制宜地选育宿根性强的品种是宿根蔗丰产的关键技术。选育过程中往往受到如亲本配合力和选育年限长等许多因素的影响，所以选育出一个宿根性好的品种，往往需要很长的时间才能实现。因此，从宿根甘蔗发株期的生理特性进行研究，找出与甘蔗强宿根性相关的生理特性，用于甘蔗宿根性强弱的评价，便于强宿根甘蔗新品种的早期筛选。

选题的研究现状（理论渊源及演化、国外相关研究综述、国内相关研究综述）：
宿根甘蔗在生产上具有很大的潜力，其研究为世界各甘蔗生产国所重视。吴坤宗等（1956）[8]在发表的《珠江三角洲宿根甘蔗减产原因与增产途径》提到宿根甘蔗生产问题。我国栽培宿根蔗已有一千四百年以上的历史[9]，且发现有宿根比世界其他各国年数更长的甘蔗[10]。周可湧（1963）[11]指出宿根蔗的基础是芽和根，且与外界条件有密切关系。明确了老根系具有吸收作用，认为破畦松兜的增产效果最为明显。Hatch等[12]证明甘蔗未成熟茎组织中酸性转化酶活性与节间伸长速率成正比，活性最高时期与快速生长期相吻合，天气变凉或千早使生长下降时，此酶几乎消失，这个时期成熟茎中蔗糖含量快速增加。同年他们在温室条件下，证明生长速度与酸性转化酶活性与总糖和还原糖含量成正比。陈伟栋、陈西凯[13]有关甘蔗叶片转化酶与甘蔗进化生长和糖分积累关系的研究表明，酸性转化酶活性越高，新植蔗种苗萌发越快。Madan等[14,15]也证明在大生长期叶片转化酶活性最高，成熟期下降。因而，叶片中的转化酶活性及还原酶和蔗糖的含量在一定程度上反映植株生长和蔗糖积累的情况。Kark等(1985)在田间试验研究中发现赤霉素和乙烯利能显著提高eo64、eoj7s和eojs3的蔗茎产量，一定浓度的生长素和赤霉素等生长调节剂均可减轻脱水，增加可溶性蛋白质含量，从而达到提高宿根蔗产量的目的。张勇和陈西凯等[16]认为还原糖含量是影响甘蔗萌发的主要原因之一。邓祖湖等（2000）[17]研究表明宿根性状配合力是甘蔗宿根性育种的关键；叶燕萍等（2005）[18]研究表明新植蔗前期施用低浓度乙烯利可促进宿根蔗出苗整齐，早生快发，增加了甘蔗产量；张勇和陈西凯[19]的研究表明，K促进了转化酶的活力，且与甘蔗的生长正相关。方位宽（2004）[20]指出宿根性强的甘蔗品种在前期生长过程中，蔗株叶片中表现出较高的酸性转化酶和过氧化物酶活性，并具有较高的淀粉、蔗糖和N、P、K含量。如果这是普遍存在的，它们可望作为评价宿根性的生理生化辅助指标，对于提高甘蔗宿根性选择的准确率，将具有重要意义。

论文(设计)主要内容（提纲）：
1.前言
2.试验材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 供试材料
选用云蔗06-407（强宿根）、云蔗06-408（弱宿根）、云蔗06-415（强宿根）和云蔗06-416（弱宿根）等4个宿根性强弱不同的甘蔗品种作为研究材料，对照种ROC22为生产上大面积推广应用的强宿根性甘蔗品种。
2.2 实验仪器及试剂
主要仪器：可见分光光度计、试管、水浴锅、离心管
主要试剂：考马斯亮蓝G-250、3，5-二硝基水杨酸、1%对氨基苯磺酸、0.2%α-萘胺、苯酚、浓硫酸
2.3 试验方法
2.3.1 采样
于2012年3月20日、2012年4月20日、2012年5月20日取每个试验品种不同植株生长良好的幼嫩叶片+1叶各3～5片，剪取叶片中间部位60cm左右带回实验室洗净，若不能及时对叶片进行研磨提取，应将其剪成10cm左右片段数段，装入采样袋置-76℃备用。
2.3.2 可溶性蛋白、可溶性糖、还原糖、转化酶（中性、酸性）、硝酸还原酶等物质的含量的测定。
3.结果与分析
4.讨论
5.结论
拟研究的主要问题、重点和难点:
1.研究的主要问题：探索研究与甘蔗发株期强宿根性有关的生理特性。
2.研究的重点：甘蔗宿根性强弱在生理指标上的差异性及其规律。
3.研究的难点：由于目前国内外对评价甘蔗宿根性强弱生理指标的发株期生理特性研究文献报道较少，所以各个生理特性的测定主要参考甘蔗分蘖生理基础研究的内容和参考有关甘蔗研究的文献，进行探索性的研究。
研究目标：
糖是人类必需的食用品之一，甘蔗既是一种重要的糖料作物和理想的能源作物，也是糖果、饮料等食品工业的重要原料。甘蔗的秆稍及嫩叶可供家畜饲料，副产品尚有糖浆、酒精、蔗渣纤维更是广泛的工业原料。发展宿根甘蔗生产，对降低种植成本，提高甘蔗产量和蔗农收益、促进农业和相关产业的发展，乃至对整个国民经济的发展都具有重要的地位和作用。培育高产、高糖、强宿根、高抗、广适的甘蔗新品种以及提高甘蔗的附加值始终是甘蔗育种的主要目标。因此，从生理角度对强宿根甘蔗进行深入研究，对今后强宿根甘蔗的选育和评价将具有重要意义。
1. 通过研究强宿根甘蔗的生理特性，有利于了解强宿根甘蔗宿根发株期的生理特性和强宿根甘蔗新品种的筛选评价，为强宿根甘蔗品种的培育和宿根甘蔗的生产打下基础。
2. 完成毕业论文。
研究方法、技术路线、实验方案、可行性分析：
研究方法：生理指标的测定
技术路线：
资料收集

甘蔗实验品种

剪取甘蔗叶片+1叶中部60cm左右带回实验室洗净，若不能及时对叶片进行研磨提取，应将其剪成10cm左右数段，-76℃保存备用。
研磨成浆，离心，收集上清液 叶片剪成0.3～0.5cm方形小块
生理测定

其它

酸性、中性转化酶活性
可溶性糖含量
可溶性蛋白含量

硝酸还原酶活性
还原糖含量

二硝基水杨酸法
二硝基水杨酸法
考马斯亮蓝法
磺胺显色法
苯酚法

数据处理
结果分析

实验方案：
1.生理指标的测定
1.1. 可溶性蛋白含量测定
参照高继国[21]的方法，并略作修改。叶片去中脉后剪碎，准确称取剪碎后的甘蔗叶片0.2500g左右，加少量石英砂、PVP及10ml 0.1 mol/L pH6.8的Tris-HCl缓冲液，在冰浴下研磨成匀浆，于冷冻离心机下10000r/min 离心10min，上清液即为蛋白提取液。取上清液0.1ml+5ml考马斯亮兰G-250(100mg考马斯亮兰G-250溶于50ml 95%乙醇搅拌，加入l20ml 85%磷酸，混合后稀释至1000ml，过滤)混匀，2～3min后，用紫外—可见光分光度计测定吸光值OD595，计算可溶性蛋白含量（μg/g）。标准液为牛血清蛋白液。
1.2 可溶性糖含量测定
参照孔祥生[22]的方法，将取样后处理好的叶片剪成0.3～0.5cm方形小块，混匀，准确称取0.3000g左右样品，放入试管中，加入8ml蒸馏水。于沸水浴提取30min，提取液过滤入25ml容量瓶中，加蒸馏水重复提取1次，合并提取液，定容至25ml。反应体系：0.5ml提取液+1.5ml蒸馏水+1ml 9%苯酚+5ml浓硫酸，摇匀。恒温下放置30min，显色。用紫外—可见分光光度计测吸光值OD485，计算可溶性糖含量(mg/g)。
1.3 中性、酸性转化酶活性测定
1.3.1 酶液的提取
称取剪碎叶片0.5000g左右，加入石英砂约0.5g，少量PVP和3ml提取液（预冷无菌蒸馏水），在预冷研钵中冰浴研磨成匀浆，加提取液3ml，混匀后倒入15ml离心管中，再用3ml提取液洗涤研钵两次，合并提取液，4000r/min离心15min。上清液即酶提取液（用于测定中、酸性转化酶活性和还原糖含量）。
1.3.2 酶活性测定
参照张志良[23,24]的方法，并略作修改。反应体系为1ml酶提取液+2ml 10%蔗糖溶液+5ml缓冲液（中性转化酶用pH7.0柠檬酸-磷酸缓冲液，酸性转化酶用pH4.6柠檬酸-磷酸缓冲液），酶液钝化组为对照，即1ml酶液经过沸水浴10min钝化后使用，体系其他试剂相同，将反应混合液置于37℃水浴中保温（中性转化酶2.5h，酸性转化酶1.5h）后，吸取1ml+0.75ml 3，5-二硝基水杨酸于10ml刻度试管中，沸水浴中加热5min后立即放入冷水中冷却至室温，加蒸馏水定容10ml并颠倒混匀。用紫外—可见光分光度计测定540nm处吸光值，以单位时间内还原糖产生的量表示酶活性(mg/g·Fw·h)。
1.4 还原糖含量测定
参照高继国[21]的方法，并略作修改。吸取1ml转化酶提取液+0.75ml 3，5-二硝基水杨酸于10ml刻度试管中，沸水浴中加热5min后立即放入冷水中冷却至室温，加蒸馏水定容10ml并颠倒混匀。用紫外—可见光分光度计测定540nm处吸光值，计算还原糖含量(mg/g)。
1.5 硝酸还原酶活性测定
用活体法[21]，将取样后处理好的叶片剪成0.3～0.5cm方形小块，混匀，准确称取1.0000g样品，各4份，分别置于小烧杯中，其中3份重复，l份空白。重复样品各加9ml 0.1mol/L KNO3·异丙醇·磷酸缓冲液混合液，空白样品加入9ml 0.1mol/L KNO3·异丙醇·磷酸缓冲液混合液+1ml 30％三氯乙酸溶液（钝化酶活性）。摇匀，置真空干燥器中抽气，反复几次，使叶片完全沉于液面下，置黑暗中30℃下保温1h，其间，摇匀一次，取出后加入1ml 30%三氯乙酸终止反应（空白除外），摇匀，分别吸取1ml提取液于试管中，加入2ml 1%对氨基苯磺酸和2ml 0.2%α－萘胺，摇匀30℃下静置30min，用紫外—可见分光光度计测吸光值OD540，以亚硝酸钠μg/g·Fw·h表示酶活性。
2.数据处理
3.结果分析
可行性分析：
1.国内外对宿根性的评价做了许多研究工作，可以参考前人的研究方法及思路；
2.云南省农科院甘蔗研究所拥有同一亲本组合粤糖97-20×ROC25杂交分离产生的宿根性强、弱差异典型的甘蔗品种创新后代，为具有相同遗传背景的研究材料提供有利基础；
3.实验设备齐全能保障实验顺利进行。
研究的特色与创新之处：
1.研究的特色：
宿根甘蔗目前已经被世界各地所广泛应用于生产，很多研究报道指出，在良好的生产管理条件下，宿根甘蔗的产量要明显高于新蔗，且具有早生快发、提早成熟、省工省种、成本低、早分蘖、早拔节、生长期长、植株高大、有效茎多、高产稳产、早熟高糖、增产潜力大、错开农时和耐旱耐涝等许多优点。由于宿根甘蔗具有很大的生产潜力和应用前景，因此从生理角度对强宿根甘蔗进行研究，对今后强宿根甘蔗新品种的选育将具有深远意义。
2.创新之处：
从甘蔗发株期的生理特性着手，从本质上努力探索研究与甘蔗宿根性强弱有关的生理特性及其规律，为强宿根甘蔗品种的培育和早期筛选评价提供依据。
进度安排及预期结果：
进度安排：
2012年7月：查阅资料撰写实验方案
2012年8月：做各准备实验（试剂配制、材料采取）
2012年9—12月：写开题报告，正式进入实验研究
2012年12月—2013年3月：完成试验，收集毕业论文资料并开始撰写论文
2013年4月—5月：论文定稿，准备论文答辩事宜
2013年6月：毕业论文答辩
预期结果：
1.获得与甘蔗宿根性强弱相关的生理数据和结论，了解与甘蔗宿根性强弱相关的生理特性和生理指标；
2.获得甘蔗宿根性强弱在生理指标上所存在的一些差异及其规律。
参考文献：
[1] 李杨瑞.现代甘蔗学[M].北京:中国农业出版社,2010:313.
[2] 邓重焘.中国甘蔗品种志[M].广东:广东科技出版社,1990,115-117.
[3] 陆章流.提高宿根蔗低产低糖的技术措施[J].广西蔗糖,2005,(1):3-5.
[4] GURARAY H.Ratooning in sugarcane[J].Outlook on Agriculture,1989,18(4):176-184.
[5] PURIA MS,CHAUDHARY BS,TENEJAAD.Association of some characters in seedlings.Seedlings ratoon and first cional generationsin sugarcane[J].Indian Sugar,1984,34(7):559-561.
[6] SUNDARA.龚得明译.影响甘蔗宿根性的品种性状[J]国外农学-甘蔗,1993,(2):33-36.
[7] TRIPATHI BK-GILLSS.MISRAGP.etal Screening of sugarcane (Sa,charum spp.hybrids) germ types for rationing ability[J].Indian Sugar,1982,32(9):577-580.
[8] 吴坤宗,黄标.珠江三角洲宿根甘蔗减产原因与增产途径[J].农业科技通讯,1956,(10):585-587.
[9] 周可湧.中国植蔗和制糖历史问题的商榷[J].福建农学院学报,1960.
[10] 徐绍智,林智勃.百年蔗[J].中国农业科学,1961,(8):46-47.
[11] 周可湧.宿根甘蔗的基础—芽和根[J].作物学报,1963,2(4):437-450.
[12] Hatchm MD. Glasziou,KT.Sugar Accumulation Cycle in Sugareane.2 Relationship of Invertase Activity to sugar content and Growth Rate in storage Tissue of Plants Grown in Controlled Environments plant Physiocogy,1963,(38):344-348.
[13] 陈伟栋,陈西凯.甘蔗叶片转化酶与甘蔗金花生长和糖分积累地关系[J].四川甘蔗科技,1985,3:27-32.
[14] Madan VK,Singh K.Activity of Invertases in Sugarcane Leaves. International Sugar Joumal,1980,(82): 947.
[15] Madan VK.Foliar.EnZymes of sugarcane.International Sugar journal,1981,(83):990.
[16] 张勇,陈西凯.不同甘蔗品种萌发时蔗芽中酶的变化[J].四川甘蔗,1990,1:10-13.
[17] 邓祖湖,林彦铨.甘蔗实生苗及其宿根性状配合力分析[J].福建农业大学学报,2000,29(3):286-291.
[18] 叶燕萍.乙烯利对宿根蔗生理生化特性和农艺性状的影响[J].广西农业科学,2005,36(4):308-311.
[19] 张勇,陈西凯.氮、钾对甘蔗叶片中几种酶的影响及其与生长和糖分积累的关系[J].四川甘蔗,1988, (4):l-12.
[20] 方位宽.影响宿根甘蔗萌发的若干因素探讨[D].广西大学,2004,(1):1-37.
[21] 高继国,郭春绒.普通生物化学教程试验指导[M].北京:化学工业出版社,2009:38-40.
[22] 孔祥生,易现峰.植物生理学实验技术[M].中国农业出版社,2008:134-135.
[23] 张志良,瞿伟菁,李小方.植物生理学实验指导(第4版)[M].北京:高等教育出版社,2009:33-35.
[24] 王晶英,敖红,张杰,等.植物生理生化实验技术与原理[M].哈尔滨:东北林业大学出版社,2003:122-124.
[25] 陈如凯.现代甘蔗育种的理论与实践[M].北京:中国农业出版社,2003．

指导教师意见：
毕业论文设计符合科学研究要求，试验方法和技术路线可行，内容充实，格式合理，符合本科毕业论文的基本要求。
同意开题。

指导教师签名：覃伟
2012年 11月 01 日
答辩小组意见：
甘蔗宿根性是维持甘蔗品种常年稳定高产的重要关键因子，因此研究宿根性具有重要意义。该论文拟通过形态、生理方面找到影响品种宿根性的关键性状，作为早期宿根品种筛选的评价指标，对遗传育种具有较大的指导作用，但在实验设计中需要注意有代表性材料的选择和生理指标选择的可依据性，使论文结果更具说服力。

组长签名：刘新龙
2012年 11月 03 日
备注：1、题目来源栏应填：教师科研、社会实践、实验教学、教育教学等；2、题目类别栏应填：应用研究、理论研究、艺术设计、程序软件开发等。
红河学院本科生毕业论文（设计）开题记录表
姓名
刘金堂
性别
男
学号
200913050175
院-系
生命科学与技术学院
年级
2009
专业
生物科学
指导教师
覃伟
职称
实习研究员
论文题目
甘蔗宿根性与宿根发株期生理的关系
学生陈述：栽培宿根蔗具有早生快发、提早成熟、省工省种、成本低、有效茎多、高产、高糖和耐旱耐涝等优点，在甘蔗生产中占有极其重要的地位，为世界各蔗糖生产国家所重视。但近年来，宿根蔗的产量偏低不稳，宿根年限也缩短，宿根面积有减少趋势，其原因主要是受品种退化、管理措施不当等原因的综合影响。因此，从宿根甘蔗发株期的生理特性进行研究，找出与甘蔗强宿根性相关的生理特性，用于甘蔗宿根强弱的评价，便于强宿根甘蔗新品种的早期筛选。

教师提问及学生回答：
1.粤糖97-20×ROC25杂交分离产生的创新后代是否是前面所选用的材料？
答：是，所选用的材料均是粤糖97-20×ROC25杂交分离产生的后代。
2.为什么选择发株期？
答：发株期是宿根甘蔗的关键时期，该时期为宿根蔗出苗期，出苗的多少可以反应宿根蔗的生长情况。
3.生理特性主要测定哪些指标？
答：主要测定可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、还原糖含量、转化酶（中性、酸性）活性和硝酸还原酶活性。

结论： 　　　　　　　　 　通过　　　　　　　□未通过
组员签名：刘洪博 吴转娣 刘新龙 夏红明 昝逢刚
记录员签名：覃伟 李纯佳
组长签名：刘新龙
学院（公章）
2012年 11月03日
红河学院本科生毕业论文（设计）任务书
姓名
刘金堂
性别
男
学号
200913050175
院－系
生命科学与技术学院
年级
2009
专业
生物科学
指导教师
覃伟/王栋
职称
实习研究员/讲师
论文题目
甘蔗宿根性与宿根发株期生理的关系
一．研究的主要内容
1、研究目标
（1）通过研究强宿根甘蔗的生理特性，有利于了解强宿根甘蔗宿根发株期的生理特性和强宿根甘蔗新品种的筛选评价，为强宿根甘蔗品种的培育和宿根甘蔗的生产打下基础。
（2）完成毕业论文。
2、论文(设计)主要内容（提纲）
(一)前言
(二)试验材料与方法
(1) 试验材料
① 供试材料
选用云蔗06-407(强宿根)、云蔗06-408(弱宿根)、云蔗06-415(强宿根)和云蔗06-416(弱宿根)等4个宿根性强弱不同的甘蔗品种作为研究材料，对照种ROC22为生产上大面积推广应用的强宿根性甘蔗品种。
(2) 实验仪器及试剂
主要仪器：可见分光光度计、试管、水浴锅、离心管
主要试剂：考马斯亮蓝G-250、3，5-二硝基水杨酸、1%对氨基苯磺酸、0.2%α-萘胺、苯酚、浓硫酸
(3) 试验方法
① 采样
于2012年3月20日、2012年4月20日、2012年5月20日取每个试验品种不同植株生长良好的幼嫩叶片+1叶各3～5片，剪取叶片中间部位60cm左右带回实验室洗净，若不能及时对叶片进行研磨提取，应将其剪成10cm左右片段数段，装入采样袋置-76℃备用。
② 可溶性蛋白、可溶性糖、还原糖、转化酶(中性、酸性)、硝酸还原酶等物质的含量的测定
(三）结果与分析
(四)讨论
(五)结论
3、拟研究的主要问题、重点和难点
(1)研究的主要问题：探索研究与甘蔗发株期强宿根性有关的生理特性
(2)研究的重点：甘蔗宿根性强弱在生理指标上的差异性及其规律。
(3)研究的难点：由于目前国内外对评价甘蔗宿根性强弱生理指标的发株期生理特性研究文献报道较少，所以各个生理特性的测定主要参考甘蔗分蘖生理基础研究的内容和参考有关甘蔗研究的文献，进行探索性的研究。
二．有关要求
1、应收集的资料及主要参考文献
[1] 李杨瑞.现代甘蔗学[M].北京:中国农业出版社,2010:313.
[2] 邓重焘.中国甘蔗品种志[M].广东:广东科技出版社,1990,115-117.
[3] 陆章流.提高宿根蔗低产低糖的技术措施[J].广西蔗糖,2005,(1):3-5.
[4] GURARAY H.Ratooning in sugarcane[J].Outlook on Agriculture,1989,18(4):176-184.
[5] PURIA MS,CHAUDHARY BS,TENEJAAD.Association of some characters in seedlings.Seedlings ratoon and first cional generationsin sugarcane[J].Indian Sugar,1984,34(7):559-561.
[6] SUNDARA.龚得明译.影响甘蔗宿根性的品种性状[J]国外农学-甘蔗,1993,(2):33-36.
[7] TRIPATHI BK-GILLSS.MISRAGP.etal Screening of sugarcane (Sa,charum spp.hybrids) germ types for rationing ability[J].Indian Sugar,1982,32(9):577-580.
[8] 吴坤宗,黄标.珠江三角洲宿根甘蔗减产原因与增产途径[J].农业科技通讯,1956,(10):585-587.
[9] 周可湧.中国植蔗和制糖历史问题的商榷[J].福建农学院学报,1960.
[10] 徐绍智,林智勃.百年蔗[J].中国农业科学,1961,(8):46-47.
[11] 周可湧.宿根甘蔗的基础—芽和根[J].作物学报,1963,2(4):437-450.
[12] Hatchm MD. Glasziou,KT.Sugar Accumulation Cycle in Sugareane.2 Relationship of Invertase Activity to sugar content and Growth Rate in storage Tissue of Plants Grown in Controlled Environments plant Physiocogy,1963,(38):344-348.
[13] 陈伟栋,陈西凯.甘蔗叶片转化酶与甘蔗金花生长和糖分积累地关系[J].四川甘蔗科技,1985,3:27-32.
[14] Madan VK,Singh K.Activity of Invertases in Sugarcane Leaves. International Sugar Joumal,1980,(82): 947.
[15] Madan VK.Foliar.EnZymes of sugarcane.International Sugar journal,1981,(83):990.
[16] 张勇,陈西凯.不同甘蔗品种萌发时蔗芽中酶的变化[J].四川甘蔗,1990,1:10-13.
[17] 邓祖湖,林彦铨.甘蔗实生苗及其宿根性状配合力分析[J].福建农业大学学报,2000,29(3):286-291.
[18] 叶燕萍.乙烯利对宿根蔗生理生化特性和农艺性状的影响[J].广西农业科学,2005,36(4):308-311.
[19] 张勇,陈西凯.氮、钾对甘蔗叶片中几种酶的影响及其与生长和糖分积累的关系[J].四川甘蔗,1988, (4):l-12.
[20] 方位宽.影响宿根甘蔗萌发的若干因素探讨[D].广西大学,2004,(1):1-37.
[21] 高继国,郭春绒.普通生物化学教程试验指导[M].北京:化学工业出版社,2009:38-40.
[22] 孔祥生,易现峰.植物生理学实验技术[M].中国农业出版社,2008:134-135.
[23] 张志良,瞿伟菁,李小方.植物生理学实验指导(第4版)[M].北京:高等教育出版社,2009:33-35.
[24] 王晶英,敖红,张杰,等.植物生理生化实验技术与原理[M].哈尔滨:东北林业大学出版社,2003:122-124.
[25] 陈如凯.现代甘蔗育种的理论与实践[M].北京:中国农业出版社,2003．
2、外文翻译要求
(1)语句顺畅，语言精练；
(2)专业术语必须翻译准确，符合内部审计专业英语的要求，符合国际审计准则的要求；
(3)论文写作过程中涉及到的相关外文文献要翻译准确，并标明英文出处和作者。
3、论文撰写(设计)要求
(1)目录部分的小圆点用英文的小点，不要用中文的大点；目录为正文标题，不超过二级。
(2)中英文摘要及目录页码用大写罗马数字（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……），统一居右；正文、参考文献、致谢及附录部分页码用阿拉伯数字（1、2、3……），其中，正文部分页码奇数页居右，偶数页居左；参考文献、致谢及附录部分页码统一居右。
(3)摘要、目录、参考文献、致谢、附录等页眉为“红河学院本科毕业论文 (设计)”。正文奇数页页眉为“红河学院本科毕业论文 (设计)”，偶数页页眉写每一章对应的章名，一律采用“楷体五号字”居中书写。
(4)参考文献中的标点符号统一用英文书写状态下的标点，其余部分请用中文书写状态下的标点。
(5)全文中除了标题部分有特殊要求外，其余部分中文都为宋体，西文字体都为Times New Roman。
(6)论文前后逻辑清晰、语言要简练。
(7)论文写作中引用的相关理论知识要真实、准确。
(8)论文写作要突出重点、难点。
(9)在写作过程中要有自己的观点与想法。

三．毕业论文（设计）进度安排
1、研究方法、技术路线、实验方案
研究方法：生理指标的测定
技术路线：
资料收集

甘蔗实验品种

剪取甘蔗叶片+1叶中部60cm左右带回实验室洗净，若不能及时对叶片进行研磨提取，应将其剪成10cm左右数段，-76℃保存备用。
研磨成浆，离心，收集上清液 叶片剪成0.3～0.5cm方形小块
生理测定

其它

酸性、中性转化酶活性
可溶性糖含量
可溶性蛋白含量

硝酸还原酶活性
还原糖含量

二硝基水杨酸法
二硝基水杨酸法
考马斯亮蓝法
磺胺显色法
苯酚法

数据处理
结果分析

实验方案：
(一)生理指标的测定
(1) 可溶性蛋白含量测定
参照高继国[21]的方法，并略作修改。叶片去中脉后剪碎，准确称取剪碎后的甘蔗叶片0.2500g左右，加少量石英砂、PVP及10ml 0.1 mol/L pH6.8的Tris-HCl缓冲液，在冰浴下研磨成匀浆，于冷冻离心机下10000r/min 离心10min，上清液即为蛋白提取液。取上清液0.1ml+5ml考马斯亮兰G-250(100mg考马斯亮兰G-250溶于50ml 95%乙醇搅拌，加入l20ml 85%磷酸，混合后稀释至1000ml，过滤)混匀，2～3min后，用紫外—可见光分光度计测定吸光值OD595，计算可溶性蛋白含量（μg/g）。标准液为牛血清蛋白液。
(2) 可溶性糖含量测定
参照孔祥生[22]的方法，将取样后处理好的叶片剪成0.3～0.5cm方形小块，混匀，准确称取0.3000g左右样品，放入试管中，加入8ml蒸馏水。于沸水浴提取30min，提取液过滤入25ml容量瓶中，加蒸馏水重复提取1次，合并提取液，定容至25ml。反应体系：0.5ml提取液+1.5ml蒸馏水+1ml 9%苯酚+5ml浓硫酸，摇匀。恒温下放置30min，显色。用紫外—可见分光光度计测吸光值OD485，计算可溶性糖含量(mg/g)。
(3) 中性、酸性转化酶活性测定
① 酶液的提取
称取剪碎叶片0.5000g左右，加入石英砂约0.5g，少量PVP和3ml提取液（预冷无菌蒸馏水），在预冷研钵中冰浴研磨成匀浆，加提取液3ml，混匀后倒入15ml离心管中，再用3ml提取液洗涤研钵两次，合并提取液，4000r/min离心15min。上清液即酶提取液（用于测定中、酸性转化酶活性和还原糖含量）。
② 酶活性测定
参照张志良[23,24]的方法，并略作修改。反应体系为1ml酶提取液+2ml 10%蔗糖溶液+5ml缓冲液（中性转化酶用pH7.0柠檬酸-磷酸缓冲液，酸性转化酶用pH4.6柠檬酸-磷酸缓冲液），酶液钝化组为对照，即1ml酶液经过沸水浴10min钝化后使用，体系其他试剂相同，将反应混合液置于37℃水浴中保温（中性转化酶2.5h，酸性转化酶1.5h）后，吸取1ml+0.75ml 3，5-二硝基水杨酸于10ml刻度试管中，沸水浴中加热5min后立即放入冷水中冷却至室温，加蒸馏水定容10ml并颠倒混匀。用紫外—可见光分光度计测定540nm处吸光值，以单位时间内还原糖产生的量表示酶活性(mg/g·Fw·h)。
(4) 还原糖含量测定
参照高继国[21]的方法，并略作修改。吸取1ml转化酶提取液+0.75ml 3，5-二硝基水杨酸于10ml刻度试管中，沸水浴中加热5min后立即放入冷水中冷却至室温，加蒸馏水定容10ml并颠倒混匀。用紫外—可见光分光度计测定540nm处吸光值，计算还原糖含量(mg/g)。
(5) 硝酸还原酶活性测定
用活体法[21]，将取样后处理好的叶片剪成0.3～0.5cm方形小块，混匀，准确称取1.0000g样品，各4份，分别置于小烧杯中，其中3份重复，l份空白。重复样品各加9ml 0.1mol/L KNO3·异丙醇·磷酸缓冲液混合液，空白样品加入9ml 0.1mol/L KNO3·异丙醇·磷酸缓冲液混合液+1ml 30％三氯乙酸溶液（钝化酶活性）。摇匀，置真空干燥器中抽气，反复几次，使叶片完全沉于液面下，置黑暗中30℃下保温1h，其间，摇匀一次，取出后加入1ml 30%三氯乙酸终止反应（空白除外），摇匀，分别吸取1ml提取液于试管中，加入2ml 1%对氨基苯磺酸和2ml 0.2%α－萘胺，摇匀30℃下静置30min，用紫外—可见分光光度计测吸光值OD540，以亚硝酸钠μg/g·Fw·h表示酶活性。
(二)数据处理
(三)结果分析
2、进度安排及预期结果
进度安排：
2012年7月：查阅资料撰写实验方案
2012年8月：做各准备实验（试剂配制、材料采取），
2012年9—12月：写开题报告，正式进入实验研究
2012年12月—2013年3月：完成试验，收集毕业论文资料并开始撰写论文
2013年4月—5月：论文定稿，准备论文答辩事宜
2013年6月：毕业论文答辩
预期结果：
得出甘蔗宿根性强弱在生理指标上所存在的一些差异及其规律。

四．任务执行日期
自 2012 年 11月 03日起，至 2013年 06月 01日止。
学生(签名)：刘金堂 指导教师(签名)：覃伟 王栋
学院领导(签名)：
学院（公章）
2012 年 11 月 15 日

红河学院本科生毕业论文（设计）指导记录
姓名
刘金堂
性别
男
学号
200913050175
院－系
生命科学与技术学院
年级
2009
专业
生物科学
指导教师
覃伟
职称
实习研究员
论文题目
甘蔗宿根性与宿根发株期生理的关系
时间
毕业论文（设计）指导情况
2012
年
07
月
1. 指导撰写实验方案
2.引导查找相关文献和书籍