WT1在不同类型骨髓增殖性疾病病人中的表达及临床意义_胡忠利.pdf

收稿日期 修回日期 基金项目 蚌埠医学院自然科学重点项目（）作者单位 蚌 埠医学 院第 一附属 医院 血 液 科，安 徽 蚌 埠；蚌埠医学院 实验动物中心，安徽 蚌埠 作者简介 胡忠利（），女，硕士，主管检验师通信作者 杨 艳 丽，硕 士 研 究 生 导 师，主 任 医 师：文章编号（）临床医学 在不同类型骨髓增殖性疾病病人中的表达及临床意义胡忠利，杨艳丽，胡忠亭摘要目的：研究不同亚型的骨髓增殖性肿瘤（）病人 表达水平差异，总结 在 中的表达特征，尤其是 基因的相对表达量与慢性粒细胞白血病（）病情发展的相关性。方法：运用荧光定量（）检测 例 病人的基因表达类型，以及 基因、基因的相对表达量，分析 在不同基因类型 中的表达特点。结果：组 阳性率与非 组比较差异有统计学意义（），组的 阳性病例中 数值与非 组 阳性病例比较差异亦有统计学意义（）。组的 阳性率高于非 组（），组 阳性病例的 数值与非 组 阳性病例比较亦差异有统计学意义（）。和 基因在 疾病进程的不同阶段表达差异均有统计学意义（），的数值随着 进入加速期而明显升高，部分缓解时 的数值则明显下降。结论：病人中 的基因表达具有一定的差异性，且其中 的 病人 相对表达量可以与 基因的相对表达量一起作为判断 进展的指标。关键词 骨髓增殖性肿瘤；慢性粒细胞白血病；肾母细胞瘤肿瘤基因；中图法分类号 文献标志码 ：，（，；，）：（），（）：（），：（），（）（），（）（），：，；肾母细胞瘤肿瘤基因（，）最早被认为是肿瘤抑制基因，其表达水平与肿瘤密切相关。它位于 号染色体短臂的第 个带中，其编码的 通过两个可变剪接形成 个异构体，发生剪接的对应位置分别位于外显子 和 之 间 以 及 外 显 子 上。骨 髓 增 殖 性 疾 病（，）是一种伴有异常克隆性增生的血液病，发生于造血干细胞或祖细胞，以一种或多种外周血细胞增多为主要临床特征，常伴有肝脾肿大、血栓形成、出血倾向及髓外造血。主要包括慢性粒细胞白血病（，）、真性红细胞增多症（，）、原 发 性 血 小 板 增 多 症蚌埠医学院学报 年 月第 卷第 期（，）、骨髓纤维化（，）等。其中 发生在早期祖细胞上，主要涉及髓系，外周血不成熟粒细胞显著增多，病人骨髓中可以发现 染色体，即特征性（；）（；）染色体移位，和 或 融合基因阳性。本研究采用 检测 例 病人骨髓细胞 基因的表达，研究 基因在亚型不同的 中的相对表达量的差异及其差异的特征性总结与临床的相关性分析。资料与方法 一般资料 所有 病人均选自蚌埠医学院第一附属医院血液科，住院时间为 年；其中男 例，女 例；中位年龄 岁。其中 例，其余 例中 例，例，例。例 病人白细胞数值为（），血小板数值为（）。对病人常见体征、血常规和骨髓行详细检查和诊断。病人符合目前国内白血病的分型标准。基因的定性检测及 基因与 基因的定量检测，均采用 抗凝备用。检验方法 骨髓细胞学检查 于骼后上棘抽取骨髓液，制作骨髓涂片，加入瑞氏染色 缓冲液 染色，借助显微镜对于细胞的数量及外形进行观察和记录。镜下数 个有核细胞，依据 形态学诊断标准进行分型。病人可见骨髓增生极度活跃，嗜酸细胞嗜碱细胞比例显著升高。可见骨髓增生活跃，粒系增生活跃，血小板散在及中大簇多见，显示增多（见图 ）。基因检测 的检测：通过 提取物完成细胞的总 提取，在 的温度下储存以用作备用。解冻上述 溶解后得到的白细胞，解冻完成后，需要用三氯甲烷、异丙醇、乙醇处理，并在 中溶解至适当浓度。制备 样品并在 型 仪器上扩增。同时做内参基因 绝对拷贝数定量检测，表达量 绝对拷贝数 绝对拷贝数。基因检测：通过 提取试剂盒进行 提取以制备 样品，其在 型 仪器上扩增。检测突变体非受体酪氨酸激酶基因的突变（）、血小板生成素受体（）突变、钙 网 蛋 白（）突 变（、），同时室内对照野生型作为内参。基因检测：同 基因步骤相同制备 样品，并在 型 仪上扩增。同时做内参基因 绝对拷贝数定量检测，表达量 绝对拷贝数 绝对拷贝数。染色体核型检测采用骨髓细胞短期培养法制片，热变性姬姆萨 显带，平均分析中期细胞数 个，染色体核型分析根据人类细胞遗传学国际命名体制（的规定进行。检查结果见图、。根据 病情进展分组 根据血液病诊疗标准，慢性期（）：骨髓与外周血原始细胞比例 ；加速期（）：外周血或骨髓中原始细胞 ，或外周血嗜碱细胞值；急变期（）：骨髓或外周血原始细胞。统计学方法采用 检验、方差分析及独立样本 检验和 检验。结果 各类型 病人 的表达特征各类型 病人中 基因的阳性率存在差异，病人中共有 例，例，例，例。由于各非 的 组 的表达率较低，故合并为一组（非 组）进行比较。结果显示，组 阳性率与非 组比较差异有统计学意义（），组的 阳性病例中 数值与非 组 阳性病例比较差异亦有统计学意义 ，（）（见表）。表 不同亚型 病人 的表达比较分组 阳性阳性病例 数值（）非 组 组 示 值 不同基因类型的 病人 的表达差异本研究中 病人共有 种基因型表达，其中 基因型 例，基因型 例，基因型 例，基因型 例，基因型 例，基因型 例。由于非 的基因型中 阳性表达率较低，故合并为一组（非 组）进行比较。结果显示，组的 阳性率高于非 组（），组 阳性病例的 数值与非 组 阳性病例比较亦差异有统计学意义（）（见表）。表 不同基因类型的 病人中的 表达分组 阳性 数值（）非 组 组 示 值 病人 及 的表达量与病程进展的关系 和 基因在 疾病进程的不同阶段表达差异均有统计学意义（）（见表），的数值随着 进入加速期而明显升高，部分缓解时 的数值则明显下降。表 表达与 病程发展之间的关系（）分组 数值 数值 组内 检验：与 组比较 ；与 组比较 ；与 组比较 讨论 是由于细胞的恶性发展而诱发疾病，是一类克隆性异常增生的血液肿瘤。美国 数据库中，、的发病率分别为 万、万和 万，中位发病年龄分别为、和 岁，中位生存时间分别为、和 年。、和 作为 的驱动基因，通过激活 信号通路，导致骨髓细胞异常增殖。既往研究显示，例 病人中，大约有 例可发展为急性髓系白血病（），这些病人往往预后不良，有些病人甚至可能进展为难治性。的确切发病机制已在世界范围内被探索，一些学者认为该疾病可能是由 甲基化引起的，导致肿瘤抑制基因沉默，并且认为 基因的突变和 的发生有一定的有关性。另外，在 的 和 病人中检测到 基因的体细胞突变，而 突变也存在与少数 和 的病人中。这些突变的发现极大地方便了对 的诊断。上述 种基因的突变导致 信号的异常活化和分化细胞的自主成长，因此它们被认为是“”基因突变。是一类非受体型酪氨酸激酶，作用于细胞因子的信号转导中。基因 突变是近年来 发病机制研究中的重要发现，其从根本上揭示了 阴性 的致病机制。目前，基因突变已成为 的诊断性标志，除难治性贫血伴环状铁粒幼细胞和 中发现高比率 突变，其他恶性血液病很少发现此突变。结合促红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子和促血小板生成素等细胞因子受体使 相关的激酶激活，导致下游 激酶信号转导通路异常活化，其他信号转导通路（、）也被异常激活，共同参与调节造血细胞的增殖和分化。是 的一个同源受体，突变导致 跨膜近膜结合部位的色氨酸被亮氨酸 赖氨酸替换。突变可存在于少数的 和 病人中，突变的细胞可呈现与 突变类似的效应。基因突变定位在染色体 ，包含 个外显子，编码钙网织蛋白，且发现突变位点均发生在第九号外显子上。是 的一种常见类型，病人多慢性起病，病程进展缓慢，而 的分期与外周血或骨蚌埠医学院学报 年 月第 卷第 期髓原始细胞百分比有关，随着病程的进展原始细胞的比例已相应增加，这对判断疾病的进展及预后有一定价值。随着血液病诊断技术的发展，血液病的诊断早已不再局限于骨髓细胞学，基因检测已成为新的参考。新诊断病人的诊断不仅限于白血病的分类，而是更多地关注预后和药物治疗相关的指标。以 基因作为代表，该基因可以抑制造血细胞的增殖，阻碍基因的分化转录，同阶段调整细胞凋亡水平。基因与造血细胞的增殖、分化及凋亡有关，基因可以促进造血干细胞增殖和阻碍其分化，其检测分析是评估血液系统恶性疾病重要的风险指标之一。在对 基因相对表达量的分析中发现，随着疾病的进展 的表达量也增加，表现出明显的阶段性，因此我们推测，阳性率与 病人的原始细胞成正相关，且随着原始细胞比例的增加 的阳性表达率及相对表达量已增加，而在正常成熟血细胞中几乎不表达。说明 基因在调节造血干细胞的增殖、分化中发挥重要作用。基因有可能是 信号途径的下游基因之一。蛋白梭基末端为指蛋白结构域，具有较强的转录调控作用，可以增强或抑制特异靶基因的表达，其靶基因主要与细胞生长、代谢、分化及凋亡等有关。在血液系统肿瘤尤其是急性白血病中，基因呈高表达，基因表达水平的高低与白血病的预后呈负相关，可能主要发挥癌基因的作用。国外研究表明，纯合突变的细胞株 和，呈阳性表达；在 和 细胞株培养过程中加入 抑制剂后，表达水平明显下降；表明 表达水平的高低与 的活性相关。以往的报道亦证实，基因在 中表达较正常对照组阳性率升高（）。本研究发现，组 阳性率与非 组比较差异有统计学意义，且 组的 阳性率高于非 组，组 阳性病例的 数值与非 组 阳性病例比较差异亦有统计学意义。此外在本研究中发现在 的不同疾病进展阶段 均有不同程度的表达，加速期及急变期的 表达水平明显高于部分缓解期。表达量与病人的 的表达量成正相关，且随着病程的进展而发生变化，表现出明显的阶段性，这表明 基因的表达随 的临床进展而表达逐渐增加。进展期病人 的表达量相对较高，这对病人的诊治及预后评估有一定临床意义。综上，基因在 中的表达有一定的特异性，随着病情的进展而变化，并与 基因的表达水平相关。未来在临床中 基因可与 基因一起作为 病人诊断的有效指标，用于临床上 的判断及了解预后。参考文献 冯砚平，王楠，王伟佳、基因在急性髓系白血病中的表达及其与预后的关系 检验医学与临床，（）：连嘉颖，叶佩佩，曹俊杰 自体造血干细胞移植治疗微小残留病阴性病人中危急性髓系白血病的影响因素分析 中华内科杂志，（）：，（）：，（）：，（）：，：杨岚，曹丽霞，任慧娟，等 慢性粒细胞白血病病人血液肿瘤相关基因突变研究进展 白血病淋巴瘤，（）：沈悌，赵永强 血液病诊断及疗效标准 版 北京：科学出版社，：，（）：，：（），（）：，：，（），（）：，：，（）：，（）：，（）：，（），（）：，（），：，：，（）：，（）：，：，（）：，（）：，（）：，（）：，：，（）：（）：，（）：，：，（）：，（）：，（）（），（）：，（）：，（）：，（）：（本文编辑 刘梦楠）蚌埠医学院学报征订启事 蚌埠医学院学报 创刊于 年 月，由安徽省教育厅主管，蚌埠医学院主办，国内外公开发行的综合性医学学术期刊。主要刊登实验医学论文和应用医学论文。设有述评、基础医学、大学生科技园地、临床医学、检验医学、影像医学、药学、公共卫生、祖国医学、精神卫生、护理学、技术与方法、综述、个案报道等栏目。本学报现为月刊，每月 日出版，国际标准 开本，无光铜版纸印刷。标准刊号：；：。邮发代号：，每册定价 元，全年 元。欢迎广大读者及时向当地邮局订阅，也可直接向本刊编辑部订阅，免收邮寄费。邮购地址：安徽省蚌埠市东海大道 号 邮政编码：电话：（）：蚌埠医学院学报编辑部蚌埠医学院学报 年 月第 卷第 期