泰山黄精寄生真菌的分离鉴定.pdf

2024.03试验推广泰山黄精寄生真菌的分离鉴定穆淑媛付均惠秦宁董斌庞献伟仉劲*摘要在山东省泰安市林业局实验林场泰山黄精栽培基地采集泰山黄精病株袁用组织分离法对其寄生真菌进行分离尧培养和鉴定袁共分离出寄生真菌 18 株袁其中链格孢属渊Alternaria sp.冤真菌 7 株尧刺盘孢属渊Colletotrichum sp.冤真菌 5 株尧镰刀菌属渊Fusarium sp.冤真菌 2 株袁其他聚生小穴壳菌渊Dothiorella gregaria冤尧高粱附球菌渊Epicoccum sorghinum冤尧Diaporthe eres尧数丝顶多毛孢渊Bar鄄talinia robillardoides冤各 1 株遥关键词泰山黄精曰病害曰寄生真菌曰鉴定揖基金项目铱院泰安市农业良种项目野泰山黄精新品种选育与示范推广冶渊2023NYLZ11冤曰泰安市科技创新发展项目渊政策引导类冤野泰山黄精主要病虫害发生规律和防治技术研究冶渊2020NS063冤遥穆淑媛袁付均惠袁秦宁袁庞献伟袁仉劲,山东省泰安市泰山林业科学研究院袁邮编 271000曰董斌袁泰安市泰山森林病虫害防治检疫站遥收稿日期院2023-12-13*通讯作者院仉劲渊E-mail院冤黄精渊Polygonatum sibiricum Red.冤袁 又名老虎姜尧仙人余粮袁为百合科黄精属多年生草本植物袁是泰山四大名药之一袁在国内享有盛誉遥黄精以其根茎入药袁具有补气养阴尧健脾润肺尧益肾的功效袁在我国已有 2 000 多年的药用历史遥 其根茎富含多糖尧脂肪尧蛋白质尧胡萝卜素尧维生素等袁兼具药用和食用价值袁 国内研发了多种具有保健功能的黄精食品尧饮品尧护肤品等遥目前在四川尧贵州尧安徽尧河南尧辽宁等地已有规模化人工栽培袁山东泰安尧威海等地也得到快速发展遥但随着集中栽培规模的不断扩大袁黄精病害也日益严重袁影响了黄精的产量和质量遥已报道的黄精病害主要有叶斑病尧炭疽病尧叶枯病尧根腐病尧花腐病尧病毒病等袁以真菌病害为主袁但目前对泰山黄精病害的研究较少遥 笔者对泰安市林业局实验林场人工栽培的泰山黄精的寄生真菌进行了分离与鉴定袁为病害防治提供依据遥1材料与方法1.1材料2021 年 6 月袁在泰安市林业局实验林场黄精栽培基地采集泰山黄精病株 7 株遥1.2方法1.2.1真菌分离将不同症状的病叶尧 病根用清水清洗晾干后袁用 75%酒精浸没消毒 30 s袁0.1%升汞浸没消毒 1 min袁无菌水清洗 3 遍袁用无菌吸水纸吸取叶片水分后袁 剪取病健交界部放到 PDA 培养皿上袁28 益避光培养 35 d袁 观察同一培养物上长出的菌落颜色尧形状等是否相同袁若有则进一步分离纯化袁直至长出单一菌落遥1.2.2形态学鉴定观察 PDA 培养基上菌落的颜色尧形态变化袁并在光学显微镜下观察记录孢子形态特征遥 查阅叶真菌鉴定手册曳等袁初步鉴定菌株种类遥1.2.3分子生物学鉴定用真菌基因组 DNA 提取试剂盒渊购自北京索莱宝科技有限公司冤提取菌株的基因组 DNA遥 ITS 序列 PCR 扩增体系院2.5 滋L 10伊PCR Buffer尧2 滋L dNTPs 渊10 mmol/L冤尧1 滋L ITS1尧1 滋L ITS4尧0.25 滋L Taq 酶尧1 滋L DNA 模板袁17.25 滋LddH2O遥 扩增程序院94 益 4 min袁94 益 1 min袁55 益1 min袁72 益1 min袁33 个循环袁72 益 10 min袁4 益保存遥 ITS 序列通用引物 ITS1(5-TCCGTAGGTGAAC鄄CTGCGG-3)和 ITS4(5-TCCTCCGCTTATTGATAT鄄GC-3)的合成及 PCR 反应产物测序均由深圳华大基因科技服务有限公司完成遥通过 NCBI-NucleotideBLAST 分析测序结果袁 以相似度最高的序列作为参考序列袁根据 Per.Ident 值确定目的菌株分类地位遥2结果与分析2.1寄生真菌分离结果从采集样品中共分离出 18皿真菌渊图 1冤袁对分离出的寄生真菌菌落形态特征观察记录并统计渊表 1冤袁分析可知袁18 株菌株可归为11组遥632024.03试验推广2.2分子生物学鉴定结果由表 2 可知袁 各菌株ITS 序列与参考序列的相似值均超过 99%袁 可初步认定为同一种遥 综合分析表 12尧图 2 可知袁分离出链格孢属真菌共 7 株袁占菌落总数的 38.89%袁其中包括细极链格孢菌 2 株袁交互链格孢菌 5 株曰分离出刺盘孢属真菌共 6 株袁占菌落总数的 27.78%袁其中包括旋卷葱刺盘孢菌 2 株尧山茶刺盘孢菌 2 株尧胶孢炭疽菌 1 株曰 镰刀菌属真菌 2 株袁 占菌落总数的11.11%曰此外还分离出聚生小穴壳菌尧高粱附球菌尧Diaporthe eres尧数丝顶多毛孢各 1 株遥因此袁可初步认定袁泰安市林业局实验林场人工栽培黄精的优势寄生种为链格孢属真菌和刺盘孢属真菌袁 且有包括镰刀菌在内的其他多种寄生真菌混合侵染遥3讨论与结论本研究确定泰山黄精的叶部病害主要致病菌为链格孢属和刺盘孢属真菌遥 刺盘孢属真菌能引起黄精炭疽病袁但对叶斑病病原菌研究有不同观点袁主要认为叶斑病的病原菌有交互链格孢菌渊A.alternata冤尧细极链格孢菌渊A.tenuissima冤尧叶点霉属渊Phyllostic鄄tasp.sp冤等遥 因此袁根据本次分离鉴定结果和发病症状袁初步认为链格孢菌侵染泰山黄精引起叶斑病尧刺盘孢属真菌引起黄精炭疽病袁 在防治泰山黄精病害时袁应以链格孢属和刺盘孢属真菌为主袁筛选敏感药剂袁提高防治效果遥图 1泰山黄精寄生真菌的菌落形态图表 1泰山黄精寄生真菌的菌落数统计和菌落形态菌落编号菌落数占比菌落形态菌落正面菌丝致密毛毡状袁初白色产孢后转至墨绿色曰菌落背面墨黑色曰分生孢子为卵形或倒棍棒状袁褐色袁具纵横隔膜菌落正面菌丝致密毛毡状袁初白色产孢后转至灰绿色曰菌落背面灰黑至墨黑色曰分生孢子为卵形或倒棍棒状袁褐色袁具纵横隔膜菌落正面初白色产孢后呈灰色袁菌丝较致密曰菌落背面有黑色点状物曰分生孢子单胞袁具有大量附着胞袁形状不规则菌落初白色袁后期从中心向外逐渐变灰白色袁气生菌丝蓬松呈海绵样隆起曰菌落背面有黑色点状色素沉积袁从菌落中心向外蔓延曰分生孢子为长椭圆形或椭圆形袁具有大量附着胞袁圆形或不规则菌落正面初白色袁后期从中心向外逐渐变灰白色袁菌丝蓬松呈绒毛状袁较密集曰菌落背面有黑色点状色素沉积曰分生孢子圆柱形袁两端钝圆菌落正面初期白色袁从中心向外逐渐变黄色袁气生菌丝绒毛状曰菌落背面棕黄色曰大分生孢子袁镰刀形菌落正面浅紫色袁气生菌丝棉絮状曰菌落背面中心紫色袁外缘浅棕色曰大分生孢子新月形或镰刀形菌落正面从中心至外缘为黄绿色要浅紫色要浅棕色袁气生菌丝稀疏曰菌落背面有从中心至外缘为墨绿要黄绿要浅棕色菌落正面粉白色袁后期变为浅灰色袁菌丝毛毡状袁随培养时间延长分泌褐色液体背面变为褐红色菌落正面白色较蓬松袁放射状袁菌落边缘的气生菌丝棉絮状曰菌落背面棕色菌落正面菌丝致密袁边缘整齐袁由中心至边缘逐渐变为黄绿色袁出现黑色颗粒状代谢物曰菌落背面深灰色尧有黑色点状物袁有裂痕RA尧BC尧D尧E尧F尧GH尧IJ尧KLMNOPQ111111122255.56%5.56%5.56%5.56%5.56%5.56%5.56%11.11%27.78%11.11%11.11%642024.03表 2寄生真菌 ITS 序列在 NCBI 库中的比对结果菌落编号A尧BC尧D尧E尧F尧GH尧IJ尧KLMNOPQR名称细极链格孢菌 Alternaria tenuissima交互链格孢菌 Alternaria alternata旋卷葱刺盘孢菌 Colletotrichum circinans山茶刺盘孢菌 Colletotrichum camelliae胶孢炭疽菌 Colletotrichum gloeosporioides镰刀菌属真菌 Fusarium sp.尖孢镰刀菌 Fusarium oxysporum聚生小穴壳菌 Dothiorella gregaria高粱附球菌 Epicoccum sorghinumDiaporthe eres数丝顶多毛孢 Bartalinia robillardoides参考序列登录号JX867218.1OQ690708.1MH714550.1OQ652517.1ON139690.1KU321547.1MT974214.1FJ517548.1ON332034.1OM536181.1OP060696.1相似度/%99.81100.0099.0599.6299.8199.8099.4299.6199.4099.6299.26参考文献1 王光辉,王琦,时元林.泰山四大名药J.山东中医杂志,2006,25渊3冤院203-204.2 董垚垚,周涛,乔玉双,等.泰山黄精的研究进展J.中国果菜,2022,42(02):21-28.3 国家药典委员会.中国药典M.北京院中国医药科技出版社,2020.4 张娜娜,潘慧云,侯芯芯,等.黄精研究现状与可持续发展探析J.安徽农学通报,2022,28(10):24-26.5 仉劲,李国清,李景宇,等.泰山黄精栽培研究进展J.山东林业科技,2021,51(01):87-91.6 邱泽澜,陈锦,张卓,等.湖南省多花黄精炭疽病病原鉴定及其药剂筛选J.西南农业学报,2023,36(01):91-97.7 田启建,赵致,谷甫刚.贵州黄精病害种类及发生情况研究初报J.安徽农业科学,2008(17):7 301-7 303.8 杨汝.贵州省黄精病害发生情况调查及叶斑病的初步研究D.贵阳:贵州大学,2008.9 姚姜雯,高园园,谢婵,等.黄精叶斑病拮抗细菌筛选与鉴定J.南方农业,2022,16(21):51-54+63.10 魏景超.真菌鉴定手册M.上海:上海科学技术出版社,1979.紫色乌塌菜与传统乌塌菜农艺性状与营养品质比较邱婷婷王兵帆郝加敏周贺芳摘要淮南市农科院选育的紫色乌塌菜品种野NKHXW281冶野NKHXW297冶富含花青素遥 对比了这两个品种和传统黄心品种野淮南精品塌地乌渊CK1冤冶和野淮南塌地乌 8 号渊CK2冤冶农艺性状和营养品质遥 结果表明袁紫色乌塌菜在株高和开展度方面显著高于对照组袁富含可溶性糖尧蛋白质等营养元素袁而且含有大量花青素袁满足了现代人对健康的需求遥关键词紫色乌塌菜曰农艺性状曰营养品质曰花青素邱婷婷,王兵帆,郝加敏,周贺芳,安徽省淮南市农业科学研究院,邮编 232001遥收稿日期院2023-12-28不结球白菜渊Brassica campestris ssp.chinensis冤属于十字花科芸薹属袁是其中 3 个亚种之一遥过去的研究已证明不结球白菜可以细分为 6 个变种袁 乌塌菜是其中之一遥乌塌菜以其独特的外观尧很好的耐寒性尧富含维生素和膳食纤维而受到广大消费者喜爱袁并在江淮流域得到广泛种植遥 随着人们生活质量的提高袁传统黄心乌已无法满足大众需求袁具有高品质和高观赏性的乌塌菜品种选育成为研究的热门方向遥 在蔬菜育种过程中袁 花青素因其特殊的生理功试验推广65