苍术内酯对骨关节炎大鼠软骨...伤修复和软骨细胞凋亡的影响_郭跃生.pdf

安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Aug，27（8）苍术内酯对骨关节炎大鼠软骨损伤修复和软骨细胞凋亡的影响郭跃生，穆岭，张锟，赵大伟，姚太顺作者单位：洛阳正骨医院（河南省骨科医院）足踝一科，河南 洛阳471002基金项目：河南省中医药科学研究专项课题（20-21ZY2249）摘要：目的 探讨苍术内酯（AT）对骨关节炎大鼠软骨损伤修复和软骨细胞凋亡的影响及其可能作用机制。方法 60只78周龄SPF级雄性SD大鼠，48只大鼠采用前后交叉韧带断离术建立骨关节炎（OA）模型，造模成功大鼠采用随机分为模型组、AT低、中、高剂量组，各12只，另设对照组（12只）。AT低、中、高剂量组腹腔注射5、10、20 mg/kg AT，对照组及模型组给予等量生理盐水，连续30 d。观察大鼠软骨组织形态计算Mankins评分；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-（TNF-）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）水平；苏木精-伊红（HE）染色观察软骨组织病理学变化；TUNEL法检测大鼠软骨组织细胞凋亡情况；实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测大鼠软骨组织中微RNA-98-5p（miR-98-5p）表达、高迁移率族蛋白2（HMGA2）、糖原合成酶激酶-3（GSK-3）mRNA表达；蛋白质印迹法（Western blotting）检测大鼠HMGA2、GSK-3、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）、Bcl-2相关蛋白（Bax）蛋白表达情况。结果 模型组大鼠软骨组织HMGA2、GSK-3 mRNA和Bcl-2蛋白表达降低，Mankins评分 （8.620.69）分 比 （1.710.12）分、TNF-、IL-1、IL-6、miR-98-5p、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率 （47.824.26）%比（8.411.74）%显著升高（P0.05）；与模型组比较，AT低、中、高剂量组大鼠软骨组织 HMGA2、GSK-3 mRNA 和 Bcl-2 蛋白表达升高，Mankins 评分 （5.050.47）分、（4.680.36）分、（2.150.23）分 比（8.620.69）分、血清TNF-、IL-1、IL-6、miR-98-5p、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率 （32.052.84）%、（23.682.89）%、（12.152.13）%比（47.824.26）%显著降低（P0.05），且以AT高剂量组效果最佳。结论 AT能够调整OA大鼠血清炎性因子水平，抑制软骨细胞凋亡，可能是通过干扰miR-98-5p促进HMGA2、GSK-3蛋白表达发挥作用。关键词：苍术属；骨关节炎；软骨细胞；微RNA-98-5p；高迁移率族蛋白2；糖原合成酶激酶-3；大鼠，Sprague-DawleyEffect of atractylode on osteochondral injury repair and chondrocyte apoptosis in osteoarthritis ratsGUO Yuesheng,MU Ling,ZHANG Kun,ZHAO Dawei,YAO TaishunAuthor Affiliation:First Department of Foot and Ankle,Henan Luoyang Orthopedic Hospital,Luoyang,Henan 471002,ChinaAbstract：Objective To investigate the effect of atractylode(AT)on osteochondral injury repair and chondrocyte apoptosis in osteoarthritis rats and its possible mechanism.Methods Sixty male SD rats aged 7-8 weeks in SPF,48 rats were selected to establish osteoarthritis(OA)model by anterior and posterior cruciate ligamentectomy.The successful model rats were randomly assigned into model group(12 rats),low dose of AT group(12 rats),medium dose of AT group(12 rats),high dose of AT group(12 rats),and the rest were control group(12 rats).The low,medium and high dose of AT groups were intraperitoneally injected with 5,10 and 20 mg/kg at injection(prepared with normal saline),and the control group and model group were given the same amount of normal saline for 30 days.The cartilage tissue morphology of rats in each group was observed to calculate Mankins score;the level of serum tumor necrosis factor-(TNF-),interleukin-1(IL-1)and interleukin-6(IL-6)were detected by ELISA.The pathological changes of cartilage tissue were observed by HE staining.The apoptosis of rat chondrocytes were detected by TUNEL method.The mRNA expression of micRNA-98-5p,high mobility group protein 2(HMGA2)and glycogen synthase kinase-3(GSK-3)in rat cartilage were detected by real-time fluorescence quantitative method.The protein expression of high mobility group protein 2(HMGA2),glycogen synthase kinase-3(GSK-3),apoptotic protein B-cell lymphoma factor 2(Bcl-2)and Bcl-2 related X protein(Bax)in rat cartilage were detected by Western blot.Results Compared with the control group,the levels of HMGA2,GSK-3 mRNA expression and Bcl-2 protein expression were decreased,Mankins score(8.620.69)score vs.(1.710.12)score,the levels of TNF-,IL-1,IL-6,miR-98-5p expression,Bax protein expression,and apoptosis rate(47.824.26)%vs.(8.411.74)%were significantly increased in model group(P0.05).Compared with the model group,the levels of HMGA2,GSK-3 mRNA expression and Bcl-2 protein expression were increased,Mankins score 药学研究引用本文：郭跃生，穆岭，张锟，等.苍术内酯对骨关节炎大鼠软骨损伤修复和软骨细胞凋亡的影响 J.安徽医药，2023，27（8）：1497-1502.DOI：10.3969/j.issn.1009-6469.2023.08.004.1497网络首发时间：2023-07-06 13:09:34网络首发地址：https:/ 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Aug，27（8）(5.050.47)score,(4.680.36)score,(2.150.23)score vs.(8.620.69)score,and the levels of serum TNF-,IL-1,IL-6,miR-98-5p expression,Bax protein expression and apoptosis rate(32.052.84)%,(23.682.89)%,(12.152.13)%vs.(47.824.26)%were significantly decreased in low,medium and high dose of AT groups(P0.05),and the effect of AT high dose group was the best.Conclusion AT can adjust the levels of serum inflammatory factors and inhibit chondrocyte apoptosis in OA rats,possibly by interfering with miR-98-5p and promoting HMGA2 and GSK-3 protein expression plays a role.Key words：Atractylodes;Osteoarthritis;Chondrocytes;Micro RNA-98-5p;High mobility group protein 2;Glycogen synthase kinase-3;Rats,Sprague-Dawley骨关节炎（osteoarthritis，OA）为中老年人常见病症，是一种慢性退行性关节疾病，其发病率随着年龄增长而升高，70 岁以上的老人患病率高达70%1。临床病理表现主要为关节肿痛、关节软骨退化或缺失、关节活动僵硬等，严重影响病人日常生活2。软骨组织靠关节液进行物质交换，一旦受到损伤，靠自身代谢修复组织功能十分困难4。OA发病机制复杂，目前临床仍为保守治疗，迫切需要寻找更加安全有效的药物。苍术内酯（atractylenolide，AT）是分离自中草药白术的一种生物活性成分，具有良好的抗炎止痛、祛风散寒药理作用，中医学临床中常用于治疗风湿和消化系统疾病5。研究表明，AT可以调节炎性因子水平，对细胞增殖和凋亡亦有影响，推测其或对软骨损伤有积极作用6。因此，本研究自2022年14月建立OA大鼠模型，探讨AT对软骨损伤的影响，并分析其可能作用机制，旨在为临床提供参考。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物SPF级SD大鼠，雄性，60只，78周龄，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SCXK（京）2016-0011。体质量 210230 g。饲养条件设置为：环境温度为2024，保持良好通风，给予充足饮水和普通饲料，适应性饲养1周。1.1.2药品、主要试剂和仪器AT（纯度98%，上海沪峥生物科技有限公司，批号HZ-22023）；肿瘤坏死因子-（tumour necrosis factor-，TNF-）、白细胞介素-1（interleukin-1，IL-1）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）ELISA试剂盒（北京雅安达生物科技有限公司）；兔抗-actin多克隆抗体、高迁移率族蛋白 2（high mobility group proteins，HMGA2）、糖原合 成 酶 激 酶-3（glycogen synthetase kinase，GSK-3）、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）、Bcl-2相关蛋白（bcl-2 related x protein，Bax）多克隆抗体、山羊抗兔二抗IgG（北京索莱宝科技有限公司）；小动物手术器械（南京赛博生物技术有限公司）；石蜡包埋机（徕卡-2018型，赛默飞世尔仪器有限公司）。1.2方法1.2.1OA大鼠模型建立采用前后交叉韧带断离术建立OA模型，选取48只大鼠腹腔注射3%戊巴比妥钠进行麻醉后，固定于手术台上，将大鼠左后腿毛剃除并消毒，无菌条件下在左侧膝关节髌内纵向切开皮肤，暴露出整个膝关节，止血钳钝性分离结缔组织、血管、肌肉等，显露前交叉韧带横向剪断，切除1/3半月板，保留关节软骨面，逐层缝合。手术完毕给各组大鼠腹腔注射青霉素，预防感染。术后3 d内，每日将大鼠放入跑步笼中30 min，观察大鼠状态，大鼠出现膝关节肿胀变形，走路跛行或侧倒，视为建模成功7。1.2.2分组与给药造模成功大鼠随机分为模型组、AT低、中、高剂量组，各12只，剩余12只为对照组。参照文献 8-9，AT低、中、高剂量组腹腔注射给药5、10、20 mg/kg AT注射液（生理盐水配制），对照组及模型组给予等量生理盐水，每组给药 1 次/天，连续注射30 d。1.3检测指标1.3.1标本采集末次给药后，腹腔注射3%戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉采血，4 下3 000 r/min离心15 min，取血清，20 保存。脊椎脱臼法处死大鼠，取膝关节，分离软骨组织，剪取部分装入无菌冻存管内，80 保存备用，其余软骨组织置入4%多聚甲醛液固定24 h备用。1.3.2大鼠软骨组织 Mankins 评分光学显微镜下观察软骨组织形态变化，并采用Mankins软骨组织学分级标准对各组大鼠软骨组织进行评分，从大鼠软骨结构、软骨细胞、潮线评定大鼠软骨组织病变程度，各部分数相加为最终得分。评分越高表明OA病变程度越严重，详细评定标准见表1。1.3.3血清炎性因子水平检测取出ELISA试剂盒铝箔袋，置于室温 1 h 平衡温度后，按照 TNF-、IL-1、IL-6试剂盒说明书操作，主要步骤为：取出相关板条设置板孔，分别为样品孔与标准孔，标准孔加入标准品，样品孔加入10 L待测样本。再添加40 L稀释液于样品孔，将100 L辣根过氧化物酶标记好的检测抗体加入各板孔中，封膜 37 孵育60 min，弃液并使用洗涤液清洗5次。将50 L底物A、B液加入板孔，封膜37 孵育15 min。终止反应于15 min内在酶标仪450 nm处检测各板孔光密1498安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Aug，27（8）度（OD）值，根据标准品梯度浓度结果建立标准曲线，计算样本浓度。1.3.4软骨组织HE染色观察取出已固定好的软骨组织，置于10%EDTA液中脱钙，梯度浓度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片机切成薄片（4 m），切片再烘干3 h至水分完全消失。将切片放入二甲苯10 min二甲苯10 min无水乙醇5 min无水乙醇5 min95%乙醇 3 min80%乙醇2 min75%乙醇2 min进行脱蜡复水，分别经苏木素染色 10 min，盐酸分化 1 s，伊红染液染色 2 min，脱水透明，中性树脂封固。置于光学显微镜下观察软骨组织病理变化并拍片。1.3.5TUNEL法检测软骨组织细胞凋亡取软骨组织石蜡切片，二甲苯脱蜡，乙醇脱水，浸入枸椽酸缓冲液盒 60 min，PBS冲洗3次，严格按照 TUNEL试剂盒说明书操作，加入显色剂孵育30 min，PBS冲洗3次，复染后封片，光学显微镜下移动切片观察软骨组织神经细胞凋亡情况，选择5个无重复视野，观察棕黄色的凋亡细胞数，计算凋亡率（凋亡细胞数/细胞总数100%）。1.3.6RT-PCR 检测 miR-98-5p、HMGA2、GSK-3 mRNA表达取出软骨组织，预冷的PBS清洗后迅速加入500 L Trizol裂解液，上下吹打混匀，再加入氯仿、异丙醇，12 000 r/min高速离心机离心15 min，离心后吸取上清，检测RNA浓度。使用TAKARA反转录试剂盒，配制10 L逆转录体系得到cDNA。将得到的 cDNA 配制 PCR 反应体系：正、反向引物各0.8 L，ROX Refermce Dye 0.4 L，SYBR Premix Ex Tap 10 L，cDNA 2 L，RNase free-ddH2O 6 L。将配置好的反应体系混匀后加入PCR板，于反应条件为95 30 s，95 5 s，60 35 s下进行40个循环。取样本CT值平均数，以目的基因相对内参的表达量计算各样本之间基因表达差异，2CT为各样本基因的表达比较倍数。反应引物序列设计为miR-98-5p：正 向（5-TATTGTTGTGGGGTAGGGATT-3），反向（5-ATAACTTCACCCCAAAAATCG-3）；U6：正 向（5-CGTTCACGCATCTTTAAAATTGGA-3），反 向（5-TTATGCGTGTCATCCTTGCG-3）。HMGA2：正向（5-CATTGGAGAAAAACGGCCAAG-3），反向（5-TTGCGAGGATGTCTCTTCAGT-3）；GSK-3：正向（5-ATGGCAGCAAGGTAACCACAG-3），反 向（5-TCTCGGTTCTTAAATCGCTTGTC-3）；以-actin 为内参，-actin：正向（5-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3），反向（5-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3）。1.3.7蛋白质印迹法检测 HMGA2、GSK-3、Bax、Bcl-2蛋白表达软骨组织裂解匀浆，4 下12 000 r/min离心15 min，吸取上清液使用BCA蛋白浓度测定盒测定蛋白浓度，按照每组蛋白上样量20 L，加入4倍体积的缓冲液混匀放入恒温水浴锅中100 加热10 min进行变性，加入配制好的分离胶与浓缩胶，进行SDS-PAGE凝胶电泳，之后将蛋白转至PDVF膜上，5%脱脂牛奶封闭2 h，加入1 1 000稀释的HMGA2、GSK-3、Bax、Bcl-2 一抗，4 封闭过夜，TBST洗膜，加入二抗（1 5 000），室温封闭 60 min，TBST洗膜，滴加显影液进行显影，显影曝光，分析条带灰度值。1.4统计学方法运用SPSS 23.0统计学软件分析数据，计量数据以x s表示，采用单因素方差分析进行多组间比较，LSD-t检验进行两组间比较。P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1软骨组织学评分比较与对照组（1.710.12）分比较，模型组大鼠软骨组织学 Mankins 评分（8.620.69）分升高（P0.05）。与模型组比较，AT低（5.050.47）、中（4.680.36）、高剂量组（2.150.23）大鼠软骨组织学Mankins评分均降低（P0.05）。与AT 低剂量组比，AT 中、高剂量组大鼠软骨组织学Mankins 评分降低（P0.05）。与 AT 中剂量组比，AT高剂量组Mankins评分降低（P0.05）。2.2血清炎性因子水平比较与对照组比，模型组TNF-、IL-1、IL-6 水平上升（P0.05）。与模型组比，AT低、中、高剂量组TNF-、IL-1、IL-6水平降低（P0.05）。与 AT 低剂量组比，AT 中、高剂量组TNF-、IL-1、IL-6水平降低（P0.05）。与 AT中剂量组比，AT 高剂量组 TNF-、IL-1、IL-6 水平降低（P0.05）。见表2。2.3软骨组织HE染色比较结果显示，对照组大表1Mankins软骨组织学评定标准项目软骨结构软骨细胞潮线病变程度形态无异常形态不规则、表层受到破坏表层受到破坏、血管翳形成裂隙且达移行层形成裂隙且达软骨辐射层形成裂隙且达软骨钙化层结构完全破坏、软骨缺失形态无异常细胞数量明显增多、排列紊乱无序细胞过多增生成簇细胞数量明显减少完整不完整、有血管出现分值01234560123011499安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Aug，27（8）鼠关节软骨组织结构完整，基质均匀，表层光滑并无裂隙生成，表层细胞形态正常、排列整齐，中层细胞呈圆形或圆柱形四散分布，各层细胞均未见破坏；未见炎性细胞浸润、水肿等现象。模型组大鼠关节软骨组织结构破坏严重，表层明显变薄，形成裂隙深达钙化层，表层细胞缺失，深层细胞排列紊乱，细胞及细胞核明显受到压缩；可见大量炎性细胞浸润。AT低、中、高剂量组大鼠关节软骨组织结构受损现象得到改善，表层逐渐平整，结构基本清晰，偶见微小裂隙，骨细胞及细胞核形态正常；炎性细胞浸润现象减少。见图1。2.4软骨组织细胞凋亡率比较与对照组（8.411.74）%比较，模型组大鼠软骨组织细胞凋亡率（47.824.26）%上升（P0.05）。与模型组比较，AT低、中、高剂量组大鼠软骨组织细胞凋亡率 （32.052.84）%、（23.682.89）%、（12.152.13）%下降（P0.05）。与AT低剂量组比较，AT中、高剂量组大鼠软骨组织细胞凋亡率下降（P0.05）。与CA中剂量组比较，AT高剂量组大鼠软骨组织细胞凋亡率下降（P0.05）。见图2。2.5miR-98-5p、HMGA2、GSK-3 mRNA 水平比较与对照组比较，模型组大鼠软骨组织 miR-98-5p表达水平升高，HMGA2、GSK-3 mRNA水平降低（P0.05）。与模型组比，AT低、中、高剂量组大鼠软骨组织 miR-98-5p 表达水平降低，HMGA2、GSK-3 mRNA表达水平均升高（P0.05）。与AT低剂量组比较，AT中、高剂量组大鼠软骨组织miR-98-5p表达水平降低，HMGA2、GSK-3 mRNA 表达水平升高（P0.05）。与AT中剂量组比，AT高剂量组miR-98-5p水平降低，HMGA2、GSK-3 mRNA水平升高（P0.05）。见表3。2.6HMGA2、GSK-3、Bax、Bcl-2 蛋白水平比较与对照组比，模型组HMGA2、GSK-3、Bcl-2蛋白水平降低，Bax蛋白水平升高（P0.05）。与模型组比，AT 低、中、高剂量组大鼠软骨组织 HMGA2、GSK-3、Bcl-2蛋白表达水平升高，Bax蛋白表达水平降低（P0.05）。与AT低剂量组比较，AT中、高剂量组大鼠软骨组织 HMGA2、GSK-3、Bcl-2 蛋白表达水平升高，Bax蛋白表达水平降低（P0.05）。与AT中剂量组比较，AT 高剂量组大鼠软骨组织 HMGA2、GSK-3、Bcl-2蛋白表达水平升高，Bax蛋白表达水平降低（P0.05）。见表4，图3。3讨论关节软骨作为骨与骨之间的联合，可将外界对人体的作用力均匀分布，人的所有运动都离不开关节软骨的负荷10。研究表明，关节炎是在机械和生表2各组大鼠血清炎性因子水平比较/（ng/L，x s）组别对照组模型组AT低剂量组AT中剂量组AT高剂量组F值P值鼠数1212121212TNF-21.432.36187.2817.49112.5310.3578.167.8234.863.68541.380.001IL-110.740.8086.328.2164.385.1337.954.2518.511.78518.810.001IL-638.693.65238.5719.48173.8214.2491.438.1243.303.81670.660.001注：TNF-为肿瘤坏死因子-，IL-1为白细胞介素-1，IL-6为白细胞介素-6。与对照组比，P0.05。与模型组比，P0.05。与AT低剂量组比，P0.05。与AT中剂量组比，P0.05。表3大鼠miR-98-5p及HMGA2、GSK-3 mRNA水平比较/x s组别对照组模型组AT低剂量组AT中剂量组AT高剂量组F值P值鼠数1212121212miR-98-5p0.430.031.860.191.450.150.860.070.470.03219.070.001HMGA21.620.150.340.030.850.101.280.111.450.13256.030.001GSK-31.910.180.240.020.660.041.480.131.830.17409.540.001注：HMGA2为高迁移率族蛋白2，GSK-3为糖原合成酶激酶-3。与对照组比，P0.05。与模型组比，P0.05。与AT低剂量组比，P0.05。与AT中剂量组比，P0.05。表4大鼠HMGA2、GSK-3、Bax、Bcl-2 蛋白水平比较/x s组别对照组模型组AT低剂量组AT中剂量组AT高剂量组F值P值鼠数1212121212HMGA21.630.180.390.040.860.091.090.111.530.16193.160.001GSK-31.540.160.280.020.740.070.960.081.290.13264.590.001Bax0.240.031.570.171.250.130.840.090.420.04328.330.001Bcl-21.370.020.460.130.780.121.090.081.250.05320.130.001注：HMGA2为高迁移率族蛋白2，GSK-3为糖原合成酶激酶-3，Bax为Bcl-2相关蛋白，Bcl-2为B细胞淋巴瘤因子2。与对照组比，P0.05。与模型组比，P0.05。与AT低剂量组比，P0.05。与AT中剂量组比，P0.05。1500安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Aug，27（8）物因素共同影响下，引发软骨基质降解、软骨细胞自身代谢紊乱的退行性疾病11。关节软骨由基质与软骨细胞组成，软骨组织需靠仅占组织1/10的软骨细胞进行正常代谢，所以代谢缓慢和修复能力低都使OA难以完全治愈，一旦发病会将不断反复发作，疼痛难忍12。目前现代医学的医治方法主要以非甾性抗炎药为主，但非甾性抗炎药对肠胃的毒副作用明显，因此，寻找更加安全、毒副作用低的药物对OA临床治疗有着重大意义13。AT是提取自菊科植物白术根茎的生物活性成分，是一种倍半萜烯类化合物。现代药理学研究证实了AT具有多种药理活性，包括抗炎、抗病毒、抗溃疡、保肝及抗肿瘤等14。中医学对OA的研究极为久远，已有研究发现，AT可代替非甾性药物对软骨损伤修复有着良好效用15。横断前后交叉韧带和切除半月板造模方法可引起软骨表面缺失、表层基质缺陷、软骨细胞代谢紊乱等改变，与OA病人临床表现十分贴近，是公认的OA造模方法16。故本研究建立OA大鼠模型，结果显示，模型组大鼠软骨组织学Mankins评分降低，血清TNF-、IL-1、IL-6、细胞凋亡率水平上升，表明模型组大鼠软骨组织受到损伤且伴有炎症反应，在给予不同剂量AT治疗后上述指标水平降低，提示AT可缓解大鼠体内炎症反应，修复软骨损伤。此外，软骨组织HE染色和TUNEL染色结果也表明软骨各基层结构受损现象得到改善，细胞肿胀、炎性细胞浸润现象和软骨细胞凋亡现象明显减少，进一步证实AT可以抑制软骨细胞的凋亡，对软骨组织损伤具有修复作用。在本研究中，模型组大鼠软骨组织 miR-98-5p表达水平升高，HMGA2和GSK-3基因表达和蛋白表达水平明显降低，同时研究发现，模型组大鼠促凋亡蛋白 Bax 蛋白表达水平升高，且抑凋亡蛋白Bcl-2表达降低。结合模型组大鼠软骨细胞凋亡率升高，表明模型组大鼠软骨组织受到损伤后，体内miR-98-5p 水平骤然升高，HMGA2/GSK-3 信号通路被激活，细胞凋亡与抑凋亡平衡被打破，导致大量骨细胞凋亡流失。微小 RNA（microRNA，miRNA）是一种由 1925 个核苷酸组成的非编码小RNA，参与机体内细胞增殖、分化、迁移、凋亡等生理过程。miR-98-5p是 miRNAs 家族在肿瘤和骨骼方向倍受关注的成员之一，其可以通过抑制 HMGA2表达抑制细胞凋亡，GSK-3是一种多功能丝氨酸/苏氨酸激酶，可调节能量代谢、细胞生长和凋亡，是 HMGA2 反向底物和效应器17。miR-98-5p/HMGA2/GSK-3 轴是调控骨细胞生长的重要通路，在正常的生理状态下维持着骨组织的动态平衡18。与模型组比较，AT各剂量组大鼠软骨组织miR-98-5p 表达、Bax 蛋白表达水平降低，HMGA2、GSK-3 mRNA和Bcl-2蛋白表达水平均升高。结合大鼠软骨组织细胞凋亡率变化，可见AT能够干扰miR-98-5p促进HMGA2、GSK-3蛋白表达抑制软骨细胞凋亡，对大鼠软骨损伤有积极影响。综上所述，AT能够调整OA大鼠血清炎性因子水平，抑制软骨细胞凋亡，可能是通过干扰miR-98-5p，促进HMGA2、GSK-3蛋白表达发挥作用，为临床治疗OA提供实验依据。（本文图1，2见插图8-1）参考文献1 ZUPAN J，DROBNI M，STRAAR K，et al.Synovium-derived mesenchymal stem/stromal cells and their promise for cartilage regeneration J.Adv Exp Med Biol，2020，1212：87-106.2 邓慧琳，杨婧，郭俐.-硫辛酸对白细胞介素1诱导的软骨细胞损伤的保护作用 J.安徽医药，2021，25（1）：57-63.3 杨光，惠越，陈奎，等.苍术内酯对骨关节炎大鼠软骨损伤、血清炎性因子和氧化应激的调节作用及机制研究 J.中医学报，2021，36（3）：601-607.4 BENMASSAOUD MM，GULTIAN KA，DICERBO M，et al.Hydrogel screening approaches for bone and cartilage tissue regeneration J.Ann N Y Acad Sci，2020，1460（1）：25-42.5 GEGG C，YANG F.Spatially patterned microribbon-based hydrogels induce zonally-organized cartilage regeneration by stem cells in 3D J.Acta 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