H3型组胺受体在结直肠癌中作用研究_边振远.pdf

基金项目：辽宁省科学技术计划项目（）第一作者：边振远（），男，河北石家庄人，副主任医师通信作者：张 成，：.结直肠癌外科治疗 型组胺受体在结直肠癌中作用研究边振远，王鑫宇，张 成北部战区总医院 普通外科，辽宁 沈阳 摘要 目的 探讨 型组胺受体在结直肠癌中的作用。方法 人结直肠癌组织和癌旁组织样本来自于北部战区总医院普通外科。将人结肠癌细胞 细胞分入 组和 组。采用 检测结直肠癌和癌旁组织中的 表达水平；使用 干涉片段对结直肠癌 细胞进行处理，采用、划痕实验检测 干涉对 组、组细胞增殖能力的影响及对 细胞迁移能力的影响。结果在 对结直肠癌和癌旁组织中，结直肠癌组织中 表达水平高于癌旁组织。干涉后，组细胞增殖能力低于 组（.）。干涉降低 表达后，细胞迁移能力下降（.）。结论 与结直肠癌细胞的增殖和迁移相关。关键词 结直肠癌；型组胺受体；增殖；迁移中图分类号：.：文章编号：（），（，）：（），（.）（.）：；结直肠癌是一种高度恶性肿瘤，其发病率和病死率分别排在肿瘤的第 位和第 位。目前，针对结直肠癌的药物治疗手段比较缺乏，有待进一步开发。有研究报道，组胺作为一种内源性胺类物质，结合相应的组胺受体可以作用于肿瘤细胞的增殖，目前，已经发现的组胺受体包括、型组胺受体 种，组胺通过与这些不同的受体结合会发挥不同的作用。人 基因定位于第 号染色体，编码的蛋白由 个氨基酸组成。有学者发现，型组胺受体（，）具有调控肿瘤细胞增殖和迁移的作用。有研究证实，肝细胞肝癌、胆管细胞癌、黑色素瘤、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌等恶性肿瘤组织中的 表达水平显著增高。本研究旨在探讨 在结直肠癌中的作用。现报道如下。材料与方法.实验材料 人结直肠癌组织和癌旁组织样本来自于北部战区总医院普通外科。胎牛血清购自 公司；培养基及.胰酶由课题组专业技术人员配置；二甲基亚矾购自 公司；酒精（无水乙醇、乙醇）购自天津市富宇精细化工有限公司；光学显微镜购自，全自动酶标仪（）购自美国 公司，离心机购自；试剂购自广州锐博生物科技有限公司；干涉片段由吉玛基因公司合成。.实验方法.实验分组及干涉片段转染（）组织样本临床军医杂志 年 月 第 卷 第 期 ，.，.，按照结直肠癌和癌旁组织分为 对。（）将传代好的人结肠癌细胞 细胞分入 组和 组。组接种细胞于 孔板中。用无血清培养基配制 混合液，室温静置；再用无血清培养基配制干涉片段混合液。将两种混合液混匀后静置 ，分别加入到相应的 孔板中，正常条件下培养（，），再进行干涉片段的转染。.实验（）接种细胞：将常规处理过的 组、组细胞消化离心后以适宜密度种于 孔板中，于、培养 。（）标记细胞：制备 培养基并加入 孔板中，孵育 后用 清洗。（）细胞固定化：加入含 多聚甲醛的，室温脱色摇床孵育 ，然后用 甘氨酸溶液中和，继续加入 清洗，清洗结束后加入含.的，室温脱 色 摇 床 孵 育 ，最 后 用 清 洗。（）反应：于 孔板中加入 反应液孵育 ，然后加入含.的，重复 次，每次 。（）染色：配制适量 反应液并加入 孔板中，避光孵育 ，再用 清洗，重复 次，每次 。（）荧光显微镜获取图像进行分析。.细胞划痕实验（）接种细胞：将常规处理过的 组、组细胞消化离心后种于 孔板中（密度为 个细胞），、培养。接种细胞前用 笔在 孔板背面画线标记。（）细胞划痕：用 中枪头垂直于孔板制造划痕，再用无血清培养基清洗划痕产生的细胞碎片。（）观察拍照：加入无血清培养基，显微镜下观察并拍照，记录、的作用效果图。.统计学方法 采用 .统计学软件对数据进行处理。计量资料以均数 标准差（?）表示，组间比较采用 检验；计数资料以百分率表示，组间比较采用 检验。以 .为差异有统计学意义。结果.结直肠癌和癌旁组织 表达水平比较 在 对结直肠癌和癌旁组织中，结直肠癌组织中 表达水平高于癌旁组织。见图。.干涉对 组、组细胞增殖能力影响比较 干涉后，组细胞增殖能力低于 组（.）。见图。.干涉对 细胞迁移能力影响 干涉降低 表达后，细胞迁移能力下降（.）。见图。图 结直肠癌和癌旁组织 表达水平比较（表示肿瘤，表示癌旁）图 干涉对 组、组细胞增殖能力影响比较 讨论 可在恶性肿瘤的发生和发展过程中发挥调控作用，。等发现，肾上腺皮质瘤中 呈显著高表达。等报道，组胺可通过结合 和 型组胺受体对胰腺癌细胞的生长发挥调控作用。朱剑军等研究表明，通过调控伪足形成在结直肠癌中参与肿瘤迁移。恶性肿瘤细胞系和肿瘤组织中均存在着高内源性组胺，其可通过旁分泌或自分泌的方式释放到细胞间隙中，从而作用于肿瘤发生和发展的各个阶段。本研 临床军医杂志 年 月 第 卷 第 期 ，.，.，图 干涉对 细胞迁移能力影响究中，检测结果显示，结直肠癌组织中 表达水平高于癌旁组织。这提示，组胺可能通过作用于 调控结直肠癌的发生和发展。在后续实验中，通过构建 表达干涉载体降低 在结直肠癌细胞系中的表达后发现，表达降低后，细胞迁移能力下降（.）。这提示，在结直肠癌中，组胺通过 促进结直肠癌细胞的增殖和转移。本研究存在一定的不足：仅在细胞系中进行了干涉实验，降低 表达后，细胞的增殖和迁移能力出现显著下降，但对组胺通过 产生促肿瘤增殖、迁移效应的具体机制并未进行深入研究。综上所述，与结直肠癌细胞的增殖和迁移相关，这为以 为靶点的结直肠癌药物开发提供了理论基础。参考文献：，（）：，（）：，（）：，（）（），（）：胡艳芬，张文桃，朱剑军，等 基于数据库分析 在肝癌中的功能作用及临床意义 中国比较医学杂志，（）：，（）：，（）：，（）：，：，（）：，（）：，：，（）：，（）：朱剑军，石丽洪 沉默 减少伪足形成抑制结肠癌细胞迁移 中国生物化学与分子生物学报，（）：（收稿日期：；本文编辑：关婷婷）临床军医杂志 年 月 第 卷 第 期 ，.，.，