HPLC法测定香菊胶囊中欧前胡素和异欧前胡素的含量_丁慧.pdf

第 3 期第 53 卷工业微生物作者简介：丁慧（1978.08），女，汉族，河南周口人，本科，主管药师，研究方向：食品药品检验、食品生产监管、“两品一械”不良反应检测。E-mail：。HPLC 法测定香菊胶囊中欧前胡素和异欧前胡素的含量丁慧1，王雯丽2，邵雪力31.周口市淮阳区食品药品检验所，河南 周口 466700；2.河南省药品审评查验中心，河南 郑州 450000；3.周口市公共检验检测中心，河南 周口 466700摘要：建立 HPLC 法测定香菊胶囊中欧前胡素、异欧前胡素的含量。采用 Agilent Extend-C18色谱柱，以乙晴-水（4852）为流动相；检测波长为 214 nm，流速为 1.0 mL/min-1。欧前胡素进样量在0.060 30.505 8 g 范围内与峰面积存在良好的线性关系（r=1.000 0）；异欧前胡素进样量在 0.037230.285 7 g 范围内与峰面积具有良好的线性关系（r=1.000 0）。欧前胡素的平均回收率为98.20%，SRSD=1.16%；异欧前胡素的平均回收率为 97.90%，SRSD=1.10%。该方法操作过程简便快速，测定结果准确，可用于香菊胶囊的质量控制。关键词：欧前胡素；异欧前胡素；香菊胶囊；HPLCdoi：10.3969/j.issn.1001-6678.2023.03.037第 53 卷第 3 期2023 年 6 月工业微生物Industrial MicrobiologyVol.53 No.3Jun.2023香菊胶囊是由化香树果序（除去种子）、夏枯草、野菊花、黄芪、辛夷、防风、白芷、甘草、川芎 9 味药材加工制成的中药制剂，具有辛散祛风、清热通窍的功效，常用于治疗急、慢性鼻窦炎与鼻炎。以往的质量标准通常不涉及含量的测定，这是其质量标准制定的弊端。为健全质量控制体系，本文在借鉴相关文献 的 基 础 上，选 用 HPLC 法 对 香 菊 胶 囊 中Imperatorin（欧前胡素）和 Isoimperatorin（异欧前胡素）的含量进行测定1，结果显示这种方法快速、灵敏、准确，可有效控制香菊胶囊的质量。1仪器与试剂岛津 LC-2010C 高效液相色谱仪（双重控温柱温箱，自动进样器）（日本公司）、紫外检测器 UV-2401 型可见紫外分光光度计。BS-21S 型电子分析天平、HD-500 超声波清洗器。Imperatorin 与 Isoimperatorin 对照品（中国药品生物制品检定所，Imperatorin 批号：110826-201512；Isoimperatorin 批号：110827-201617）；香菊胶囊（批号：220221、220518、220613、220926，山东步长制药股份有限公司）；乙腈为色谱纯，水（纯化水，自制），盐酸（优级纯），其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：Agilent Extend-C18柱（4.6 mm250mm，5 m）；流动相：乙晴-水（4852）；流速：1.0mL min-1；柱温：35；进样量 20 L；检测波长：214nm。就理论层面而言，根据 Imperatorin 峰值进行计算，6 000。分离度1.5。2.2溶液的配制2.2.1对照品溶液的配置方法使用高精度天平进行精密称定，然后将浓度为50%的甲醇有机化合物溶解稀释，摇匀后精准量取10 mL，分别置于 100 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（相当于含欧前胡素18.27 g mL-1；异欧前胡素 10.59 g mL-1）。2.2.2供试品溶液的配制取 10 粒香菊胶囊，经过细致研磨处理后称取1.5 g，使用高精度天平进行精密称定，将粉末倒入具塞锥形瓶中并加塞，准确加入 50 mL 盐酸，密塞称定重量，超声处理（功率：300 W；频率：40 kHz）30min，自然冷却后再次称定重量，若重量有损失就对应地添加盐酸溶液，充分摇匀后置于分液漏斗中，用154-第 3 期第 53 卷乙酸乙酯振摇提取 4 次，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，用体积分数为 50%的甲醇有机化合物溶液溶解所得残渣，然后取 10 mL 的量瓶来装置，将其稀释到既定刻度并摇匀后，使用 0.45 m 的微孔滤膜进行过滤，获得续滤液2-3。2.2.3阴性对照溶液的配制取不含白芷的其他药材和辅料按照处方比例配制阴性对照样品。2.3线性关系考察分别精密吸取“2.2.1”项制备的对照品混合溶液5、10、15、20、30、40 L，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，进样测定，记录峰面积。以对照品进样量（g）为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），绘制标准曲线，计算得欧前胡素回归方程为：Y=6.728357106X+3.580 719103，r=1.000 0，异欧前胡素回归方程为：Y=5.612 836106X+1.446 321103，r=1.000 0。结果表明，Imperatorin 进样量的最小值为0.060 3 g，最大值为 0.505 8 g，该取值范围与峰面积之间存在良好的线性关系，Isoimperatorin 进样量的最小值为 0.037 23 g，最大值为 0.285 7 g，该取值范围与峰面积之间也存在良好的线性关系。2.4精密度试验取一定量供试品（批号：220613），依照上述色谱条件，平行进样 6 次，记录色谱峰面积。结果表明，欧前胡素峰面积平均值为 2 438 471.172，SRSD=0.06%；异欧前胡素峰面积平均值为 2 131 286.232，SRSD=0.05%（n=6），说明精密度良好。2.5稳定性试验取同一供试品（批号：220613）溶液，分别在 0、6、10、15、20、25、30、48 h 时进样 20 L，结果表明，8次进样欧前胡素的峰面积平均值为 4 619 463.21，SRSD=0.18%；异欧前胡素的峰面积平均值为 5 627419.26，SRSD=0.47%。表明供试品溶液在 48 h 内稳定性良好。2.6重复性试验分别精密称取 6 份同一供试品（批号：220613），按供试品溶液的制备方法制备，在上述色谱条件下，平行测定含量，计算得到欧前胡素的平均含量为0.089mg 粒-1，SRSD=1.2%；异欧前胡素的平均含量为 0.058mg 粒-1，SRSD=1.5%。表明本法的重复性良好。2.7阴性对照试验按“2.1”项的方法进行测定，如图 1 所示，在阴性对照色谱图中，在与欧前胡素、异欧前胡素对照品色谱相应位置的停留时间段内没有出现色谱峰，所以判断其他组分对 Imperatorin 和 Isoimperatorin 含量的测定不会造成干扰。2.8加样回收率试验按供试品溶液的制备方法制备并根据上述色谱图 1a.对照品；b.样品；c.阴性对照；1.欧前胡素；2.异欧前胡素0.05.010.015.020.025.030.035.040.045.050.055.0 t/min12ab0.05.010.015.020.025.030.035.040.045.050.055.0 t/min0.05.010.015.020.025.030.035.040.045.050.055.0 t/minc12丁慧等：HPLC 法测定香菊胶囊中欧前胡素和异欧前胡素的含量155-第 3 期第 53 卷工业微生物批号220221220613220518220926欧前胡素0.0820.0890.0730.087异欧前胡素0.0490.0580.0670.054名称样品中含量/mg对照品加入量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%SRSD/%欧前胡素0.2990.2960.59798.6698.201.160.2970.2960.58999.230.2920.2960.59197.630.3000.2960.59595.680.2940.2960.58998.640.2980.2960.59499.37异欧前胡素0.2040.1910.59698.6297.901.100.2100.1910.59497.580.2060.2090.1910.1910.6010.59396.8997.660.2140.2190.1910.1910.5890.57697.9398.72条件测定其含量，计算回收率，得出欧前胡素平均回收率为 98.20%，SRSD为 1.16%；异欧前胡素平均回收率为 97.90%，SRSD为 1.10%。表明本法回收率较好，准确度高，符合定量分析的要求。结果见表 1。表 1加样回收率试验结果（n=6）2.9检出限及定量限的确定准确量取对照品溶液 1 mL，置于 100 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度线处，摇匀，按照同样的方法检测。结果显示，当信噪比为 31、进样量为 1 L时，检出限为 2.63 ng；当信噪比为 101、进样量为3 L 时，定量限为 7.281 ng。连续测定 6 次，平均值为 14 016，SRSD=2.5%（n=6）。符合定量分析的要求。2.10样品的含量测定使用精密仪器对 Imperatorin 和 Isoimperatorin的对照品混合溶液以及供试品融合液进行提取，各提取 10 L，按照上述色谱条件执行测定操作，选用外标法来计算样品中的Imperatorin和Isoimperatorin 含量，具体结果如表 2 所示。表 2含量测定结果（n=6）（单位：mg/粒）3讨论考察流动相指向乙腈和水的比例，以及浓度为0.1%的乙腈磷酸溶液，结果显示，当乙腈和水的比例为 4852 时，色谱峰呈尖锐形态，且各峰分离清晰，分离度良好，峰值停留时间适宜，所以将此定为流动相。柱温的考察选择了 4 个值，分别为 20、25、30 和 35，结果表明，分离效果最好的温度是 35。参考文献1 何鸽飞,易爱纯,张顺芝.高效液相色谱法测定清眩片中欧前胡素和异欧前胡素的含量 J.中南药学,2010,8(1):30-33.2 霍翠翠,徐兰兰,胡军华,等.肩痛颗粒中异欧前胡素的含量测定 J.南京中医药大学学报,2009,25(1):73-74.3 马开,秦文杰.HPLC 测定痛可停胶囊中欧前胡素和异欧前胡素含量 J.中成药,2003(10):27-29.Research on Determination of iMperatorin and Isoimperatorin in Xiangju Capsules byHPLCDING Hui1，WANG Wenli2，SHAO Xueli31.Zhoukou Huaiyang District Food and Drug Inspection Institute,Zhoukou 4667001,China；2.Henan Provincial Drug Review and Inspection Center,Zhengzhou 450000，China；3.Zhoukou Public Inspection and Testing Center，Zhoukou 4667001,ChinaAbstractTo establish a method for the determination of prebiotics and iso-opiomelanocarpin in Xiangju capsules by HPLC.AnAgilent Extend-C18column was used with acetylene-water(4852)as the mobile phase;the detection wavelength was 214 nm andthe flow rate was 1.0 mL min-1.The results showed that the linear relationship between the injection volume and the peak area ofeuphorbiain was good in the range of 0.060 3-0.505 8 g(r=1.000 0);the linear relationship between the injection volume and thepeak area of isoeuphorbiain was good in the range of 0.037 23-0.285 7 g(r=1.000 0).The average recovery of euphorbiain was98.20%with SRSD=1.16%;the average recovery of iso-euphorbiain was 97.90%with SRSD=1.10%.The method is simple,rapid andaccurate,and can be used for the quality control of chamomile capsules.Key wordseuphorbiaceae；isoeuphorbiaceae；chamomile capsule；HPLC156-