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红穿破石地上与地下部分质量分析研究119红穿破石地上与地下部分质量分析研究刘纤纤，周楚惠，赵凤仙，邓青梅，陈勇*（广西中医药大学科学实验中心，南宁 530200）基金项目：广西中医药大学2019年广西一流学科建设项目（No.2019XK105）；广西壮瑶药重点实验室资助项目（No.GXZYKF2021-11）；广西壮瑶药重点实验室资助项目（No.GXZYKF2019-2）；2019年度广西高校中青年教师科研基础能力提升项目（No.2019KY0341）；广西中药药效研究重点实验室（No.17-259-20）；广西高校中药提取纯化与质量分析重点实验室（No.桂教科研20146号）；壮瑶药协同创新中心（桂教科研201320号）、广西壮族自治区民族药资源与应用工程研究中心（桂发改高技函20202605号）、广西中医药重点学科壮药学（GZXK-Z-20-64）、广西一流学科中药学（民族药学）（桂教科研201812号）第一作者：刘纤纤，硕士，药物质量控制研究*通讯作者：陈勇，教授，药物质量控制研究【摘 要】目的：对红穿破石药材地上与地下部分进行质量分析对比研究。方法：观察红穿破石地上部分茎、叶显微鉴别特征，对其水分、灰分、酸不溶性灰分及浸出物的含量进行测定，对其地上、地下部分进行TCL鉴别检查，通过HPLC法同时测定地上、地下部分大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。结果：红穿破石药材显微特征、薄层色谱鉴别特征较明显且专属性强。结论：实验建立的红穿破石药材质量控制方法具有较好的专属性和准确性，研究结果可为该药材的扩大使用和资源开发提供科学依据。【关键词】红穿破石；质量分析；地上与地下部分对比研究Study on Quality Analysis from the Above-ground and Underground Parts of Ventilago leiocarpa BenthLiu Qianqian，Zhou Chuhui，Zhao Fengxian，Deng Qingmei，Chen Yong*（Guangxi University of Chinese Medicine Science Experiment Center，Nanning 530200）【Abstract】Objective：To analyze and compare the quality from the above-ground and underground parts of Ventilago leiocarpa Benth.Methods：The microscopic identification characteristics from the stems and leaves of the above-ground parts were observed，and the contents of water，ash，acid-insoluble ash and extract were determined.The above-ground and underground parts were identified by TCL，and the contents of emodin，chrysophanol and physcion from the above-ground and underground parts were simultaneously determined by HPLC.Results：The microscopic characteristics and TLC identification characteristics of Ventilago leiocarpa Benth were obvious and specific.Conclusion：The quality control method established in the experiment has good specificity and accuracy，and the research results can provide scientific basis for the expanded use and resource development of this medicinal material.【Keywords】Ventilago leiocarpa Benth；Quality Analysis；Comparative Study of Aboveground and Underground Parts红穿破石为鼠李科属植物翼核果（Ventilago leiocarpa Benth）的根及根茎，又名血风藤，收载于广西壮族自治区壮药质量标准第二卷，红穿破石药材清热利湿，利尿通淋，对泌尿系统结石具有特殊的作用。现有文献记载中，其用药部位以地下部分的根及根茎为主，但地上部分的茎叶等非用药部位的资源较多，丢弃不用易造成浪费。对红穿破石药材地上、地下部分进行质量分析对比研究，将对红穿破石药材的资源开发和临床应用有实际意义。质量标准Identification&SourceGendingSwhyenz 1201 药材、仪器与试剂1.1 实验仪器Waters 2695高效液相色谱仪（美国Waters公司）；N-13000旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）。1.2 药品与试剂大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品（成都麦德生科技有限公司，批号：RP190519，纯度：99.66%、99.95%、98.12%），甲醇、乙腈（色谱纯）；超纯水。实验用红穿破石药材经广西中医药大学药用植物教研室郭敏副教授鉴定为：鼠李科属植物翼核果（Ventilago leiocarpa Benth.）的干燥茎、叶、根及根茎，具体信息见表1。表1 红穿破石样品采集信息编号产地采集时间HCPS-1广西东兴市马路镇2020年11月HCPS-2广西防城港市那梭镇2020年12月HCPS-3广西防城港市上思县2020年12月HCPS-4广西钦州市钦北区贵台镇2020年12月HCPS-5广西钦州市钦南区那丽镇2021年3月HCPS-6广西来宾市金秀县2021年3月HCPS-7广西桂林市平乐县2021年3月HCPS-8广西防城港市防城区2021年3月HCPS-9广西南市宁兴宁区山口村2021年3月HCPS-10广西南宁青秀区2021年3月图2 红穿破石药材干燥图图1 红穿破石原植物图2 药材地上部分显微鉴别茎、叶横切面。茎横切面：木栓层呈棕黄色，由13列细胞组成，大小不一，常含有棕黄色物质。叶横切面：上下表皮细胞均1列类方形或类长方形细胞，下表皮细胞略呈连珠状增厚。1.木栓层 2.皮层 3.韧皮部 4.形成层 5.木质部 6.射线 7.导管 8.髓图3红穿破石茎横切面及其局部放大图14725836300 um14725836300 um红穿破石地上与地下部分质量分析研究1212.1 药材地上部分茎、叶粉末鉴别药材粉末为黄棕色至黄绿色。可见石细胞类圆形或类方形，50130 m，壁稍厚，孔沟显。1.上表皮 2.草酸钙方晶 3.栅栏组织 4.海绵组织 5.下表皮 6.纤维1.具缘纹孔导管 2.螺纹导管 3.石细胞 4.草酸钙方晶 5.红棕色物 6.非腺毛 7.嵌晶纤维图4 红穿破石主叶脉及叶片横切面图图5 红穿破石茎、叶粉末显微图3 药材地上与地下部分薄层色谱鉴别吸取供试品、对照品溶液各5 L，点于硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸（1551）为展开剂展开，取出，晾干，置于365 nm紫外光灯下检视。10个产地红穿破石药材茎、叶、根及根茎的供试品在与对照品相同位置上均显相同颜色荧光斑点，分离效果好，重现性也较好，可作为红穿破石药材薄层鉴别方法。结果见图6。11234567146225533300 um100 um20 um50 um100 um50 um50 um50 um20 um质量标准Identification&SourceGendingSwhyenz 1224 药材地上部分水分、灰分及浸出物测定10个产地红穿破石茎、叶水分测定：水分含量范围分别为8.34%11.95%、9.00%11.32%，均值分别为9.80%、10.33%结果见表2。对10个产地红穿破石茎、叶分别进行灰分测定，总灰分含量范围3.44%7.61%、4.25%7.17%，均值分别为4.45%、5.63%，结果见表3。1.大黄素对照品 2.红穿破石茎、叶、根及根茎供试品溶液图6 红穿破石药材茎、叶、根及根茎薄层色谱图表2 红穿破石茎叶水分、浸出物的测定结果（n=3，%）编号产地茎水分含量RSD叶水分含量RSD茎浸出物含量RSD叶浸出物含量RSDHCPS-1广西东兴市马路镇8.990.6710.371.5715.011.1235.280.38HCPS-2广西防城港市那梭镇8.340.8510.410.5817.171.2937.502.23HCPS-3广西防城港市上思县9.120.2510.350.6714.142.7735.212.09HCPS-4广西钦州市钦北区贵台镇10.050.6510.290.8216.822.3338.601.45HCPS-5广西钦州市钦南区那丽镇8.520.3510.481.7416.420.7942.031.23HCPS-6广西来宾市金秀县9.111.1410.810.4221.861.9038.021.56HCPS-7广西桂林市平乐县11.200.3010.350.1427.481.4746.141.19HCPS-8广西防城港市防城区10.960.349.930.2529.380.2939.330.54HCPS-9广西南市宁兴宁区山口村9.720.389.000.5323.350.5239.441.18HCPS-10广西南宁青秀区11.950.6011.320.2621.342.0143.912.48均值/9.80 0.55 10.33 0.70 20.30 1.45 39.55 1.43 表3 红穿破石茎叶总灰分、酸不溶性灰分的测定结果（n=3，%）编号产地茎总灰分含量RSD茎 酸不溶性灰分含量RSD叶总灰分含量RSD叶 酸不溶性 灰分含量RSDHCPS-1广西东兴市马路镇4.492.370.331.575.421.750.637.28HCPS-2广西防城港市那梭镇4.301.210.363.215.550.500.677.70HCPS-3广西防城港市上思县3.442.770.284.935.701.490.637.70HCPS-4广西钦州市钦北区贵台镇3.512.610.223.846.030.480.654.79HCPS-5广西钦州市钦南区那丽镇4.670.920.426.995.701.160.724.43HCPS-6广西来宾市金秀县3.302.400.393.576.211.681.174.78HCPS-7广西桂林市平乐县3.790.630.292.994.740.140.757.34前沿线前沿线前沿线起始线起始线起始线111555333777101010222666999444888111111红穿破石地上与地下部分质量分析研究123编号产地茎总灰分含量RSD茎 酸不溶性灰分含量RSD叶总灰分含量RSD叶 酸不溶性 灰分含量RSDHCPS-8广西防城港市防城区7.611.390.696.035.500.800.603.58HCPS-9广西南市宁兴宁区山口村4.452.840.565.614.251.110.592.70HCPS-10广西南宁青秀区5.970.580.504.797.170.720.781.76均值/4.55 1.77 0.40 4.35 5.63 0.98 0.72 5.21 续表5 药材地上与地下部分含量测定5.1 色谱条件色谱柱：SHIMADZU Shim-pack C18（4.6 x 250 mm，5 um）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（7525，V/V）；流速1.0 mL/min；柱温30；进样量10 L；检测波长223 nm。5.2 供试品溶液与对照品溶液制备分别称取样品粉末各2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷50 mL和2.5 mol/L硫酸溶液25 mL，称重，100 加热回流3 h，冷却，补重，摇匀，滤过，分取三氯甲烷液，精密量取25 mL，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移到5 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤，即得。5.3 系统适应性试验各色谱峰分离度均大于1.5，与其他组分分离完全，对称因子均大于1，符合要求，理论塔板数均不低于10 000，色谱系统适用性实验符合含量测定要求。5.4 方法学考察5.4.1 线性关系考察精密吸取“5.2”项下对照品溶液，按“5.1”项下色谱条件，以各对照品质量浓度（X，g/mL）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归分析，得各回归方程及线性范围，结果见表4。表4 线性关系考察结果对照品回归方程R2线性范围（g/mL）大黄素Y=62 135X395 1150.999 55.02752.8大黄酚Y=67 725X-4 782.90.999 90.01155大黄素甲醚Y=56 492X106 3040.999 20.011605.4.2 精密度实验取混合对照品溶液连续进样6次，计算大黄素、大黄酚、大黄素甲醚峰面积的RSD分别为0.99%、0.95%、0.94%，表明仪器的精密度良好。5.4.3 稳定性试验取“5.3”项下供试品溶液，于配制后0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、18 h、24 h进样，计算大黄素、大黄酚、大黄素甲醚峰面积的RSD分别为1.56%、1.74%、2.42%，供试品溶液在24 h内稳定。5.4.4 重复性实验精密称取样品6份，平行制备并测定，计算得到样品中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的RSD分别为1.91%、3.03%、2.94%，表明该方法重复性较好。ABC质量标准Identification&SourceGendingSwhyenz 1245.4.5 加样回收实验取已知含量的样品粉末6份，每份约1.0 g，精密称定，按重复性结果分别精密加入大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品计算加样回收率及其RSD。5.5 样品含量测定结果10批不同产地红穿破石药材含量差异较大，茎、叶、根及根茎大黄素含量范围分别为0.2 4861.0 785 mg/g、0.0 9341.0 799 mg/g、1.2 8763.6 756 mg/g；茎、叶、根及根茎大黄酚含量范围分别为0.0 0800.1 681 mg/g、0.0 0250.0 552 mg/g、0.0 2580.6 854 mg/g；茎、根及根茎大黄素甲醚含量范围分别为0.0 0030.1 171 mg/g、0.0 1850.8 079 mg/g，叶的大黄素甲醚几乎没有，含量可忽略不计。结果见表5。A：大黄素 B.大黄酚 C.大黄素甲醚图7 对照品及红穿破石茎、叶、根及根茎HPLC图ABCABCABBCC红穿破石地上与地下部分质量分析研究125表5 红穿破石药材茎、叶、根及根茎含量测定结果（n=3）编号产地含量（mg/g）茎根及根茎叶大黄素大黄酚大黄素甲醚大黄素大黄酚大黄素甲醚大黄素大黄酚大黄素甲醚HCPS-1广西东兴市马路镇0.596 40.017 50.004 42.451 90.247 90.237 00.764 90.004 4-HCPS-2广西防城港市那梭镇0.765 20.020 00.001 22.692 90.251 50.188 00.558 50.002 8-HCPS-3广西防城港市上思县0.700 90.018 70.001 32.904 80.406 90.283 20.719 00.010 0-HCPS-4广西河池市东兰县0.317 00.025 90.000 31.968 90.080 40.075 00.170 90.002 5-HCPS-5广西钦州市钦南区那丽镇1.078 50.021 0-2.515 50.297 30.408 90.583 60.008 5-HCPS-6广西来宾市金秀县0.164 00.008 0-3.306 90.143 70.086 80.346 60.010 9-HCPS-7广西桂林市平乐县0.248 60.019 8-3.501 50.037 10.034 60.127 30.003 1-HCPS-8广西防城港市防城区0.877 80.016 30.003 91.287 60.025 80.018 51.079 90.006 4-HCPS-9广西南市宁兴宁区山口村0.223 70.168 10.085 23.675 60.476 90.639 90.093 40.055 20.005 4HCPS-10广西玉林市北流市六靖镇0.294 60.013 20.117 13.092 00.685 40.807 90.346 60.027 50.048 96 小结实验建立的红穿破石药材质量控制方法具有较好的专属性，研究结果可为药材的扩大使用和资源利用提供科学依据。经过对比红穿破石药材地上部分茎、叶与地下部分根及根茎的含量测定结果，发现地下部分根及根茎中的大黄素约为地上部分茎、叶的23倍，地下部分根及根茎中的大黄酚、大黄素甲醚的含量约为地上部分茎、叶的10倍。地上部分也具有一定的利用价值，若以3种主要蒽醌类成分作为检测性指标成分，可用多倍量的地上部分药材替代地下部分用于临床治疗，可提高红穿破石药用资源的综合效率，为红穿破石药材的资源综合利用提供参考。参考文献1谢新然，曲婷丽，许晋芳，等.黄芪地上、地下部分化学成分以及药效学比较J.光明中医，2016，31（15）：2 188-2 192.2张宇，赵玉梅，佟丽华，等.黄芪地下与地上部分有效成分比较J.中草药，1997（11）：651-653.3常思勤，李元静，山如娇，等.蒙古黄芪地下部分与地上部分药理活性比较J.天津药学，1990（4）：20-24.4游维丽.龙胆地上、地下部分药理作用的比较J.内蒙古中医药，2017，36（8）：135-136.5江蔚新，安胜利，郭立萍，等.龙胆地上、地下部分药理作用的比较分析J.哈尔滨商业大学学报（自然科学版），2003（1）：14-16.6梁超杨，王顺年，张洪亮.血风藤鉴别的研究J.中草药，1993，24（7）：371-372.7安丽敏，安丽华.中药显微鉴定常用制片方法概述J.哈尔滨医药，2016，36（1）：78-79.8陈海魁.几种植物组织石蜡制片技术的探讨J.安徽农业科学，2014，42（28）：9 677，9 681.