不同品牌试剂盒检测猪口蹄疫O型、A型抗体水平对比评估_高登军.pdf

通信作者，：收稿日期：；修回日期：作者简介：高登军（），男，内蒙古呼和浩特人，高级兽医师，主要从事动物疫病预防工作，：文章编号：（）不同品牌试剂盒检测猪口蹄疫型、型抗体水平对比评估高登军，刘国民，陈广林，高日明，武瑞雪，苍枫（正镶白旗动物疫控中心，内蒙古锡林郭勒 ；金宇保灵生物药品有限公司，内蒙古呼和浩特 ；内蒙古金迈诗生物科技有限公司，内蒙古呼和浩特 ）摘要：目前，商品化口蹄疫检测试剂盒众多，但质量评估方法并不完善，只是在使用时通过主观判断或者简单的数据对比来评估试剂盒的检测效果。采用细胞中和抗体和 型、型口蹄疫液相阻断 方法，对不同品牌试剂盒的符合率、敏感性和特异性进行检测，从中筛选优质试剂盒应用于临床，同时为制定相应的免疫程序提供科学依据。对种试剂盒的敏感性符合率、特异性进行数据对比发现，试剂盒 的试剂盒符合率最高，中和抗体效果表现为 试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒；以兰州兽医研究所研制的、型口蹄疫液相阻断 试剂盒为标准，结果表现为试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒，试剂盒与兰州兽医研究所试剂盒阳性符合率一致性最高。关键词：口蹄疫灭活疫苗；液相阻断酶联免疫吸附试验；中和抗体中图分类号：；文献标志码：口蹄疫（，）是由口蹄疫病毒（，）引起的一类急性、热性、高度接触性传染病，主要感染猪、牛、羊等偶蹄动物，我国将其列为一类动物传染病。疫苗免疫是预防口蹄疫的有效手段，研究表明，其通过有效提高猪群的抗体水平，降低了猪口蹄疫流行的严重程度和范围。口蹄疫病毒抗体检测可以客观评价猪群免疫口蹄疫疫苗后疫苗免疫效价和免疫效果，也是疾病预警的一种基本手段，可为科学制定免疫程序提供重要依据，是重大动物疫病防控中的一项必不可少的基础性工作。目前，市面上商品化的猪口蹄疫抗体检测试剂盒品类众多，但检测的结果和准确度却不尽相同，给使用者带来不小的困惑和麻烦。另外，试剂盒的质量评估体系也不太完善，大多只是在使用时通过主观感受或者简单的数据对比来评估试剂盒的检测效果。为评估不同厂家的猪型、型口蹄疫病毒抗体检测试剂盒的准确度，本试验使用细胞中和抗体和兰州兽医研究所 型、型口蹄疫液相阻断 抗体检测试剂盒作为参照标准，检测不同厂家口蹄疫抗体检测试剂盒符合率、敏感性和一致性，筛选可应用于临床的抗体检测试剂盒，同时评估免疫接种效果，以期为临床免疫前后抗体检测评估及制定合理的免疫程序提供参考。材料与方法材料猪 型、型口蹄疫抗体检测试剂盒选用个不同厂家的猪 型、型口蹄疫抗体检测试剂盒，分别标注为、，同时使用细胞中和抗体作为参照（以下简称细胞中和抗体）。同时，选用个不同厂家的猪型、型口蹄疫抗体检测试剂盒，分别标注为、，选用兰州兽医研究所口蹄疫型、型液相阻断 抗体检测试剂盒（以下简称兰兽研试剂盒）为标准。实验仪器与设备移液器、酶标仪、孔形血凝板、振荡器、恒温培养箱。血清样本型血清样本 份，其中猪血清 份，牛血清 份；型血清样本 份，其中猪血清 份，牛血清 份。样本均由内蒙古金迈诗检测中心提供。方法细胞中和抗体检测方法是将样品送入金宇生物 检测中心检测并出报告。液相阻断酶联免疫吸附试验（）方法主要参考说明书，并做部分修改。具体步骤如下：在 孔 形血凝板上依次用 稀释样本血清（猪血清递次稀释至第孔），按 孔加病毒抗原，孔病毒抗原对照孔仅加入 病毒抗原，振荡 ，封板，过夜，吸取稀释液按照 孔剂量转移至包被板上，后续操作按照说明书步骤进行操作；抗体阳性判定按照各试剂盒说明书的方法进行。年月第期兽医导刊 结果与分析以细胞中和抗体为参考比较不同品牌试剂盒从符合率数据分析可知：型中和抗体符合率排序为试剂盒试剂盒 试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒；型中和抗体符合率排序为试剂盒 试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒 试剂盒（表）。结合灵敏度、特异性数据分析可知，试剂盒 试剂盒 试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒。表不同品牌试剂盒以细胞中和抗体为参考测定的 型、型数据 试剂品牌 血清样本（猪牛）（）型 型 符合率（）（）型 型 灵敏度（）（）型 型 特异性（）（）型 型 试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒 （）（）注：以上比对结果以细胞中和为金标准。以兰兽研经典液相阻断试剂盒为参考比较不同品牌试剂盒从符合率数据分析可知，型液相阻断 抗体符合率排序为试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒；型液相阻断 抗体符合率排序为试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒（表）。结合灵敏度、特异性数据分析可知，试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒。表不同品牌试剂盒以兰兽研经典液相阻断参考测定型、型数据 试剂品牌 型样本 阳性 阴性 型样本 阳性 阴性 符合率（）（）型 型 灵敏度（）（）型 型 特异性（）（）型 型 试剂盒 试剂盒 试剂盒 试剂盒 试剂盒 讨论当前，国 际 上 通 常 用 液 相 阻 断 检 测（）口蹄疫结构蛋白抗体，国内除了用液相阻断 外，还用间接血凝试验、细胞中和抗体进行检测。研究证明，口蹄疫液相阻断 抗体检测技术具有良好的敏感性、快速诊断性和可重复性，现被大量应用于口蹄疫免疫抗体水平的检测中。对于口蹄疫保护性免疫反应，细胞免疫和体液免疫都很重要，只有两者协调机体才能产生更高的免疫效力。但在临床中大部分用 方法来评估体液免疫，其中 是检测 的国际标准方法，也是国际贸易检疫指定的方法之一。用细胞中和抗体来评估疫苗有效抗体，因临床上细胞培养困难而没有普及，但细胞中和抗体检测依然是疫苗生产企业评估疫苗效力最有效的方法之一。有研究表明，口蹄疫血清中和抗体滴度与攻毒保护力相关，牛的中和抗体与攻毒保护力呈正相关，猪的血清中和抗体与保护力相关性弱一些，但中和抗体滴度 提供了较好的保护。在一定范围内，疫苗有效抗原（）含量的高低可直接反映疫苗的免疫保护水平。实验研究表明，疫苗 与液相阻断 测定的抗体水平相关性在 兽医导刊 年第期以上。目前，大部分用液相阻断 方法检测抗体滴度，滴度 时，免疫动物能耐受攻击，属于全部保护范围；抗体滴度 时，免疫动物不能耐受攻击，属于不保护范围；介于两者之间，即 抗体滴度在 时，免疫动物不能完全耐受攻击，属于不完全保护范围，此时应进行免疫接种或加强免疫。本试验通过对种试剂盒的敏感性、符合率、特异性进行数据对比发现，试剂盒 符合率最高，试剂盒高于试剂盒；试剂盒与兰州兽研所试剂盒的阳性符合率一致性最高。但一般情况下应根据检测目的来选择不同的试剂盒，如进行流行病学监测时应侧重于选择阴性一致性较高的试剂盒，进行出入境动物检疫时应侧重于选择阳性一致性较高的试剂盒，在临床疫苗评估及预警时应该选择符合率更高、准确性更高的试剂盒做评估，以免出现假阳性或假阴性。参考文献（）：，：，：刘国民，王晓清，宋东，等 疫苗免疫接种与抗体检测对疫病防控的作用湖北畜牧兽医，（）：刘国民，林文耀，宋庆庆，等口蹄疫疫苗免疫程序大数据监测分析猪业科学，（）：，（）：易建钢，刘国民，吴布库，等 影响口蹄疫贴壁种毒质量因素的研究中国兽医杂志，（）：，（）：龚鹏飞，陈如意，陈文涛，等 猪口蹄疫免疫抗体两种不同 检测方法的比较当代畜牧，（）：侯英慧，杜季梅，王江辉 三种试剂盒检测猪口蹄疫 型抗体的对比试验中国动物检疫，（）：秦荣香，曹玉美，陆江，等不同口蹄疫疫苗免疫效果及检测方法评估 养猪，（）：刘国民，高日明，尚策，等口蹄疫灭活疫苗保存及稳定性研究兽医导刊，（）：，：，（）：，（.，；.，.，；.，.，）：，：；高登军刘国民陈广林等不同品牌试剂盒检测猪口蹄疫型、型抗体水平对比评估