WT1基因在急性白血病中的表达及临床价值.pdf

云南医药2 0 2 4年第45卷第2 期特征及其临床应J.实用药物与临床,2 0 2 0,2 3（5)：404 409.9 Pozowski P,Misiak P,Szymanska K,et al.Atypical Enhance-ment of Gd-BOPTA on the Hepatobiliary Phase in HepaticMetastasis from Carcinoid Tumor-Case Report J.Am JCase Rep,2020,21:e924280.10 Ichikawa S,Motosugi U,Suzuki T,et al.Imaging features ofhepatic inflammatory pseudotumor:distinction from colorec-tal liver metastasis using gadoxetate disodium enhancedmagnetic resonance imaging J.ABDOM RADIOL,2020,45(8):2400-2408.11郑婉静,熊美莲，陈晓丹，等.贝葡胺多期增强MRI对肿块性胆管细胞癌和不典型肝脓肿的鉴别诊断J.中.33.国医学影像杂志，2 0 2 2,30（5）：47 4-48 9.12 Tsili AC,Alexiou G,Naka C,et al.Imaging of colorectalcancer liver metastases using contrast-enhanced US,mul-tidetector CT,MRI,and FDG PET/CT:a meta-analysisJ.ACTA RADIOL,2021,62(3):302-312.13 Renzulli M,Clemente A,Ierardi AM,et al.Imaging of Color-ectal Liver Metastases:New Developments and Pending Is-suesJ.Cancers,2020,12(1):1-11.14王屹.结直肠癌肝转移瘤影像诊断J.中华肝胆外科杂志,2 0 2 2,2 6(7):50 0 -50 2.15】黄文冲,汤间仪.超声联合多参数MRI预测乳腺癌腋窝淋巴结转移价值研究J.云南医药，2 0 2 3,44（1）：77 80.临床研究WT1 基因在急性白血病中的表达及临床价值舒晓莉，赵宗美，汪天发，马晓波2（1.镇雄县人民医院检验科，云南镇雄6 57 2 0 0；2.昆明医科大学第一附属医院检验科，云南昆明6 50 10 0）摘要目的对急性白血病初诊患者的WT1基因表达进行研究和分析，探讨其临床意义。方法收集昆明医科大学第一附属医院2 0 2 1年1月-2 0 2 2 年12 月急性白血病初诊患者145例作为实验组，同期非白血病初诊患者6 9 例作为对照组，应用 RT-PCR法检测患者骨髓标本 WT1 基因表达。结果实验组与对照组之间的WT1 基因表达量有显著性差异（P0.05）；低危组、中危组及高危组比较，均存在显著性差异（P0.05）。结论WT1 基因在急性白血病初诊患者中高表达，可作为临床治疗和预后的评估指标。关键词急性白血病；WT1基因；微小残留病【中图分类号R733.71(1.Department of Laboratory Medicine,Peoples Hospital of Zhenxiong County,Zhenxiong Yunnan 657200,China;2.Department of Laboratory Medicine,First Hospital Affiliated to Kunming Medical University,Kunming Yunnan 650100,China)Abstract:Objective To study and analyze WT 1 gene expression in newly diagnosed acute leukemia patients and explore its clinicalsignificance.Methods 145 newly diagnosed patients with acute leukemia in The First Affiliated Hospital of Kunming Medical Universityfrom January 2021 to December 2022 were collected as experimental group,and 69 newly diagnosed non-leukemia patients in the sameperiod as control group.WT 1 gene expression in bone marrow samples of patients was detected by RT-PCR.Results WTI geneexpression quality were significantly different between the experimental and the control groups(P0.05);There were significant differences in low-risk,intermediate-risk and high-risk groups(P 0.05），见表1。表 1一般临床资料性别年龄组别例数男女中位年龄范围实验组0.05高危组2812中危组5734低危组6030合计14576对照组69401.2WT1检测方法1.2.1样本处理样本使用EDTA（Et h y le n e D i a m i n e T e t r a a c e t i cAcid，ED T A，即乙二胺四乙酸）抗凝，采集骨髓标本约1 2 mL。利用梯度离心方式对有核细胞进行分析。使用Trizol提取RNA。提取后尽快进行检测，由于核酸容易降解，因此如果不能立即进行检测时，要将提取好的核酸样本放置在8 0 冰箱保存。完成核酸提取之后，溶解核酸，取15uL进行后续检测。1.2.2扩增试剂准备把扩增试剂放置在室温环境中复温后离心，让管壁上粘附的试剂全部回到管中。根据说明书对反应体系进行配制，严格按照说明书操作，在配制的时候根据样本数量计算所需试剂体积。在PCR管中分装配制好的反应体积，10 uL/管。WT1 目标基因和Abelson鼠云南医药2 0 2 4年第45卷第2 期白血病病毒的致癌基因 Homolog（A b e ls o n M u r in e Le u-kemia Viral Oncogene Homolog，A BL）内参基因引物及探针序列，见表2。加样：分别取15uL参考品、对照品等，加人到反应体系中，盖上盖子，压紧，随后上机检测。表2 WT1及ABL的引物及探针序列基因引物、探针WT1上游引物5-CAGGCTGCAATAAGAGATATTTTAAGCT-3下游引物5-GAAGTCACACTGGTATGGTTTCTCA-3探针5-CTTACAGATGCACAGCAGGAAGCACACTG-3ABL上游引物5-TGGAGATAACACTCTAAGCATAACTAAAGGT-3下游引物探针5-CCATTTTTGGTTTGGGTTCACACCATT-31.2.3PCR 扩增（1）扩增条件：ABI7500荧光PCR检测仪，扩增条件：42，30 min；9 4，5m i n;(94,15s e c;60，6 0 s e c）40 个循环。反应体系为2 5l。在PCR循环第二步6 0 时收集荧光信号。（2）检测通道和参比荧光：ABI7500荧光PCR检测仪检测通道为：FAMT A M RA，参比荧光设定为none。1.3结果分析和处理应用荧光实时定量聚合酶链式反应RT-PCR对PWT1基因进行检测，对所得结果进行有效性分析和判定。为了进一步消除mRNA定量、RT-PCR反应效率的差异对结果的影响，实验中同步进行内参照ABL绝对拷贝数的定量检测，以WT1与ABL绝对拷贝数16452351304769462957序列5-GATGTAGTTGCTTGGGACCCA-31480的比值作为WT1基因的相对表达量，即WT1基因表20 74达水平=WT1拷贝数/ABL拷贝数10 0%。15 761.4统计学处理14 80本研究数据采用SPSS26.0进行分析，各项分组19810.05验对结果进行分析，P0.05表示有显著性差异且具有统计学意义。2结果2.1WT1基因在急性白血病患者中的表达对145例急性白血病初诊患者骨髓标本进行WT1基因检测，WT1基因表现为过表达，其表达量中位水平为47.2 8%，而对照组6 9 例非急性白血病患者骨髓标本中，WT1基因表达量中位水平为0.17%，二者之间存在显著性差异，有统计学意义（P0.05），见表3。表3实验组和对照组WT1表达水平n（%）】组别例数WT1表达量实验组145对照组69Z47.28-11.1780.17P0.001危组WT1 基因表达进行了比较，结果显示低危组与中、高危组WT1基因表达有显著性差异，因此，可将云南医药2 0 2 4年第45卷第2 期2.2低危组、中危组和高危组组间比较145例AL患者中，低危、中危和高危分别为6 0、57和2 8 例。将3个组的WT1基因表达量分别作比较。结果显示，低危组与中危组和高危组均存在显著性差异（P0.05），而中危组与高危组的基因表达量也有统计学意义（P0.05），见表5。表 5145 例急性白血病患者 WT1 基因表达与性别比较n（%）性别例数比例WT1表达量男76女692.4VWT1基因表达与患者年龄的关系将145例患者分为46 岁及以上和46 岁以下两个组，46 岁以上组WT1表达量为41.52%，而46 岁以下组WT1表达量为56.9 0%，无明显差异（P0.05),见表6。表6 46 岁以上和46 岁以下患者 WT1 基因表达组间比较n（%)年龄例数WT1表达量467046753讨论WT1基因位于人体染色体11p13，内含10 个外显子，长度约56 kb，编码人的肾母细胞瘤蛋白（Wilmstumor protein)3。研究发现4-6，WT1 可以看作是一个泛白血病基因，在急性白血病时存在高表达，其表达水平的高低在指导急性白血病诊断、治疗、预测复发以及预后评估等方面有极大的临床使用价值，在国内外受到高度重视5.6。WTI 基因参与调控骨髓造血细胞的增殖和分化，在骨髓白血病细胞内的表达远远超过了正常骨髓细胞10 3 10 5倍，具有较高的表达水平。本文采用RT-PCR定量测定WT1基因，敏感性.35.好、特异性高、结果可靠。WT1 基因表达与患者性别、年龄等因素没有相关性，145例初诊AL普遍存在高表达（高表达率8 9.5%），AL患者和非AL患者的WT1基因表达中位水平分别为47.2 8%和0.17%，二者有显著性差异，具有统计学意义（P0.05）。W T 1基因在AL初诊患者骨髓细胞中高表达，这为WT1基因作为急性白血病诊断、治疗和预后的重要指标奠定了理论依据。微小残留病变（Minimal Residual Disease，M RD）中危与是指白血病患者进行诱导治疗缓解后，残留于身体中的极少白血病细胞的数量。MRD 监测是诊断和治疗急P=0.001性白血病的关键因素7-9。本研究将低危组与中、高P=0.001P=0.001P=0.001一52.451.1247.651.041.5256.90P=0.002一Z-0.5380.590ZP-1.6100.107WT1 基因作为MRD的监测基因之一。WT1 基因在AL初诊患者及复发患者中都存在高表达，在白血病的危险度分层中也起着重要作用，对白血病化疗或者骨髓移植后的 MRD 监测也有重要的临床价值，故而可作为AL临床诊断、治疗和预后的评价指标之一。参考文献：1王晓亮，李丽梅.WT1基因在AML中的意义J.中国医药生物技术,2 0 2 2,17(1):47-49.P2李乾鹏,曹荣旋,张俊英,等.WT1 基因在急性髓细胞性白血病微小残留病检测中的应用J.国际检验医学杂志，2022,43(3):313-316.3 Liu J.Minimal residual disease monitoring and preemptive im-munotherapies for frequent 11q23 rearranged acute leukemiaafter allogeneic hematopoietic stem cell transplantation J.Ann Hematol,2021,100(5):1267-1281.4程焕臣,刘生伟,赵雪飞,等.急性白血病患者WT1 基因表达水平及其临床意义J.白血病.淋巴瘤,2 0 17,2 6（1)：33-36.5刘新鑫，孔军,潘信安，等.WT1基因定量动态监测预测伴MLL基因重排急性髓系白血病造血干细胞移植后复发的临床价值J.中华血液学杂志,2 0 2 2,43（9）：7 8 5-7 8 7.6 Gao MG.The predictive value of minimal residual diseasewhen facing the inconsistent results detected by real-timequantitative PCR and flow cytometry in NPM1-mutated a-cute myeloid leukemia J.Ann Hematol,2020,99(1):73 82.7 Deng DX.Wilms tumor gene 1 is 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