miR-660-5p靶向TET2促进乳腺癌的增殖、迁移和侵袭.pdf

论 著第 37 卷第 1 期医学信息Vol.37 No.12024 年 1 月Journal of Medical InformationJan.2024miR-660-5p 靶向 TET2 促进乳腺癌的增殖、迁移和侵袭张秀娟1袁何莉莉2袁田 蜜3袁李 新2渊1.复旦大学附属华东医院普外科袁上海200040曰2.荆门市人民医院甲乳外科袁湖北 荆门448000曰3.荆门市公安局法医鉴定中心袁湖北 荆门448000冤摘要院目的研究miR-660-5p/TET2通过PI3K/AKT/mTOR信号通路调节乳腺癌细胞增殖尧凋亡尧迁移和侵袭的机制遥方法收集2021年1月-2022年6月荆门市人民医院65例乳腺癌患者的乳腺癌组织和邻近正常组织样品袁qPCR实验检测miR-660-5p在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平袁Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验分析miR-660-5p与患者临床病理特征的相关性曰CCK8尧流式细胞术和Transwell方法检测miR-660-5p对乳腺癌细胞增殖尧凋亡尧迁移和侵袭情况曰双荧光素酶报告基因和蛋白质印迹实验明确miR-660-5p与TET2的关系曰Western blot尧CCK8和Transwell实验明确miR-660-5p通过靶向TET2调节乳腺癌的进程曰Western blot实验检测miR-660-5p/TET2是否激活PI3K/AKT/mTOR信号通路曰动物成瘤实验证明敲低miR-660-5p在乳腺癌中的作用遥结果miR-660-5p在乳腺癌组织中表达上调袁且miR-660-5p的高表达与乳腺癌的淋巴结转移渊=0.003冤袁晚期TNM分期渊=0.009冤和血管浸润渊=0.018冤密切相关曰敲低miR-660-5p可抑制乳腺癌细胞增殖尧迁移和侵袭袁诱导乳腺癌细胞凋亡曰TET2是miR-660-5p的直接靶标袁干扰TET2可以部分逆转敲低miR-660-5p对乳腺癌细胞恶性潜能的抑制作用曰miR-660-5p下调TET2并激活PI3K/AKT/mTOR信号通路曰敲低miR-660-5p可抑制体内肿瘤生长遥结论miR-660-5p通过靶向TET2和PI3K/AKT/mTOR信号通路来促进乳腺癌的进程袁可能是治疗乳腺癌的潜在靶标遥关键词院乳腺癌曰miR-660-5p曰TET2曰PI3K/AKT/mTOR信号通路中图分类号院R736.3文献标识码院ADOI院10.3969/j.issn.1006-1959.2024.01.016文章编号院1006-1959渊2024冤01-0095-09miR-660-5p Targets TET2 to Promote Breast Cancer Proliferation,Migration and InvasionZHANG Xiu-juan1,HE Li-li2,TIAN Mi3,LI Xin2(1.Department of General Surgery,East China Hospital,Fudan University,Shanghai 200040,China;2.Department of Thoracic and Breast Surgery,Jingmen Peoples Hospital,Jingmen 448000,Hubei,China;3.Forensic Appraisal Center of Jingmen Public Security Bureau,Jingmen 448000,Hubei,China)Abstract：Objective To study the mechanism of miR-660-5p/TET2 regulating the proliferation,apoptosis,migration and invasion of breast cancer cellsthrough PI3K/AKT/mTOR signaling pathway.Methods The samples of breast cancer tissues and adjacent normal tissues of 65 patients with breastcancer in Jingmen Peoples Hospital from January 2021 to June 2022 were collected.The expression level of miR-660-5p in breast cancer tissues andcell lines was detected by qPCR.Kaplan-Meier survival analysis and log-rank test were used to analyze the correlation between miR-660-5p andclinicopathological features of patients.The effects of miR-660-5p on the proliferation,apoptosis,migration and invasion of breast cancer cells weredetected by CCK8,flow cytometry and Transwell methods.The relationship between miR-660-5p and TET2 was determined by dual luciferase reportergene and Western blotting.Western blot,CCK8 and Transwell experiments were used to confirm that miR-660-5p regulated breast cancer progressionby targeting TET2.Whether miR-660-5p/TET2 activated PI3K/AKT/mTOR signal pathway was detected by Western blot experiment.The effect ofknockdown of miR-660-5p in breast cancer was further proved through animal tumor formation experiment.Results The expression of miR-660-5p wasup-regulated in breast cancer tissues,and the high expression of miR-660-5p was closely related to the lymph node metastasis(=0.003),advancedTNM staging(=0.009)and vascular invasion(=0.018)of breast cancer.Knockdown of miR-660-5p inhibited breast cancer cell proliferation,migrationand invasion,and induced breast cancer cell apoptosis.TET2 was the direct target of miR-660-5p,interference with TET2 could partially reverse theinhibitory effect of knockdown miR-660-5p on the malignant potential of breast cancer cells.miR-660-5p down-regulated TET2 and activatedPI3K/AKT/mTOR signaling pathway.Knockdown of miR-660-5p inhibited tumor growth.Conclusions miR-660-5p promotes breast cancerprogression by targeting TET2 and PI3K/AKT/mTOR signaling pathways,and may be a potential target for breast cancer treatment.Key words：Breast cancer;miR-660-5p;TET2;PI3K/AKT/mTOR signaling pathway基金项目：湖北省荆门市科技计划基金项目（编号：2020YFYB012）作者简介：张秀娟（1987.3-），女，上海人，本科，护师，主要从事甲乳肿瘤基础研究通讯作者：李新（1980.6-），男，湖北荆门人，硕士，副主任医师，主要从事甲乳肿瘤基础研究窑论著窑95论 著第 37 卷第 1 期医学信息Vol.37 No.12024 年 1 月Journal of Medical InformationJan.2024乳腺癌（breast cancer，BC）是女性中常见的高危恶性肿瘤，转移是乳腺癌患者死亡的常见原因。microRNA 是一类非编码 RNA，长度为 1825 个核苷酸，参与许多癌症的发生和发展1，通过在转录后水平上调节基因的表达来发挥功能2，3。miRNA 的异常表达可以作为多种癌症的诊断指标和预后生物标志物4，miR-660-5p 与乳腺癌细胞的增殖，迁移和侵袭密切相关5。TET（ten-eleven translocation）蛋白家族是一类双加氧酶，包括 3 个成员（TET1，TET2和 TET3）6，7。TET2 在癌症中起抑制作用8，可促进乳腺癌的进展。PI3K/AKT/PKB/mTOR 信号通路与细胞分化，增殖和凋亡密切相关9-11，TET2 调节 PI3K/AKT 通路促进冠心病进展12，TET1 通过 PI3K/AKT通路参与生殖衰老过程13。最近的研究表明14-16，抑制 PI3K/AKT/mTOR 信号传导是治疗乳腺癌的有效方法，但目前尚未阐明 TET 与 PI3K/AKT/mTOR 信号通路在乳腺癌中的作用机制。为此，本研究拟探索 miR-660-5p/TET2 通过 PI3K/AKT/mTOR 信号通路调节乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的调控机制，为乳腺癌的治疗提供新的靶点和依据。1材料与方法1.1 标本来源 选取 2021 年 1 月-2022 年 6 月荆门市人民医院 65 例从未在接受过化学、放疗或其他治疗的乳腺癌患者，获取 65 组乳腺癌组织和邻近的正常组织样品。获取组织后立即保存在-80 益冰箱中。本研究得到荆门市人民医院伦理委员会的批准，所有患者在进行根治性切除术之前均签署知情同意书。1.2 细胞培养 人乳腺癌上皮细胞系 MCF-10A 和人乳腺癌细胞系 MCF-7 和 MDA-MB-231 均获自美国典型培养物保藏中心（ATCC，USA）。MCF-10A 细胞系用专用培养基培养（CM-0525）。10%胎牛血清的 DMEM（Gibco）用于培养乳腺癌细胞系。所有细胞系均在 37 益的 5%CO2培养箱中培养。1.3 细 胞 转 染TET2 特 异 性 小 分 子 干 扰 RNA（si-TET2），阴性对照（negative control，si-NC），TET2过 表 达 质 粒（NCBI参 考 序 列：NM_001127208.3）和空载体（vector）是从上海GenePharma 公司购买。miR-660-5p mimic，mimicNC，miR-660-5p inhibitor 和 inhibitor NC 购自广州Ribobio 公司。转染时使用 Lipofectamine 3000（Invitrogen）进行转染。1.4 qRT-PCR 使用 TRIzol 溶液（Invitrogen）提取细胞总 RNA 样品。逆转录使用 M-MLV 逆转录酶试剂盒（Invitrogen）和 All-in-OneTMmiRNA First StandcDNA 合成试剂盒（GeneCopoeia）进行。下面列出了从 GeneCopoeia 购买的特殊引物。SYBR PremixTaqTM域试剂盒（Takara）用于 PCR 反应。通过 2-驻驻Ct方法分析了 miR-660-5p（以 U6 为内参）和 TET2（以 GAPDH 为内参）的表达量17。miR-660-5p（正向，5-TACCCATTGCATATCGGAGTTG-3；反向，通用 引 物），TET2（正 向，5-GGACTGAGCTGCT原GAATTCAACT-3；反向，5-CCTCAACATGGTTG原GTTCTATCC-3），U6（正 向，5 -CTCGCTTCG原GCAGCACA-3；反 向，5-AACGCTTCAC原GAATTTGCGT-3）和 GAPDH（正向，5-CTGGGC原TACACTGAGCACC-3；反 向，5-AAGTGGTCGTTGAGGGCAATG-3）。1.5 Cell counting kit-8（CCK8）CCK8 试剂盒（Sigma）用于分析乳腺癌细胞的增殖能力。将乳腺癌细胞（5000 个细胞/孔）接种到 96 孔板中过夜。转染 24 h后，将 10 滋l CCK8 溶液与乳腺癌细胞在室温下孵育2 h。使用酶标仪测量在 450 nm 下吸光度值。1.6 流式细胞术 将乳腺癌细胞（3伊105细胞/孔）铺板到 6 孔板中过夜。转染 72 h 后，使用冷磷酸盐缓冲液（PBS）清洗乳腺癌细胞两次。乳腺癌细胞同时用5 滋l Annexin V 组合的 FITC 和 PI（Solarbio）染色，以标记磷脂酰丝氨酸（PS）和 DNA 含量。流式细胞仪用于区分早期（FITC+/PI-）和晚期凋亡细胞（FITC+/PI+）与正常和坏死细胞。1.7 细胞迁移和侵袭 8 滋mol/L 的 Transwell 小室（Corning）用于 Transwell 迁移和侵袭实验。在Transwell 迁移实验中，转染 24 h 后，将乳腺癌细胞（1伊104细胞/100 滋l 无血清培养基）接种到上室中，下室加入 500 滋l 完全培养基。24 h 后，用 4%多聚甲醛（Sangon Biotech）固定 20 min，并用结晶紫（Sangon Biotech）染色 10 min。对 5 个随机视野中迁移的乳腺癌细胞的数量进行计数并取平均值。在侵袭试验中，将 40 滋l BD Matrigel 基质在 1颐8 的比例稀释，再接种乳腺癌细胞，其余步骤与迁移相同。1.8 双荧光素酶报告基因实验 TET2 的 3UTR 中的部分序列（基因 ID：54790；3UTR 1502 位点至1914位；413bp），克隆到 pmirGLO 载体（Promega）中以构建 TET2 WT 或 TET2 MUT。在 24 孔板中的乳96论 著第 37 卷第 1 期医学信息Vol.37 No.12024 年 1 月Journal of Medical InformationJan.2024腺癌细胞中转染 10 nmol/L miR-660-5p mimic 或mimic NC 和 40 ng TET2 WT 或 TET2 MUT。转染48 h 后，用双荧光素酶报告基因试剂盒（Promega）和酶标仪（Plate Chameleon V）测量荧光素酶活性。海肾荧光素酶活性作为对照。1.9 Western blot乳 腺 癌 细 胞 用 RIPA 裂 解 液（Beyotime）裂解。通过 SDS-PAGE 凝胶分离蛋白质样品。将蛋白质转移到 PVDF 膜（millipore）上。封闭1 h 后，用 以 下 抗 体 TET2（ab94580，Abcam），GAPDH（ab37168，Abcam），p-AKT（T308，ab38449，Abcam），AKT（ab8805，Abcam），p-mTOR（ab109268，Abcam）或 mTOR（ab2732，Abcam）孵育过夜，HRP 结合的二抗（ab6721，Abcam）孵育 1 h。用增强的化学发光（ECL）系统分析蛋白质条带的强度。1.10 小鼠异种移植实验 裸鼠异种移植实验得到荆门市人民医院动物研究委员会的批准。使用 miR-660-5p inhibitor 或 inhibitor NC 转染 MCF-7 细胞或未转染的 MCF-7 细胞建立肿瘤异种移植模型。将上述 MCF-7 细胞（2伊106细胞/200 滋l PBS）皮下注射到裸鼠（=5）背部的右侧，每周测量一次肿瘤体积。4 周后，处死裸鼠，记录肿瘤的重量。取肿瘤用于检测 miR-660-5p，TET2 的表达水平以及 PI3K/AKT/mTOR 信号通路蛋白的表达水平。1.11 统计学方法 每个实验至少重复 3 次以上。所有统计数据以（依）表示，使用检验和单向方差分析（ANOVA）。Kaplan-Meier 生存分析采用 Log-rank检验方法，主要检测乳腺癌患者长期生存率。约0.05表示差异有统计学意义。2结果2.1 miR-660-5p 在乳腺癌组织中的表达情况qPCR 实验发现，miR-660-5p 在乳腺癌组织中表达高于癌旁组织（图 1A）；miR-660-5p 高表达的患者存活率降低（图 1B）。正常人乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞中 miR-660-5p 也上调（图 1C）。单因素分析显示，miR-660-5p 的表达与年龄、肿瘤大小和分化没有明显的相关性，而与淋巴结转移、临床 TNM 分期和血管浸润有关，见表 1。项目年龄（岁）逸50约50肿瘤大小（cm）逸3约3淋巴结转移是否40（61.54）25（38.46）42（64.62）23（35.38）39（60.00）26（40.00）高（=32）22（55.00）10（40.00）23（54.77）9（39.13）25（64.10）7（26.92）低（=33）18（45.00）15（60.00）19（45.23）14（60.87）14（35.90）19（73.08）miR-660-5p 表达表1乳腺癌患者中miR-660-5p的表达水平 渊%冤项目TNM 分期玉域期芋郁期分化高/中低血管侵入是否35（53.85）30（46.15）28（43.08）37（56.92）29（44.62）36（55.38）高（=32）12（34.29）20（66.67）10（35.71）22（59.46）19（65.52）13（36.11）低（=33）23（65.71）10（33.33）18（64.28）15（40.54）10（34.48）23（63.89）miR-660-5p 表达注：A：qRT-PCR 检测 miR-660-5p 的基因表达水平；B：Kaplan-Meier 分析和 log-rank 检验方法分析乳腺癌患者的存活率；C：qRT-PCR 检测 miR-660-5p 的基因表达水平；*约0.05图1 miR-660-5p在乳腺癌组织中的表达情况ABC97论 著第 37 卷第 1 期医学信息Vol.37 No.12024 年 1 月Journal of Medical InformationJan.20242.2 miR-660-5p inhibitor 对乳腺癌细胞的影响miR-660-5p inhibitor 可以显著抑制 miR-660-5p 的表达（图 2A、图 2B）。CCK8 实验显示，乳腺癌细胞中inhibitor 可以抑制乳腺癌细胞的增殖（图 2C、图2D）。miR-660-5p inhibitor 还可以加速细胞的凋亡（图 2E）。miR-660-5p inhibitor 可以明显抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭（图 2F图 2I）。2.3 TET2 是 miR-660-5p 的直接靶标 TargetScan软件预测下游靶基因，根据其序列构建双荧光素酶质粒（图 3A），双荧光素酶报告基因实验发现miR-660-5p mimic 可明显降低荧光素酶活性（图 3B、图 3C）。蛋白质印迹发现 miR-660-5p mimic可以降低 TET2 蛋白的表达水平，inhibitor 可以增加TET2 蛋白的表达（图 3D、图 3E）。乳腺癌细胞和组织中 TET2 的表达水平都较正常乳腺上皮细胞低（图 3F、图 3G）；TET2 的表达与 miR-660-5p 的表达呈负相关（图 3H）。2.4 过表达 TET2 抑制乳腺癌细胞的生长、迁移和侵袭 实验构建成功表达 oeTET2 的质粒（图 4A、图4B）。过表达 TET2 可以降低乳腺癌细胞的增殖能力（图 4C、图 4D），细胞凋亡显著增加（图 4E），抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭（图 4F、图 4G）。2.5 干扰 TET2 抑制 miR-660-5p inhibitor 介导乳腺癌的增殖、迁移和侵袭 si-TET2 抑制 miR-660-5pinhibitor 引起上调的 TET2 蛋白（图 5A）、细胞增殖（图 5B、图 5C）和细胞凋亡（图 5D）；si-TET2 部分挽救被 miR-660-5p inhibitor 所抑制的细胞迁移和侵袭（图 5E、图 5F）。2.6 miR-660-5p 靶向 TET2 参与乳腺癌细胞的分化miR-660-5p inhibitor 抑制 N-cadherin 的表达，si-TET2 部分恢复 N-cadherin 的蛋白质表达；而E-cadherin 的表达与 N-cadherin 呈相反的趋势（图 6A、图 6B）。注：A、B：qRT-PCR 检测 miR-660-5p 的表达水平；C、D：CCK8 实验在 24 h、48 h 和 72 h 分别检测 450 nm 的吸光度值；E：流式细胞术评估转染 72 h 后的细胞凋亡情况；FI：Transwell 实验评估乳腺癌细胞的迁移和侵袭；*约0.05图2 miR-660-5p inhibitor对乳腺癌细胞的影响ABCDEFGHI98论 著第 37 卷第 1 期医学信息Vol.37 No.12024 年 1 月Journal of Medical InformationJan.2024ABCDEFGH注：A：预测 miR-660-5p 和 TET2 WT 之间的结合位点；B、C：报告基因实验检测荧光素酶活性；D、F：Western 免疫印迹检测 TET2 的表达水平；G：qRT-PCR 检测 TET2 的表达；H：分析 miR-660-5p 与 TET2 之间的关系；*约0.05图3 TET2是miR-660-5p的直接靶标注：A、B：免疫印迹实验检测 TET2 的表达；C、D：CCK8 实验检测吸光度值；E：流式细胞术评估的细胞凋亡；F、G：transwell 方法评估细胞迁移和侵袭；*约0.05图4过表达TET2抑制乳腺癌细胞的生长尧迁移和侵袭ABCDEFG99论 著第 37 卷第 1 期医学信息Vol.37 No.12024 年 1 月Journal of Medical InformationJan.20242.7 miR-660-5p 下 调 TET2 并 激 活 PI3K/AKT/mTOR 信号通路 miR-660-5p inhibitor 下调 AKT和 mTOR 的磷酸化水平，总的 AKT 和 mTOR 蛋白表达没有变化，而 si-TET2 部分挽救 AKT 和 mTOR的磷酸化（图 7A、图 7B）。2.8 miR-660-5p inhibitor 抑制体内肿瘤生长 miR-660-5p inhibitor 的肿瘤体积和重量均低于 inhibitorNC 和对照组（图 8A、图 8B）。miR-660-5p 表达也明显下降（图 8C），而 TET2 蛋白的表达明显上调（图 8D）。miR-660-5p inhibitor 中 AKT 和 mTOR 的磷酸化水平也显著降低（图 8E）。注：A：Western blot 检测 TET2 的表达水平；B、C：CCK8 实验检测吸光度值；D：流式细胞术评估细胞凋亡；E、F：transwell 分析迁移和侵袭能力；*约0.05图5干扰TET2抑制miR-660-5p inhibitor介导乳腺癌的增殖尧迁移和侵袭ABCDEF注：A、B：Western blot 检测 E-cadherin 和 N-cadherin 的蛋白表达；*约0.05图6 miR-660-5p靶向TET2参与乳腺癌细胞的分化AB100论 著第 37 卷第 1 期医学信息Vol.37 No.12024 年 1 月Journal of Medical InformationJan.20243讨论乳腺癌是女性中常见的高危恶性肿瘤，转移是乳腺癌患者死亡的常见原因。因此，研究乳腺癌的发病机制对于乳腺癌的治疗至关重要。miR-660-5p和 TET2 在乳腺癌中有重要的作用，但具体调节机制不清。本研究发现，miR-660-5p 可以靶向结合TET2，激活 PI3K/AKT/mTOR 信号通路传导介导乳腺癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭，可能是治疗乳腺癌新的潜在靶标。miRNA 失调与癌症的发生和发展有关18，19。miRNA 作为癌基因或抑癌基因，可抑制与增殖、凋亡、迁移、侵袭和分化有关的下游基因的表达，从而注：A、B：蛋白质印迹检测 AKT 及其磷酸化、mTOR 及其磷酸化蛋白质表达水平；*约0.05图7干扰TET2抑制miR-660-5p inhibitor介导PI3K/AKT/mTOR信号传导AB注：A：每周记录一次肿瘤的体积大小；B：称量小鼠异种移植肿瘤；C：qRT-PCR 检测 miR-660-5p 的表达水平；D：Western blot 测定 TET2的蛋白表达水平；E：Western blot 检测 p-AKT、AKT、p-mTOR 和 mTOR 的蛋白表达水平；*约0.05图8 miR-660-5p inhibitor抑制体内乳腺癌肿瘤生长ABCDE101论 著第 37 卷第 1 期医学信息Vol.37 No.12024 年 1 月Journal of Medical InformationJan.2024调节细胞的生物学过程20。在许多类型的癌症中，miR-660-5p 的表达均升高。miR-660-5p 在乳腺癌细胞中上调，并通过靶向转录因子 CP2（TFCP2）促进乳腺癌细胞的增殖和转移21。miR-660-5p 在骨肉瘤中过表达，并且通过下调 FOXO1 促进骨肉瘤细胞的增殖和侵袭22。非小细胞肺癌（NSCLC）患者的血浆和外泌体中 miR-660-5p 的表达增加，而 miR-660-5p 可能通过降低 KLF9 的表达来促进 NSCLC细胞的增殖和转移23。抑制 miR-660-5p 的表达可抑制乳腺癌细胞的进展21。本研究中，乳腺癌组织中miR-660-5p 的富集程度更高，且 miR-660-5p 表达的增加与淋巴结转移，晚期 TNM 分期和血管浸润以及预后不良密切相关。在乳腺癌细胞中干扰 miR-660-5p 可以抑制细胞的生长和转移并促进了细胞凋亡，而 miR-660-5p 在乳腺癌中的致癌作用与先前的研究报道一致21。但是，miR-660-5p 介导乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制仍不清楚。转录因子 CP2（TFCP2）是 miR-660-5p 的靶标，而miR-660-5p 通过靶向 TFCP2 促进了乳腺癌的发展21。在本研究中，通过 TargetScan 软件预测了miR-660-5p 的另一个靶标 TET2，双荧光素酶报告基因检测验证了 miR-660-5p 与 TET2 之间的靶向关系，在 MCF-7 和 MDA-MB-231 细胞中，miR-660-5p 对 TET2 的表达有负调节作用。TET2 是 TET 双加氧酶家族的成员，也称为DNA 脱甲基酶。TET2 的突变或抑制通过增强肿瘤抑制基因的甲基化水平并下调其表达水平来促进肿瘤发生。TET2 的突变与血液系统恶性肿瘤的发生密切相关24。干扰 TET2 促进了前列腺癌细胞的增殖和迁移25。抑制 TET2 促进了乳腺癌的发展26，27。本研究表明，TET2 的上调抑制了乳腺癌细胞的生长、迁移和侵袭，但诱导了细胞凋亡。敲低 TET2 可部分抵消 miR-660-5p inhibitor 对乳腺癌细胞恶性行为的抑制作用。在乳腺癌中经常发现 PI3K/AKT/mTOR 信号通路的异常激活或突变28。有许多研究报道了乳腺癌中使用 PI3K/AKT/mTOR 信号通路的抑制剂，可以改善患者的预后29-32。而干扰 TET2 可以减轻由抑制miR-660-5p 引起的 p-AKT 和 p-mTOR 下调的磷酸化水平。综上所述，miR-660-5p 在乳腺癌中有致癌作用。miR-660-5p 通过下调 TET2 激活 PI3K/AKT/mTOR 信号传导，从而促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，并抑制其凋亡。因此，miR-660-5p/TET2 轴可能是乳腺癌治疗的潜在靶标。参考文献院1Hill M,Tran N.miRNA interplay:mechanisms and conse鄄quences in cancerJ.Dis Model Mech,2021,14(4):dmm047662.2Stavast CJ,Erkeland SJ.The Non-Canonical Aspects 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