枳实薤白桂枝汤标准煎液对异丙肾上腺素致心肌缺血大鼠的影响.pdf

药理毒理51Pharmacy andChineseMateriaMedica2023;14(6)中药与临床积实燕白桂枝汤标准煎液对异丙肾上腺素致心肌缺血大鼠的影响林紫薇 2，武柳君12，曹科”，谢晓芳 2，彭成2摘要】目的：考察积实蕴白桂枝汤标准煎液（ZXGD）对异丙肾上腺素（ISO)致心肌缺血大鼠的影响。方法：连续7天灌胃ZXGD12.2、6.1g k g 进行预防给药，第6，7 d腹腔注射异内肾上腺素（8 5mgkg）制备大鼠心肌缺血模型，检测大鼠心电图，收集血液进行血清心肌酶学和血液流变学指标检测，HE染色检测心肌损伤程度。结果：与空白组相比，模型组大鼠心电图ST段抬高，全血粘度和血浆粘度均显著升高(p0.01)，心肌明显坏死，血清心肌酶均显著升高(p0.01);与模型组比较，ZXGD显著降低了ISO所致大鼠心电图ST段抬高。同时，ZXGD减轻了心肌损伤，降低了血清肌酸激酶MB(CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）(p 0.0 1)水平，并降低了全血粘度和血浆粘度(p0.05)。高剂量组（12.2 g*kg）、低剂量组（6.1gkg）均有显著药效。结论：ZXGD能预防ISO所致的大鼠心肌缺血，可改善大鼠血液凝集状态，保护心脏功能，减轻心肌损伤。关键词 积实蕉白桂枝汤；心肌缺血；血液流变学中图分类号 R285.5文献标识码】A文章编号 16 7 4-92 6 X(2023)05-009-04Effect of Zhishi Xiebai Guizhi Decoction on isoproterenol induced myocardial ischemia in rats/LIN Zi-wei2in rats/LIN Zi-weil2,WU Liu-jun-,CAO Ke,XIE Xiao-fang,PENG Cheng/l(I.State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 611137,Sichuan;2.School of Pharmacy,Chengdu University ofTraditional Chinese Medicine,Chengdu 611137,Sichuan;3.Chengdu Huashen Technology Group Co.,Ltd.,Chengdu 610000,Sichuan)Abstract Objective:To observe the effect of standard liquid of Zhishi Xiebai Guizhi Decoction(ZXGD)on myocardialischemia induced by isoproterenol(ISO)in rats.Method:After 7 days of prophylactic administration by intragastric administrationof ZXGD(12.2、6.1 g k g ),ISO (8 5 m g:k g)w a s i n j e c t e d i n t r a p e r i t o n e a l l y o n t h e 6 t h a n d 7 t h d a y t o p r e p a r e r a t m o d e l o fmyocardial ischemia.Cardiac function was assessed by ECG and serum myocardial enzyme levels.Changes in hemorheologyindexes were detected,and myocardial tissue damage was detected by HE staining.Result:Compared with blank group,STsegment elevation,whole blood viscosity and plasma viscosity were significantly increased in model group(p 0.01).Myocardialnecrosis and serum myocardial enzymes were significantly increased in model group than that of blank group(p 0.01).Comparedwith model group,ZXGD significantly reduced ST segment elevation induced by isoproterenol.Meanwhile,ZXGD alleviatedmyocardial damage,reduced serum creatine kinase MB(CK-MB)and lactate dehydrogenase(LDH)levels(p 0.01),and reducedwhole blood viscosity and plasma viscosity(p 0.05).High dose group(12.2 g kg)and low dose group(6.1 g:kg)had significanteffects.Conclusion:ZXGD can prevent myocardial ischemia caused by ISO,improve blood viscosity,protect cardiac function andreducemyocardial injury inrats.Key words Zhishi Xiebai Guizhi Decoction;myocardial ischemia;hemorheology基金项目】国家中医药多学科交叉创新团队项目（ZYYCXTD-D-202209）；四川省中医药科技产业创新团队（2 022C001）；四川省科技计划项目（2 0 18 SZ0008）【作者单位】1.成都中医药大学西南特色中药资源国家重点实验室，四川成都，6 11137；2.成都中医药大学药学院，四川成都，6 11137；3.成都华神科技集团股份有限公司，四川成都，6 10 0 0 0作者简介】林紫薇（1998-），女，四川，在读硕士研究生，主要从事药物药效与毒理研究Tel:18708294764 Email:通讯作者 彭成（196 4-），男，四川，博士，研究员，博士生导师，主要从事中药药理与毒理研究Tel:028-61800005 Email:收稿日期 2 0 2 3-0 2-2 1积实白桂枝汤由张仲景所创，记载于金要略，由积实、白、瓜萎、桂枝、厚朴组成，主治“胸痹心中痞，留气结在胸，胸满，胁下逆抢心之证。而根据中医对“胸痹 的认识与论述，该病多见于现代医学冠心病心绞痛、心肌梗死等。在中医现代临床，积实燕白桂枝汤也常用于治疗冠心病。现代药理研究证实，积实白桂枝汤（ZXGD）具有保护心血管、抗氧化、抗炎、抗调亡、抗缺氧、抗凝、抗纤维化、改善血液流变学、调节神经递质等多种活性2-4。由于该方剂在中医临床上仍被广泛使用，疗效确切，优势明显，因此成功入选国家药品监督管理局出版的第一批古籍方剂目52Pharmacy andChinese Materia Medica2023;14(6)YUICSO中药与临床录。然而其治疗心肌缺血的基础药效作用不甚清楚。据此，本研究建立异丙肾上腺素（Isoprenalinehydrochloride,ISO）致大鼠心肌缺血模型，给予灌胃ZXGD标准煎液，观察其对心肌缺血大鼠心功能、血流变指标、心肌损伤的影响，从而了解ZXGD治疗冠心病心肌缺血的药效作用，为该经典名方治疗胸痹提供现代医学证据。1材料和方法1.1试验药物积实白桂枝汤标准煎液（成都华神科技有限公司提供，批号：2 10 30 1），培哚普利（规格4mg，国药准字H0034053，施维雅天津制药有限公司），碾碎后，用纯水配置成浓度为0.0 4mgmL的混悬液。1.2动物SD大鼠，雄性，体重18 0-2 2 0 g，均购于北京斯贝福生物科技有限公司，许可证号：SCXK（京）2019-00101.3试剂盐酸异丙肾上腺素（美国sigma，批号：BCBZ5101）。大鼠肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）酶联免疫检测试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：2 0 2 2 0 6 2 8）；乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20220609)1.4仪器PowerLab数据采集分析系统，澳大利亚ADIn-struments公司；低温高速离心机，Eppendorf5430R；细胞成像微孔板检测系统，美国Beckman公司，ALLEGRAX-12R。1.5方法1.5.1分组及给药取健康、成年的雄性SD大鼠50只，待适应环境后，按体重随机分为空白、模型、阳性、ZXGD（12.2 g k g ）、ZXG D（6.1g k g ）组，每组10 只，连续灌胃给药7 天，空白组和模型组灌胃纯水。第6、7 天灌胃后1h后，模型组、阳性组、ZXGD（12.2 g kg）组、ZXGD（6.1g k g）组大鼠均腹腔注射ISO85mgkg，空白组注射等量生理盐水，连续2 天。1.5.2指标测定天末次注射ISO30min后，使用异氟烷麻醉大鼠，采用生理记录进行心电图检查；末次注射ISO6h后，采用戊巴比妥钠（40 mgkg）腹腔注射醉大鼠，腹主动脉取血，腹主动脉采血3mL血用肝素钠抗凝，测定血流变指标；另每只大鼠再收集血清2 mL，30 0 0 r p m 离心15min取血清，采用试剂盒测定各组大鼠血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）水平；迅速摘取心脏，取心室部分固定于4%多聚甲醛溶液，HE染色行病理组织检测。1.5.3统计学分析采用SPSS26.0统计学软件分析数据，统计数据以均数土标准差（XS)表示，数据经方差齐性检验后，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用LSD法，统计结果以p0.05认为差异具有统计学意义。2结果2.1ZXGD对心肌缺血大鼠心肌组织HE染色的影响由图1所示，空白组心脏组织心内膜、心肌膜及心外膜结构清晰，心壁及心腔未见明显异常；心肌纤维着色均匀，细胞分界清楚，走形一致，心肌细胞横纹清楚，明、暗相间，间质未见异常；未见明显的炎性改变。与空白组相比，模型组心脏组织可见大面积心肌细胞坏死，核固缩，伴有淋巴细胞浸润。阳性组、ZXGD（12.2 g k g）组、ZXGD（6.1g k g ）心脏组织可见小面积心肌细胞坏死，核固缩，伴少量淋巴细胞浸润，较模型组相比有所减轻。红模型维ZXGD122g:kg)ZXGD(61gkgy图1ZXGD对大鼠心肌形态学的影响(200)2.2ZXGD对心肌缺血大鼠心电图的影响由图2 和表1可知，与空白组大鼠相比，模型组大鼠心电图ST段明显抬高(p0.01)；与模型组相比，阳性组、ZXGD（12.2 g kg）组、ZXGD（6.1g.kg）组大鼠心电图明显改善(p0.01)。空白组模型组阳性组ZXGD(12.2g:kgl)ZXGD(6.1 g:kg)图2 ZXGD对大鼠心电图的影响53Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica 2023;14(6)中药与临床表1ZXGD对大鼠心电图的影响（XS,n=6）组别剂量(g:kgl)ST抬高(mV)空白0.0160.008模型0.1240.026阳性410-30.0580.008ZXGD12.20.0610.013*ZXGD6.10.0640.005*注：与空白组比较，#p0.01,与模型组比较，p0.052.3ZXGD对心肌缺血大鼠血液流变学的影响由表2 可知，与空白组相比，模型组全血粘度和血浆粘度显著升高(p0.01)；与模型组相比，阳性组能明显降低全血粘度值(p0.05)、ZXG D（12.2 g k g）组和ZXGD（6.1g k g ）组均能显著降低全血粘度和血浆粘度值(p0.05)。表2 ZXGD对大鼠血液流变学的影响（XS,n=6)全血高切全血低切血浆粘度组别剂量(gkg*)相对指数相对指数(mpa.s)(mpa.s)(mpa.s)空白2.430.0713.871.281.150.01模型3.100.08#19.171.733#1.270.03#一阳性41032.670.0616.881.581.230.06ZXGD12.22.560.0814.471.081.200.03*ZXGD6.12.650.1315.771.76*1.190.02注：与空白组比较，p0.01，与模型组比较，p0.05，P0.012.4ZXGD对心肌缺血大鼠血清酶学的影响由表3可知，与空白组相比，模型组血清中CK-MB、LD H 的含量显著升高（p0.01）。与模型组相比，阳性组、ZXGD（12.2 g k g ）组、ZXGD（6.1gkg）组能明显降低血清中CK-MB、LD H 的含量(p0.01)表3ZXGD对大鼠血清中CK-MB、LD H 含量的影响（X+S,n=6)CK-MB组别剂量(g:kgl)LDH(UL)(ng:mL)空白26.463.202670.14489.84模型50.868.37#5705.19162.84#1阳性410331.091.913839.73478.59*ZXGD12.239.606.224006.11424.79*ZXGD6.139.764.564460.98597.28*注：与空白组相比，p0.01，与模型组相比，p0.013讨论心肌缺血是指心肌供血供氧减少，导致心肌代谢异常，心脏不能正常工作的一种病理状态。ISO是b受体激动剂，作用于心脏b,受体，可收缩冠状动脉血管增加心肌耗氧量，最终出现心肌缺血、坏死。心肌缺血常表现为心电图异常和血清中心肌肌钙蛋白、CK-MB等生物标志物水平改变，并常伴有体温升高、血清炎症因子增多等炎性反应症状。心肌大面积缺血损伤后会出现心室重构，心功能不全，心力衰竭甚至死亡，严重危害着人类健康，目前仍然是发达国家死亡的主要原因之一5。改善心肌缺血状态是防治冠心病的关键。目前临床上最常用的治疗心肌缺血的药物有Ca*拮抗剂、b受体阻断剂等，疗效显著并且作用机理明确，但长期服用药效将逐渐降低，并出现不同的耐药性与不良反应。近年来，中药因其多靶点、多通路治疗心血管疾病且毒副作用少、对胃肠道刺激小的优势受到广泛关注。在中医经典金匮要略中，张仲景提出“胸痹 这一病证，并创制积实白桂枝汤这一经典方用于治疗它，沿用至今。ECG检查和血清生物标志物检测是临床上用于诊断冠心病心肌缺血或心肌梗死的常规方法，特征性的ST段抬高和心肌酶学的升高是典型征象。在本研究中，注射ISO后，模型组大鼠心肌酶CK-MB、LDH显著升高，心电图检测显示ST段高，表明模型制备成功7-8 。与模型组比较，ZXGD明显减轻缺血大鼠的心肌损伤，心电图ST段下降，血清CK-MB、LD H 的水平也明显降低，提示ZXGD可以有效保护心肌，减轻心肌损伤，改善心功能。现代药理学研究发现ZXGD还可降低高脂血症大鼠血脂水平8，改善血液流变学。血液流变学的异常与心肌缺血有着极其紧密的联系，血液粘度增大造成血流阻力增加、流速减慢，是使冠脉血流量减少的重要因素之一，可诱发或加重心肌缺血9。本研究结果显示，模型组大鼠全血粘度高切相对指数、低切相对指数和血浆粘度显著升高，血液变明显异常；经ZXGD预防治，能使大鼠因心肌缺血而异常升高的全血粘度和血浆粘度均有明显降低，说明ZXGD能改善心肌缺血大鼠的血液流变学指标，改善血液粘滞的状态，从而起到抗心肌缺血的作用。综上所述，ZXGD可改善模型动物的心肌缺血，对心肌有一定的保护作用，其抗心肌缺血作用可能与其改善血液流变性有关。然而ZXGD作为中药复方，其抗心肌缺血作用可能涉及多种途径9-15，因此其具体作用机制还有待进一步研究。（责任编辑：陈思敏）上接第50 页）思敏）54Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica 2023;14(6)中药与临床参考文献1 Tang Y,Cai H,Zhan Z,et al.Herbal medicine(zhishi xiebaiguizhi decoction)for unstable angina:Protocol for a systemat-ic review and meta-analysis J.Medicine(Baltimore),2018,97(52):e13965.2 Zhang WY,Yu Y,Yan LL,et al.Discovery of cardio-protectiveconstituents of Gualou Xiebai Decoction,a classical tradition-al Chinese medicinal formula J.Phytomedicine,2019,54:318-27.3 Ding YE,Peng YR,Li J,et al.Gualou Xiebai Decoction pre-vents myocardial fibrosis by blocking TGF-beta/Smad signal-ling.J Pharm Pharmacol,2013,65(9):1373-81.4 Yan LL,Zhang WY,Wei X H,et al.Gualou Xiebai Decoction,a Traditional Chinese Medicine,Prevents Cardiac Reperfu-sion Injury of Hyperlipidemia Rat via Energy Modulation J.Front Physiol,2018,9:296.5 OJha N,Dhamoon A S.Myocardial Infarction Z.TreasureIsland(FL):StatPearls Publishing.StatPearls Publishing,20226 Zhang Y,Zhao ZD,Kong PY,et al.A comparative pharma-cogenomic analysis of three classic TCM prescriptions forcoronary heart disease based on molecular network modelingJ.Acta Pharmacol Sin,2020,41(6):735-44.7 Martin TP,Macdonald EA,Elbassioni AAM,et al.Preclinicalmodels of myocardial infarction:from mechanism to transla-tion J.Br J Pharmacol,2022,179(5):770-91.8张东,贾连群,杨关林,等.化瘀祛痰方对异丙肾上腺素(ISO)者心功能的关系.深圳中西医结合杂志,2 0 2 0,30(16):1-2.18吕志伟.有氧运动协同骨髓干细胞动员对心肌梗死后心电图和血流动力学指标的影响J.中国组织工程研究,2 0 15,19(19):2 959-2 96 4.19 Chen YY,Huang ZS.Stimulation of locus coeruleus increasesarterial pressure in rabbitsJ.Zhongguo Yao Li Xue Bao,1997,18(5):437-40.20张琼,马江伟,王昌华,等.冠状动脉粥样硬化对心脏舒张功能的影响J.中国循环杂志,2 0 18,33(11):10 7 5-10 7 9.21 潘博,田杰.心脏舒张功能障碍的基础与临床研究进展J.中华实用儿科临床杂志,2 0 18,3313)：5.22 Bader M,Ganten D.Update on tissue renin-angiotensinsystems JJ.Journal of Molecular Medicine,2008,86(6):615-621.23 Frangogiannis NG.Cardiac fibrosis:Cell biological mech-anisms,molecular pathways and therapeutic opportunities急性心肌缺血大鼠心肌细胞结构、心电图ST段总偏移值、MDA、SO D、LD H、C K 表达影响随机平行对照研究.实用中医内科杂志,2 0 18,32(0 6):6 9-7 4.9孔祥琳,吕琴,李运伦,等.黄芪甲苷对心脑血管疾病的现代药理作用研究进展J.中国实验方剂学杂志,2 0 2 1,2 7(0 2):2 18-223.10夏寒星,张业.积实白桂枝汤对高脂血症大鼠血脂及血管内皮功能的影响J.中国实验方剂学杂志,2 0 12,18(10):2 2 4-226.11张恒,李媛媛,王笑,等.积实白桂枝汤通过保护缝隙连接干预心肌缺血再灌注钙超载的研究J.中药药理与临床,2 0 19,35(0 2):2-7.12李加会,徐鹏博,钟华,等.代谢组学结合网络药理学技术探究“瓜萎-白 药对抗动脉粥样硬化的配伍机制.中国中药杂志,2 0 2 2,47(2 2):6 2 0 7-6 2 16.13 Song F,Li H,Sun J,et al.Protective effects of cinnamicacid and cinnamic aldehyde on isoproterenol-induced acutemyocardial ischemia in ratsJ.Journal of Ethnopharmacolo-gy,2013,150:125-130.14 Lee YM,Hsiao G,Chen HR,et al.Magnolol reduces myo-cardial ischemia/reperfusion injury via neutrophil inhibition inratsJ.European Journal of Pharmacology,2001,422:159-167.15 Pillai VB,Samant S,Sundaresan NR,et al.Honokiol blocksand reverses cardiac hypertrophy in mice by activating mito-chondrial Sirt3JJ.Nat Commun,2015,6,6656.（责任编辑：陈-ScienceDirect J.Molecular Aspects of Medicine,2019,65:70-99.24 Brilla CG,Scheer C,Rupp H.Renin-angiotensin system andmyocardial collagen matrix:modulation of cardiac fibroblastfunction by angiotensin II type 1 receptor antagonism J.JHypertens Suppl,1998,15(6):13-9.25 Bacmeister L,Schwarzl M,Warnke S,et al.Inflammationand fibrosis in murine models of heart failure J.Basic Re-search in Cardiology,2019,114(3):19.26门素珍,马丽娟,石亚男,等.成纤维细胞分化为肌成纤维细胞的调控机制J.新医学,2 0 17,48(2):4.27 Vaibhav B,Patel,Jiu-Chang,et al.Role of the ACE2/An-giotensin 1-7 Axis of the Renin-Angiotensin System in HeartFailure J.Circulation research,2016,118(8):1313-26.