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饲料厂化验室操作手册饲料中的水分测定1原理：试样在1052烘箱内，在常压下烘干，直至恒重，逸失的重量为总水分。2测定步骤：洁净的称样皿，在1052烘箱中烘1h，取出，在干燥器中冷却30min，称准至0.0002g，再烘干30 min，同样冷却，称重，直至两次的重量之差小于0.0005g为恒重。用已恒重的称样皿称取2份平行试样，每份2-5g（含水量0.1g以上，样品厚度4mm一下）。准确至0.0002g，不盖称样皿盖，在1052烘箱中烘3h（以温度达到105开始计时），取出，盖好称样皿盖，在干燥器中冷却30min，称重。在同样烘干1h ,冷却，称重，直至两次称重的重量差小于0.002g.烘干前的质量烘干后的质量水分= 100烘干前的质量粗蛋白的测定1.原理：凯氏定氮法测定试样中的含氮量，即在催化剂的作用下用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵，加入强碱进行蒸馏，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，测出含氮量，将结果乘以换算系数6.25，算出粗蛋白的含量。2.测定步骤：.消煮：称取样品0.5g，准确放入凯氏烧瓶中，加入6.4g催化剂，15ml硫酸，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360-410），直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h.定容：消煮后冷却，加20ml水至凯氏烧瓶中，摇匀，待消煮试样完全冷却后转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水冲洗数次，并一起转入到容量瓶中，至刻度，摇匀，做为试样分解液。.蒸馏:.准备：将蒸馏装置准备妥当以后，先用蒸馏水洗涤，移取分解液10ml，氢氧化钠（40%）10ml，加入少量水，塞好入口玻璃塞，且在入口处加水密封，防止露气，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，在将装有20ml硼酸和2滴甲基红指示剂的锥形瓶放在冷凝管的末端。.滴定：将蒸馏后的吸收液立即用盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 （体积空白）浓度0.0146.25 粗蛋白= 100 试样质量0.014 与1.00ml盐酸标准溶液【c(Hcl)=1.000/ molL-1】相当的以克表示的氮的质量6.25氮换算成蛋白质的平均系数3.试剂配制：1.混合催化剂：4g硫酸铜+60g无水硫酸钠2.氢氧化钠：40g氢氧化钠+100ml水3.硼酸： 1g硼酸+50ml水4.混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存3个月5.盐酸标准溶液配制： c(Hcl)/ molL-1 盐酸（ml） 1 90 0.5 45 0.1 9_4.盐酸标定方法：取在270300温度下干燥至恒重的基准无水碳酸钠约0.015g，精密称重，加水50ml使溶解，加甲基红溴甲酚绿混合指示剂2滴，用盐酸滴定至溶液由绿色转变为灰红色，在煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液变为灰红色。 空白测定: 称蔗糖0.5g，代替试样，进行空白滴定，消耗0.1 molL-1盐酸标准溶液的体积不得超过0.2ml，消耗0.02 molL-1盐酸标准溶体积不得超过0.3ml. 无水硫酸钠的质量 浓度= (体积-空白)0.052995.蒸馏步骤检测：精确称取硫酸铵0.2g，代替试样进行消化蒸馏，测得硫酸铵含量21.19%0.2%，可知消煮过程和试剂配制是否正常。饲料中纯蛋白测定1.原理：硫酸铜在碱性溶液中，可将蛋白质沉淀，且不溶于热水，过滤和洗涤后，可将纯蛋白质含氮物分离，再用凯氏定氮法测定沉淀中的蛋白质含量。2.试剂：（1）硫酸铜溶液：10g硫酸铜溶于100ml水中。（2）氢氧化钠溶液：将2.5g氢氧化钠溶于100ml水中。（3）氯化钡溶液：1g氯化钡溶于100ml水中。（4）2 molL-1盐酸溶液。3. 测定步骤：准确称取1g左右试样，置于200ml烧杯中，加50ml水，加热至沸，加入20ml硫酸铜溶液，20ml氢氧化钠溶液，用玻璃棒充分搅拌，放置1h以上，用倾斜过滤（定性滤纸），然后用60-80热水洗衣涤沉淀5-6次，用氯化钡溶液5滴和盐酸溶液1滴检查滤液，直至不生成白色硫酸钡沉淀为止。将沉淀和滤纸放在65烘箱干燥2h，然后全部转移到凯氏烧瓶中。消化后进行定氮测定。4.结果计算同粗蛋白测定一样。快速测盐分（饲料级）1. 盐分含量测定原理：溶液澄清，在酸性条件下，加入过量硝酸银溶液使样品溶液中的氯化物形成氯化银沉淀，除去沉淀后，用硫氰酸铵回滴过量硝酸银，根据消耗硫酸氰铵的量，计算出氯化物的含量。2. 试剂配制：Ango3：称取硝酸银3.4g，用少量水溶解，定容至1L，储于棕色瓶中3. 标定：称取在550下恒温1h的基准氯化钠0.02g，加50ml水，加5%铬酸钾指示剂1ml，用待标定的硝酸银标准溶液滴定至砖红色为终点。200.02 C = 体积4.测定步骤：称取样品2g左右，加200ml蒸馏水搅拌，静止20min，吸取上清液20ml放入锥形瓶，加50ml蒸馏水，加1ml铬酸钾（10%），用Ango3滴定成桔红色。浓度体积2000.05845CL = 100样品质量20测食盐中CL的含量称0.02g样品，放入锥形瓶中，加50ml蒸馏水，加1ml铬酸钾（10%），用Ango3滴定成桔红色。浓度体积0.05845CL = 100样品质量粗灰分、钙、磷连续测定（饲料级）1.原理： 试样在550灼烧后所得残渣，用质量百分率表示。残渣只要是氧化物、盐类等矿物质，也包括混入饲料中的沙石、土等，故称粗灰分。2.步骤： 将干净的坩埚方入高温炉，在55020下灼烧30min。取出，在空气中冷却约1min，放入干燥器冷却30min，称其重量，在已恒重的坩埚中称取2-5g试料，准确至0.0002g。在电炉上小心碳化至无烟，在放入高温炉，于55020下灼烧3h。取出，在空气中冷却约1min，放入干燥器中冷却30min，称取重量。 灰化后的质量 粗灰分= 100% 灰化前的质量钙：在盛有灰分的坩埚中加入10ml（1：3）盐酸,加3滴硝酸，小心煮沸，随即滤入100ml的容量瓶中，用蒸馏水洗涤坩埚和漏斗上的滤纸，定容至100ml，摇匀，取10ml分解液放入锥形瓶，加入50ml水，1%煮沸冷却后的淀粉溶液10ml,乙二胺1ml，三乙醇胺2 ml，孔雀石绿1滴，20%氢氧化钠10 ml，盐酸羟胺少许，钙指示剂少许，然后用EDTA滴定至蓝色。 EDTA体积浓度 Ca= 100 样品质量试剂配制：盐酸：1：31ml盐酸溶于3ml蒸馏水中氢氧化钠：20% 20g的氢氧化钠溶于100ml的蒸馏水中三乙醇胺： 1：11ml三乙醇胺溶于1ml蒸馏水中乙二胺： 1：11ml乙二胺溶于1ml蒸馏水中孔雀石绿：0.001g孔雀石绿溶于1ml蒸馏水中，既0.1g孔雀石绿溶于100g蒸馏水中钙黄指示剂：0.1g钙黄绿素，0.13g甲基百里香酚蓝，5g氯化钾研细混匀，储于磨砂口瓶中备用。（钙红指示剂：1g钙羟酸指示剂与99g氯化钠）EDTA：0.02 molL-1称取8g乙二胺四乙酸二钠，放入烧杯中，加200ml蒸馏水，加热溶解，冷却后转入1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀稀释至刻度。标定：钙标准溶液0.001g molL-1准确称取在105110下烘干3h，干燥至恒重的基准碳酸钙2.497g，溶于40ml（1：3）盐酸中（沿烧杯壁慢慢加入），加热除去Co2,冷却，转移到1000ml容量瓶中，稀释到刻度，标定方法同测定方法同样。 0.0120（分解液吸取值）EDTA浓度= EDTA的体积磷：取上述分解液1ml，放入50ml的容量瓶中，加10ml钒钼酸铵显色剂，定容至50ml，摇匀，放至20分钟。用10毫米比色池，在420nm波长下，用分光光度计测定试样分解液的吸光度 波长所对应得含磷量磷含量= 质量100分解液移取量试剂配制：钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25g，先加入量水，使其差不多溶解，加硝酸250ml，另取钼酸铵25g加蒸馏水400ml溶解，冷却后将此溶液倒入上述溶液中，加水定容至1000ml。避光保存，入生成沉淀则不能使用。磷标准溶液：将磷酸二氢钾在105烘箱中干燥1小时，在干燥器中冷却后称取0.2195g，定量转入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，用水稀释至刻度，摇匀，即50微克/毫升的磷标准溶液。标准曲线绘制： 准确吸取0ml.1ml.2ml.5ml.10ml.15ml于50ml容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色剂10ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静止10分钟以上，以0溶液为参比，用10毫米比色池，在420nm波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线图。饲料中粗脂肪的测定1.原理：用装有乙醚的索氏脂肪提取器，提取试样中的脂肪，称脂肪包的重量，提取的脂肪中除脂肪外还有有机酸，磷脂，脂溶性维生素，叶绿素等，因而测定结果称为粗脂肪或乙醚提取物。2.测定步骤：称试样15g（准确至0.0002g），于滤纸筒中，或用滤纸包好，放入105烘箱中，烘干120min，滤纸筒应高于提取器虹吸管的高度，滤纸包长度应以可全部浸泡于乙醚中为准，将滤纸筒或包放入抽提管，在抽提瓶中加无水乙醚60-100ml，在60-75的水浴上加热，使乙醚回流，控制乙醚回流次数约每小时10次，共回流约50次（油脂高的约70次）或检查抽提管流出的乙醚挥发后不留下油迹为抽提终点。（约3个小时）取出试样，仍用原提取器回收乙醚，直至抽提瓶全部回收完，取下抽提瓶，将回收的乙醚倒入乙醚瓶中保存。取出滤纸包，仍放回原称样皿，开盖在1052烘箱中烘干2h，（刚放烘箱时将烘箱门打开，使滤纸包中的乙醚挥发完以后在合上门，否者会有危险），取出，放入干燥器中冷却，称重，在烘干30min，冷却称重，直至两次误差小于0.001g为止。 烘干后试样的重量提取脂肪后试样的重量 粗脂肪= 100 烘干前试样的重量大豆脲酶活性的测定（滴定法）1.选用范围：本法适用于大豆制品品及其副产品中脲酶活性的测定，可确认大豆的温热处理程度和抗胰蛋白酶等抗营养因子的水平。2.定义：尿素酶活性指：在300.5和pH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。3.原理： 将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30保持30min，尿酶催化尿素水解产生氨的反应。用过里盐酸中和产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。4. 试剂： 尿素缓冲溶液：准确称取3.4g经110烘干的磷酸二氢钾和4.45g磷酸氢二钠，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，再将30g尿素溶解在此缓冲液中，可保持一个月。 0.1 molL-1盐酸溶液：用量筒量取8.4ml浓盐酸（GB 622），注入1000ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。 0.1molL-1氢氧化钠（GB 629）标准溶液 ：按GB 601的规定配制。（5ml NaOH饱和溶液定容至1L）5. 测定步骤： 准确称取已粉碎的试样约0.2g（精确至0.0001g），置于刻管中（如活性很高，只称0.05g）。加入10ml尿素缓冲溶液，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于（300.5）恒温水浴中，准确计时保持30min。取下后立即加入10ml 0.1molL-1盐酸溶液,并迅速冷却至20，将试管中内容物无损地移入50ml烧杯中，用5ml蒸馏水冲洗试管2次，立即用0.1molL-1的氢氧化钠标准溶液滴定至pH 4.7,记录氢氧化钠标准溶液的消耗量。同时做空白试验。尿素苯酚磺试剂法（脲酶活性）1.原理：在尿素苯酚磺指示剂存在的条件下，以尿素转变成氨的多少及显色度检测大豆饼中的脲酶的活性。2.试剂与溶液： 0.2molL-1氢氧化钠溶液：量取澄清的饱和氢氧化钠溶液11.2ml，置于1000ml容量瓶中，用新沸过的冷水稀释至刻度，混匀即可。 0.1 molL-1硫酸溶液：量取5.6ml浓硫酸，注入已加了少量蒸馏水的1000ml容量瓶中，冷却稀释至刻度。 尿素苯酚磺指示剂：取1.2g苯酚红溶于30ml 0.2 molL-1氢氧化钠溶液中，用蒸馏水稀释至300ml，加入90g尿素，溶解后再用水稀释至2000ml，加70ml 0.1 molL-1硫酸溶液，稀释至3000ml。配好的溶液应呈琥珀色，若溶液转变呈桔红色时，用再适量滴加0.1 molL-1硫酸溶液，调成琥珀色。试剂最好现配现用。3.测定步骤： 取粉碎的大豆粕少许，在表面皿上均匀的铺成薄层，用吸管吸取尿素苯酚磺指示剂，浸湿表面皿上平铺的大豆粕，放置5min，观察显色结果。4.结果判定： 无任何红点出现时，再放置25min，若仍无红点出现时，说明被检大豆粕没有脲酶活性，是过熟的大豆粕。 有少数红点，或表面有25%-50%红点出现，表示含有微量脲酶，大豆粕可以使用。 若大豆粕表面75%-100%被红点覆盖，说明脲酶活性很强，粕过生，不能直接使用。挥发性盐基氮（VBN）测定方法 1、原理：利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来，用硼酸吸收，再用标准酸滴定，计算出含氮量。2、试剂： 1、0.lmolL盐酸标准溶液（无水碳酸钠标定）：吸取分析纯盐酸8.3mL，用蒸馏水定容至1000mL。2、0.01mol/L盐酸标准溶液：用0.1mol/L盐酸标准溶液稀释获得。3、2%硼酸溶液：分析纯硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。4、混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期三个月以内。5、1%氧化镁溶液：化学纯氧化镁1.0g溶于100mL蒸馏水振接成混悬液。3、测定： 1、称取15g试样(精确到0.001g)于250mL具塞锥形瓶中，加蒸馏水100mL，振荡摇匀30min后静置，上清液为样液。 2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL锥形瓶中，加混合指示剂2滴，使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。 3、蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此溶液为橙红色，否则补加硫酸。 4、准确移取10mL样液注入蒸馏装置的反应室中，再加入10mL 1%的氧化镁溶液，用少量蒸馏水冲洗进样入口，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏10min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。 5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点，同时进行试剂空白测定。4、测定结果计算： （盐酸体积空白）浓度14挥发性盐基氮的含量100 （ 质量分解液体液）分解液总体积2、重复性：每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。允许相对偏差为5%油脂酸价测定 取干燥的锥形瓶（带手套取）。称重记录，加入测样2-3g，称重记录，取烧杯加入50ml醇醚，5滴酚酞指示剂，Naoh滴定空白体积变成粉紫色，把滴定的醇醚倒入盛有测样的锥形瓶中，摇匀，再滴5滴酚酞指示剂，用Naoh滴定成粉红色，半分钟之内不变色。计算公式： 浓度（体积空白）56.11酸价= 样品质量试剂配制：Naoh标准溶液0.05mol/L配制方法1：取2g氢氧化钠放入1000ml容量瓶中，用新沸过的冷水定容至1000ml，摇匀。方法2：取饱和溶液2.8ml，用新沸过的冷水定容至1000ml标定：取在105-110干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.2g，精密称重，加新沸过的冷水50ml，摇匀，使其溶解，加酚酞指示剂2滴，用本液滴定至粉红色。 邻苯二甲酸氢钾质量浓度 = - Naoh体积0.2042中性醇醚：2：1（2ml乙醇+1ml乙醚）1%酚酞乙醇指示剂：1g酚酞+100ml乙醇油脂TBA值的测定方法1.原理： 油脂受到光、热、空气中氧等的作用，发生酸败。分解出醛、酮之类的化合物。丙二醛就是分解产物的一种，它能与TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉红色化合物，在532nm波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。2.操作步骤：1、标准曲线的绘制 准确吸取上述标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于纳氏比色管中，加水至总体积为5ml，加入5ml TBA溶液，然后按样品测定步骤进行，测得吸光度并绘制标准曲线。2、样品制备与检测 准确称取均匀的豆油15g，置于100ml具塞三角瓶内，准确加入25ml三氯乙酸混合液，振摇半小时（保持油脂融溶状态），用四层滤纸过滤，除去油脂。准确移取上述滤液10ml置于25ml比色管内，准确加入TBA溶液10ml，混匀，加塞，置于90水浴内保温40min，取出，冷却1h，移入小试管内，离心5min，上清液倾入25ml纳氏比色管中，加入5ml氯仿，摇匀，静置，分层，吸出上清液于532nm波长处，用1-5cm比色皿比色（同时作空白试验）。 3.试剂配制： 1、0.02mol/L TBA水溶液：称取TBA 0.288g加热溶于水中，并稀释至100ml；2、三氯乙酸混合液：称取三氯乙酸7.5g及0.1gEDTA，用水溶解，稀释至100ml； 3、氯仿（分析纯）；4、丙二醛标准溶液：称取0.315g 1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至1000ml，此溶液每ml相当于丙二醛100g，置于冰箱内保存。准确吸取10ml，稀释至100ml，此溶液每ml相当于丙二醛10g，备用。 丙二醛浓度混合液体积(滤液体积TBA水溶液体积)丙二醛 = 油脂质量TBA水溶液体积 油脂过氧化值测定方法1.原理: 油脂氧化过程中产生过氧化物，与碘化钾作用，生成游离碘，以硫代硫酸钠溶液滴定，计算过氧化值。 2.试剂和溶液: 1、饱和碘化钾溶液：称取14g碘化钾，加10ml水溶解，必要时微热使其溶解，冷却后贮于棕色瓶中； 2、三氯甲烷冰乙酸混合液：量取40ml三氯甲烷，加60ml冰乙酸，混匀； 3、1%淀粉试剂：将淀粉0.5g用少许冷水调成糊状，倒入50ml沸水中调匀，煮沸，临时用现配；4、0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液；（26g硫代硫酸钠/16无水硫代硫酸钠溶于1000ml水中）0.1 molL-1配制：称取2.6g硫代硫酸钠/1.6无水硫代硫酸钠于1000ml容量瓶中，用适量新沸（煮沸10分钟）过的水溶解并稀释至1000ml，摇匀，放置2周以后备用。硫代硫酸钠标定方法： 取适量基准重铬酸钾在120烘箱中烘至恒重(3h)，然后称取0.15g，精确至0.0001g，置于碘量瓶中，溶于25ml煮沸并冷却的蒸馏水中，加2g碘化钾及20%硫酸溶液20ml，摇匀，于暗处放置10min。加150ml水，用配制好的硫代硫酸钠溶液滴定。近终点时（即呈黄绿色或淡黄色时），加3ml淀粉指示剂（5gL-1），继续滴定至溶液蓝色消失为终点，同时做空白。 重铬酸钾的质量 硫代硫酸钠浓度= （体积空白）0.049030.04903与1ml硫代硫酸钠标准溶液以克表示的重铬酸钾的质量4.测定方法: 称取23g油样（称准至0.0002g）于碘量瓶中（对于固态样品应先用索氏提取器将样品中油脂提取出来），加30ml三氯甲烷冰乙酸混合液，使样品完全溶解。加入1ml饱和碘化钾溶液，紧密塞好瓶盖，并轻轻振摇0.5min，然后在暗处放置3min，取出加100ml水，摇匀，立即以淀粉试液为指示剂，用0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至蓝色消失为终点。同时做空白试验。 0.1269浓度（体积空白） 过氧化值（%）= -100 质量 0.1269换算系数；油脂皂化值的测定方法1.原理： 油脂与氢氧化钾乙醇溶液共热时，发生皂化反应，剩余的碱可用标准酸液进行滴定，从而可计算出中和油脂所需的氢氧化钾毫克数。2.试剂和溶液 1、0.5mol/L的盐酸标准溶液； 2、1%酚酞指示剂； 3、0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液：称取30g化学纯氢氧化钾，溶于95%乙醇中使成1L，摇匀，静置24h，倾出上层清液，贮于装有苏打石灰球管的玻璃瓶中。3.操作步骤 称取适量样品（纯油样2g；固态样品10g并用索氏提取法提取出样品中的粗脂肪，蒸干乙醚溶剂），准确至0.0002g，准确加入0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液25ml，在沸水浴上加热回流30min，不时摇动。取下冷凝管，冷却后加入数滴酚酞指示剂，用0.5mol/L的盐酸标准溶液滴定至红色消失。同时做空白试验。 56.1浓度(空白体积) 皂化值(mg KOH/g)= - 质量 备注 一般植物油的皂化价如下：棉子油189198，花生油188195，大豆油190195，菜子油170180，芝麻油188195，葵子油188194，茶子油188196。