BCA蛋白浓度测定.doc

(完整版)BCA蛋白浓度测定(整理版)BCA蛋白浓度测定Pierce？ BCA Protein Assay Kit (试剂盒室温保存）1. 准备BSA标准品 按Table 1配制一系列的蛋白标准品. 原液（stock）：取出一个ample（内含2mg/mL的白蛋白标准品 (此量足够3个replication)2。准备BCA工作液（Working Reagent,WR) （1)用公式计算总工作液量（标准品数+待测样品数)*(复制数）(每个工作液的量)=总的需要的工作液的量例子:3个待测样品,每个样品2个复制所需的工作液量（9个标准品+3个待测样品)*（2个复制数)*（2ml）=48ml工作液Note:试管法：每个试管需2ml工作液 微孔板:每个孔需200ul工作液（例子中需共4.8ml) (2）BCA试剂A:B=50：1配制适量BCA工作液，充分混匀。对于上面的例子，试管法需要50ml BCA A液+1ml BCA B液,微孔板法需5ml A液和1mlB液.B液加到A液中时，迅速浑浊，但是通过混匀立即变成清澈 绿色的工作液.工作液在密闭室温下可以保存数天.3。微孔板步骤(样品与工作液比例=1:8)(1).标准液和样品各25ul加入微孔板中 Note：若样品有限，可各加10ul（样品与工作液比例=1：20）(2）.每孔加200ul的工作液并且充分震荡30s。（3）.在37度孵育样品30min，或室温2h。（4).冷却至室温.(5).在酶标仪中测量562nm时的吸光值（6).绘制标准曲线，再用标准曲线判断出样品的蛋白浓度. Note：540-590nm的波长均可Figure 1： Typical color response curves for BSA and BGG using the Standard Test Tube Protocol (37C/30-minute incubation）. 不得用于商业用途仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。For personal use only in study and research； not for commercial use。Nur fr den persnlichen fr Studien, Forschung， zu kommerziellen Zwecken verwendet werden.Pour l tude et la recherche uniquement des fins personnelles； pas des fins commerciales. ， , 。 以下无正文