基于生物信息学分析肾透明细...域指蛋白6的表达及临床意义_于建宇.pdf

癌症进展2023 年 3 月第 21 卷第 6 期ONCOLOGY PROGRESS,Mar 2023 V ol.21,No.6*论著*基于生物信息学分析肾透明细胞癌中植物同源结构域指蛋白基于生物信息学分析肾透明细胞癌中植物同源结构域指蛋白6 6的的表达及临床意义表达及临床意义于建宇1，方爱钟2，郑义2，于春娜1，彭怡琛1，林艺1，汪晓敏1#，李文斌1,2#1首都医科大学附属北京天坛医院神经肿瘤综合治疗病区，北京 1000712首都医科大学健康医疗大数据国家研究院，北京 1000690 0摘要摘要：目的目的基于生物信息学分析肾透明细胞癌（KIRC）中植物同源结构域指蛋白 6（PHF6）的表达及临床意义，进而推断 PHF6在 KIRC 中的作用。方法方法通过癌症基因组图谱（TCGA）数据库下载 535例 KIRC 组织及72例正常肾组织的表达数据和临床数据，从基因型-组织表达（GTEx）数据库下载28例正常肾组织的表达数据和临床数据。比较 TCGA、GTEx 数据库中正常肾组织与 KIRC 组织中 PHF6 的表达情况，并比较不同临床特征KIRC患者KIRC组织中PHF6的表达情况。依据PHF6表达水平的中位数，将TCGA数据库中535例KIRC患者分为 PHF6高表达组和 PHF6低表达组，比较两组患者的总生存期（OS）、无进展生存期（PFS）、疾病特异性生存期（DSS）。对PHF6高表达组和PHF6低表达组差异表达的基因进行基因本位（GO）分析，并对PHF6高表达组的基因进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析；选取相关基因进行相关性分析，并通过免疫组化法验证PHF6表达与核糖体蛋白S6激酶A6（RSK4）表达的相关性。结果结果与正常肾组织相比，PHF6在KIRC组织中表达下调，PHF6高表达组KIRC患者的中位OS、PFS、DSS均长于PHF6低表达组（P0.05）。通过GO分析可知，差异基因主要集中于体液免疫应答和补体激活等生物学过程，免疫球蛋白复合物和血液微粒等细胞成分，抗原结合、糖胺聚糖结合和硫化合物结合等分子功能上；通过KEGG通路分析可知，PHF6高表达的信号通路中与免疫相关的信号通路活化。相关性分析结果显示，如肌醇 1，4，5-三磷酸 2 型受体（ITPR2）、磷脂酶 A2 组A（PLA2G4A）、前列腺素F受体（PTGFR）、RSK4均与PHF6的表达呈正相关（r=0.52、0.34、0.50、0.42，P0.01）。免疫组化结果显示，RSK4 蛋白的表达与 PHF6 蛋白的表达呈正相关（r=0.557，P0.01）。结论结论与正常肾组织相比，PHF6在KIRC组织中表达下调，PHF6高表达KIRC患者的预后较好，RSK4的表达与PHF6的表达呈正相关。可以根据PHF6的表达水平，对KIRC患者进行干预，有必要将其作为KIRC的候选生物标志物。关键词关键词：植物同源结构域指蛋白6；肾透明细胞癌；预后中图分类号中图分类号：R R737737.1111文献标志码文献标志码：AdoiAdoi：10.11877/j.issn.1672-1535.2023.21.06.06Expression and clinical significance of plant homeodomain finger proteinExpression and clinical significance of plant homeodomain finger protein 6 6 in inrenal clear cell carcinoma based on bioinformatics analysisrenal clear cell carcinoma based on bioinformatics analysisYU Jianyu1,FANG Aizhong2,ZHENG Yi2,YU Chunna1,PENG Yichen1,LIN Yi1,WANG Xiaomin1#,LI Wenbin1,2#1Department of Neuro-Oncology,Cancer Center,Beijing Tiantan Hospital,Capital Medical University,Beijing 100071,China2National Institute for Data Science in Health and Medicine,Capital Medical University,Beijing 100069,ChinaAbstractAbstract:ObjectiveObjectiveBased on bioinformatics analysis of the expression and clinical significance of plant homeodomain finger protein 6(PHF6)in renal clear cell carcinoma(KIRC),the role of PHF6 in KIRC can be inferred.MethodMethodDownloaded the expression and clinical data of 535 KIRC tissues and 72 normal kidney tissues from The Cancer GenomeAtlas(TCGA)database,and 28 normal kidney tissues from the Genotype-Tissue Expression(GTEx)database.Comparedthe expression of PHF6 between normal kidney tissue and KIRC tissue in TCGA and GTEx databases,and compared theexpression of PHF6 in KIRC tissue of KIRC patients with different clinical characteristics.Based on the median expression level of PHF6,535 KIRC patients in the TCGA database were divided into PHF6 high expression group and PHF6low expression group,the overall survival(OS),progression-free survival(PFS),and disease-specific survival(DSS)ofthe two groups were compared.Performed Gene Ontology(GO)enrichment analysis on differentially expressed genes inthe PHF6 high expression group and PHF6 low expression group,and performed Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)pathway enrichment analysis on genes in the PHF6 high expression group.Selected relevant genes forcorrelation analysis,and verified the correlation between PHF6 expression and ribosomal protein S6 kinase A6(RSK4)expression through immunohistochemistry.ResultResultCompared with normal kidney tissue,PHF6 expression was downregulated in KIRC tissue,and the median OS,PFS,and DSS of KIRC patients with PHF6 high expression group werelonger than those of the PHF6 low expression group(P0.05).According to GO analysis,differential genes mainly focus基金项目：国家自然科学基金（81972338、82270153）#通信作者（corresponding author），汪晓敏，邮箱：；李文斌，邮箱：603癌症进展2023年3月第21卷第6期on biological processes such as humoral immune response and complement activation,cellular components such as immunoglobulin complex and blood microparticle,and molecular functions such as antigen binding,glycosaminoglycan binding,and sulfur compound binding.Through KEGG pathway analysis,it can be concluded that immune related signalingpathways were activated in the PHF6 highly expressed signaling pathway.The correlation analysis results showed thatthe expression of PHF6 was positively correlated with inositol 1,4,5-triphosphate receptor type 2(ITPR2),phospholipase A2 group IVA(PLA2G4A),prostaglandin F receptor(PTGFR),and RSK4(r=0.52,0.34,0.50,0.42,P0.01).The immunohistochemical results showed positive correlation between the expression of RSK4 protein and the expression ofPHF6 protein(r=0.557,P0.01).ConclusionConclusionCompared with normal kidney tissue,PHF6 expression is downregulatedin KIRC tissue.KIRC patients with PHF6 high expression have a better prognosis,and the expression of RSK4 is positively correlated with PHF6 expression.It is necessary to intervene in KIRC patients based on the expression level ofPHF6 as a candidate biomarker for KIRC.Key wordsKey words:plant homeodomain finger protein 6;renal clear cell carcinoma;prognosisOncol Prog,2023,21(6)肾细胞癌是全球常见的恶性肿瘤之一，其中最常见的亚型是肾透明细胞癌（renal clear cell carcinoma，KIRC），占所有肾细胞癌类型的 70%80%1-2，是一种恶性程度相对较低、发展缓慢的肿瘤。手术是 KIRC 的主要治疗手段，但大多数情况下，即使进行了早期手术治疗，仍有30%转移的可能3-6。KIRC 已被证明与免疫微环境7、广泛的肿瘤特异性遗传和表观遗传学改变有关8，这些改变可导致许多肿瘤相关基因表达水平的改变。因此，迫切需要对KIRC的敏感基因进行研究，以寻找有效的治疗靶点及预后的分子标志物，进而有助于早期诊断，并为KIRC早期干预提供依据。植物同源结构域指蛋白 6（plant homeodomainfinger protein 6，PHF6）定位于人染色体 Xq26.3，是一种核仁、核糖体RNA启动子相关蛋白，该蛋白具有2个植物同源结构域9，定位于细胞核中，并在脊椎动物中高度保守10。PHF6表达异常与肿瘤发生发展相关，研究表明，PHF6 编码核仁和染色质相关的白血病抑制因子，其表达缺失会导致染色质可及性及核小体定位的局灶性变化11，PHF6 表达缺失极大地损害了 G2期细胞检查点的恢复12。随着基因研究的不断深入，PHF6在血液病中的作用，特别是对血液肿瘤的抑制作用也逐渐受到关注13，并取得了一定的成果。但目前临床对 KIRC 与PHF6间的关系知之甚少。本研究利用癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas，TCGA）数据库中 KIRC 患者的临床特征 及 RNA-seq 高 通 量 测 序 信 息，分 析 PHF6 在KIRC 中的表达及与患者预后的关系，从而分析PHF6 表达与 KIRC 间的关系，并通过免疫组化法进一步验证 PHF6 的表达与肿瘤相关基因间的关系，现报道如下。1 1资料与方法资料与方法1 1.1 1 数据来源及处理数据来源及处理从 TCGA 数 据 库（https:/www.cancer.gov/ccg/research/genome-sequencing/tcga）下载 535 例 KIRC组织及 72 例正常肾组织的数据及患者的病历资料；从基因型-组织表达（Genotype-Tissue Expression，GTEx）数 据 库（https:/commonfund.nih.gov/gtex）下载28例正常肾组织的数据及患者的病历资料。由于部分数据有缺失，共统计到 535 例 KIRC患者的部分临床特征、100 例正常肾组织和 535 例KIRC组织的 RNA-seq数据、535例 KIRC患者的总生存期（overall survival，OS）、532 例 KIRC 患者的无进展生存期（progression-free survival，PFS）、530例 KIRC 患者的疾病特异性生存期（disease-specific survival，DSS）资料。此外，自上海超芯生物科技有限公司购买KIRC组织及癌旁组织共150个微阵列的石蜡切片，由于部分矩阵的病历资料缺失，共统计到 146 个微阵列的年龄和性别、148 个微阵列的组织学分级和临床分期的资料。首先比较 TCGA数据库下载的 72例正常肾组织与 535 例 KIRC 组织中的 PHF6 表达情况；再加上 GTEx数据库下载的 28例正常肾组织，比较 100例正常肾组织与 535 例 KIRC 组织中 PHF6 的表达情况，并比较不同临床特征 KIRC 患者 KIRC 组织中 PHF6 的表达情况。绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线，计算曲线下面积（area under the curve，AUC），评估 PHF6 表达对KIRC的诊断价值。依据PHF6表达水平的中位数，将 TCGA 数据库中 535 例 KIRC 患者分为PHF6 高表达组和 PHF6 低表达组，采用 Kaplan-Meier 法绘制生存曲线，组间比较采用 Log-rank 检验，比较两组患者的OS、PFS、DSS。1 1.2 2 基因本位基因本位（Gene OntologyGene Ontology，GOGO）分析和京都分析和京都基因与基因组百科全书基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia ofKyoto Encyclopedia ofGenes and GenomesGenes and Genomes，KEGGKEGG）通路富集分析通路富集分析为探究 PHF6 调节 KIRC 的可能的分子机制，依据 PHF6表达水平的中位数，将 TCGA数据库中535 例 KIRC 患者分为 PHF6 高表达组和 PHF6 低表达组，利用R语言的“Limma”包对两组患者的所有基因进行差异分析，并将|Log Fold Change|1作604ONCOLOGY PROGRESS,Mar 2023 V ol.21 No.6为共同差异基因。采用DAVID在线数据库（https:/david.ncifcrf.gov）对上述共同差异基因进行 GO 分析，并将共同差异基因中PHF6高表达组的基因提取出来进行 KEGG 通路富集分析，通过 R 语言的“ggplot2”包进行可视化。1 1.3 3 免疫组化法验证组织微阵列中相关蛋白与免疫组化法验证组织微阵列中相关蛋白与PHFPHF6 6表达的相关性表达的相关性选取 KEGG 通路富集分析中的相关基因进行相关性分析，免疫组化法验证组织微阵列中相关蛋白与 PHF6 表达的相关性。选取上海超芯生物科技有限公司购买的 75 例 KIRC 组织及癌旁组织（共 150 个矩阵），经二甲苯及梯度乙醇脱水，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）洗涤 3次，在微波炉内用柠檬酸盐修复 15 min，冷却至室温后，TBST 洗涤 3 次，免疫组化笔圈出组织，过氧化物酶封闭15 min。滴加稀释后的山羊血清一抗，4 孵育过夜，室温复温 30 min，胰蛋白酶标记的羊抗鼠/兔免疫球蛋白 G（immunoglobulin G，IgG）聚合酶孵育 1 h，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色 15 min，苏木素复染 15 min，1%酸性乙醇分化液分化 2 s，返蓝 2 min 后，梯度乙醇及二甲苯复水，封片，镜检。判定标准：依据染色强度进行评分，无着色计1 分，浅黄色染色计 2 分，黄色或深黄色染色计 3分，细胞呈较深黄色且没有背景着色计 4 分，细胞呈深黄色且没有背景着色计5分；依据阳性细胞所占比例评分，5%计 1 分，5%24%计 2 分，25%49%计 3分，50%75%计 4分，75%计 5分。将染色强度评分和阳性细胞所占比例评分相乘，14分为阴性，58分为弱阳性，912分为阳性，1325分为强阳性；其中18分为低表达，925分为高表达。1 1.4 4 统计学方法统计学方法使用R语言和SPSS 16.0对所有数据进行统计分析，计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用2检验；计量资料以均数标准差（x-s）表示，组间 比 较 采 用 t 检 验。采 用 Kaplan-Meier 法 评 估PHF6 高表达组与 PHF6 低表达组 KIRC 患者的生存差异，组间比较采用Log-rank检验；绘制ROC曲线，计算 AUC，评估 PHF6 表达对 KIRC 的诊断价值。采用 R 语言中的 cor 函数计算相关系数 r，验证组织微阵列中相关蛋白与 PHF6 表达的相关性。以P0.05为差异有统计学意义。2 2结果结果2 2.1 1 正常肾组织和正常肾组织和KIRCKIRC组织中组织中PHFPHF6 6表达情况的表达情况的比较比较TCGA 数据库中，正常肾组织中 PHF6 的相对表达量为（2.4340.051），明显高于 KIRC 组织的（2.0110.018），差异有统计学意义（t=8.215，P0.01）。TCGA 和 GTEx 数据库中，正常肾组织中PHF6 的相对表达量为（2.3520.482），明显高于KIRC组织的（2.0110.018），差异有统计学意义（t=7.417，P0.01）。2 2.2 2 TCGATCGA 数 据 库 中 不 同 临 床 特 征数 据 库 中 不 同 临 床 特 征 KIRCKIRC 患 者患 者KIRCKIRC组织中组织中PHFPHF6 6表达情况的比较表达情况的比较TCGA 数据库中，不同年龄、性别 KIRC 患者KIRC 组织中 PHF6 表达情况比较，差异均无统计学意义（P0.05）。不同临床分期、组织学分级、肿瘤状态 KIRC 患者 KIRC 组织中 PHF6 表达情况比较，差异均有统计学意义（P0.05），其中术后无新发肿瘤患者的 PHF6 高表达率高于术后新发肿瘤患者，且随临床分期、组织学分级升高，PHF6高表达率逐渐降低。（表1）2 2.3 3 组织微阵列中不同临床特征组织微阵列中不同临床特征 KIRCKIRC 患者患者 KIRCKIRC组织中组织中PHFPHF6 6表达情况的比较表达情况的比较组织微阵列中，不同年龄、性别、组织学分级情况KIRC患者KIRC组织中PHF6表达情况比较，差异均无统计学意义（P0.05）。不同临床分期KIRC患者 KIRC组织中 PHF6表达情况比较，差异有统计学意义（P0.05）。（表2）2 2.4 4 PHFPHF6 6表达水平对表达水平对KIRCKIRC的诊断价值的诊断价值ROC 曲线显示，KIRC 组织中 PHF6 表达水平诊断 KIRC 的 AUC 为 0.730（95%CI：0.6720.782），灵敏度为77.80%，特异度为58.90%。（图1）2 2.5 5 预后情况的比较预后情况的比较依据 PHF6 表达水平的中位数，将 TCGA 数据库中 KIRC 患者分为 PHF6 高表达组和 PHF6 低表表表1 1TCGATCGA数据库中不同临床特征数据库中不同临床特征KIRCKIRC患者患者KIRCKIRC组织组织中中PHFPHF6 6表达情况的比较表达情况的比较临床特征年龄（岁）6565性别男女临床分期组织学分级G1G2G3G4未知肿瘤状态术后无新发肿瘤术后新发肿瘤注：部分数据有缺失例数333198345186266571238214227207755350157PHF6高表达n（%）162（48.65）79（39.90）152（44.06）89（47.85）140（52.63）25（43.86）46（37.40）29（35.37）9（64.29）113（49.78）87（42.03）27（36.00）4（80.00）179（51.14）53（33.76）PHF6低表达n（%）171（51.35）119（60.10）193（55.94）97（52.15）126（47.37）32（56.14）77（62.60）53（64.64）5（35.71）114（50.22）120（57.97）48（64.00）1（20.00）171（48.86）104（66.24）2值3.8350.70112.1719.58813.198P值0.0500.4020.010.0440.01605癌症进展2023年3月第21卷第6期达组，Kaplan-Meier 法评估不同 PHF6 表达情况KIRC患者生存情况的差异，结果显示，PHF6高表达组患者的中位 OS、PFS、DSS 均长于 PHF6 低表达组，差异均有统计学意义（P0.05）。（图2图4）2 2.6 6 GOGO分析和分析和KEGGKEGG通通路富集分析路富集分析为研究PHF6参与KIRC发生发展的可能分子机制，对 TCGA 数据库中 PHF6 高表达组和 PHF6低表达组KIRC患者的基因进行分析，结果共筛选出 750 个差异基因，其中 300 个相对 PHF6 表达上调，450 个相对 PHF6 表达下调。GO 分析结果显示，差异基因的生物过程主要集中于体液免疫应答、补体激活和 B细胞介导的免疫上，细胞成分主要集中于免疫球蛋白复合物、含胶原蛋白的细胞外基质、细胞的顶端部分和血液微粒上，分子功能主要集中于抗原结合、糖胺聚糖结合和硫化合物结合上。将共同差异基因中 PHF6 高表达组的基因提取出来进行 KEGG通路富集分析，结果显示，PHF6 高表达的 KEGG 通路主要集中于胆固醇代谢、白细胞介素-17信号通路和类固醇激素生物合成中，表明 PHF6 可能通过生物代谢与合成、炎症反应影响免疫调节与应答，调节 KIRC 的发展进程。（图5、图6）2 2.7 7 免疫组化法验证组织微阵列中相关蛋白与免疫组化法验证组织微阵列中相关蛋白与PHFPHF6 6表达的相关性表达的相关性选取KEGG免疫相关的信号通路中参与KIRC发生发展的基因，探讨其与 PHF6 表达的相关性，从而进一步推断PHF6在KIRC中的作用。参与肿瘤调节的基因如肌醇 1，4，5-三磷酸 2 型受体（inositol 1,4,5-triphosphate receptor type 2，ITPR2）（是促进细胞衰老、减少细胞增殖的基因）、磷脂酶 A2组 A（phospholipase A2 group A，PLA2G4A）（是介导溶酶体损伤的基因）、前列腺素 F 受体（prostaglandin F receptor，PTGFR）（是抗血管生成的基因）、核糖体蛋白 S6激酶 A6（ribosomal proteinS6 kinase A6，RSK4）（是抑癌基因），均与 PHF6 的表达呈正相关（r=0.52、0.34、0.50、0.42，P0.01）。表明 PHF6 与 ITPR2、PLA2G4A、PTGFR、RSK4 在KIRC中的作用相似，可以抑制KIRC细胞的生长。通过免疫组化法验证组织微阵列中 RSK4 与表表2 2组织微阵列中不同临床特征组织微阵列中不同临床特征KIRCKIRC患者患者KIRCKIRC组织中组织中PHFPHF6 6表达情况的比较表达情况的比较临床特征年龄（岁）6565性别男女临床分期组织学分级G1G2G3G4注：部分数据有缺失例数11432984868363212598252PHF6高表达n（%）81（71.05）25（78.12）74（75.51）32（66.67）52（76.47）19（52.78）26（81.25）10（83.33）41（69.49）62（75.61）3（60.00）1（50.00）PHF6低表达n（%）33（28.95）7（21.88）24（24.49）16（33.33）16（30.77）17（47.22）6（18.75）2（16.67）18（30.51）20（24.39）2（40.00）1（50.00）2值0.6281.2678.5892.221P值0.4280.2600.0240.670图图1 1PHFPHF6 6表达诊断表达诊断KIRCKIRC的的ROCROC曲线曲线灵敏度0.20.40.60.81.001-特异度1.0PHF6表达00.5图图2 2PHFPHF6 6高表达组高表达组（n n=268268）与与PHFPHF6 6低表达组低表达组（n n=267267）KIRCKIRC患者的患者的OSOS曲线曲线累积生存率0.20.40.60.81.00生存时间（年）41012PHF6高表达组208PHF6低表达组6图图3 3PHFPHF6 6高表达组高表达组（n n=266266）和和PHFPHF6 6低表达组低表达组（n n=266266）KIRCKIRC患者的患者的PFSPFS曲线曲线累积生存率0.20.40.60.81.00生存时间（年）410PHF6高表达组208PHF6低表达组6图图4 4PHFPHF6 6高表达组高表达组（n n=265265）和和PHFPHF6 6低表达组低表达组（n n=265265）KIRCKIRC患者的患者的DSSDSS曲线曲线累积生存率0.20.40.60.81.00生存时间（年）41012PHF6高表达组208PHF6低表达组6606ONCOLOGY PROGRESS,Mar 2023 V ol.21 No.6PHF6 表达的相关性，由 2 名研究者独立对染色后的组织微阵列中PHF6蛋白和RSK4蛋白的阳性细胞所占比例和染色强度进行综合评分，结果显示，RSK4 蛋白的表达与 PHF6 蛋白的表达呈正相关（r=0.557，P0.01），表明 PHF6蛋白可能通过调节RSK4蛋白的表达抑制KIRC细胞的生长。（图7）3 3讨论讨论PHF6 的表达水平对 KIRC 患者的预后有重要意义。近年来，随着生物信息学技术的飞速发展，通过大数据分析某些或某类基因在疾病中的作用，可以为疾病的发生发展、治疗和预后评估等提供新思路。KIRC与免疫微环境、肿瘤特异性遗传和表观遗传学改变有关，这些改变均可导致多个肿瘤相关基因表达水平的改变。目前，虽然已经开发了新的诊断手段提高KIRC的诊断率，但由于KIRC 起病隐匿、肿瘤标志物较少，KIRC 患者的早期诊断效率仍较差7；因此，为寻找新的早期诊断和预后评估的生物标志物，本研究对TCGA数据库中 KIRC 患者的病历资料和 RNA-seq 数据进行了分析。本研究首先分析了TCGA数据库中KIRC患者的临床特征，结果显示，PHF6表达水平与KIRC患者的临床分期、组织学分级、肿瘤状态有关；且与正常肾组织相比，PHF6 在 KIRC 组织中表达下调。然后本研究绘制 ROC 曲线推断 PHF6 表达水平对KIRC的诊断效能，结果显示，PHF6表达水平诊断 KIRC 的 AUC 为 0.730（95%CI：0.6720.782），灵敏度为77.80%，特异度为58.90%。Kaplan-Meier分析发现，PHF6 高表达组患者的中位 OS、PFS、DSS 均长于 PHF6 低表达组患者，提示 PHF6 的表达水平可能对KIRC患者的预后有指示作用。目前，临床对 PHF6 如何参与 KIRC 的发生发展过程仍知之甚少，为进一步研究 PHF6 在 KIRC中的生物学功能，本研究依据 PHF6表达水平的中位数，对PHF6高表达组和PHF6低表达组KIRC患者的差异基因进行GO分析，结果显示，PHF6表达与体液免疫应答、B 细胞受体信号通路、抗原结合和补体激活有关，提示PHF6基因主要富集在免疫相关通路上，且可能对免疫相关通路存在促进作用；将共同差异基因中PHF6高表达组的基因提取出来进行 KEGG 富集分析显示，PHF6 高表达的KEGG 通路主要集中于胆固醇代谢、白细胞介素-17信号通路和类固醇激素生物合成中，表明PHF6可能通过生物代谢与合成、炎症反应影响免疫调节与应答，调节KIRC的发展进程。有研究证实，T细胞的衰竭是导致 KIRC 组织免疫抑制的关键因素，且与患者的不良预后有关8。既往研究证实，ITPR2 对 衰 老 和 凋 亡 的 触 发 有 重 要 贡 献14；PLA2G4A的下调减弱了肿瘤细胞的上皮-间充质转化过程，抑制了肿瘤细胞的生长和转移15-16；PTGFR甲基化改变可以将转录调控重新定位到肿瘤组织，从而抑制肿瘤进展17；RSK4 与多种肿瘤患者的生存期有关18-19。本研究选取上述基因与PHF6的表达水平进行相关性分析，并通过免疫组化方法验证组织微阵列中 RSK4 的表达与 PHF6 表达的关系，结果发现，TPR2、PLA2G4A、PTGFR 和 RSK4 均与 PHF6 的表达水平呈正相关，且 RSK4 蛋白的表达与PHF6蛋白的表达呈正相关。体液免疫应答补体激活B细胞介导的免疫循环免疫球蛋白介导的体液免疫应答免疫球蛋白介导的免疫应答补体活化，经典途径体液免疫反应的调节补体活化的调节免疫球蛋白复合物含胶原蛋白的细胞外基质细胞的顶端部分血液微粒内质网腔顶端质膜膜的锚固部件免疫球蛋白复合物循环抗原结合糖胺聚糖结合硫化合物结合肝素结合免疫球蛋白受体结合无机阴离子跨膜转运蛋白活性钠离子跨膜转运蛋白活性氯化物跨膜转运蛋白活性富集基因数203040P值0.000050.000100.000150.000200.040.060.08富集评分图图5 5差异基因的差异基因的GOGO分析分析胆固醇代谢白细胞介素-17信号通路类固醇激素生物合成病毒蛋白与细胞因子和细胞因子受体的相互作用非洲锥虫病阿米巴病突触囊泡周期磷脂酶D信号通路霍乱弧菌感染钙信号通路醛固酮调节钠重吸收集合管酸分泌-2.52.55.0log10P值0.0-5.0图图6 6差异基因的差异基因的KEGGKEGG富集分析富集分析PHF6RSK4高表达低表达图图7 7组织微阵列中组织微阵列中KIRCKIRC患者患者KIRCKIRC组织中组织中PHFPHF6 6与与RSKRSK4 4的表达情况的表达情况（免疫组化染色免疫组化染色，1010）607癌症进展2023年3月第21卷第6期综上所述，与正常肾组织相比，PHF6 在 KIRC组织中表达下调，PHF6 高表达 KIRC 患者的预后较好，RSK4 的表达与 PHF6 的表达呈正相关。可以根据PHF6的表达水平，对KIRC患者进行干预，有必要将其作为KIRC的候选生物标志物。参参 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