NK细胞疗法-医学课件.ppt

全球癌症趋势全球癌症趋势今后20年全球新患人数每年1000万1500万死亡人数每年600万1000万 18th International Congress on Anti-Treatment,Paris,2007中国癌症趋势中国癌症趋势 2000年发病约180-200万死亡140-150万064岁人口中，1/4死于癌症 中国癌症预防与控制规划纲中国癌症预防与控制规划纲要（要（2004-20102004-2010）癌症的三大常规治疗癌症的三大常规治疗手术手术-破冰船破冰船历史悠久手术本身的两面性：消除（降低）肿瘤负荷促进转移的倾向难以清除肿瘤微小转移灶很多患者就诊时已失去手术最佳时机癌症的三大常规治疗癌症的三大常规治疗化疗化疗-轰炸机轰炸机肿瘤内科治疗的基石对肿瘤细胞的杀伤缺乏选择性损伤正常组织Goldie-Coldman假说及“一级动力学”理论：化疗对数杀灭细胞，不可能彻底清除肿瘤细胞癌症的三大常规治疗癌症的三大常规治疗1898 年发现镭镭用于治疗肿瘤放疗有效破坏或消灭癌细胞，甚至可以治愈部分肿瘤放疗损伤机体正常细胞，降低机体免疫力 2024/6/4癌症治疗的癌症治疗的 现状现状靶向药物靶向药物NK免疫细胞生物治疗免疫细胞生物治疗是进一步提高癌症治疗疗效的是进一步提高癌症治疗疗效的最有前景的治疗方法最有前景的治疗方法政府全力支持政府全力支持-卫生部文件卫生部文件政府全力支持政府全力支持-卫生部文件卫生部文件 2011年生物免疫获得诺贝尔奖医学奖 诺贝尔生理学或医学奖评审委员会诺贝尔生理学或医学奖评审委员会10月月3日认定，本年度日认定，本年度3名获奖者名获奖者“发现免疫系统激活的关键原理，革命性地改变我们大家对免疫系统的理发现免疫系统激活的关键原理，革命性地改变我们大家对免疫系统的理解解”。也为人类哪些久治不愈的癌症。也为人类哪些久治不愈的癌症等等疾病提高新的治疗出路，也是疾病提高新的治疗出路，也是21世世纪唯一有可能攻克这些疾病的治疗方法。纪唯一有可能攻克这些疾病的治疗方法。国内权威报道国内权威报道 中央新闻联播对生物细胞免疫中央新闻联播对生物细胞免疫疗法最权威报道：肿瘤生物治疗疗法最权威报道：肿瘤生物治疗获得重大突破，早期癌症三分之获得重大突破，早期癌症三分之一可治愈。一可治愈。NK细胞免疫细胞免疫疗法也称为生物免疫疗法中的细胞治疗疗法也称为生物免疫疗法中的细胞治疗方法，具体方法是：通过提取患者体内不成熟的免疫细方法，具体方法是：通过提取患者体内不成熟的免疫细胞（采血），在实验室中进行胞（采血），在实验室中进行活化活化培养使其具有高效识培养使其具有高效识别和杀灭别和杀灭肿瘤肿瘤细胞的能力后，再回输患者体内。患者只细胞的能力后，再回输患者体内。患者只需配合做采血与回输血两个步骤，无需住院。需配合做采血与回输血两个步骤，无需住院。疗法优点突显在：通过采集人体自身疗法优点突显在：通过采集人体自身免疫免疫细胞，经细胞，经由体外培养使其数量成千上万倍增多，进而使免疫细胞由体外培养使其数量成千上万倍增多，进而使免疫细胞的靶向性杀伤功能增强，然后再回输到人体以杀灭血液的靶向性杀伤功能增强，然后再回输到人体以杀灭血液及组织中的病原体、癌细胞、突变的细胞，打破机体免及组织中的病原体、癌细胞、突变的细胞，打破机体免疫耐受，激活和增强机体的疫耐受，激活和增强机体的免疫力免疫力，具有治疗和防治双，具有治疗和防治双重功效。重功效。NKNK免疫细胞疗法免疫细胞疗法免疫系统的成员免疫系统的成员造血干细胞淋巴系骨髓系B细胞系T细胞系NKNK细胞细胞中性球嗜酸性球嗜碱性球肥大细胞单核球系树突细胞巨嗜细胞Nature Reviews Cancer Vol.2,Nov.2002:PP850-861NK免疫细胞对抗癌细免疫细胞对抗癌细胞的三大胞的三大法宝法宝：1.直接摧毁癌细胞直接摧毁癌细胞(perforin&granzymes)2.启动癌细胞的凋亡开关启动癌细胞的凋亡开关(Death Receptor)3.阻断癌细胞的营养供给阻断癌细胞的营养供给NK免疫细胞疗法的优势免疫细胞疗法的优势 1、术后治疗巩固疗效、术后治疗巩固疗效,防止肿瘤转移、复发，降低转移复防止肿瘤转移、复发，降低转移复发风险发风险41%左右；早期部分患者长期生存率达左右；早期部分患者长期生存率达70%；2、加强、加强放、放、化疗治疗效果化疗治疗效果，增加放、化疗对癌细胞的敏感，增加放、化疗对癌细胞的敏感性和杀伤率，性和杀伤率，减轻放疗副作用，减轻放疗副作用，提高机体免疫力；提高机体免疫力；3、对于癌末病患改善生活品质，提高生活质量，延长生命对于癌末病患改善生活品质，提高生活质量，延长生命周期；周期；4、NK免疫细胞疗法适应症广，对各种早期肿瘤有效率达免疫细胞疗法适应症广，对各种早期肿瘤有效率达93%，中晚期达，中晚期达75%；1、适应症广：有效治疗大多数实体恶性肿瘤，并能消灭对放、化疗不敏感及转移的肿瘤细胞；2、安全性：利用人体自身细胞杀死肿瘤细胞，毒副作用微乎其微；3、持久性：启动机体免疫系统，恢复机体免疫功能，持久杀伤肿瘤细胞；4、彻底性：提高机体免疫能力，彻底清除体内残留肿瘤细胞和微小转移病灶；5、针对性：DC细胞特异性识别肿瘤细胞，CIK细胞非特异性杀伤广谱的肿瘤细胞；6、全面性：重建和提高患者自身的机体免疫功能，全面识别、搜索、杀伤肿瘤细胞，有效防止肿瘤的复发和转移；NKNK免疫细胞疗法的免疫细胞疗法的主要特点主要特点l乳腺癌、子宫颈癌、卵巢癌乳腺癌、子宫颈癌、卵巢癌l脑肿瘤、原发性肝癌、肺癌脑肿瘤、原发性肝癌、肺癌l胃癌、食道癌、大肠癌胃癌、食道癌、大肠癌l血癌、淋巴癌血癌、淋巴癌l胆嚢癌、胆嚢癌、胰胰臓癌、癌性腹水等臓癌、癌性腹水等l肾癌、前列腺癌肾癌、前列腺癌NK免疫细胞疗法技术的应用免疫细胞疗法技术的应用禁忌症：禁忌症：、怀孕或正在哺乳期妇女；、怀孕或正在哺乳期妇女；、脏器移植者；、脏器移植者；、严重自身免疫性疾病患者；、严重自身免疫性疾病患者；、不可控制的感染性疾病患者；、不可控制的感染性疾病患者；、对生物制剂过敏者；、对生物制剂过敏者；、T细胞淋巴瘤患者；细胞淋巴瘤患者；、正在进行全身放疗、化疗的患者；正在进行全身放疗、化疗的患者；、晚期肿瘤造成的恶病质、外周血象过低患者。晚期肿瘤造成的恶病质、外周血象过低患者。适应症：适应症：、手术后患者，可防止肿瘤转移复发；、手术后患者，可防止肿瘤转移复发；、无法进行手术、放疗、化疗的中晚期患者；、无法进行手术、放疗、化疗的中晚期患者；、放疗、化疗失败的患者；、放疗、化疗失败的患者；、放疗或化疗后患者的综合治疗；、放疗或化疗后患者的综合治疗；、骨髓移植后或化疗缓解后的白血病患者；、骨髓移植后或化疗缓解后的白血病患者；、癌性胸、腹腔积液患者。、癌性胸、腹腔积液患者。细胞疗法临床应用的适应症和禁忌症细胞疗法临床应用的适应症和禁忌症NKNK免疫细胞治疗项目免疫细胞治疗项目一、一、一、一、自然杀伤细胞自然杀伤细胞自然杀伤细胞自然杀伤细胞(Natural kell cell,NK)(Natural kell cell,NK)(Natural kell cell,NK)(Natural kell cell,NK)；二、二、二、二、NKNKNKNK细胞因子诱导的杀伤细胞细胞因子诱导的杀伤细胞细胞因子诱导的杀伤细胞细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)(CIK)(CIK)(CIK)；（一）（一）NKNK自然杀伤细胞（自然杀伤细胞（NK cellsNK cells）PBMNC PBMNC（50ml 50ml 外周血）外周血）NKNK细胞培养细胞培养NKNK细胞数量可达细胞数量可达 0.53100.53109 9培养12-14天用正常健康人由来的用正常健康人由来的PBMC的实验例的实验例用正常健康人由来的用正常健康人由来的PBMC，经由，经由NK诱导诱导Kit的共存培养的共存培养后，后，NK细胞被诱导出来细胞被诱导出来36 yrmaleday0 day12CD56CD1622.77%=5.08%+17.69%94.81%=3.81%+91%http:/www.kuramae- 3.0%（细胞）CD16 CD56 74.8%（细胞）CD56 18.8%（细胞）细细胞胞浓度度 93.6疗疗法的法的细细胞胞浓度度CD3 3.0%（细胞）CD16 CD56 40.7%（细胞）CD56 52.4%（细胞）细细胞胞浓度度 93.1NKNK细胞的治疗策略细胞的治疗策略抽肿瘤患者外周血(50ml)体外诱导体外诱导NKNK细胞细胞每星期回输一次每星期回输一次NKNK细胞给细胞给患者（至少4次）回输的NK细胞能提高机体免疫功能杀伤残留的肿瘤细胞，抑制肿瘤的复发和转移蔵前内科蔵前内科 NK细胞培养技术的细胞培养技术的三高优势：三高优势：n高数量(健康人每剂可达530亿颗以上的细胞)n高纯度(NK细胞纯度最高可达9095%)n高活性(与目前市面常用的CIK细胞比较)NKNK细胞之其它应用细胞之其它应用nNK免疫疾病如：红斑性踉跄、硬皮症、异位性皮肤炎n预防医学、保养（保健）如：增强身体免疫力、使身体年轻化、增加身心和生活满意度总结总结1.确立高活性、高纯度确立高活性、高纯度NK细胞的培养方法。细胞的培养方法。2.将高纯度的活性化将高纯度的活性化NK细胞，实际应用在对肿瘤及细胞，实际应用在对肿瘤及病毒感染疾病的免疫疗法上。病毒感染疾病的免疫疗法上。3.3.NKNK细胞免疫疗法是一种専属于个人细胞免疫疗法是一种専属于个人(tailor made)(tailor made)的医疗，亦是一种提高免疫体质的理想医疗。的医疗，亦是一种提高免疫体质的理想医疗。4.4.应用无应用无副作用的副作用的NKNK细胞免疫疗法治疗癌症，可细胞免疫疗法治疗癌症，可维持病患良好的维持病患良好的QOLQOL(Quality of Life)(Quality of Life)，对身体不会产，对身体不会产生任何负担生任何负担并且逹到延命效果。并且逹到延命效果。(二二)NKCIK)NKCIK细胞免疫治疗细胞免疫治疗PBMNC 0.5-310PBMNC 0.5-3107 7（50ml50ml）CIKCIK细胞培养细胞培养12-14 days 11.51012-14 days 11.5101010CIK细胞的表型细胞的表型NKCIK细胞的治疗策略细胞的治疗策略抽肿瘤患者外周血(50ml)体外诱导体外诱导CIKCIK细胞细胞(1x10(1x101010以上以上)每星期回输一次每星期回输一次CIKCIK细胞给细胞给患者（至少4次）回输的CIK细胞能提高机体免疫功能杀伤残留的肿瘤细胞，抑制肿瘤的复发和转移CIKCIK细胞免疫治疗的作用细胞免疫治疗的作用 1 1、改善生活质量（包括食欲增强，睡眠改善）；、改善生活质量（包括食欲增强，睡眠改善）；2 2、经过手术、介入和放疗使肿瘤负荷下降后，结合、经过手术、介入和放疗使肿瘤负荷下降后，结合CIKCIK细胞治疗，对抑制肿瘤复发和转移具有较好的作用；细胞治疗，对抑制肿瘤复发和转移具有较好的作用；3 3、在化疗间隙中，选择适当的时间进行、在化疗间隙中，选择适当的时间进行CIKCIK治疗对保护治疗对保护机体的免疫功能具有较好的作用；机体的免疫功能具有较好的作用；4 4、一些肝癌患者经过、一些肝癌患者经过CIKCIK治疗后甲胎球蛋白值下降，肝治疗后甲胎球蛋白值下降，肝功能好转，乙肝功能好转，乙肝DNADNA的复制素降低；的复制素降低；5 5、血液中抗肿瘤效应细胞数量和抗肿瘤的细胞因子有所、血液中抗肿瘤效应细胞数量和抗肿瘤的细胞因子有所提高。提高。NK免疫细胞生产流程免疫细胞生产流程n收集30-50毫升的周边静脉血 20-40 毫升 含抗凝剂肝素的采血管 周边单核球(PBMC)的来源10 毫升 不含抗凝剂的的采血管 NK血清来源n周边单核球进入为时57天的NK免疫细胞诱导程序。n经过57天的NK免疫细胞诱导程序后，进入NK免疫细胞扩增阶段。NK免疫细胞生产流程免疫细胞生产流程污染检测污染检测细菌培养检测:方法方法:含血琼脂48小时培养。结果结果:若呈现阳性，则将停止NK细胞的培养。实施时程实施时程:第7、12、14天施行。内毒素检测:方法方法:鲎试剂凝集法。结果结果:若呈现阳性（产生凝集现象），则将不得使用于病人。实施时程实施时程:第14天（出厂当天）施行。生菌数检测:方法方法:Hygiene Swab 结果结果:若呈现阳性，则将不得使用於病人实施时程：实施时程：出厂当天回输前（24小时内）。NKNK免疫细胞治疗后的疗效评估免疫细胞治疗后的疗效评估 按照国家食品药品监督管理局有关生物制品的疗效评估按照国家食品药品监督管理局有关生物制品的疗效评估方法，主要以肿瘤病灶的大小变化和患者的生存期评估疗效方法，主要以肿瘤病灶的大小变化和患者的生存期评估疗效,及患者的生活质量等：及患者的生活质量等：1 1、免疫学指标改善的评价按统计学结果判定：治疗前后、免疫学指标改善的评价按统计学结果判定：治疗前后T T淋淋 巴亚群的变化；例如巴亚群的变化；例如CD4/CD8CD4/CD8的比值增高，的比值增高，NKNK细胞数量有所改细胞数量有所改善等；善等；2 2、无无进进展生存期展生存期(PFS)(PFS)和生存期和生存期；3 3、对有可测量病灶的患者通过影像检查按、对有可测量病灶的患者通过影像检查按RECISTRECIST标准评价，标准评价，分为完全缓解分为完全缓解(CR)(CR)，部分缓解，部分缓解(PR)(PR)，稳定，稳定(SD)(SD)和进展和进展(PD)(PD)；4 4、肿瘤患者的肿瘤标记物的变化情况。、肿瘤患者的肿瘤标记物的变化情况。n53岁男性，结肠癌肝转移。n经过2剂的NK治疗后，肝转移病灶消退。临床实例一：结肠癌肝转移临床实例一：结肠癌肝转移Pre NKPost NKAug.31,2001Sep.27,2001Mar.14,2002Private&Confidentialn经过NKNK治疗后，其脑部病灶明显消退。（分别是8剂和6剂NK）临床实例二临床实例二:脑神经胶质瘤脑神经胶质瘤27-yr-old female16-yr-old femalePrivate&Confidential临床实例三：乳癌临床实例三：乳癌n56岁女性，乳癌末期，腋下、锁骨淋巴结转移。n经过本公司17剂的NK治疗，其转移病灶明显消退。Pre NKPost NK临床实例临床实例四四：丙型肝炎：丙型肝炎n53岁女性，丙型肝炎。n经过8剂NK治疗，丙型肝炎病毒指数明显下降。Private&Confidential临床实例临床实例五五：卵巢癌：卵巢癌 (33-yr/female,bilateral ovarian cancer stage IIIc)33岁女性，卵巢癌。经过9剂NK治疗，CA125指数明显下降。傳統療法+免疫細胞療法七年存活率為 52%傳統療法七年存活率為 24%兩者存活率相差一倍!肺癌患者接受傳統療法和細胞免疫療法的成效 傳統療法(即手術療法後接受化學療法和放射線治療)搭配細胞免疫治療後，肺癌病患七年存活率明顯高於僅接受傳統療法者。K imura H,et al.,1997分类分类年龄年龄/性别性别接受接受NK前之简史前之简史接受接受NK后之结果简述后之结果简述效果效果副作用副作用原发性肝癌原发性肝癌77/男HBV(+),微创消融手术，CIK 治疗B型肝炎病毒DNA指数明显下降(5.371051.51105copies/ml).从正子扫瞄片观察得知并无癌细胞活动的现象。好好无无原发性肝癌原发性肝癌43/男HbsAg(+),肝拴筛手术,微创消融手术，CIK 治疗HbsAg(-)（病毒表面抗原阴性）,AFP:2.02 ng/ml(0-25)位于正常值。从正子扫瞄片观察得知，未有癌复发现象。好好无无直肠癌肝转移直肠癌肝转移71/女直肠切除术，肝脏微创消融手术,CIK治疗由断层扫瞄观察，肝病灶无复发。好好无无结肠癌肝转移结肠癌肝转移女右结肠切除,肝拴筛手术，肝脏微创消融手术,CIK治疗从核磁共振观察，肝病灶无复发。好好无无肺腺癌肺腺癌69/男部分肺叶切除,支气管动脉灌注化疗断层扫瞄结果显示，除了纵膈淋巴结外，原有的病灶和淋巴结肿大消退。好好无无结肠癌结肠癌62/男部分结肠切除CA199:6.93 U/ml(0-35)AFP:4.01 ng/ml(0-25)CEA:1.63 ng/ml(0-5)（癌症标记皆位在正常值）由断层扫瞄观察，其病灶无复发。好好无无乳癌乳癌69/女左乳房改良式切除术,化疗由胸部正子扫瞄观察，其病灶无复发。好好无无肾癌肾癌73/男肾切除术。术后肠阻塞，预后差无明显疗效不明显无无NK免疫细胞疗法之疗效免疫细胞疗法之疗效Private&Confidential2024/6/4临床实例临床实例五五：肺癌：肺癌 患者男患者男70岁住院号：岁住院号：151182综合科综合科入院诊断：左上肺腺癌入院诊断：左上肺腺癌第第一一次次住住院院行行诱诱导导化化疗疗，后后先先后后行行gamma刀刀治治疗疗及及射射频频消消融融治治疗疗，并并于于2005.12.6-2007.6.21 共共进进行行CIKCIK治治疗疗：2626次次；DC-CIKDC-CIK治治疗疗：1515次次。出出院院时时一一般般情情况况好好，肿肿瘤瘤标标志志物物无无升升高高，脑脑无无占占位位，肺肺部部病病灶灶及及纵纵隔隔淋淋巴巴结结均均无无活活性性,到到现现在在无无瘤瘤生生存存已已1818个个月，这个病人是综合治疗的范例。月，这个病人是综合治疗的范例。2024/6/42024/6/4左乳癌切除术后，经两次化疗后进行6次NK和6次CIK细胞免疫治疗，2007-11-20胸部PET-CT示未见复发谢谢各位谢谢各位