基于RNA-Seq数据分析...化及PPAR信号通路的影响_金哲勇.pdf

吉林农业大学学报 2023，45（2）：221-227http:/Email:jlndxb Journal of Jilin Agricultural University基于RNA-Seq数据分析油酸对牛前体脂肪细胞分化及PPAR信号通路的影响*金哲勇1，张军芳2，唐琳2，李强2，金鑫1*1.延边大学实验动物中心，延吉 133002；2.东北寒区肉牛科技创新教育部工程研究中心，延吉 133002摘 要：利用100 mol/L油酸对细胞进行诱导分化，通过RNA-Seq技术对分化后48，96 h的细胞进行转录组测序，对差异表达基因进行GO功能注释和KEGG富集分析。结果表明：与分化48 h时相比，分化96 h时差异表达基因数增加3 519个，差异表达基因的分子功能、参与的生物过程和细胞组成随分化时间不同均发生变化，生化代谢途径和信号转导途径也差异较大；由过氧化物酶体增殖物激活受体（Peroxisome proliferators-activated receptors，PPARs）信号通路的分析结果可以得出，分化 48 h时，PPAR的表达上调，信号通路成员PLIN2、CPT1，SREBP1、FABP4上调，SCD表达下调；分化96 h时，PLIN2、SREBP1、CPT1显著上调，PPAR、SCD的表达显著下调，FABP4表达无显著变化。说明油酸对延边牛前体脂肪细胞分化过程中的转录组学及信号通路存在一定影响。关键词：延边牛；油酸；转录组学；前体脂肪细胞；PPAR信号通路中图分类号：S823 文献标志码：A 文章编号：1000-5684（2023）02-0221-07DOI：10.13327/j.jjlau.2021.1481引用格式：金哲勇，张军芳，唐琳，等.基于RNA-Seq数据分析油酸对牛前体脂肪细胞分化及PPAR信号通路的影响 J.吉林农业大学学报，2023，45（2）：221-227.Effects of Oleic Acid on Differentiation of Bovine Precursor Adipocytes and PPAR Signaling Pathway Based on RNA-Seq Data*JIN Zheyong1，ZHANG Junfang2，TANG Lin2，LI Qiang2，JIN Xin1*1.Experimental Animal Center of Yanbian University，Yanji 133002，China；2.Engineering Research Center of Northeast Cold Region Beef Cattle Science&Technology Innovation，Ministry of Education，Yanji 133002，ChinaAbstract：Cell differentiate was induced with 100 mol/L oleic acid,and transcriptome sequencing was performed on cells by RNA-Seq technology at 48 and 96 h after differentiation.GO functional annotation and KEGG enrichment analysis were performed for differentially expressed genes.The results showed that the number of differentially expressed genes increased by 3 519 at 96 h compared with that at 48 h.The molecular functions,biological processes and cell composition of differentially expressed genes changed with differentiation time.Biochemical metabolic pathways and signal transduction pathways were also different.According to the analysis results of PPAR signaling pathway,PPAR expression was up-regulated at 48 h differentiation,while the expression of SCD was down-*基金项目：吉林省教育厅项目（JJKH20230631），国家自然科学基金项目（31660667），延边大学博士启动基金项目（ydbq202229）作者简介：金哲勇，男,硕士,助理实验师，研究方向：动物遗传育种与繁殖。收稿日期：2021-11-02*通信作者：金鑫，E-mail：吉林农业大学学报 2023 年 4 月Journal of Jilin Agricultural University 2023，Aprilregulated in PLIN2,CPT1,SREBP1 and FABP4.At 96 h of differentiation,the expression of PLIN2,SREBP1 and CPT1 were significantly up-regulated,PPAR and SCD were down-regulated,and FABP4 expression was not significantly changed.Therefore,the effects of oleic acid on transcriptome and signal pathway of Yanbian cattle preadipocytes were different at different differentiation time.Key words：Yanbian cattle；oleic acid；transcriptomics；precursor adipose；PPAR signaling pathway油酸作为单不饱和脂肪酸，是牛肉品质评定体系中重要的评价指标之一，同时也是肉牛肌内脂肪组织中含量最丰富、最重要的脂肪酸。肉牛脂肪酸组成与肌内脂肪沉积关系密切。过氧化物酶体增殖物激活受体（Peroxisome proliferators-activated receptors，PPARs）是由脂肪酸及其衍生物激活的核激素受体，属于核激素受体家族中的配体激活受体，包括 PPAR，PPAR/，PPAR等 3 个亚型。PPARs 调节基因转录的经典途径包括其通过与配体结合的初始激活与视黄醇类X 受体（RXR）的异二聚化。PPAR-RXR 二聚体与位于启动子或基因内区的 DNA 应答元件（PPRE）结 合。同 时，核 受 体 共 激 活 因 子 与PPAR-RXR 协同作用并且补充和稳定活性转录复合体，可调节脂质代谢，脂肪形成，维持代谢稳态和炎症基因的表达1。研究表明，油酸是PPAR 的天然激活配体，能够激活 PPAR 与视黄醇类X受体形成异源二聚体，进而调控目的基因的转录，与其他类型的脂肪酸相比，在调节脂质代谢和抗氧化方面有其自身的特点2-3。同时，油酸可以增强胰岛素信号传导，促进胰岛素诱导脂肪细胞摄取葡萄糖，具有通过激活PPAR进而促进脂肪生成及其下游产物的表达，同时可以诱导3T3-L1细胞中甘油三酯的积累4，具有调控前体脂肪细胞增殖和分化的作用，目前已在很多研究中使用油酸作为促进脂肪细胞分化的诱导剂5。在肉牛的肌内脂肪中，油酸含量与肌内脂肪含量呈正相关关系。但是，油酸作为肉牛肌内脂肪组织中最重要的单不饱和脂肪酸，在延边牛脂肪细胞分化过程和脂肪沉积过程中的具体作用机制尚不清楚。本研究拟以油酸作为促进延边牛前体脂肪细胞分化的诱导剂，通过RNA-Seq技术对延边牛前体脂肪细胞分化过程中的差异表达基因进行分析，并明确油酸诱导下不同分化阶段主要信号通路的变化及对关键基因的调控作用，为研究油酸诱导延边牛前体脂肪细胞的分化调控机制及从分子育种学角度为肉牛生产应用提供素材。1材料与方法1.1细胞延边牛前体脂肪细胞，为延边大学东北寒区肉牛科技创新教育部工程研究中心分离鉴定并保存的前体脂肪细胞系。1.2主要试剂FBS（澳洲胎牛血清）、青链霉素混合液、链霉蛋白酶、0.25%胰蛋白酶EDTA-triypsin、DMEM高糖培养液均购自Gibco公司；荧光定量试剂盒、4%多聚甲醛、无钙镁磷酸盐缓冲液、油红O染色试剂盒等均购自Solarbio公司。1.3前体脂肪细胞的传代培养及诱导分化参照文献 6 的方法进行前体脂肪细胞的传代培养。以 100 mol/L油酸+5%FBS/DMEM 为分化液对传代培养至第3代的延边牛前体脂肪细胞（完全汇合）进行体外诱导分化，将诱导处理后的细胞置于37、5%CO2的恒温培养箱中培养，2 d换1次分化液。1.4油红O染色脂肪细胞油红O染色参照Solarbio油红O染色试剂盒说明书（G1262）提供的方法进行。1.5转录组测序及差异表达基因分析用 TRIzol 法 分 别 提 取 经 油 酸 处 理 后 0 h（CON），48 h（OA-48 h），96 h（OA-96 h）的延边牛前体脂肪细胞RNA，交由爱默基因（厦门）生物科技有限公司进行 RNA-Seq分析。使用Cuffdiff软件识别样品中的差异基因，在保留具有统计学显著性意义（P0.05）基因的基础上保留Fold change大于1.500 0或者小于0.667 0的基因 log2（1.500 0）=0.584 9，log2（0.667 0）=-0.584 9，对筛选出的差异基因用在线IGV软件进行GO和KEGG分析。1.6差异表达基因的实时荧光定量PCR验证及引物用TRIzol法提取分化后不同时间脂肪细胞的总 RNA，用 FastkinggDNA Dispelling RT SuperMix试剂盒构建cDNA文库。随机选取4个差异表达222金哲勇，等：基于RNA-Seq数据分析油酸对牛前体脂肪细胞分化及PPAR信号通路的影响吉林农业大学学报 Journal of Jilin Agricultural University基因进行实时荧光定量 PCR以验证转录组测序数据的准确性。以牛 GAPDH 基因为内源性对照，委托生工生物（上海）股份有限公司合成引物（表1），反应程序：95 预变性15 s；95 变性5 s，55 退火30 s，72 延伸30 s，共40 个循环。PCR反应体系 20 L：Dye 0.5 L，SYBR 10 L，上、下游引物（10 mol/L）各 0.5 L，cDNA 模板 1 L，ddH2O 7.5 L。1.7数据分析用2Ct计算各基因的相对表达量，用统计学软件 Graphpad Prism 6.07对基因的相对表达量进行单因素方差分析和多重比较分析，并绘图（P0.05表示有显著性差异）。2结果与分析2.1油酸对牛前体脂肪细胞分化的油红O染色结果从油红O染色结果可以看出（图1），0 h时未见有脂滴生成，只能看见被染成蓝色的细胞核。待分化至48 h时，可明显观察到细胞核周围有圆形、被染成红色的脂滴生成，96 h时，脂滴较48 h时更加密集，且数量明显增多，且脂滴也变得更大。2.2差异基因分析由转录组测序结果分析得出，经油酸诱导分化后 48 h，3 926 个差异表达基因中，有 2 263 个上调基因和1 663个下调基因；分化96 h时，7 445个差异表达基因中，有 7 088 个上调基因和 357 个下调基因。综合分析后得出，分化 96 h 与 48 h相比，差异表达基因数量增加了 3 519 个，其中，上调基因增加了 4 825 个，下调基因减少了1 306个。由图2可以看出差异表达基因的分布情况。表1PCR引物信息Table 1PCR primer information基因GAPDHFASHSP70ACCAMPK登录号NM_001034034NM_174662NM_203322NM_174224NM_001109802引物序列(53)F：ACTCTGGCAAAGTGGATGTTGTCR：GCATCACCCCACTTGATGTTGF:ACCCGGAATACCAAGTGCAGR:GTTGCTCGTTGGTGTGCATTF:GGGGAGGACTTCGACAACAGR:CGTCCTCCGCCTTGTACTTTF:CTGAACCAGCACTCCCGATTR:ATTCCCTTCCCTCCTCCTCCF:CACCAAGGTGTAAGGAAAGCAR:ACGGGTTTACAACCTTCCATTC退火温度/6060555555片段大小/bp143123901926127图1不同分化时间油红O染色效果（200）Fig.1Effect of oil red O staining at different differentiation time（200）223吉林农业大学学报 2023 年 4 月Journal of Jilin Agricultural University 2023，April2.3差异表达基因的实时荧光定量PCR验证从测序得到的数据中随机抽取4个差异表达基因 AMPK、FAS、ACC 和 HSP70 进行实时荧光定量PCR试验，验证转录组测序结果的可靠性。由图 3可见，与对照组相比，AMPK的表达从处理后开始上升，96 h 时最高（P0.05）；FAS 的表达从48 h时开始显著下降（P0.05）；ACC的表达在 48 h 时显著下降（P0.05）之后又恢复到处理前水平，表现为先降后升；HSP70 的表达在 48 h时达到最高（P0.05），96 h 时略下降，总体表现为先升后降。经检验随机抽取的 4 个基因在不同分化时间的表达变化与测序所得结果变化趋势一致，测序结果可靠，可用于进行下一步分析。2.4油酸对差异表达基因GO项分析的影响基因注释GO富集分析呈现了生物过程中差异基因的数量布局，以及差异基因参与的生物过程（BP）、分子功能（MF）及细胞组成（CC）等。通过GO富集分析结果得出，在油酸的诱导下，延边牛前体脂肪细胞中调节脂肪形成相关过程重要GO项的基因发生了一定的变化，经油酸诱导48 h时，有1 302个差异基因参与了包括复制处理、对营养水平的反应、Ras蛋白信号转导调控等6 897种生物过程，1 366个差异基因被富集到核仁、核体、核浆等857个不同的细胞组成；分子功能类别上，1 127个差异基因富集在嘌呤核糖核苷三磷酸结A.OA48 h-CON；B.OA96 h-CON图2差异表达基因分布火山图Fig.2Volcanic map of the distribution of DEGs组间标注不同小写字母表示有显著性差异（P0.05)图3差异表达基因验证Fig.3Validation of differentially expressed genes224金哲勇，等：基于RNA-Seq数据分析油酸对牛前体脂肪细胞分化及PPAR信号通路的影响吉林农业大学学报 Journal of Jilin Agricultural University合、ATP结合、酸酐水解酶活性等1 513种分子功能上。经油酸诱导96 h，2 581个差异基因参与了包括信使RNA代谢过程、细胞大分子分解代谢过程、细胞定位等8 420种生物过程；2 705个差异基因被富集到核浆、线粒体基质、微管细胞骨架等1 115 个不同的细胞组成；在分子功能类别上，2 241个差异基因与ATP结合、腺嘌呤核苷酸结合等1 982种分子功能相关。2.5油酸对差异表达基因KEGG富集的影响通过KEGG富集分析结果可知，差异表达基因主要参与生化代谢途径和信号转导途径。分析得出，经油酸诱导48 h，有1 630个差异表达基因富集到102个通路中，其中，富集程度比较高的通路分别为人类乳头瘤病毒感染、Epstein-bar病毒、碳代谢、细胞衰老、脂肪酸代谢、p53 信号通路、PPAR 等。表达上调的基因主要富集在 RNA 运输、细胞衰老、自噬动物、泛素介导的蛋白水解作用等通路中，表达下调的基因主要富集在人类乳头瘤病毒感染、MAPK信号通路、Epstein-bar病毒、黏着斑等通路中。经油酸诱导96 h，有3 183个差异表达基因富集到179个通路中，其中，富集程度比较高的通路分别为MAPK信号通路、内吞作用、细胞衰老等通路中，表达上调的基因主要富集在MAPK 信号通路、内吞作用、内质网的蛋白质加工、泛素介导的蛋白水解作用等通路中，表达量下调的基因主要富集在人类T细胞白血病病毒1感染、阿尔茨海默病、亨廷顿病、氧化磷酸化及PPAR等信号通路中。2.6油酸对延边牛前体脂肪细胞发育过程中PPAR信号通路的影响根据富集分析结果和PPAR信号通路内基因的表达变化可知，经油酸诱导48，96 h时，通路内富集的差异表达基因发生了明显变化，即分化48 h 时，PPAR 基因表达上调，同时，FABP4、PLIN2、ACSL6、CPT1A、GK、MMP1、ANGPTL4 和CD36等8个基因也均上调，只有SCD基因表达下调，即10个差异表达基因中，9个基因上调和1个基因下调。分化96 h时，表达上调的基因分别为CTP1A、ANGPTL4、NR1H3、GK、PCK1、ACSL6、MMP1、PLIN2和CD36等9个基因，表达下调的基因为LPL和SCD基因，即11个差异表达基因中，9 个基因上调和2个基因下调。各差异基因的表达量变化见表2。表2分化不同时间PPAR信号通路的差异表达基因变化Table 2Changes of differentially expressed gene in PPAR signaling pathway at different differentiation time组别OA-48 hOA-96 h基因名称ACSL6SCDPPARGCPT1AANGPTL4MMP1FABP4GKPLIN2CD36NR1H3ACSL6SCDLPLCPT1AANGPTL4MMP1GKPCK1PLIN2CD36PPARGlog2变化倍数2.889 0-1.150 60.796 31.993 36.461 64.448 71.134 51.806 62.814 34.381 50.766 82.433 5-1.837 4-1.120 52.107 66.800 53.674 11.688 31.899 33.236 84.029 50.491 2P值0.000 80.000 10.001 00.000 10.000 10.000 10.000 10.000 10.000 10.000 10.000 80.000 80.000 11.000 00.000 10.000 10.000 10.000 11.000 00.000 10.000 10.001 0表达变化上调下调上调上调上调上调上调上调上调上调上调上调下调下调上调上调上调上调上调上调上调上调变化倍数7.407 60.450 41.736 63.981 588.132 421.837 02.195 43.498 27.033 820.843 11.701 45.402 20.279 80.459 94.309 8111.471 412.764 93.222 83.730 29.426 816.330 51.405 6225吉林农业大学学报 2023 年 4 月Journal of Jilin Agricultural University 2023，April3讨论脂肪酸是机体主要能量来源之一，通过核受体如PPARs、肝脏X受体及各种转录因子如肝细胞核因子-4a和胆固醇调节元件结合蛋白（Sterol-regulatory element binding proteins，SREBPs）7等来调节脂质生成。脂肪酸分为饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸2种，同时，不饱和脂肪酸又可以根据分子内双键的多少分为单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。与饱和脂肪酸相比，不饱和脂肪酸可以更好地激活PPAR-，进而参与脂肪组织质量减少和抑制肥胖过程8-9。研究表明，PPAR-的内源性活化剂如棕榈酸、油酸和亚油酸等均可诱导3T3-L1 细胞中甘油三酯的积累以及 PPAR 和GLUT4蛋白的表达4，10。其中，油酸可以作为脂肪细胞分化的诱导促进剂，能够通过调控基因的表达调节前体脂肪细胞增殖和分化，并影响脂肪生成和下游产物的表达11。据报道，在肉牛肌肉和脂肪组织中，油酸是所有脂肪酸类型中含量最丰富的脂肪酸，且脂肪组织的质量与油酸含量呈正相关关系，尤其是日本和牛因其肌筋膜内含有脂肪细胞，因此其肌肉的油酸含量非常高12-19。本试验仅利用油酸作为延边牛前体脂肪细胞的诱导分化剂，进一步证实了油酸对前体脂肪细胞的分化的促进作用，可为今后脂肪细胞分化促进剂的筛选提供参考。目前，国内外学者利用转录组测序技术在组织水平和细胞水平上都进行了大量的研究，证实了该项技术的科学性和准确性20-25。云巾宴等26利用转录组测序技术对延边黄牛不同分化时期的脂肪细胞转录本进行分析，得到了大量的不同分化时期的差异表达基因。朴政玉27利用传统的鸡尾酒法对延边牛棕色脂肪细胞和白色脂肪细胞分别进行诱导分化，研究不同脂肪细胞分化前期的转录组差异，筛选出与脂肪细胞分化密切相关的功能基因和蛋白。金鑫28在利用油酸诱导延边牛前体脂肪细胞的条件下，分析了不同分化时间（48，96 h）主要成脂相关基因的表达变化以及蛋白表达变化规律。本试验在前期研究的基础上，不仅筛选出大量分化不同时间的差异表达基因，还对差异表达基因的生化代谢途径和信号转导途径进行了进一步的分析，明确了不同分化时期脂肪细胞的转录组差异，尤其是具体分析了油酸在不同分化时间对 PPAR 信号通路的影响，明确了不同分化时间的差异表达基因及表达量变化，证明了油酸不仅可以诱导延边牛前体脂肪细胞分化，影响细胞的生化代谢途径和信号转导途径，同时还对PPAR信号通路起到重要的调节作用，研究结果可以为今后肉牛品种的选育及从分子营养学角度改良肉质性状提供一定的参考依据。本试验结果表明，利用油酸诱导延边牛前体脂肪细胞分化，分化不同时间对差异表达基因的数量产生一定影响；同时，对PPAR信号通路的研究结果表明，分化48 h时，PPAR、FABP4、PLIN2、ACSL6、CPT1A、GK、MMP1、ANGPTL4 和 CD36 等9 个基因表达上调，SCD基因表达下调；分化96 h时，CTP1A、ANGPTL4、NR1H3、GK、PCK1、ACSL6、MMP1、PLIN2和 CD36等 9个基因表达上调，LPL和SCD基因表达下调。参考文献：1 刘冬梅，肖美先，王海利，等.PPAR-/AP-1信号通路在相关疾病中作用的研究进展 J.宜春学院学报，2021，43（6）：12-16.2 Eguchi K，Manabe I，Oishi-Tanaka Y，et al.Saturated fatty acid and TLR signaling link cell dysfunction and islet inflammation J.Cell Metabolism，2012，15（4）：518-533.3 邢媛媛，李红磊，李大彪，等.油酸对奶牛乳腺上皮细胞内甘油三酯含量和乳脂肪合成相关基因表达的影响 J.中国畜牧杂志，2017，53（7）：56-61.4 Feng L M，Yang J Z，Liu W N，et al.Lipid biomarkers in acute myocardial infarction before and after percutaneous coronary intervention by lipidomics analysis J.Medical Science Monitor，2018，24：4175-4182.5 Ding S T，Mersmann H J.Fatty acids modulate porcine adipocyte differentiation and transcripts for transcription factors and adipocyte-characteristic proteins J.The Journal of Nutritional Biochemistry，2001，12（2）：101-108.6 郭盼盼，金鑫，孙建富，等.基于RNA-Seq数据分析环格列酮和胰岛素诱导延边黄牛前脂肪细胞分化的差异表达基因J.中国畜牧兽医，2021，48（7）：2358-2368.7 Fernandez M L，West K L.Mechanisms by which dietary fatty acids modulate plasma lipidsJ.The Journal of Nutrition，2005，135（9）：2075-2078.8 Madsen L，Petersen R K，Kristiansen K.Regulation of adipocyte differentiation and function by polyunsaturated fatty acidsJ.Biochimica et Biophysica Acta，2005，1740（2）：266-286.9 Ren B，Thelen A P，Peters J M，et al.Polyunsaturated fatty acid suppression of hepatic fatty acid synthase and S14 gene expression does not require peroxisome proliferator-activated receptor J.Journal of Biological Chemistry，1997，272（43）：226金哲勇，等：基于RNA-Seq数据分析油酸对牛前体脂肪细胞分化及PPAR信号通路的影响吉林农业大学学报 Journal of Jilin Agricultural University26827-26832.10 Liao F H，Liou T H，Shieh M J，et al.Effects of different ratios of monounsaturated and polyunsaturated fatty acids to saturated fatty acids on regulating body fat deposition in hamsters J.Nutrition，2010，26（7/8）：811-817.11 Ding S T，Wang J C，Mersmann H J.Effect of unsaturated fatty acids on porcine adipocyte differentiationJ.Nutrition Research，2003，23（8）：1059-1069.12 Sturdivant C A，Lunt D K，Smith G C，et al.Fatty acid composition of subcutaneous and intramuscular adipose tissues and M.longissimus dorsi of Wagyu cattle J.Meat Science，1992，32（4）：449-458.13 May S G，Sturdivant C A，Lunt D K，et al.Comparison of sensory characteristics and fatty acid composition between Wagyu crossbred and Angus steersJ.Meat Science，1993，35（3）：289-298.14 Gotoh T，Nishimura T，Kuchida K，et al.The Japanese Wagyu beef industry：current situation and future prospects-A reviewJ.Asian-Australasian Journal of Animal Sciences，2018，31（7）：933-950.15 Smith S B，Lunt D K，Chung K Y，et al.Adiposity，fatty acid composition，and delta-9 desaturase activity during growth in beef cattleJ.Animal Science Journal，2006，77（5）：478-486.16 Smith S B，Kawachi H，Choi C B，et al.Cellular regulation of bovine intramuscular adipose tissue development and composition J.Journal of Animal Science，2009，87（suppl_14）：E72-E82.17 Nogoy K M，Zhang Y，Lee Y H，et al.Nutrient composition and in vitro fermentability of corn grain and stover harvested at different periods in Goesan，a mountainous area J.Journal of Animal Science and Technology，2019，61（1）：18-27.18 Smith S B，Lunt D K，Zembavashi M.Intramuscular fat deposition M/Proceedings of the Plains Nutrition Council.Texas：A&M Research and Extension Center，2000：1-12.19 Gotoh T，Takahashi H，Nishimura T，et al.Meat produced by Japanese Black cattle and WagyuJ.Animal Frontiers，2014，4（4）：46-54.20 Zhang X L，Wan F C，You W，et al.Comparison of apoptosis between bovine subcutaneous and intramuscular adipocytes by resveratrol via SIRT1 J.Animal Biotechnology，2020，31（6）：538-546.21 OLoughlin A，Lynn D J，McGee M，et al.Transcriptomic analysis of the stress response to weaning at housing in bovine leukocytes using RNA-seq technology J.BMC Genomics，2012，13：250.22 Driver A M，Peagaricano F，Huang W，et al.RNA-Seq analysis uncovers transcriptomic variations between morphologically similar in vivo-and in vitro-derived bovine blastocystsJ.BMC Genomics，2012，13：118.23 Cnovas A，Rincon G，Islas-Trejo A，et al.SNP discovery in the bovine milk transcriptome using RNA-Seq technology J.Mammalian Genome，2010，21（11）：592-598.24 Lee H J，Jang M，Kim H，et al.Comparative transcriptome analysis of adipose tissues reveals that ECM-receptor interaction is involved in the depot-specific adipogenesis in cattleJ.PLoS One，2013，8（6）：e66267.25 Rosen E D，Spiegelman B M.Molecular regulation of adipogenesis J.Annual Review of Cell and Developmental Biology，2000，16：145-171.26 云巾宴，于永生，曹阳，等.葛根素对延黄牛原代脂肪细胞分化的影响 J.吉林农业大学学报，2018，40（2）：223-228.27 朴政玉.延边牛不同脂肪组织来源脂肪细胞转录组分析及相关基因的功能研究 D.延吉：延边大学，2020.28 金鑫.PPAR配体对延边牛前体脂肪细胞分化影响及成脂相关作用机制研究 D.延吉：延边大学，2020.（责任编辑：林海涛）227