免疫组织化学技术介绍.ppt

资料仅供参考,不当之处，请联系改正。免免免免疫疫疫疫组组组组织织织织化化化化学学学学（简简简简称称称称免免免免疫疫疫疫组组组组化化化化）是是是是组组组组织织织织化化化化学学学学的的的的一一一一种种种种，它它它它是是是是利利利利用用用用已已已已知知知知的的的的特特特特异异异异性性性性抗抗抗抗体体体体或或或或抗抗抗抗原原原原能能能能特特特特异异异异性性性性结结结结合合合合的的的的特特特特点点点点，通通通通过过过过化化化化学学学学反反反反应应应应使使使使标标标标记记记记于于于于结结结结合合合合后后后后的的的的特特特特异异异异性性性性抗抗抗抗体体体体上上上上的的的的显显显显示示示示剂剂剂剂，如如如如酶酶酶酶、金金金金属属属属离离离离子子子子、同同同同位位位位素素素素等等等等，显显显显示示示示一一一一定定定定的的的的颜颜颜颜色色色色，并并并并借借借借助助助助显显显显微微微微镜镜镜镜观观观观察察察察其其其其颜颜颜颜色色色色的的的的变变变变化化化化，从从从从而而而而在在在在抗抗抗抗原原原原抗抗抗抗体体体体结结结结合合合合部部部部位位位位确确确确定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。近十年来，免疫组化技术发展很快，在现代医学近十年来，免疫组化技术发展很快，在现代医学近十年来，免疫组化技术发展很快，在现代医学近十年来，免疫组化技术发展很快，在现代医学的基础和临床研究中发挥着重要的作用，对疾病，的基础和临床研究中发挥着重要的作用，对疾病，的基础和临床研究中发挥着重要的作用，对疾病，的基础和临床研究中发挥着重要的作用，对疾病，尤其是对肿瘤的诊断、鉴别诊断及发病机理的研尤其是对肿瘤的诊断、鉴别诊断及发病机理的研尤其是对肿瘤的诊断、鉴别诊断及发病机理的研尤其是对肿瘤的诊断、鉴别诊断及发病机理的研究提供了强有力的手段，但随着免疫组化标记物究提供了强有力的手段，但随着免疫组化标记物究提供了强有力的手段，但随着免疫组化标记物究提供了强有力的手段，但随着免疫组化标记物的增多和利用，原为特异的标记物并非绝对特异，的增多和利用，原为特异的标记物并非绝对特异，的增多和利用，原为特异的标记物并非绝对特异，的增多和利用，原为特异的标记物并非绝对特异，而且出现交叉反应和异常表达的情况日益增多。而且出现交叉反应和异常表达的情况日益增多。而且出现交叉反应和异常表达的情况日益增多。而且出现交叉反应和异常表达的情况日益增多。故对免疫组化标记结果的意义故对免疫组化标记结果的意义故对免疫组化标记结果的意义故对免疫组化标记结果的意义不能绝对化不能绝对化不能绝对化不能绝对化，应在，应在，应在，应在光镜观察组织形态的基础上，合理使用免疫组化光镜观察组织形态的基础上，合理使用免疫组化光镜观察组织形态的基础上，合理使用免疫组化光镜观察组织形态的基础上，合理使用免疫组化技术，审慎判断其标记的意义。技术，审慎判断其标记的意义。技术，审慎判断其标记的意义。技术，审慎判断其标记的意义。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。免疫组化标记的形态学特征免疫组化标记的形态学特征 免疫组化标记具有形态学特点，若能熟免疫组化标记具有形态学特点，若能熟练掌握则有助于对免疫组化标记结果的练掌握则有助于对免疫组化标记结果的正确判断，现择要分述如下：正确判断，现择要分述如下：资料仅供参考,不当之处，请联系改正。一、阳性标记色度特征一、阳性标记色度特征 免疫组化标记时细胞阳性着色程度取决于抗原含量、分布密免疫组化标记时细胞阳性着色程度取决于抗原含量、分布密免疫组化标记时细胞阳性着色程度取决于抗原含量、分布密免疫组化标记时细胞阳性着色程度取决于抗原含量、分布密度和标记方法及其敏感性。一般而言，抗原含量越多，分布度和标记方法及其敏感性。一般而言，抗原含量越多，分布度和标记方法及其敏感性。一般而言，抗原含量越多，分布度和标记方法及其敏感性。一般而言，抗原含量越多，分布密度越高，标记方法越敏感，阳性结果显色则越强。根据阳密度越高，标记方法越敏感，阳性结果显色则越强。根据阳密度越高，标记方法越敏感，阳性结果显色则越强。根据阳密度越高，标记方法越敏感，阳性结果显色则越强。根据阳性标记的显色程度分为：性标记的显色程度分为：性标记的显色程度分为：性标记的显色程度分为：淡黄色淡黄色淡黄色淡黄色，提示为弱阳性；，提示为弱阳性；，提示为弱阳性；，提示为弱阳性；棕黄色棕黄色棕黄色棕黄色，为中等度阳性；为中等度阳性；为中等度阳性；为中等度阳性；棕黑色棕黑色棕黑色棕黑色，示为强阳性。在结果判断中，后两，示为强阳性。在结果判断中，后两，示为强阳性。在结果判断中，后两，示为强阳性。在结果判断中，后两者较有意义，可作为判断依据。而前者除考虑标本处理和方者较有意义，可作为判断依据。而前者除考虑标本处理和方者较有意义，可作为判断依据。而前者除考虑标本处理和方者较有意义，可作为判断依据。而前者除考虑标本处理和方法学因素外，可能与细胞只有轻度异常表达，或某些细胞摄法学因素外，可能与细胞只有轻度异常表达，或某些细胞摄法学因素外，可能与细胞只有轻度异常表达，或某些细胞摄法学因素外，可能与细胞只有轻度异常表达，或某些细胞摄取了周围组织抗原之故。取了周围组织抗原之故。取了周围组织抗原之故。取了周围组织抗原之故。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。二、阳性标记细胞学特征二、阳性标记细胞学特征 免疫组化标记中，阳性标记细胞学特征是反映免疫组化标记中，阳性标记细胞学特征是反映免疫组化标记中，阳性标记细胞学特征是反映免疫组化标记中，阳性标记细胞学特征是反映抗原在细胞中的定位和分布情况。在诊断中阳抗原在细胞中的定位和分布情况。在诊断中阳抗原在细胞中的定位和分布情况。在诊断中阳抗原在细胞中的定位和分布情况。在诊断中阳性细胞以拟标记的细胞为前提，阳性表达必须性细胞以拟标记的细胞为前提，阳性表达必须性细胞以拟标记的细胞为前提，阳性表达必须性细胞以拟标记的细胞为前提，阳性表达必须在细胞特定的抗原部位，若不在抗原所在部位在细胞特定的抗原部位，若不在抗原所在部位在细胞特定的抗原部位，若不在抗原所在部位在细胞特定的抗原部位，若不在抗原所在部位的阳性表达和非目标细胞即使阳性也不应作为的阳性表达和非目标细胞即使阳性也不应作为的阳性表达和非目标细胞即使阳性也不应作为的阳性表达和非目标细胞即使阳性也不应作为判断依据。根据抗原在细胞中分布和阳性颗粒判断依据。根据抗原在细胞中分布和阳性颗粒判断依据。根据抗原在细胞中分布和阳性颗粒判断依据。根据抗原在细胞中分布和阳性颗粒沉淀部位可分为以下沉淀部位可分为以下沉淀部位可分为以下沉淀部位可分为以下5 5种类型：种类型：种类型：种类型：资料仅供参考,不当之处，请联系改正。1.胞膜型胞膜型 阳性颗粒主要分布于细胞膜表阳性颗粒主要分布于细胞膜表面，形成一薄层棕黄色颗粒包绕整个细面，形成一薄层棕黄色颗粒包绕整个细胞。此类型常见于某些膜抗原，如上皮胞。此类型常见于某些膜抗原，如上皮膜抗原（膜抗原（EMA）、白细胞共同抗原）、白细胞共同抗原（LCA）及）及B细胞、细胞、T细胞、粒细胞相关细胞、粒细胞相关抗原（抗原（GAA）和）和Ki-1等。等。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2.胞核型胞核型 阳性颗粒定位于细胞核，呈均阳性颗粒定位于细胞核，呈均匀分布或位于核膜下，有的呈小斑块状匀分布或位于核膜下，有的呈小斑块状不规则分布。此多见于增殖细胞核抗原、不规则分布。此多见于增殖细胞核抗原、Ki-67及激素受体中雌激素受体（及激素受体中雌激素受体（ER）、）、孕激素受体（孕激素受体（PR）和基因）和基因p53等。等。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3.3.胞浆型胞浆型胞浆型胞浆型 阳性颗粒主要分布于细胞浆。大部分抗原阳性颗粒主要分布于细胞浆。大部分抗原阳性颗粒主要分布于细胞浆。大部分抗原阳性颗粒主要分布于细胞浆。大部分抗原均属于此种类型，如细胞角蛋白、波形蛋白、结蛋均属于此种类型，如细胞角蛋白、波形蛋白、结蛋均属于此种类型，如细胞角蛋白、波形蛋白、结蛋均属于此种类型，如细胞角蛋白、波形蛋白、结蛋白、神经丝蛋白、肌红蛋白、白、神经丝蛋白、肌红蛋白、白、神经丝蛋白、肌红蛋白、白、神经丝蛋白、肌红蛋白、1 1-抗胰糜蛋白酶及前抗胰糜蛋白酶及前抗胰糜蛋白酶及前抗胰糜蛋白酶及前列腺特异性抗原（列腺特异性抗原（列腺特异性抗原（列腺特异性抗原（PSAPSA）等。依据抗原在胞浆内分）等。依据抗原在胞浆内分）等。依据抗原在胞浆内分）等。依据抗原在胞浆内分布形式，通常表现为弥漫性分布或局限性分布。前布形式，通常表现为弥漫性分布或局限性分布。前布形式，通常表现为弥漫性分布或局限性分布。前布形式，通常表现为弥漫性分布或局限性分布。前者阳性颗粒弥漫而均匀地分布于整个细胞浆。局限者阳性颗粒弥漫而均匀地分布于整个细胞浆。局限者阳性颗粒弥漫而均匀地分布于整个细胞浆。局限者阳性颗粒弥漫而均匀地分布于整个细胞浆。局限性是指阳性颗粒呈小斑点状或斑块状局限于细胞浆性是指阳性颗粒呈小斑点状或斑块状局限于细胞浆性是指阳性颗粒呈小斑点状或斑块状局限于细胞浆性是指阳性颗粒呈小斑点状或斑块状局限于细胞浆中的某一部位、核周或细胞浆的一侧。中的某一部位、核周或细胞浆的一侧。中的某一部位、核周或细胞浆的一侧。中的某一部位、核周或细胞浆的一侧。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。4.4.微绒毛型微绒毛型微绒毛型微绒毛型 抗原颗粒主要分布于腺癌细胞的微绒抗原颗粒主要分布于腺癌细胞的微绒抗原颗粒主要分布于腺癌细胞的微绒抗原颗粒主要分布于腺癌细胞的微绒毛，而胞浆和胞膜可以是阳性或阴性表达。这种毛，而胞浆和胞膜可以是阳性或阴性表达。这种毛，而胞浆和胞膜可以是阳性或阴性表达。这种毛，而胞浆和胞膜可以是阳性或阴性表达。这种表现形式最常见于各种腺癌，如甲状腺腺癌、乳表现形式最常见于各种腺癌，如甲状腺腺癌、乳表现形式最常见于各种腺癌，如甲状腺腺癌、乳表现形式最常见于各种腺癌，如甲状腺腺癌、乳腺腺癌、胃肠腺癌、胆道腺癌、卵巢浆液性腺癌腺腺癌、胃肠腺癌、胆道腺癌、卵巢浆液性腺癌腺腺癌、胃肠腺癌、胆道腺癌、卵巢浆液性腺癌腺腺癌、胃肠腺癌、胆道腺癌、卵巢浆液性腺癌等。其特点是阳性颗粒除靠近腔面阳性外，其余等。其特点是阳性颗粒除靠近腔面阳性外，其余等。其特点是阳性颗粒除靠近腔面阳性外，其余等。其特点是阳性颗粒除靠近腔面阳性外，其余基底部可呈阴性反应。在肿瘤标记物中多见于上基底部可呈阴性反应。在肿瘤标记物中多见于上基底部可呈阴性反应。在肿瘤标记物中多见于上基底部可呈阴性反应。在肿瘤标记物中多见于上皮膜抗原、上皮特异性抗原、结肠相关抗原、卵皮膜抗原、上皮特异性抗原、结肠相关抗原、卵皮膜抗原、上皮特异性抗原、结肠相关抗原、卵皮膜抗原、上皮特异性抗原、结肠相关抗原、卵巢癌抗原等。甲状腺腺癌中甲状腺球蛋白常以该巢癌抗原等。甲状腺腺癌中甲状腺球蛋白常以该巢癌抗原等。甲状腺腺癌中甲状腺球蛋白常以该巢癌抗原等。甲状腺腺癌中甲状腺球蛋白常以该形式出现。形式出现。形式出现。形式出现。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。5.复合型复合型 在常规免疫组化标记中，同一在常规免疫组化标记中，同一种抗原可以同时表达于胞膜和胞浆、胞种抗原可以同时表达于胞膜和胞浆、胞核和胞浆、微绒毛和胞浆，但很少发现核和胞浆、微绒毛和胞浆，但很少发现胞膜和胞核同时表达。值得注意的是组胞膜和胞核同时表达。值得注意的是组织标本固定不及时造成抗原移位或乳腺织标本固定不及时造成抗原移位或乳腺ER和和PR修复不充分也可以发生胞核和胞修复不充分也可以发生胞核和胞浆同时阳性。浆同时阳性。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。三、阳性标记组织学特征三、阳性标记组织学特征 根据免疫组化阳性细胞的组织学特点，根据免疫组化阳性细胞的组织学特点，免疫组化阳性细胞或阳性颗粒可呈以下免疫组化阳性细胞或阳性颗粒可呈以下类型排列：类型排列：资料仅供参考,不当之处，请联系改正。1.1.局灶型局灶型局灶型局灶型 阳性细胞呈不规则小灶性分布。阳性细胞阳性细胞呈不规则小灶性分布。阳性细胞阳性细胞呈不规则小灶性分布。阳性细胞阳性细胞呈不规则小灶性分布。阳性细胞可多可少，排列不规则，无固定排列形式，阳性染可多可少，排列不规则，无固定排列形式，阳性染可多可少，排列不规则，无固定排列形式，阳性染可多可少，排列不规则，无固定排列形式，阳性染色深浅不一。细胞角蛋白、上皮膜抗原在低分化鳞色深浅不一。细胞角蛋白、上皮膜抗原在低分化鳞色深浅不一。细胞角蛋白、上皮膜抗原在低分化鳞色深浅不一。细胞角蛋白、上皮膜抗原在低分化鳞状细胞癌、腺癌和癌肉瘤；肌动蛋白和结蛋白在低状细胞癌、腺癌和癌肉瘤；肌动蛋白和结蛋白在低状细胞癌、腺癌和癌肉瘤；肌动蛋白和结蛋白在低状细胞癌、腺癌和癌肉瘤；肌动蛋白和结蛋白在低分化横纹肌肉瘤；分化横纹肌肉瘤；分化横纹肌肉瘤；分化横纹肌肉瘤；NSENSE、神经丝蛋白、突触素在恶、神经丝蛋白、突触素在恶、神经丝蛋白、突触素在恶、神经丝蛋白、突触素在恶性神经内分泌肿瘤及低分化星形胶质细胞瘤中胶质性神经内分泌肿瘤及低分化星形胶质细胞瘤中胶质性神经内分泌肿瘤及低分化星形胶质细胞瘤中胶质性神经内分泌肿瘤及低分化星形胶质细胞瘤中胶质原纤维酸性蛋白（原纤维酸性蛋白（原纤维酸性蛋白（原纤维酸性蛋白（GFAPGFAP）和恶性黑色素瘤中）和恶性黑色素瘤中）和恶性黑色素瘤中）和恶性黑色素瘤中S-100S-100蛋白等均可表现为局灶性阳性。蛋白等均可表现为局灶性阳性。蛋白等均可表现为局灶性阳性。蛋白等均可表现为局灶性阳性。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2.2.弥漫型弥漫型弥漫型弥漫型 阳性细胞呈弥漫性分布，细胞间无连阳性细胞呈弥漫性分布，细胞间无连阳性细胞呈弥漫性分布，细胞间无连阳性细胞呈弥漫性分布，细胞间无连接，也可以单个细胞散在分布。此型中细胞几接，也可以单个细胞散在分布。此型中细胞几接，也可以单个细胞散在分布。此型中细胞几接，也可以单个细胞散在分布。此型中细胞几乎都高度表达某种抗原，如淋巴瘤（白细胞共乎都高度表达某种抗原，如淋巴瘤（白细胞共乎都高度表达某种抗原，如淋巴瘤（白细胞共乎都高度表达某种抗原，如淋巴瘤（白细胞共同抗原）、同抗原）、同抗原）、同抗原）、HodgkinHodgkin病（粒细胞相关抗原、病（粒细胞相关抗原、病（粒细胞相关抗原、病（粒细胞相关抗原、Ki-Ki-1 1）、胃肠未分化癌癌胚抗原（）、胃肠未分化癌癌胚抗原（）、胃肠未分化癌癌胚抗原（）、胃肠未分化癌癌胚抗原（CEACEA）及上皮膜）及上皮膜）及上皮膜）及上皮膜抗原、尤文瘤中抗原、尤文瘤中抗原、尤文瘤中抗原、尤文瘤中CD99CD99等。等。等。等。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3.3.片块型片块型片块型片块型 较常见。阳性细胞多为细胞浆表达，细较常见。阳性细胞多为细胞浆表达，细较常见。阳性细胞多为细胞浆表达，细较常见。阳性细胞多为细胞浆表达，细胞间界限较清晰，但相互融合呈片状或团块状结胞间界限较清晰，但相互融合呈片状或团块状结胞间界限较清晰，但相互融合呈片状或团块状结胞间界限较清晰，但相互融合呈片状或团块状结构。此型可见于上皮源性肿瘤、某些向上皮分化构。此型可见于上皮源性肿瘤、某些向上皮分化构。此型可见于上皮源性肿瘤、某些向上皮分化构。此型可见于上皮源性肿瘤、某些向上皮分化的间叶源性肿瘤、恶性黑色素瘤、中分化神经内的间叶源性肿瘤、恶性黑色素瘤、中分化神经内的间叶源性肿瘤、恶性黑色素瘤、中分化神经内的间叶源性肿瘤、恶性黑色素瘤、中分化神经内分泌瘤及核形细胞瘤（如癌肉瘤和神经纤维瘤、分泌瘤及核形细胞瘤（如癌肉瘤和神经纤维瘤、分泌瘤及核形细胞瘤（如癌肉瘤和神经纤维瘤、分泌瘤及核形细胞瘤（如癌肉瘤和神经纤维瘤、平滑肌肉瘤）。平滑肌肉瘤）。平滑肌肉瘤）。平滑肌肉瘤）。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。4.网状型网状型 此型主要见于细胞密度较大的此型主要见于细胞密度较大的大细胞肿瘤，标记物多为膜抗原。阳性大细胞肿瘤，标记物多为膜抗原。阳性细胞膜与膜间相互紧靠，而胞核呈阴性细胞膜与膜间相互紧靠，而胞核呈阴性反应，免疫组化标记显示网状结构。反应，免疫组化标记显示网状结构。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。5.腺管型腺管型 主要见于腺癌和具有腺癌样结主要见于腺癌和具有腺癌样结构的胚胎性肿瘤。上皮标记物多为胞浆构的胚胎性肿瘤。上皮标记物多为胞浆表达。胃肠低分化腺癌中有时表达。胃肠低分化腺癌中有时HE很难鉴很难鉴别腺样结构，但用癌胚抗原、上皮膜抗别腺样结构，但用癌胚抗原、上皮膜抗原或结肠癌相关抗原则容易显示出来。原或结肠癌相关抗原则容易显示出来。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。6.腔缘型腔缘型 阳性颗粒主要位于腺癌腔缘的阳性颗粒主要位于腺癌腔缘的微绒毛处，沿腺管腔缘表面内衬一薄层微绒毛处，沿腺管腔缘表面内衬一薄层黄色颗粒，基底部多为阴性。结肠癌相黄色颗粒，基底部多为阴性。结肠癌相关抗原在胃肠腺癌、胆囊腺癌、乳腺癌关抗原在胃肠腺癌、胆囊腺癌、乳腺癌中常表现为这种类型；卵巢癌相关抗原中常表现为这种类型；卵巢癌相关抗原在卵巢浆液性腺癌亦是如此；肿瘤相关在卵巢浆液性腺癌亦是如此；肿瘤相关粘液抗原在许多腺癌中也显示腔缘阳性。粘液抗原在许多腺癌中也显示腔缘阳性。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。7.菊团型菊团型 阳性肿瘤细胞排列呈菊团样结阳性肿瘤细胞排列呈菊团样结构，部分阳性细胞围绕血管排列。此型构，部分阳性细胞围绕血管排列。此型多见于分化较好的神经内分泌肿瘤和胶多见于分化较好的神经内分泌肿瘤和胶质细胞瘤等，阳性颗粒定位在细胞浆。质细胞瘤等，阳性颗粒定位在细胞浆。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。四、阳性标记强度特征四、阳性标记强度特征 细胞免疫组化标记的阳性强度根据显色细胞免疫组化标记的阳性强度根据显色程度分为弱阳性、中度阳性和强阳性；程度分为弱阳性、中度阳性和强阳性；也可依据阳性细胞在细胞中所占比例大也可依据阳性细胞在细胞中所占比例大致分为：弱阳性，阳性细胞致分为：弱阳性，阳性细胞25%；中阳；中阳性，阳性细胞性，阳性细胞25%50%；强阳性，阳性；强阳性，阳性细胞细胞50%。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。五、非特异着色特征五、非特异着色特征 以下情况可干扰免疫组化标记结果的观察和判断：以下情况可干扰免疫组化标记结果的观察和判断：以下情况可干扰免疫组化标记结果的观察和判断：以下情况可干扰免疫组化标记结果的观察和判断：（1 1）抗体交叉反应：）抗体交叉反应：）抗体交叉反应：）抗体交叉反应：是由于该抗原决定簇同时是由于该抗原决定簇同时是由于该抗原决定簇同时是由于该抗原决定簇同时存在于多种组织细胞，如存在于多种组织细胞，如存在于多种组织细胞，如存在于多种组织细胞，如GFAPGFAP可同时存在于星形可同时存在于星形可同时存在于星形可同时存在于星形胶质细胞和唾液腺肌上皮。胶质细胞和唾液腺肌上皮。胶质细胞和唾液腺肌上皮。胶质细胞和唾液腺肌上皮。S-100S-100蛋白则更为严重，蛋白则更为严重，蛋白则更为严重，蛋白则更为严重，可表达于多种组织细胞。因此，应全面了解和认可表达于多种组织细胞。因此，应全面了解和认可表达于多种组织细胞。因此，应全面了解和认可表达于多种组织细胞。因此，应全面了解和认识该抗体的功能和标记范围。故抗体交叉反应只识该抗体的功能和标记范围。故抗体交叉反应只识该抗体的功能和标记范围。故抗体交叉反应只识该抗体的功能和标记范围。故抗体交叉反应只要应用得当仍有助于诊断。要应用得当仍有助于诊断。要应用得当仍有助于诊断。要应用得当仍有助于诊断。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（2 2）肿瘤细胞异常表达）肿瘤细胞异常表达）肿瘤细胞异常表达）肿瘤细胞异常表达：可选用多种标记去证可选用多种标记去证可选用多种标记去证可选用多种标记去证实或排除，鉴别其真正组织来源或向某一组织细实或排除，鉴别其真正组织来源或向某一组织细实或排除，鉴别其真正组织来源或向某一组织细实或排除，鉴别其真正组织来源或向某一组织细胞分化。胞分化。胞分化。胞分化。（3 3）肿瘤细胞吞噬组织抗原：）肿瘤细胞吞噬组织抗原：）肿瘤细胞吞噬组织抗原：）肿瘤细胞吞噬组织抗原：是由于某些恶性肿是由于某些恶性肿是由于某些恶性肿是由于某些恶性肿瘤细胞摄入周围正常组织细胞成分，虽然后者也瘤细胞摄入周围正常组织细胞成分，虽然后者也瘤细胞摄入周围正常组织细胞成分，虽然后者也瘤细胞摄入周围正常组织细胞成分，虽然后者也存在某些抗原，但不属于瘤细胞固有成分，胞浆存在某些抗原，但不属于瘤细胞固有成分，胞浆存在某些抗原，但不属于瘤细胞固有成分，胞浆存在某些抗原，但不属于瘤细胞固有成分，胞浆内抗原定位较模糊，因此应该区别。内抗原定位较模糊，因此应该区别。内抗原定位较模糊，因此应该区别。内抗原定位较模糊，因此应该区别。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（4）非特异性染色）非特异性染色 是指抗原无明确定位，是指抗原无明确定位，肿瘤细胞与间质细胞、细胞与间质均为黄肿瘤细胞与间质细胞、细胞与间质均为黄色，相互累及一片，色度无深浅之分。这色，相互累及一片，色度无深浅之分。这种标记组织片不能作为免疫组织标记结果种标记组织片不能作为免疫组织标记结果判断依据。判断依据。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。非特异性染色的原因常为组织标本固定不佳、抗非特异性染色的原因常为组织标本固定不佳、抗非特异性染色的原因常为组织标本固定不佳、抗非特异性染色的原因常为组织标本固定不佳、抗体质量问题或稀释度不合理及操作方法不规范等。体质量问题或稀释度不合理及操作方法不规范等。体质量问题或稀释度不合理及操作方法不规范等。体质量问题或稀释度不合理及操作方法不规范等。因此，免疫组化特异性染色定位非常重要，如前因此，免疫组化特异性染色定位非常重要，如前因此，免疫组化特异性染色定位非常重要，如前因此，免疫组化特异性染色定位非常重要，如前所述，阳性颗粒应位于细胞胞膜、胞浆或胞核，所述，阳性颗粒应位于细胞胞膜、胞浆或胞核，所述，阳性颗粒应位于细胞胞膜、胞浆或胞核，所述，阳性颗粒应位于细胞胞膜、胞浆或胞核，阳性细胞与阴性细胞相互交杂，阳性染色强度深阳性细胞与阴性细胞相互交杂，阳性染色强度深阳性细胞与阴性细胞相互交杂，阳性染色强度深阳性细胞与阴性细胞相互交杂，阳性染色强度深浅不一。如果缺乏细胞间的不均一性染色，即是浅不一。如果缺乏细胞间的不均一性染色，即是浅不一。如果缺乏细胞间的不均一性染色，即是浅不一。如果缺乏细胞间的不均一性染色，即是呈阳性染色，常提示为非特异性染色。另组织片呈阳性染色，常提示为非特异性染色。另组织片呈阳性染色，常提示为非特异性染色。另组织片呈阳性染色，常提示为非特异性染色。另组织片边缘反应边缘反应边缘反应边缘反应和和和和出血坏死灶周围出血坏死灶周围出血坏死灶周围出血坏死灶周围阳性反应不能作为诊阳性反应不能作为诊阳性反应不能作为诊阳性反应不能作为诊断依据。断依据。断依据。断依据。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。免疫组化结果的判断原则及免疫组化结果的判断原则及对假阴性和假阳性的认识对假阴性和假阳性的认识 一、一、免疫组化结果的判断原则免疫组化结果的判断原则 免疫组化具有特异性强、敏感性高及定免疫组化具有特异性强、敏感性高及定位正确等优点，但随着免疫组化应用的普位正确等优点，但随着免疫组化应用的普及和深入，越来越多的问题也随之出现。及和深入，越来越多的问题也随之出现。因此，掌握对免疫组化结果的判断原则是因此，掌握对免疫组化结果的判断原则是很重要的。很重要的。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。1.1.必须设染色对照必须设染色对照必须设染色对照必须设染色对照 每批染色都要以特异性的阳性每批染色都要以特异性的阳性每批染色都要以特异性的阳性每批染色都要以特异性的阳性对照和阴性对照为基础，才能对染色结果做出正对照和阴性对照为基础，才能对染色结果做出正对照和阴性对照为基础，才能对染色结果做出正对照和阴性对照为基础，才能对染色结果做出正确的判断。没有阳性对照，就不能做出真正阴性确的判断。没有阳性对照，就不能做出真正阴性确的判断。没有阳性对照，就不能做出真正阴性确的判断。没有阳性对照，就不能做出真正阴性结果的判断；同理，没有阴性对照，也就不能做结果的判断；同理，没有阴性对照，也就不能做结果的判断；同理，没有阴性对照，也就不能做结果的判断；同理，没有阴性对照，也就不能做出真正阳性结果的判断。因而，没有对照的免疫出真正阳性结果的判断。因而，没有对照的免疫出真正阳性结果的判断。因而，没有对照的免疫出真正阳性结果的判断。因而，没有对照的免疫组化染色，即使做出了判断也是不可信的。组化染色，即使做出了判断也是不可信的。组化染色，即使做出了判断也是不可信的。组化染色，即使做出了判断也是不可信的。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2.抗原表达必须在特定部位抗原表达必须在特定部位 阳性表达必阳性表达必须在细胞和组织特定的抗原部位才能视须在细胞和组织特定的抗原部位才能视为阳性，如为阳性，如LCA在细胞膜上、在细胞膜上、Keratin在在细胞浆内、细胞浆内、S-100蛋白在胞浆和胞核内，蛋白在胞浆和胞核内，EMA在细胞膜上。不在抗原所在部位的在细胞膜上。不在抗原所在部位的阳性表达一概不能视为阳性。阳性表达一概不能视为阳性。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3.阴性结果不能视为抗原不表达阴性结果不能视为抗原不表达 即阴性即阴性结果不能认为具有否定意义；阳性表达结果不能认为具有否定意义；阳性表达有强弱、多少之分，哪怕是只是有少数有强弱、多少之分，哪怕是只是有少数细胞阳性（但要在抗原所在部位）也要细胞阳性（但要在抗原所在部位）也要视为阳性表达，不能认为个别细胞阳性视为阳性表达，不能认为个别细胞阳性而不作阳性看待。而不作阳性看待。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。4.免疫组化与免疫组化与HE切片诊断应以切片诊断应以HE切片切片诊断为准诊断为准 当免疫组化诊断结果与当免疫组化诊断结果与HE切切片诊断不一致时，应再结合临床资料、片诊断不一致时，应再结合临床资料、X线等影像学及实验室结果综合分析，不线等影像学及实验室结果综合分析，不能用免疫组化检查结果推翻能用免疫组化检查结果推翻HE切片诊断。切片诊断。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。二、引起假阴性和假阳性结果的原因二、引起假阴性和假阳性结果的原因 1.1.假阴性结果的原因主要是：假阴性结果的原因主要是：假阴性结果的原因主要是：假阴性结果的原因主要是：（1 1）抗体已失活或浓度不当或抗体本身达不到应有的敏感度；抗体已失活或浓度不当或抗体本身达不到应有的敏感度；抗体已失活或浓度不当或抗体本身达不到应有的敏感度；抗体已失活或浓度不当或抗体本身达不到应有的敏感度；（2 2）由于组织自溶，抗原扩散而导致抗原消失，特别在长期由于组织自溶，抗原扩散而导致抗原消失，特别在长期由于组织自溶，抗原扩散而导致抗原消失，特别在长期由于组织自溶，抗原扩散而导致抗原消失，特别在长期固定的标本中因抗原漏出而致假阴性，因此应多用新鲜固固定的标本中因抗原漏出而致假阴性，因此应多用新鲜固固定的标本中因抗原漏出而致假阴性，因此应多用新鲜固固定的标本中因抗原漏出而致假阴性，因此应多用新鲜固定之标本；定之标本；定之标本；定之标本；（3 3）操作步骤不当，如反应时间不够或过久、洗脱不够或温操作步骤不当，如反应时间不够或过久、洗脱不够或温操作步骤不当，如反应时间不够或过久、洗脱不够或温操作步骤不当，如反应时间不够或过久、洗脱不够或温度过高；度过高；度过高；度过高；（4 4）组织或细胞中抗原的含量很低，所用的方法难以检测到，组织或细胞中抗原的含量很低，所用的方法难以检测到，组织或细胞中抗原的含量很低，所用的方法难以检测到，组织或细胞中抗原的含量很低，所用的方法难以检测到，如用直接法检测为阴性，但改用间接法时则为阳性。如用直接法检测为阴性，但改用间接法时则为阳性。如用直接法检测为阴性，但改用间接法时则为阳性。如用直接法检测为阴性，但改用间接法时则为阳性。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2.2.假阳性结果的主要原因是：假阳性结果的主要原因是：假阳性结果的主要原因是：假阳性结果的主要原因是：（1 1）所所所所用用用用的的的的抗抗抗抗体体体体与与与与其其其其它它它它无无无无关关关关的的的的抗抗抗抗原原原原有有有有交交交交叉叉叉叉反反反反应应应应，特特特特异性差，特别在应用多克隆抗血清时更易出现；异性差，特别在应用多克隆抗血清时更易出现；异性差，特别在应用多克隆抗血清时更易出现；异性差，特别在应用多克隆抗血清时更易出现；（2 2）所所所所用用用用抗抗抗抗体体体体浓浓浓浓度度度度过过过过高高高高或或或或染染染染色色色色过过过过程程程程中中中中切切切切片片片片干干干干燥燥燥燥导导导导致致致致抗体与组织产生非特异性结合；抗体与组织产生非特异性结合；抗体与组织产生非特异性结合；抗体与组织产生非特异性结合；（3 3）组组组组织织织织或或或或细细细细胞胞胞胞中中中中有有有有内内内内源源源源性性性性过过过过氧氧氧氧化化化化物物物物酶酶酶酶、碱碱碱碱性性性性磷磷磷磷酸酸酸酸酶及生物素等产生非特异性显色；酶及生物素等产生非特异性显色；酶及生物素等产生非特异性显色；酶及生物素等产生非特异性显色；资料仅供参考,不当之处，请联系改正。免疫组化操作经验和体会免疫组化操作经验和体会操作中应注意以下问题：操作中应注意以下问题：操作中应注意以下问题：操作中应注意以下问题：1.1.石蜡切片和冰冻切片均可，但要注意防止脱片。石蜡切片和冰冻切片均可，但要注意防止脱片。石蜡切片和冰冻切片均可，但要注意防止脱片。石蜡切片和冰冻切片均可，但要注意防止脱片。2.2.消除内源性过氧化酶和非特意性背景染色要充分。消除内源性过氧化酶和非特意性背景染色要充分。消除内源性过氧化酶和非特意性背景染色要充分。消除内源性过氧化酶和非特意性背景染色要充分。3.PBS3.PBS洗涤要充分。洗涤要充分。洗涤要充分。洗涤要充分。4.4.要设阴性和阳性对照。要设阴性和阳性对照。要设阴性和阳性对照。要设阴性和阳性对照。5.5.显色注意底物要适量、时间要严格控制。显色注意底物要适量、时间要严格控制。显色注意底物要适量、时间要严格控制。显色注意底物要适量、时间要严格控制。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。6.6.消除内源性生物素活性：预先以消除内源性生物素活性：预先以消除内源性生物素活性：预先以消除内源性生物素活性：预先以0.01%0.01%抗生物素抗生物素抗生物素抗生物素溶液作用切片溶液作用切片溶液作用切片溶液作用切片20min20min。7.ABC7.ABC复合物应在临用前复合物应在临用前复合物应在临用前复合物应在临用前30min30min配置。配置。配置。配置。8.ABC8.ABC试剂保存温度以试剂保存温度以试剂保存温度以试剂保存温度以4 4 为佳，保存达数年仍可为佳，保存达数年仍可为佳，保存达数年仍可为佳，保存达数年仍可获满意效果。获满意效果。获满意效果。获满意效果。9.9.抗体保存：抗体保存：抗体保存：抗体保存：-20-20 分装冻存，或于分装冻存，或于分装冻存，或于分装冻存，或于4 4 常规使用，常规使用，常规使用，常规使用，切忌反复冻融。切忌反复冻融。切忌反复冻融。切忌反复冻融。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（一）均匀的背景染色（一）均匀的背景染色（一）均匀的背景染色（一）均匀的背景染色1.1.酶酶酶酶-底物反应时间过长。底物反应时间过长。底物反应时间过长。底物反应时间过长。2.2.在孵育中切片干燥。在孵育中切片干燥。在孵育中切片干燥。在孵育中切片干燥。3.3.一抗或二抗稀释度不够。一抗或二抗稀释度不够。一抗或二抗稀释度不够。一抗或二抗稀释度不够。4.4.切片洗涤不充分。切片洗涤不充分。切片洗涤不充分。切片洗涤不充分。5.5.封闭所用的正常血清不对。封闭所用的正常血清不对。封闭所用的正常血清不对。封闭所用的正常血清不对。免疫组化常遇问题免疫组化常遇问题资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（二）部分区域背景着色（二）部分区域背景着色（二）部分区域背景着色（二）部分区域背景着色1.1.切片部分区域干燥。切片部分区域干燥。切片部分区域干燥。切片部分区域干燥。2.2.显色反应物在封片介质中是可溶的，造成弥散。显色反应物在封片介质中是可溶的，造成弥散。显色反应物在封片介质中是可溶的，造成弥散。显色反应物在封片介质中是可溶的，造成弥散。（三）部分区域不着色（三）部分区域不着色（三）部分区域不着色（三）部分区域不着色1.1.脱蜡不完全。脱蜡不完全。脱蜡不完全。脱蜡不完全。2.2.切片部分区域干燥。切片部分区域干燥。切片部分区域干燥。切片部分区域干燥。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（四）各种孵育结果所有抗体均不着色（四）各种孵育结果所有抗体均不着色1.H2O2终浓度不够或存放过久失效。终浓度不够或存放过久失效。2.稀释液中有错误的正常血清（如猪抗兔酶稀释液中有错误的正常血清（如猪抗兔酶标抗体稀释液中有正常兔血清）。标抗体稀释液中有正常兔血清）。3.显色反应物溶于脱水的酒精、二甲苯或封显色反应物溶于脱水的酒精、二甲苯或封片液中。片液中。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（五）某些抗体不着色（五）某些抗体不着色1.需要消化而没有消化。需要消化而没有消化。2.封闭内源酶时使抗体活性下降。封闭内源酶时使抗体活性下降。3.切片在裱片或干燥时过热。切片在裱片或干燥时过热。4.抗体过度稀释，一抗浓度小于二抗。抗体过度稀释，一抗浓度小于二抗。5.抗体过期或频繁冻融抗体过期或频繁冻融.资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（六）内源性酶活性：（六）内源性酶活性：（六）内源性酶活性：（六）内源性酶活性：HH2 2OO2 2-甲醇封闭不恰当。甲醇封闭不恰当。甲醇封闭不恰当。甲醇封闭不恰当。（七）脱片（七）脱片（七）脱片（七）脱片1.1.切片无粘附试剂。切片无粘附试剂。切片无粘附试剂。切片无粘附试剂。2.2.切片不干净。切片不干净。切片不干净。切片不干净。3.3.冰冻切片：组织在贴片前已经充分固定。冰冻切片：组织在贴片前已经充分固定。冰冻切片：组织在贴片前已经充分固定。冰冻切片：组织在贴片前已经充分固定。（八）核轮廓模糊（八）核轮廓模糊（八）核轮廓模糊（八）核轮廓模糊1.1.切片已干燥（特别是冰冻切片）。切片已干燥（特别是冰冻切片）。切片已干燥（特别是冰冻切片）。切片已干燥（特别是冰冻切片）。2.2.苏木素染液欠佳。苏木素染液欠佳。苏木素染液欠佳。苏木素染液欠佳。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（九）非特意性色淀（九）非特意性色淀（九）非特意性色淀（九）非特意性色淀1.1.底物底物底物底物-显色液使用前未经过滤。显色液使用前未经过滤。显色液使用前未经过滤。显色液使用前未经过滤。2.2.抗体使用前未离心。抗体使用前未离心。抗体使用前未离心。抗体使用前未离心。（十）阳性反应太弱（十）阳性反应太弱（十）阳性反应太弱（十）阳性反应太弱1.1.抗体或其它试剂活性下降。抗体或其它试剂活性下降。抗体或其它试剂活性下降。抗体或其它试剂活性下降。2.2.显色反应时间过短。显色反应时间过短。显色反应时间过短。显色反应时间过短。3.3.某些抗体的稀释度或孵育时间不够。某些抗体的稀释度或孵育时间不够。某些抗体的稀释度或孵育时间不够。某些抗体的稀释度或孵育时间不够。4.4.当加抗体时切片上缓冲液过多。当加抗体时切片上缓冲液过多。当加抗体时切片上缓冲液过多。当加抗体时切片上缓冲液过多。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（十一）切片镜下模糊或黑点沉着（十一）切片镜下模糊或黑点沉着1.脱水不彻底：进入二甲苯前加一步等量脱水不彻底：进入二甲苯前加一步等量石碳酸石碳酸/二甲苯混合液。二甲苯混合液。2.