红花黄色素联合二甲双胍对早...纤维化、尿足细胞损伤的影响_鲍喜静.pdf

doi:10 3969/j issn 1002 7386 2023 02 013论著红花黄色素联合二甲双胍对早期糖尿病肾病患者肾脏纤维化、尿足细胞损伤的影响鲍喜静李建英彭一董陆玲张贵山杨秀红王新婷辛丽娟张翠静吴嘉鸣作者单位:075000河北省张家口市第一医院内分泌科(鲍喜静、彭一、董陆玲、张贵山、杨秀红、王新婷、辛丽娟、张翠静、吴嘉鸣);重症医学科(李建英)【摘要】目的研究红花黄色素联合二甲双胍对早期糖尿病肾病(DN)患者肾脏纤维化、尿足细胞损伤的影响。方法收集 80 例 DN 患者的临床资料，随机分为对照组和观察组，每组 40 例。2 组均接受常规治疗，对照组在常规治疗基础上口服盐酸二甲双胍治疗，观察组在对照组基础上静脉滴注红花黄色素。连续治疗 14 d。观察 2 组治疗前后血清肾脏纤维化指标 层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、型前胶原(PC)、型胶原(-C)、转化生长因子 1(TGF-1)、Smad1、Smad2、Smad3 及尿液中足细胞损伤标志物(Podocin、Nephrin、ZO-1)、足细胞影响因子 结缔组织生长因子(CTGF)、骨桥蛋白(OPN)、骨形态发生蛋白(BMP-7)、足细胞数变化。结果2 组治疗前 LN、HA、PC、-C、TGF-1、Smad1、Smad2、Smad3、Podocin、Nephrin、ZO-1、结缔组织生长因子(CTGF)、骨桥蛋白(OPN)、骨形态发生蛋白(BMP-7)水平及足细胞数比较，差异无统计学意义(P 0 05);2 组治疗后 LN、HA、PC、-C、TGF-1、Smad1、Smad2、Smad3、Podocin、Nephrin、ZO-1、CTGF、OPN 及足细胞数明显低于治疗前，BMP-7 水平明显高于治疗前，差异均有统计学意义(P 0 05)，且观察组治疗后 LN、HA、PC、-C、TGF-1、Smad1、Smad2、Smad3、Podocin、Nephrin、ZO-1、CTGF、OPN 水平及足细胞数低于对照组，BMP-7 水平高于对照组(P 0 05)。结论红花黄色素联合二甲双胍可能通过抑制 TGF-1/Smad 信号通路改善早期 DN 患者肾脏纤维化并减轻尿足细胞损伤。【关键词】红花黄色素;二甲双胍;糖尿病肾病;肾脏纤维化;尿足细胞损伤【中图分类号】R 587 2【文献标识码】A【文章编号】1002 7386(2023)02 0217 04Effects of safflower yellow combined with metformin on the renal fibrosis and urinary podocyte injury in patientswith early diabetic nephropathyBAO Xijing*，LI Jianying，PENG Yi*，et al*Department of Endocrinology，The FirstHospital of Zhangjiakou City，Hebei，Zhangjiakou 075000，China【Abstract】ObjectiveTo investigate the effects of safflower yellow combined with metformin on the renal fibrosis andurinary podocyte injury in patients with early diabetic nephropathy(DN)MethodsA total of 80 patients with DN who weretreated in our hospital from October 2015 to October 2016 were enrolled in the study，who were randomly divided into twogroups，with 40 cases in each group The patients in both groups received conventional treatment，on that basis，the patients incontrol group were treated by oral metformin，however，the patients in observation group，on the basis of control group，weretreated by intravenous drip with safflower yellow，with a treatment course of 2 weeks for both groups The changes of serumLN，HA，PC，-C，TGF-1，Smad1，Smad2，Smad3 and urinary Podocin，Nephrin，ZO-1，CTGF，OPN，BMP-7 as well as thenumber of podocyte before and after treatment were observed and compared between the two groups ResultsBefore treatmentthere were no significant differences in the levels of LN，HA，PC，-C，TGF-1，Smad1，Smad2，Smad3，Podocin，Nephrin，ZO-1，CTGF，OPN，BMP-7 and the number of podocyte between the two groups(P 0 05)After treatment，the levels of LN，HA，PC，-C，TGF-1，Smad1，Smad2，Smad3，Podocin，Nephrin，ZO-1，CTGF，OPN，BMP-7 and the number of podocyte inboth groups were significantly decreased，however，the BMP-7 levels were significantly increased，moreover，the decrease degreeand increase degree in observation group were more significant than those in control group(P 0 05)ConclusionThesafflower yellow combined with metformin can improve the renal fibrosis and relieve urinary podocyte injury of patients withearly DN by inhibiting TGF-1/Smad signaling pathway【Key words】safflower yellow;metformin hydrochloride;diabetic nephropathy;renal fibrosis;urinary podocyte injury糖尿病肾病(diabetic nephrology，DN)主要病理变化是肾小球硬化、肾小管-间质纤维化，患者表现为肾功能降低及蛋白尿，严重者逐渐发展至肾功能衰竭，预后较差1 3。因此，在 DN 早期采取积极干预手段逆转或延缓疾病进展是改善预后的关键。本研究探讨了红花黄色素联合二甲双胍对早期 DN 患者肾脏纤维化、尿足细胞损伤的影响。1资料与方法1 1一般资料收集我院2015 年10 月至2016 年10月 80 例 DN 患者的临床资料，随机分为对照组和观察组，每组 40 例。2 组一般资料比较差异无统计学意义(P 0 05)。见表 1。712河北医药 2023 年 1 月 第 45 卷 第 2 期Hebei Medical Journal，2023，Vol 45 Jan No.2表 12 组一般资料比较n=40组别年龄(岁，珋x s)男/女(例)FBG(mmol/L，珋x s)24 h 尿微量白蛋白(mg，珋x s)病程(年，珋x s)对照组50 45 7 1222/187 51 0 86140 25 23 578 26 1 13观察组49 74 7 0323/177 49 0 82137 44 20 699 06 1 201 2纳入与排除标准1 2 1纳入标准:符合 2 型糖尿病、早期 DN 诊断标准;患病时间至少 1 年;患者均知情同意。1 2 2排除标准:重要脏器功能障碍;其他原因(高血压、尿路结石等)引起的尿蛋白排泄率增加;恶性肿瘤患者;对研究药物过敏者。1 3治疗方法2 组均给予常规治疗，包括健康宣教、饮食指导、运动锻炼等。1 3 1对照组:给予盐酸二甲双胍片(中美上海施贵宝制药有限公司，国药准字 H20023370)，2 g/d，口服。13 2观察组:给予盐酸二甲双胍片的同时静脉滴注红花黄色素(浙江永宁药业股份有限公司，批号220050146)，100 mg 红花黄色素+250 ml 0 9%氯化钠溶液，1 次/d。连续治疗 14 d。1 4检测方法1 4 1标本采集:采集患者空腹肘静脉血5 ml，离心，取上清，存于 20冰箱。另留取治疗前后患者中段尿 20 ml，500 r/min 离心 10 min，弃上清。14 2肾脏纤维化指标:采用放射免疫法测定血清层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、型前胶原(PC)、型胶原(-C)水平，试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。严格按照试剂盒说明书操作。1 4 3转化生长因子 1(TGF-1)、Smad:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清 TGF-1、Smad1、Smad2、Smad3 水平，试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。严格按照试剂盒说明书操作。1 4 4足细胞损伤标志物:采用 ELISA 测定尿液中Podocin、Nephrin、ZO-1 水平，试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。严格按照试剂盒说明书操作。1 4 5足细胞影响因子:采用 ELISA 测定尿液中结缔组织生长因子(CTGF)、骨桥蛋白(OPN)、骨形态发生蛋白(BMP-7)水平，试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。严格按照试剂盒说明书操作。14 6足细胞数:在荧光显微镜下观察尿沉渣中呈绿色荧光的圆形或椭圆形细胞，选取不同部位 20 个视野，计数足细胞数，取均值。1 5统计学分析应用 SPSS 10 0 统计软件，计量资料以 珋x s 表示，采用 t 检验，计数资料采用 2检验，P 0 05 为差异有统计学意义。2结果2 12 组肾脏纤维化指标比较2 组治疗前 LN、HA、PC、-C 水平比较差异无统计学意义(P 0 05);2组治疗后 LN、HA、PC、-C 水平明显低于治疗前，差异有统计学意义(P 0 05)，且观察组治疗后 LN、HA、PC、-C 水平均显著低于对照组(P 0 05)。见表 2。表 22 组肾脏纤维化指标比较n=40，g/L，珋x s组别LNHAPC-C对照组治疗前176 25 19 76286 87 27 89153 89 14 67190 86 18 98治疗后138 65 16 85*229 92 22 14*110 45 10 94*146 65 12 34*观察组治疗前182 10 22 46279 98 24 54158 13 17 09184 56 16 78治疗后89 06 10 07*#157 87 18 33*#72 45 8 54*#98 89 9 67*#注:与治疗前比较，*P 0 05;与对照组比较，#P 0 052 22 组 TGF-1、Smad 水平比较2 组治疗前 TGF-1、Smad1、Smad2、Smad3 水平比较，差异无统计学意义(P 0 05);2 组治疗后 TGF-1、Smad1、Smad2、Smad3 水平明显低于治疗前，差异有统计学意义(P 005)，且观察组治疗后 TGF-1、Smad1、Smad2、Smad3水平低于对照组(P 0 05)。见表 3。表 32 组 TGF-1、Smad 水平比较n=40，珋x s组别TGF-1(ng/L)Smad1(g/L)Smad2(ng/L)Smad3(ng/L)对照组治疗前387 72 35 431 21 0 15986 45 48 6535 21 4 19治疗后272 42 28 87*0 90 0 13*734 05 41 35*27 08 3 56*观察组治疗前394 11 33 671 18 0 13997 62 46 7634 56 4 22治疗后195 66 18 87*#0 71 0 11*#498 97 34 54*#16 90 2 23*#注:与治疗前比较，*P 0 05;与对照组比较，#P 0 052 32 组足细胞损伤标志物比较2 组治疗前Podocin、Nephrin、ZO-1 水平比较，差异无统计学意义812河北医药 2023 年 1 月 第 45 卷 第 2 期Hebei Medical Journal，2023，Vol 45 Jan No.2(P 0 05);2 组治疗后 Podocin、Nephrin、ZO-1 水平明显低于治疗前，差异有统计学意义(P 0 05)，且观察组治疗后 Podocin、Nephrin、ZO-1 水平低于对照组(P 0 05)。见表 4。表 42 组足细胞损伤标志物比较n=40，g/L，珋x s组别PodocinNephrinZO-1对照组治疗前2 14 0 305 06 0 642 49 0 36治疗后1 48 0 21*3 69 0 48*1 85 0 28*观察组治疗前2 16 0 284 99 0 572 53 0 33治疗后0 83 0 09*#2 24 0 27*#1 23 0 15*#注:与治疗前比较，*P 0 05;与对照组比较，#P 0 052 42 组足细胞影响因子比较2 组治疗前 CTGF、OPN、BMP-7 水平比较，差 异 无 统 计 学 意 义(P 0 05);2 组治疗后 CTGF、OPN、BMP-7 水平明显低于治疗前，BMP-7 水平明显高于治疗前，差异有统计学意义(P 0 05)，且观察组治疗后 CTGF、OPN、BMP-7 水平低于对照组，BMP-7 水平高于对照组(P 0 05)。见表 5。表 52 组足细胞影响因子比较n=40，珋x s组别CTGF(g/L)OPN(g/L)BMP-7(ng/L)对照组治疗前2 23 0 2918 11 2 2329 46 4 18治疗后1 55 0 23*13 86 1 57*44 95 5 35*观察组治疗前2 20 0 2719 24 2 4531 00 4 23治疗后0 79 0 09*#8 90 0 12*#69 34 8 31*#注:与治疗前比较，*P 0 05;与对照组比较，#P 0 052 52 组足细胞数比较2 组治疗前足细胞数比较差异无统计学意义(P 0 05);2 组治疗后足细胞数明显低于治疗前，差异有统计学意义(P 0 05)，且观察组治疗后足细胞数低于对照组(P 0 05)。见表 6。表 62 组足细胞数比较n=40，个/ml，珋x s组别足细胞数对照组治疗前7 04 0 89治疗后5 12 0 63*观察组治疗前6 96 0 83治疗后3 30 0 45*#注:与治疗前比较，*P 0 05;与对照组比较，#P 0 053讨论糖尿病患者机体长期处于糖脂代谢异常状态，该状态可引起全身各器官损害，其中 DN 是最常见的糖尿病微血管并发症，容易导致肾小球硬化、基底膜增厚及系膜细胞基质积聚，这是造成肾功能减退及尿蛋白量增加的重要病理机制4，5。LN、HA、PC、-C 是评估肾脏纤维化的常用指标，DN 患者血清 LN、HA、PC、-C 水平通常表现为异常增高，检测其水平能够在一定程度上反映肾脏纤维化进程及疾病治疗效果。本研究结果显示，2 组治疗前 LN、HA、PC、-C水平比较，差异无统计学意义(P 0 05);2 组治疗后LN、HA、PC、-C 水平明显低于治疗前，差异有统计学意义(P 0 05)，且观察组治疗后 LN、HA、PC、-C 水平低于对照组(P 0 05)，表明红花黄色素联合二甲双胍能够抑制肾脏纤维化进程，从而改善肾功能。研究证实，TGF-1/Smad 信号通路在 DN 发生发展中发挥关键作用6，7。TGF-1 具有调控细胞增殖、分化、凋亡等多种生物学功能，此外 TGF-1 在促进慢性肾脏纤维化和系膜细胞基质积聚中发挥重要作用。TGF-1 与 TGF-型受体结合形成受体复合物，通过磷酸化效应激活其受体底物 Smad 蛋白，后者转移至细胞核中可调控相关转录因子的表达，促进型胶原分泌及肾小管上皮-间质转化(EMT)进程，最终导致肾脏纤维化形成8，9。大量研究表明，DN 患者和肾脏损伤模型动物血清中 TGF-1/Smad 信号通路相关蛋白表达上调，而采用基因敲除、抑制剂或 miRNA 抑制 TGF-1/Smad 信号通路活化能够改善肾脏纤维化10，11。本研究结果表明，2 组治疗前 TGF-1、Smad1、Smad2、Smad3 水平比较差异无统计学意义(P 0 05);2 组治疗后 TGF-1、Smad1、Smad2、Smad3 水平明显低于治疗前，差异有统计学意义(P 0 05)，且观察组治疗后 TGF-1、Smad1、Smad2、Smad3 水平低于对照组(P 0 05)，提示红花黄色素联合二甲双胍可能通过调控 TGF-1/Smad 信号通路发挥肾脏保护作用。此外，TGF-1/Smad 信号通路参与诱发肾脏局部氧化应激反应和氧自由基大量生成，从而引起尿足细胞结构蛋白的表达和分布发生改变，导致其与肾小球基底膜间黏附性降低，进而脱落随尿液排出。因此，DN 患者尿足细胞损伤是肾脏滤过膜通透性增加及蛋白尿产生的本质原因之一12，13。在此过程中大量足细胞标志分子随之进入尿液，其中 Podocin、Nephrin、ZO-1 是反映尿足细胞氧化应激损伤程度的指标，共同参与裂孔膜复合体的形成，从而维持肾小球基底膜完整性14，15。此外，CTGF 具有促进成纤维细胞增殖、细胞外基质积聚等作用，在肾小球硬化、肾小管纤维化形成中发挥重要作用;OPN 通过调控免疫炎性反应促进尿足细胞脱落;BMP-7 能够抑制炎性反应，从而减轻尿足细胞脱落16，17。本研究结果显示，2 组治疗前 Podocin、Nephrin、ZO-1、CTGF、OPN、BMP-7 水平及足细胞数比较，差异无统计学意义(P 0 05);2 组 治 疗 后 Podocin、912河北医药 2023 年 1 月 第 45 卷 第 2 期Hebei Medical Journal，2023，Vol 45 Jan No.2Nephrin、ZO-1、CTGF、OPN 水平及足细胞数明显低于治疗前，BMP-7 水平明显高于治疗前，差异有统计学意义(P 0 05)，且观察组治疗后 Podocin、Nephrin、ZO-1、CTGF、OPN、BMP-7 水平及足细胞数低于对照组，BMP-7 水平高于对照组(P 0 05)，表明红花黄色素联合二甲双胍能够减轻肾脏足细胞损害，从而改善DN 患者病情。综上所述，红花黄色素联合二甲双胍可能通过抑制 TGF-1/Smad 信号通路改善早期 DN 患者肾纤维化，并减轻尿足细胞损伤，效果优于单纯二甲双胍治疗。TGF-1/Smad 信号通路可能成为治疗早期 DN 的潜在靶点。参考文献1刘芳，张立祥，王慧敏，等 养生益肾汤对糖尿病肾病患者血清细胞因子水 平 及 肾 功 能 的 影 响 陕 西 中 医，2022，43:476-478 2AnkusH，Dias A，Gomes E，et al Complications in advanced diabetics ina tertiary care center:a retrospective registry-based study J Clin DiagnRes，2016，10:15-193Lin YJ，Pan JL，Jiang LG，et al The apolipoprotein(APOE)gene andthe risk of diabetic nephropathy(DN):a meta-analysis in East Asianpopulations Med Sci Monit，2018，4:329-3354Hyas Z，Chaiban JT，Krikorian A Novel insights into the pathophysiologyand clinical aspects of diabetic nephropathy Rev Endocr Metab Disord，2017，18:21-285Kim Y，Lim JH，Kim MY，et al The adiponection receptor agonistadiporon ameliorates diabetic nephropathy in a model of type 2 diabetesJ Am Soc Nephrol，2018，29:1108-11276Li Z，Hong Z，Peng Z，et al Acetylshikonin from Zicao ameliorates renaldysfunction and fibrosis in diabetic mice by inhibiting TGF-1/Smadpathway Hum Cell，2018，31:199-2097Wang D，Zhang G，Chen X，et al Sitagliptin ameliorates diabeticnephropathy by blocking TGF-1/Smad pathway Int J Mol Med，2018，41:2784-27928Weng HB，Han WK，Xiong YW，et al Taxus chinensis amelioratesdiabetic nephropathy through down-regulating TGF-1/Smad pathwayChin J Nat Med，2018，16:90-969贾会玉，李莉，吕磊，等 基于 TGF-1/Smads 信号通路探讨丹蛭降糖胶囊对大鼠糖尿病肾病的防治作用 中国药理学通报，2015，31:9910Al-Onazi AS，Al-Rasheed NM，Attia HA，et al Ruboxistaurin attenuatesdiabetic nephropathy via modulation of TGF-1/Smad and GRAPpathways J Pharm Pharmacol，2016，68:219-23211季振中，胡正国，徐焱成 糖尿病肾病患者血清 miR-NA377 的表达及其对 SMAD 信号通路调控作用 重庆医学，2016，45:382412屈雅娟，张敬芳，孙旗，等 灯盏细辛联合依帕司他对糖尿病肾病模型大鼠的治疗作用及机制 陕西中医，2022，43:1337-134113殷洪波，于攀，李杰 糖尿病肾病足细胞损伤机制研究进展 解放军医药杂志，2018，30:113-11614Mergoni G，Vescovi P，Sala R，et al The effect of laser therapy on theexpression of osteocalcin and osteopontin after tooth 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