食管癌组织ARL5B表达与临床病理特征的关系及作用机制.pdf

第 卷第期年月西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)J o u r n a l o fX ia nJ i a o t o ngU n i v e r s i ty(M e d i c a l S c i e n c e s)V o l N o M a r 本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版基础研究食管癌组织A R L B表达与临床病理特征的关系及作用机制赵小涵,盖春月,王鹤松,王多,檀碧波,沈文斌(河北医科大学第四医院放三科,河北石家庄 ;河北医科大学第四医院胸外科,河北石家庄 ;河北师范大学生命科学学院,河北石家庄 ;河北医科大学第四医院外三科,河北石家庄 )摘要:目的应用生物信息学技术探讨A R L B的临床意义及可能的潜在作用机制,并通过临床资料、基础实验等进行了初步验证.方法从T C GA数据库下载食管癌数据集,R软件分析差异表达的mR NA,结合患者的临床数据集进行生存分析.取临床食管癌及癌旁组织标本,采用实时定量P C R(q R T P C R)及蛋白印迹(W e s t e r nb l o t t i n g)验证A R L B表达.免疫组化检测A R L B表达并评价其与食管癌患者临床病理特征的关系.利用生物信息学对A R L B潜在作用机制初步分析,q R T P C R初步验证可能与其作用的基因.结果生物信息学结果显示A R L B在人食管癌组织中的表达明显高于癌旁组织且A R L B高表达是食管癌患者预后差的标志.淋巴结组织、肿瘤组织、癌旁组织中,A R L B的mR NA和蛋白的表达由高到低,与生物信息学结果符合.临床分析表明A R L B表达与肿瘤的淋巴结转移、临床分期有关,其高表达是患者预后差的标志.富集分析显示A R L B与囊泡传输、内体传输、细胞器定位等生物学过程有关.蛋白质蛋白质 相互 作 用(p r o t e i n p r o t e i ni n t e r a c t i o n,P P I)分 析 提示 与A R L B互作 的蛋 白 质有V P S 、K I F A、T OM 等.q R T P C R验证表明,V P S 、K I F A、TOM 的mR NA在食管癌组织中表达高于癌旁组织(n)且与A R L B表达呈正相关.结论食管癌中A R L B存在高表达,与肿瘤淋巴结转移、临床分期及预后有关;A R L B可能通过多种分子机制调控参与食管癌进展.关键词:食管癌;A D P 核糖基化样因子 B(A R L B);临床病理学特征;K a p l a n M e i e r法;生物信息学分析中图分类号:R 文献标志码:AD O I:/j d y x b 收稿日期:修回日期:基金项目:河北省科技厅卫生健康创新专项资助项目(N o D)S u p p o r t e db yH e a l t hI n n o v a t i o nF u n d i n gP r o j e c to fH e b e i S c i e n c ea n dT e c h n o l o g yD e p a r t m e n t(N o D)通信作者:沈文斌,主任医师,硕士生导师 E m a i l:s h e n w b c o m网络出版地址:h t t p s:/l i n k c n k i n e t/u r l i d/R ()E x p r e s s i o na n dc l i n i c o p a t h o l o g i c f e a t u r e so fA R L Bi ne s o p h a g e a l c a n c e ra n d i t sm e c h a n i s mZ HAOX i a o h a n,GA IC h u n y u e,WANG H e s o n g,WANGD u o,T ANB i b o,S HE N W e n b i n(T h eT h i r dR a d i o t h e r a p yD e p a r t m e n to f t h eF o u r t hH o s p i t a lA t t a c h e dt oH e b e iM e d i c a lU n i v e r s i t y,S h i j i a z h u a n g ;T h eT h r o a c i cS u r g e r yD e p a r t m e n to f t h eF o u r t hH o s p i t a lA t t a c h e dt oH e b e iM e d i c a lU n i v e r s i t y,S h i j i a z h u a n g ;C o l l e g eo fL i f eS c i e n c e s,H e b e iN o r m a lU n i v e r s i t y,S h i j i a z h u a n g ;T h eT h i r dG e n e r a lS u r g e r yD e p a r t m e n to ft h eF o u r t hH o s p i t a lA t t a c h e dt oH e b e iM e d i c a lU n i v e r s i t y,S h i j i a z h u a n g ,C h i n a)A B S T R A C T:O b j e c t i v e T oe v a l u a t et h ec l i n i c a l i mpl i c a t i o n so fAR L Bi ne s oph age a l c a n c e ra n d i t su n d e r lyi ngm e c h a n i s m sbyu s i ngb i o i n f o r m a t i c sm e t h o d s M e t h o d s AR L Bt r a n s c r ipt o m i c e xpr e s s i o nd a t aw e r eo b t a i n e df r o mT h eC a n c e rG e n o m eA t l a s(T C GA),Rs o f t w a r ew a se mpl oye dt od e t e c tt h ed i f f e r e n t i a le xpr e s s i o nmRNA s,a n dr e l a t e dc l i n i c a li n f o r m a t i o n w a sc o l l e c t e df o rs u r v i v a la n a lys i s T ov a l i d a t et h eb i o i n f o r m a t i c sr e s u l t s,R e a l t i m equ a n t i t a t i v eP C R(qR T P C R)a n d W e s t e r nb l o t t i ngw e r ec a r r i e do u tf o rc l i n i c a lspe c i m e n so fe s oph age a lc a n c e rt u m o r t i s s u e sa n da dja c e n tt i s s u e s I mm u n o h i s t o c h e m i s t ryw a su s e dt oe v a l u a t et h ee xpr e s s i o no fAR L Ba n di t sa s s o c i a t e dc l i n i c opa t h o l ogi cf e a t u r e s T h eu n d e r lyi ngm e c h a n i s m so fAR L Bi ne s oph age a l c a n c e rw e r epr e l i m i n a r i lye xpl o r e dbyb i o i n f o r m a t i c sa n dqR T P C RR e s u l t s B i o i n f o r m a t i c sm e t h o ds h o w e dt h a t t h ee xpr e s s i o no fAR L Bi nh u m a ne s oph age a lc a n c e rt i s s u e sw a ss ign i f i c a n t lyh igh e rt h a ni na dja c e n tt i s s u e sa n dc o r r e l a t e d w i t hpo o rpr ogn o s i s C l i n i c a lspe c i m e n sw e r ed e t e c t e d,t h ee xpr e s s i o n so fAR L B mRNAa n dpr o t e i n w e r et h eh igh e s ti n西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版m e t a s t a s e slymph n o d e,f o l l o w e dbye s oph age a lc a n c e rt i s s u e sa n da dja c e n tt i s s u e s,w h i c hc o r r e spo n d e d w i t hb i o i n f o r m a t i c s r e s u l t s T h ee xpr e s s i o no fAR L Bw a s s t r o nglyc o r r e l a t e dw i t hlymphn o d em e t a s t a s e sa n da d v a n c e dc l i n i c a l s t age K apl a n M e i e ra n a lys i sr e s u l t sd e n o t e dh igh AR L Bl e v e l,i n d i c a t i ngpo o rpr ogn o s i s E n r i c h m e n ta n a lys i s s h o w e dt h a tAR L B w a sa s s o c i a t e dt h eb i o l ogi c a lpr o c e s s e ss u c ha sv a c u o l a rt r a n spo r t,l a t ee n d o s o m et olys o s o m et r a n spo r t,a n do rga n e l l el o c a l i z a t i o n P r o t e i n pr o t e i ni n t e r a c t i o na n a lys i s(P P I)s ug ge s t e dt h a tAR L Bm igh t i n t e r a c tw i t h V P S ,K I F A a n d T OM,w h o s ee xpr e s s i o n sw e r ev e r i f i e dbyqR T P C R a n dpo s i t i v e lyc o r r e l a t e dw i t hAR L Be xpr e s s i o n C o n c l u s i o n AR L Bw a sh igh lye xpr e s s e di ne s oph age a l c a n c e ra n da s s o c i a t e dw i t hlymphn o d em e t a s t a s e s,a d v a n c e dc l i n i c a l s t age,a n dpo o rpr ogn o s i s AR L Bm ayb e i n v o l v e d i n t h epr ogr e s s i o no fe s oph age a l c a n c e rw i t hs e v e r a lm o l e c u l a rm e c h a n i s m s K E Y WO R D S:e s oph age a l c a n c e r;AD Pr i b o syl a t i o nf a c t o r l i k eG T P a s e B(AR L B);c l i n i c opa t h o l ogi cf e a t u r e;K apl a n M e i e ra n a lys i s;b i o i n f o r m a t i c sa n a lys i s食管癌是全球危害最大的主要恶性肿瘤之一,其发病率位于恶性肿瘤第位,致死率位于恶性肿瘤第位.手术及放化疗是食管癌主要的治疗方式,但疗效欠佳,其整体年生存率仅为.现代医学发展表明,多种基因在调控食管癌进展及转移中发挥作用,明确食管癌发生发展的分子机制,对精准化个体治疗、提高食管癌治疗疗效有重要作用.A D P 核糖基化样因子 B(A D Pr i b o s y l a t i o nf a c t o rl i k eG T P a s e B,A R L B)是R A S超家族中A D P核糖基化因子样家族成员,可调节高尔基体、溶酶体和细胞膜间物质的运输,尤其在调节物质从核内体到高尔基体间的逆行性转运中发挥重要作用 .近些年有研究显示其在部分肿瘤中表达增高 .A R L B在食管癌中的表达情况及意义尚不清楚.本研究应用生物信息学技术探讨A R L B的临床意义及可能的潜在作用机制,并通过临床资料、基础实验进行了初步验证.材料与方法生信数据获取及分析从公 开 数 据 库T C GA(h t t p s:/t c g a d a t a n c i n i hg o v/)下载食管癌患者mR NA表达数据集及临床资料,使用R 软件分析差异表达的mR NA,使用t检 验 的f o l dc h a n g e筛 选 差 异 表 达 基 因(|l o gF C|,F D R).以A R L B表达的中位数为界,将样本分为A R L B 高表达和低表达组,利用R软件S u r v i v a l包分析A R L B表达高低与生存时间的关系.主要材料及试剂食管癌细胞系T E 购自中国科学院上海细胞资源中心,于本机构科研中心保种及培养.细胞培养基为美国G i b c o公司产品.T r i z o l为美国I n v i t r o g e n公司产品;各引物由上海生工公司S a n g o nB i o t e c h(S h a n g h a i)C o,L t d 设 计 合 成.用 于W e s t e r nb l o t t i n g的 各 一 抗(P r i m a r y a n t i b o d i e s)为 美 国S i g m a公司产品.患者来源与标本患者标本来源于两部分:新鲜标本取自 年月至 年月期间在河北医科大学第四医院进行食管癌手术患者,共 例,检测癌组织、癌旁组织及转移淋巴结组织中A R L B的mR NA及蛋白表达,以验证生信分析结果;石蜡标本取自 年月至 年 月期间于河北医科大学第四医院手术且病理确诊的食管癌患者,共 例,取肿瘤及癌旁组织.纳入者术前未行新辅助治疗,均有完整的病历记录及随访信息,末次随访至 年月.本部分检测用以分析A R L B蛋白与食管癌患者生物学特征及预后的关系.本研究由河北医科大学第四医院伦理委员会批准(伦理号:K S ).患者或监护人已签署知情同意文件.免疫组化方法应用S P法对收集到的食管癌患者食管癌组织石蜡标本病理切片行常规免疫组织化学染色.结果判读标准如下.根据癌细胞染色强度:分(无染色)、分(淡黄色颗粒)、分(棕色颗粒)、分(棕褐色颗粒);根据癌细胞阳性细胞百分率:分()、分()、分()、分().将染色强度得分和阳性细胞百分率得分相乘,分定义为低表达,分以上定义为A R L B高表达.染色结果由名病理科医师独立评价,评价者对患者情况不知情.如评价出现分歧则共同商讨解决.基因富集分析M e t a s c a p e数据库是一个功能强大的基因功能注释分析工具,能帮助用户将当前流行的生物信息学分析方法应用到批量基因和蛋白质的分析中,以实现对基因或蛋白功能的认知.通过M e t a s c a p e(h t t p s:/m e t a s c a p e o r g)的富集分析功能对A R L B相关差异表达基因进行富集分析,探索A R L B参与食管癌发生发展过程中的可能机制.以A R L B表达的中位数为界,将样本分为A R L B 高表达和低表达组.根期赵小涵,盖春月,王鹤松,等食管癌组织A R L B表达与临床病理特征的关系及作用机制本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版据A R L B差异表达相关基因通过M e t a s c a p e进行富集分析(P).蛋白质相互作用分析S T R I NG是一个搜索已知的和预测蛋白质蛋白质相互作用(p r o t e i n p r o t e i ni n t e r a c t i o n,P P I)的生物数据库,其数据来源于已被证实的或者可预测的蛋白蛋白 相 互 作 用.本 研 究 通 过S T R I NG v (h t t p s:/s t r i n g d b o r g/)数据库获取A R L B在物种“H o m oS a p i e n s”的P P I网络信息.q R T P C R方法使用T r i z o l提取食管癌患者术后标本中的食管癌组织、癌旁组织及转移淋巴结组织的总R NA,按照F a s t Q u a n tR TK i t试剂盒按照说明书将R NA反转录为c D NA,q P C R反应体系进行扩增.反应体系为:变性s,退火 s,延伸 s.重复 个 循 环.A R L B上 游 引 物:G C AT T GA C AG G GAA C GA C;下游引物:T GAA C T AAG G G T GAG G T AT T T C G.a c t i n上 游 引 物:G G T C AT C A C C AT T G G C AA;下 游 引 物:GAG T T GAAG G T AG T T T C G T G GA.将 实 验 所 得C t值 导 出,以GA P DH表 达 作 为 内 参,通 过 C t公 式 计 算A R L BmR NA在食管癌患者癌组织、癌旁组织及转移淋巴结组织的相对表达.W e s t e r nb l o t t i n g检测在食管癌组织、癌旁组织及转移淋巴结组织加入PM S F裂解液,经过离心后提取细胞总蛋白,采用二喹啉甲酸蛋白定量试剂盒检测蛋白浓度,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白样品.转印蛋白到硝酸纤维素膜后,以 g/L脱脂奶粉封闭 m i n后,依次与一抗、二抗相接触,进行化学发光反应,分析蛋白表达.通过I m a g eJ软 件 测 量 获 得 检 测 蛋 白 与 内 参 蛋 白 a c t i n表达,以比值进行蛋白表达定量.统计学处理数据统计分析通过S P S S 完成,作图通过P R I S M完成.计量资料通过均数标准差呈现.组之间的比较通过独立样本t检验完成,多组样本间的比较通过o n e w a yANOVA完成,计数资料组间比较采用检验.C O X回归分析临床病理因素与食 管 癌 患 者 预 后 的 关 系 并 计 算 风 险 比,通 过K a p l a n M e i e r法获得生 存 曲 线.相 关 性 分 析 使 用P e a r s o n相关性检验.P 为差异有统计学意义.结果生物信息学分析显示A R L B在食管癌中表达增高且为生存的危险因素在T C GA数据库中检索到肿瘤组织样本 例,癌旁样本 例,识别其编码基因的差异性表达,其中下 调 基 因 个,上 调 基 因 个.其 中A R L B在 癌 症 样 本 中 显 著 上 调(L o gF C ,F D R ,图).生存分析结果发现A R L B是生存的危险因素(P,HR,图).L o gF C,F D R .图A R L B在食管癌组织中表达显著上调F i g A R L B w a ss i g n i f i c a n t l yo v e r e x p r e s s e di ne s o p h a g e a lc a n c e r t i s s u eP,HR.图A R L B是食管癌患者生存的危险因素F i g A R L B w a sar i s kf a c t o rf o rs u r v i v a lo fe s o p h a g e a lc a n c e rp a t i e n t s验证A R L B在食管癌组织标本中的表达q R T P C R结 果 显 示,转 移 淋 巴 结 中A R L B西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版mR NA的相对表达最高(),其次为食管癌组织(),癌旁组织的表达最低(),差异具有统计学意义(F ,P).W e s t e r nb l o t t i n g结果显示A R L B蛋白在各标本中的相对表达与mR NA的相对表达相一致(图),其在转移淋巴结组织、肿瘤组织、癌旁组织的相对表达由高到低依次为(,),A R L B蛋白相对表达在肿瘤组织中较癌旁组织明显升高(P),在转移淋巴结中较癌旁组织显著升高(P ),与生信结果变化一致.F ,P .与 癌 旁 组 织(A d j a c e n t)比 较,P ,P .图W e s t e r nb l o t t i n g检测A R L B在食管癌组织及正常组织中的表达F i g W e s t e r nb l o t t i n gd e t e c t e dt h ee x p r e s s i o no fA R L Bi ne s o p h a g e a l c a n c e r t i s s u ea n da d j a c e n t t i s s u e分析食管癌组织A R L B表达与临床病理特征的关系免疫组化检测 例食管癌患者中A R L B的表达,其中 例高表达,例低表达(图).结合患者临床病理特征分析,发现A R L B表达与肿瘤淋巴结转移、美国癌症联合委员会(Am e r i c a nJ o i n tC o m m i t t e eC a n c e r,A J C C)临床分期有关,有淋巴结转移的患者、A J C C临床分期期的患者A R L B表达升高(P,表).图免疫组化检测A R L B在食管癌患者中的表达()F i g R e p r e s e n t a t i v eI HC s t a i n i n g p a t t e r n so f A R L Bi ne s o p h a g e a l c a n c e r t i s s u e()表食管癌组织A R L B表达与临床病理特征的关系T a b R e l a t i o n s h i po fA R L Be x p r e s s i o na n dc l i n i c o p a t h o l o g i cf e a t u r e s i ne s o p h a g e a l c a n c e rp a t i e n t s临床病理特征A R L B相对表达高表达(n)低表达(n)值P值年龄(岁)性别 男性 女性 A J C C临床分期 期 期 T分期 T T T T N分期 N N 分化程度 低分化 中分化/高分化 A R L B表达与食管癌患者预后的关系单因素C o x回归分析发现A R L B高表达、淋巴结转移、T分期、A J C C临床分期晚(期)是食管癌 患 者 预 后 不 良 的 危 险 因 素(表).K a p l a n M e i e r生存分析结果所示,A R L B高表达患者较低表达患者预后差(P,HR,图).表A R L B表达与食管癌患者的预后关系T a b C o r r e l a t i o nb e t w e e nA R L Be x p r e s s i o na n dp r o g n o s i so f e s o p h a g e a l c a n c e rp a t i e n t s临床病理特征HR(C I)值P值年龄(岁)(v s )()性别(男性v s女性)()A J C C临床分期(v s)()T分期(T T v s T T)()N分期(N v s N)()分化程度(低分化v s中/高分化)()AR L B相对表达(低v s高)()A R L B基因富集分析M e t a s c a p e基因富集分析表明,A R L B主要富集于调节物质迁移与定位、代谢、调节生物过程个通路.提示A R L B可能与肿瘤细胞迁移、侵袭和代谢有关.A R L B可能参与的其他通路还有细胞生物过程 调 节、刺 激 应 答 等.P P I分 析 结 果 显 示,与A R L B互作的蛋白质有V P S 、K I F A、TOM 等期赵小涵,盖春月,王鹤松,等食管癌组织A R L B表达与临床病理特征的关系及作用机制本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版(图).将富集到的高度相关通路和GOt e r m s以网络形式相连,提示A R L B与囊泡传输、内体传输、细胞器定位等生物学过程有关(图).验证与A R L B可能存在相互作用的基因q R T P C R结 果 显 示,食 管 癌 组 织 中V P S 、K I F A、TOM 的mR NA的相对表达均较癌旁组织显著升高(图,P).S p e a r m a n相关性分析显示,A R L B表达与V P S 、K I F A、TOM 均呈正相关,差异具有统计学意义(r,P;r ,P;r,P).P,HR.图K a p l a n M e i e r显示A R L B高表达的食管癌患者较低表达者预后差F i g A R L Bh i g he x p r e s s i o n i ne s o p h a g e a l c a n c e r p a t i e n t s i n d i c a t e dp o o r s u r v i v a l b yK a p l a n M e i e ra n a l y s i s图S T R I N G探索A R L B蛋白质蛋白质相互作用F i g T h ep r o t e i n p r o t e i ni n t e r a c t i o n(P P I)o f A R L B b yS T R I NG图对A R L B高度相关通路和G Ot e r m s以网络形式相连F i g H i g hc o r r e l a t i o np a t h sa n dG Ot e r m sf o rA R L Ba r ec o n n e c t e d i nn e t w o r kf o r m图q R T P C R检测食管癌组织中V P S 、K I F A、T OM 的m R N A表达F i g q R T P C Rd e t e c t e dt h emR NAe x p r e s s i o n so fV P S ,K I F Aa n dT OM i ne s o p h a g e a l c a n c e r t i s s u e讨论A D P 核糖基化因子样家族(t h eA D P r i b o s y l a t i o nf a c t o r l i k ep r o t e i n s,A R L s)属于R A S家族,是一种高度保守的小G T P结合蛋白家族,与A D P核糖 基 化 因 子 家 族(t h e A D P r i b o s y l a t i o nf a c t o r,A R F)有 相似的氨基酸序列、个结构类似的家族成员.A R L s家族已被证实在细胞间的各项生物功能中有着重要作用,如细胞增殖、黏附、运动等,其功能异常与很多疾病发生发展相关.近些年越西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版来越多的数据表明,A R L s家族在肿瘤的发生发展中发挥着 重要作用,如A R F、A R F、A R L、A R L、A R L C、A R L 和A R L 等因子,已被证明在部分恶性肿瘤中异常表达并与肿瘤发生发展相关 .其中A R L B在肿瘤中的报道较少.随着研究的不断深入,近些年逐渐发现A R L B在肿瘤中的意义.A R L B定位于反式高尔基体,可调节高尔基体、溶酶体和细胞膜间物质的运输.A R L B可通过募集一种名为S K I P的衔接蛋白并与其结合,抵消S K I P蛋白的自身抑制作用,促进S K I P与溶酶体、微管顺行运动驱动蛋白(a n t e r o g r a d em i c r o t u b u l em o t o rk i n e s i n )偶联,使溶酶体向细胞外围移动.在肿瘤中,A R L B可通过增加溶酶体向细胞边缘扩散,进而增强乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,沉默A R L B减少了前列腺癌细胞中溶酶体的扩散,降低其侵袭能力,.然而A R L B在食管癌中的表达及其作用尚未见报道.本研究通过生信分析结果显示,A R L B在食管癌患者中表达增高,且高表达A R L B患者较低表达组预后差.通过q R T P C R及W e s t e r nb l o t t i n g对我院食管癌手术标本中进行检测,发现肿瘤组织、尤其是转移淋巴结组织中A R L B表达显著升高.分析A R L B表达与临床病理特征的关系,结果显示在A R L B淋巴结转移、临床分期晚(比期)的患者中表达显著增高,且A R L B高表达患者预后不良,提示A R L B在食管癌患者中发挥促进肿瘤进展作用.富集分析显示,A R L B与肿瘤细胞迁移、侵袭和代谢有关,可能参与囊泡传输、内体传输、细胞器定位等生物学过程.P P I分析显示,A R L B可与V P S 、K I F A、TOM 相 互 作 用,通 过q R T P C R证 实V P S 、K I F A、TOM 在食管癌组织中表达增高且与A R L B表达均呈正相关.V P S 是一种参与细胞膜的融合、内体和囊泡转运的关键蛋白,在结肠癌患者中表达升高并与预后相关,细胞学实验证明其表达升高可导致肿瘤细胞增殖能力增强与奥沙利铂耐药 .K I F A又名驱动蛋白家族成员 A,作为顺行运动蛋白发挥作用,可调节物质沿微管轴向运输.其突变可导致感觉神经元病变、学习障碍等 .研究发现其在部分肿瘤组织中表达增高,并可介导卵巢癌患者对多西他赛的耐药 .TOM 作为M y b 的靶蛋白,参与细胞核内体的转运.既往研究显示细胞内物质的运输能力的强弱与细胞迁移能力相关,如溶酶体向外运动能力的减弱会导致细胞迁移能力减低,A R L B作为一种在调节包括溶酶体在内的细胞物质运输过程中有重要作用的蛋白,可能与V P S 、K I F A、TOM 相互作用,共同参与细胞内体溶酶体囊泡系统内物质的运输和交换,进而影响肿瘤细胞迁徙及增殖能力.本研究的局限性在于仅在细胞水平层面进行了A R L B作用机制的初步验证,未进行体外实验且对A R L B的作用机制未行更深入探讨,未来将进行进一步研究.总之,本研究表明食管癌细胞中A R L B高表达,与肿瘤淋巴结转移及预后有关;A R L B可能通过多种分子机制调控参与食管癌进展.利益冲突声明:所有作者均声明不存在利益冲突.参考文献:B RAY F,F E R L AYJ,S O E R J OMA T ARAMI,e ta l G l o b a lc a n c e r s t a t i s t i c s :G L O B O C ANe s t i m a t e so f i n c i d e n c ea n dm o r t a l i tyw o r l d w i d ef o r c a n c e r si n c o u n t r i e sJ C AC a n c e r JC l i n,():T HR I F TAP G l o b a lb u r d e na n depi d e m i o l og yo fB a r r e t to e s oph agu sa n do e s oph age a lc a n c e rJ N a tR e v G a s t r o e n t e r o lH epa t o l,():HOUGHT O N FJ,B E L L I NGHAM SA,H I L L A F,e ta l A r l b i saG o lgi l o c a l i s e ds m a l lGpr o t e i n i n v o l v e d i nt h er egu l a t i o no f r e t r ogr a d e t r a n spo r tJ E xpC e l lR e s,():RO S A F E RR E I RAC,CHR I S T I SC,T O RR E SIL,e t a l T h es m a l lGpr o t e i nA r l c o n t r i b u t e st oe n d o s o m e t o G o lgit r a f f i cbya i d i ngt h er e c r u i t m e n to ft h eGAR Pc o mpl e xt ot h eG o lgiJ B i o lOpe n,():J A I MO NE,T R I P A T H IA,KHURANAA,e t a l B i n d i ngw i t hh e a t s h o c kc ogn a t epr o t e i nH S C f i n e t u n e s t h eG o lgi a s s o c i a t i o no f t h es m a l lG T P a s eAR L BJ JB i o lC h e m,():XU Y Y,Y ES,ZHANG N,e ta l T h eF T O/