SD大鼠饲养管理统一标准操作作业规程.doc

SD大鼠喂养管理操作规程11月目录一、SD大鼠概述 2二、SD大鼠日常喂养管理 51、进入屏障及准备工作 52、喂养环境 63、饲喂 64、给水 75、换窝 76、离乳 87、留种交配 98、动物发放 109、引种 1110、处死 1311、SD大鼠常见疾病 1312、清洁和消毒 1613、退出屏障 1714、常见突发事件应急处理 17一、SD大鼠概述大鼠(Rat)，啮齿目、鼠科、大鼠属，属野生褐色大鼠(Rattus norvegicus) 变种。原产于亚洲中部及原苏联部分温暖地域。十八世纪后期开始人工喂养，十九世纪中叶首次用于心理学研究，二十世纪以后，大鼠应用于生命科学研究各个领域，尤其在肿瘤学、药理学、内分泌学、营养学方面应用最为广泛。1925年美国Sprague dawley农场用Wistar培育而成。其特点为头部狭长，尾长靠近身长，产仔多，生长发育较Wistar快，抗病能力尤以对呼吸系统疾病抵御力强；自发肿瘤率低，对性激素感受性高； 10 周龄雄鼠体重可达300-400g，雌鼠可达180-270g。SD大鼠常见作营养学、内分泌学和毒理学研究。行为和习性（1）SD大鼠性情温顺，易于捉取，通常不会主动咬人，但当粗暴操作或营养缺乏时可攻击人或相互撕咬，哺乳母鼠更易产生攻击人倾向，配种后成年雄鼠同笼喂养相互撕咬，严重甚至咬死。（2）SD大鼠是杂食动物，有随时采饮习惯。喜食煮熟动物肉(如兔肉)，甚至是同类肉。对营养缺乏敏感，尤其是维生素和氨基酸缺乏时可出现经典症状。如核黄素缺乏时出现皮炎、脱毛、体质虚弱和生长缓慢，还可引发角膜血管化、白内障、贫血和髓质退化；维生素E缺乏可造成雌大鼠生育能力降低，严重缺乏时雄鼠可终生丧失生殖能力。（3）SD大鼠活动多集中在黄昏到清晨这一段时间，白天常在笼内闭目休息，交配多在夜间发生。（4）SD大鼠对空气中粉尘、氨气、硫化氢等极为敏感，易引发呼吸道疾病，通常开放喂养大鼠关键死因为呼吸道疾病。（5）SD大鼠对多种刺激很敏感，环境条件微小改变也可引发大鼠反应，强烈噪音可造成大鼠恐慌、相互撕咬，带仔母鼠可出现吃仔现象。（6）SD大鼠含有群居优势，同笼多个喂养比单个喂养大鼠体重增加快、性情温顺、易于捉取，单个喂养则胆小易惊、不易捕捉。解剖学特点（1）大鼠较小鼠个体较大。通常成年大鼠体长大于18-20cm。尾上覆有短毛和环状角质鳞片，数量多于200片。上下颌各有两个切齿和六个臼齿，共16颗牙齿。齿式为（1003/1003）2。（2）大鼠骨骼约105-108块，大鼠生长发育期长,长骨长久有骨骺存在，不骨化。切齿终生不停生长，大鼠需不停啃咬磨牙以维持其长度恒定，故垫料中应有部分小木块供其啃咬。（3）大鼠唾液腺包含腮腺、颌下腺和舌下腺。分别在下颌骨后缘至锁骨腹外侧、下颌骨后缘和胸腔入口腹侧、颌下腺口侧。颈区肩胛部间沉积脂肪组织呈腺体状，称为冬眠腺，在产热中起着关键作用。（4）大鼠胃由前后两部分组成，前胃为无腺区，后胃为有腺区，前后两部分由一个界限嵴分开，食管经过界限嵴一个褶进入胃小弯，此褶是大鼠不能呕吐原因。（5）大鼠肠道分为十二指肠、空肠、回肠、盲肠、 结肠、 直肠。 其中小肠最长，约114cm（102-126），盲肠较长，约6-8cm。（6）大鼠肝脏呈紫红色，占体重百分比大，约为体重1/25，由四叶组成（右侧叶、中叶、左叶和尾叶）。肝脏再生能力强,经部分肝切除术后仍可再生。成年大鼠切除肝2/3，在一周内肝脏生长最快，三周内肝脏重量可恢复到靠近正常。大鼠无胆囊，各肝叶胆管会合成胆总管，开口于十二指肠。胰脏在胃和十二指肠弯曲处，呈淡粉色，形状不规则，似脂肪。（7）大鼠心脏重量约占体重1/30-1/20，由左心房、左心室、右心房、 右心室组成。左心室发出主动脉弓，由此分出无名动脉、左颈总动脉、左锁骨下动脉。无名动脉又分出右颈总动脉和右锁骨下动脉。主动脉弓到心脏背侧沿脊柱下行， 形成背主动脉，背主动脉再分支到髂部和四肢。（8）大鼠肺脏为海绵状，淡粉色,在胸腔中部,分为左、右两部分。左肺为一个大叶，右肺分为4叶（前叶、中叶、副叶、后叶）。（9）肾脏呈暗红色、蚕豆状，在腹腔背侧脊柱两侧。每侧肾全部和一条白色细长输尿管相连，输尿管下接膀胱。（10）大鼠神经系统和人类相同， 亦包含中枢神经系统和周围神经系统两部分。中枢神经包含脑和脊髓，周围神经包含脑神经、脊神经、植物神经。脑分为大脑、间脑、中脑、小脑和延脑，大鼠大脑很发达，中脑较小。 由脑发出神经叫脑神经，共12对。脊神经和植物神经和其它动物相同。二、SD大鼠日常喂养管理1、进入屏障及准备工作进入屏障消毒 （1）进入外更衣室，关闭外侧门。（2）脱下衣服、眼镜、手表、戒指等放在更衣箱内，进入淋浴室。（3）3840温水淋浴，用药皂、香波、护发素洗净手足、身体及头发，然后用水漱，最终洗净全身。（4）进入内更衣室后，先用外科洗手液将双手反复搓洗消毒30s后才能接触内更衣室无菌物品。 （4）先用灭菌后毛巾擦干身体、头发后，再依次穿上隔离服(动物饲育区域专用)，戴上手套，戴眼镜通常在饲育区内有专用眼镜，最终整理好衣服。（6）打开内更衣室门，快速进入风淋间进行风淋。（7）进入SPF区域。准备工作（1）计划好当日工作内容，在洁库配好消毒液，取足当日工作所需物品，一次移入动物房，遵照人员物品单向流动标准。 （2）进入动物房确定饲育室有没有异常。包含室内温度、湿度、水瓶有没有漏水、有没有动物逃逸、室内有没有其它异常等。（3）检验每盒动物饮水及摄食情况，若饮水及摄食正常则继续一天工作。（4）若饮水及摄食不正常动物笼，先检验是否饮水瓶阻塞，再观察动物是否有疾病征兆。若有，立即上报。（5）发觉动物死亡，要调查死亡原因，判定事故死亡还是异常死亡，并汇报，不能确定原因要将整盒动物送出屏障待查。2、喂养环境屏障环境喂养SD大鼠经过大家无数代定向选择，生活习性有了一定改变，对环境适应性差，不耐冷热，要求生活在清洁无尘、空气新鲜环境下。SD大鼠喜阴暗、平静环境，对环境温度、湿度很敏感，经不起温度骤变和过高温度。夏季温度过高常影响种母鼠受胎率和仔鼠生长发育。冬季室温过低，不仅会影响种鼠生长繁殖，且易发生多个疾病。喂养环境控制应达成以下要求：温度在1826，相对湿度4070，通常大鼠喂养盒内温度比环境高12，湿度高510。噪音85分贝以下，氨浓度20PPm以下通风换气812次/小时。SD大鼠怕强光，在比较强烈光照下，哺乳母鼠易发生神经紊乱，可能发生吃仔鼠现象。受到噪音刺激，也会吃仔鼠。3、饲喂SD大鼠为随时采食、多餐习性动物。大鼠采食量通常为5g（100g体重二十四小时）。在鼠盒料斗内应常常有足够量新鲜干燥饲料，对于群养盒，每七天应固定两天添加饲料，其它时间可依据情况随时注意添加。 注意事项(1)操作：灭菌饲料使用料铲给食，不能直接用手拿取。饲料用料斗给食，落在地上不能使用。 (2)给食量：饲料不宜给得过多，过多易受微生物污染，最好2次给食之间不出现剩下。依据SD大鼠不一样阶段生长发育特点，应有不一样给饲标准。因为种鼠群和生产鼠群交配繁殖频繁，尤其生产种母鼠负担重，能量消耗大，所以除供给足够块料外，还要定时饲喂少许葵花籽。4、给水大鼠饮用水为PH2.52.8酸化水，用饮水瓶给水，每七天换水23次，大鼠饮水量通常为811ml（100g体重二十四小时），要确保饮水连续不停，拧紧瓶塞，预防瓶塞漏水造成动物患病、溺死。通常日常喂养应先加水瓶再加饲料方便加饲料时检验有没有水瓶漏水，完成当日工作离开喂养室前应再次检验水瓶和饲料。还应常检验大鼠在吸水过程中，口内食物颗粒和唾液可倒流入水瓶。为避免微生物污染水瓶，水瓶灭菌后仅限一次性使用。严禁未经消毒水瓶继续使用。试验动物饮用水处理器应该定时清洗维护。定时对滤芯和管路进行清洗或更换。5、换窝换窝每七天进行12次，换窝前要用事先配好消毒液，擦拭操作台，浸泡器械。将清洁鼠盒成摞置于地面，取下待换鼠盒放置在操作台上，打开鼠盒盖放在清洁鼠盒上，用手提起大鼠尾部放入清洁鼠盒，盖上鼠盒盖，用蘸有消毒液抹布擦拭摆放鼠盒喂养架，将鼠盒放回原处，一个喂养盒内动物更换后，应把手浸在消毒液中消毒后再继续换窝。 注意事项（1）大鼠牙齿尖锐，换窝时要预防被咬伤。（2）手提大鼠尾部时不要抓尾巴末端，以防大鼠挣扎造成尾部皮肤脱落。（3）换窝时如遇母鼠正在哺乳应先将母鼠取出，再动仔鼠，以防被母鼠咬伤。（4）换窝时如遇母鼠正在产仔应推迟换窝，以免惊扰母鼠造成吃仔。换窝过程中应注意大鼠繁殖情况如有新生仔鼠应立即统计生仔日期及只数，另外，还应注意大鼠外形及精神状态，发觉有肿瘤、脱毛、烂尾、腹泻、毛色较差、极度消瘦和精神状态显著不佳大鼠应整盒处死淘汰。6、离乳离乳通常在换窝时同时进行，仔鼠哺乳期通常1821天，种用仔鼠，哺乳可延长到23天，但不超出25天。过长哺乳时间会影响母鼠健康和发情。也可观察仔鼠生长发育情况进行离乳，通常仔鼠双眼睁开、反应灵敏、含有独立采食能力即达成离乳指征，可进行离乳。将离乳仔鼠按性别区分放在群养盒中喂养、待发。幼鼠性别判别关键从外生殖器和肛门距离判定，近者为雌，远者为雄。另外，雌鼠肛门和生殖器之间有一无毛小沟，而雄鼠则在肛门和生殖器之间长毛。再者，仔鼠雌鼠有较不显著乳头。群养大鼠按离乳日期挂牌，并统计品系、性别、离乳时间方便以后发放。喂养密度以刚离乳10只每盒，150g300g 6只每盒，300g 4只每盒。7、留种交配SD大鼠繁殖，多采取随机交配，选择下代种鼠时，不需要考虑亲代血缘关系。选择标准关键依据亲代繁殖、带乳能力，仔代生长发育和健康情况。选种条件是亲代应含有较高生殖能力，每胎产仔能力8只以上且离乳存活率在95以上，并含有良好泌乳能力和对周围环境有较高适应能力。要求生长发育快，体型大，通常应从第23胎生下仔鼠中选留幼种。SD大鼠体重达200克以上，即可选做种鼠。被选种鼠应体质强壮，运动活泼，对外界刺激反应敏锐，眼睛鲜红有神，被毛光泽，浓密贴身，尾粗而较长，血管显著，呈粉红色，头部宽广，颈部长度适中，背宽而平直，躯干前后匀称，腹部系紧，胸圆满，四肢短而有力，生殖器正常等条件。对选留幼种，填好卡片，分清性别喂养。在育种过程中，应对发育不正常者立即淘汰。选配时应挑选肥度适中种鼠进行交配。过瘦说明发育不良，过肥雌鼠，常因卵巢周围沉积脂肪过多，滤泡发育少，影响卵巢激素产生和分泌，阻碍卵细胞成熟和排出，繁殖率低。雄鼠过肥，也会降低性活动和受精能力。SD大鼠通常采取以下两种交配方法（1）长久同居交配法：一雄一雌终生同居进行交配生产。该方法优点：雌雄长久同居，雌鼠生产后雄鼠和之交配，在哺乳期雌鼠又能继续怀孕，这么， 雌鼠每个月可生一胎。缺点是：雌鼠既哺乳又怀孕，负担太重，假如营养跟不上，雌鼠和仔鼠体质全部会下降，直接影响大鼠质量。（2）循环交配法：一雄多雌同居进行繁殖。可1:2、1:4交配，确定雌鼠怀孕后把它单独放一笼内进行喂养,待其产仔哺乳、仔鼠离乳后把雌鼠放回原笼交配。其优点是：雌鼠受孕后单独喂养，有利仔鼠生长发育，哺乳期不怀孕，母鼠泌乳好,仔鼠健壮。缺点是：近两个月一胎，生产周期长。应用这种方法时注意一个问题,发觉雄鼠体质下降要立即更换，以保持较高怀孕率。8、动物发放动物发放应严格根据动物应用单位要求品系、数量、性别、体重范围或日龄进行发放。定时校准电子称，待电子称显示稳定后读数。医学试验常常对试验动物体重或日龄要求较为严格，如不按使用计划配种，可能造成延误试验或造成动物超重而被迫淘汰。所以依据试验动物使用计划制订对应配种计划很关键，配种计划通常按以下公式进行计算。公式：配种日期使用日期（性周期怀孕期要求日龄）配种数量计划总数平均产仔数比如：明年2月9日需要60日龄大鼠400只，则配种日期为使用日期明年2月9日倒推4+21+60=85天，即是今年11月23日。配种数量为400只850只雌鼠。SD大鼠体形和体表特征日龄判定日龄(天)特征0-1皮肤赤红，耳壳粘连，双眼不张，全身无毛，头大，四肢和尾极短2-3皮肤粉红，耳壳略张开4-5脐带疤痕脱落，能翻身，被毛长出6-7耳耸立，能爬行8-9全身除耳部外全部有较短被毛10-11全身被毛，耳壳变薄12-14开眼14-18能跳跃，可自行采食45-55雌性小鼠阴门开启50-60雄性小鼠睾丸降落至阴囊9、引种因为种群规模有限，长时间不换种会造成种群退化、遗传信息漂变等后果。所以引种对维持屏障试验动物正常生产是十分必需。引种需向有供种资质种子中心提出供种申请，进行引种，标准上要求供给方提供正当或正规动物健康检验汇报。将动物引入SPF区域，通常见专用运输盒。具体步骤以下：（1）动物抵达后在屏障外检验运输盒是否完好，有没有破损情况。（2）根据动物运输箱上标签，查对动物出生日(或周龄)、品系名、性别、数量、供给单位名称、动物微生物控制等级等和要求是否相符。（3）运输盒表面用70酒精、50异丙醇、05过氧乙酸喷雾或擦拭消毒。（4）检验传输窗或传输室两侧门是否关闭后，再打开外侧门，将运输盒放入。（5）打开紫外灯，15min照射。（6）打开内侧门，将运输盒搬入SPF区域。（7）打开运输盒盖，将动物移入喂养盒内，加入饲料和饮水瓶。在动物喂养盒上挂上标签，统计必需背景资料。（8）取出动物后运输盒，立即从传输窗或传输室传出。动物移入屏障后不宜立即交配，应经过一周观察、适应期再进行交配。观察动物通常状态：（1）皮毛：有没有光泽、竖毛、出血、污物、脱毛等。 （2）眼：有没有眼屎、流泪、白内障、角膜损伤等。 （3）口腔：有没有流涎、出血等。 （4）耳：有没有外伤、耳壳曲折、中耳炎等。 （5）四肢：有没有外伤、弯曲、脱臼、肿胀、关节炎等。 （6）肛门：有没有腹泻、血便、脱肛等。 （7）精神和食欲：缄默、倦怠、动作不活泼、食欲不振、拒食等。（8）营养情况：消瘦、过分肥胖、成长异常。 （9）姿势和步态：姿势异常、行走和站立困难、运动失调、跛行等。10、处死对于超重及淘汰动物要立即处死，SD大鼠处死常见是颈椎脱臼法，但作为试验动物生产颈椎脱臼法过于繁琐，处死部分大鼠可采取重击头部法，提起大鼠尾巴将大鼠头部用力摔在鼠盒边缘。处死大量处死可用窒息法处死，将待处死大鼠置于鼠盒中，将相同大小鼠盒盖在上面待大鼠窒息死亡。对于处死后动物，要确定死亡后再送出屏障。11、SD大鼠常见疾病（1）沙门氏菌病病原体：沙门氏菌(salmonella sp)，为革兰氏阴性短杆菌，无芽孢、鞭毛。此菌抵御力弱，60以上和部分常规消毒药就可将其杀死，但在饮水、土壤和粪便中可存活数月。流行病学：传染源为患病和病死动物。人和各类试验动物均可感染,人感染后发生肠道疾病,呈食物中毒症状。本病可水平传输，如经过接触病死或带菌动物和被污染饲料饮水而发病，苍蝇和野鼠是关键传输媒介。临床症状：急性呈暴发型，看不到任何临床症状动物就大批死亡， 往往是下班时一切正常，第二天上班发觉动物已经有1/3死亡。亚急性表现为病鼠食欲、饮欲减退甚至废绝，被毛蓬乱无光泽，眼结膜发炎、眼睑粘合；腹泻，粪便呈泡沫状粘液、黄绿色、味恶臭,严重时粪便中带有血丝，通常可见病鼠腹部膨大，手弹可听到显著鼓音,通常病程二、三周。慢性有上述症状，但症状较轻，患鼠逐步消瘦，二、三周后逐步恢复。诊疗：依据临床症状和尸体剖检作初步诊疗，确诊须作细菌学检验。防治：加强饲料、饮水、笼具、垫料消毒，严防野鼠、苍蝇污染饲料、饮水。 喂养室定时消毒。定时进行微生物检测，发觉病鼠和带菌鼠立即处理。通常鼠群感染本病，极难根本排除，需全群淘汰，重新引种。（2）支原体病病原体：肺支原体(mycoplasma pulmonis)，革兰氏染色阴性，经典支原体菌落为圆形，支原体没有细胞壁，呈多个形态，如圆形、杆状、放射状、环状。它广泛存在于自然界，能引发人和动植物多个疾病。流行病学：传染源为发病或隐性带菌动物。它关键以呼吸道感染为传输路径， 但没有严格宿主，人、多种试验动物全部可发病，植物也能感染。临床症状：大鼠关键引发肺炎症状。动物忽然发病,呼吸急促甚至呼吸困难，有支气管肺炎或细支气管扩张和肺脓肿症状。病鼠体重减轻,被毛粗乱,常常在喂养盒一角蹲缩。大鼠最易感染部位是呼吸道和关节，感染部位可见病理改变，关键表现为炎症反应,包含充血、水肿和浆液性分泌物形成。诊疗：大鼠鼻咽部擦拭取材培养，检验出支原体即可确诊。预防及控制：预防本病方法是加强喂养室卫生消毒工作,对喂养室周围环境进行化学药品消毒。控制本病最有效措施是保持无支原体动物种群,可采取剖腹产净化种群。（3）流行性出血热（EHF） 流行性出血热是一个人畜共患病，中国是重疫区,近几年屡有报道发生流行性出血热造成人员死亡。对试验动物而言，多种试验动物全部可发病，尤以大鼠发生较多,所以又称为大鼠流行性出血热。病原体：关键是流行性出血热病毒(epidemic hemorrhagic fever virus,EHFV)。1978年，朝鲜李镐汪首次从黑线姬鼠肺中分离出该病毒。随即， 中国科研人员也从大鼠肺中分离出该病毒。 本病毒为RNA病毒、 有核衣壳包膜， 病毒颗粒结构粗大、 较集中， 平均直径为100um（50-150）,它对乙醚敏感，不耐酸、不耐热，在5030分钟或PH3.0条件下371小时就可灭活。流行病学：野鼠是关键传染源，中国带毒野鼠有黑线姬鼠、褐家鼠、大林家鼠等。 本病易感对象广泛，包含人类和多种试验动物，尤其大鼠发生较多。它可经过多个路径传输,关键有虫媒传输、消化道传输、接触传输、呼吸道传输，到底以哪种方法为主进行传输还有待研究。临床症状：关键表现为发烧、出血倾向、肾脏损害。大鼠体温升高到40（正常体温37.8 38.7 ）。解剖可见浆膜、脏器出血显著，毛细血管损伤，肾脏肿胀，体积增大，表面及包膜下充血、出血，切面可见皮质苍白，髓质呈紫红色，高度充血、出血，有灶性缺血性坏死。预防：第一，建立严格清洗消毒制度，饲料、垫料、笼具、工作服全部要根本消毒。第二，做好个人防护，喂养人员严格按操作规程操作。第三，定时检测动物，发觉疫情立即采取对应方法并汇报卫生防疫部门。12、清洁和消毒屏障环境必需尤其预防微生物从外部侵入，所以消毒对象要假设有多个微生物。通常选择广谱消毒剂、卤化物消毒剂(次氯酸钠、碘伏等)、逆性皂液(界面活性剂)、过氧化物消毒剂(过氧乙酸)及季胺类(如新洁尔灭)消毒剂等并用。（1）预防微生物从外部侵入，所以器具、物品等进入时应加以控制数量及传输次数。（2）在SPF动物区域内，从一个动物室到另一个动物室内，手指应放在消毒液中消毒，并换上新拖鞋。（3）传输窗、缓冲间内部用消毒液消毒后需打开紫外线灯30min后方可打开内侧门。（4）每个工作日对洁库、浴室、缓冲间及动物房地面擦拭消毒；对使用过体重计、作业车和器械进行擦拭和浸泡消毒。（5）每七天在换窝同时对喂养架擦拭消毒，对屏障内全部区域进行空气消毒，用喷雾器喷雾后，有紫外线灯要打开紫外线灯。（6）每个月对室内排气口进行清洗，然后消毒液浸泡，拭干水分后重新装上；13、退出屏障（1）整理动物房中物品、器械。（2）登记动物房温湿度、压力及喂养管理统计。（3）将污物移至污染走廊。（4）将动物房地面地板上污物、垫料、饲料残渣要清扫洁净，用消毒液拖洗洁净。（5）关闭对讲机、灯光，断开一切电源。（6）将污物移至缓冲间退出屏障。14、常见突发事件应急处理 种群动物感染（1）种群感染后首先停止全部动物配种。（2）处死全部种群动物，并在所处屏障内进行消毒液浸泡处理。（3）处死全部离乳前仔鼠，并在所处屏障内进行消毒液浸泡处理。（4）隔离其它没有被感染动物室内人员、物品等，做到严格分流。（5）若未引进新种，则对原种群动物进行生物净化。 动物咬伤（1）向主管或直属上级汇报。（2）如伤口不大，则可直接在所在单位进行合适处理，单位应常备紧抢救助所需要基础物品，如棉花、纱布、胶布、消毒水、清洁剂，如70酒精、碘伏、双氧水、抗生素等。（3）如感身体不适，应在接收合适诊疗和防治后立即送往医院进行诊治，并向相关医师和兽医师汇报并做好相关统计。 紧急停电处理（1）在电力供给异常时应请电工人员或电力企业处理。（2）紧急停电时，已进入屏障系统喂养人员在所处位置原地待命，严禁开启各动物房门，以降低空气流动。同时关闭正在操作设备，待恢复供电后再逐一开启。（3）未进屏障系统喂养管理人员在休息室等候，待电力供给正常后再进入屏障系统。（4）如紧急备用发电系统无法立即开启，或为长时间停电，喂养管理人员应快速离开动物房隔离区。