培养基验收作业标准指导书删减版.doc

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培养基质量控制作业指导书 1、目标：为加强我微生物试验室工作管理，确保试验室检测质量，特制订此作业指导书； 2、范围：本规范适适用于试验室微生物检测中所使用培养基质量控制。 3、职责： 3.1 检验人员：根据本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制，确保培养基符合相关标准要求。 3.2 科室责任人：负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制。 4、控制方法： 4．1培养基购置和验收 4.1.1 培养基购置试剂管理员在接到同意采购信息后，从合格供给商中选择厂商采购，同时要求厂商提供每批培养基批号、使用前pH值、储藏信息、使用期、性能评价统计（包含测试菌株、技术数据清单、质控证书及必需安全危害数据）。 4.1.2 培养基验收购置培养基到货后，由试剂管理员和微生物检测人员共同查对生产企业提供资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。同时应填写“培养基验收检验统计单”验收符合要求后，交由检测人员接收保管，填写培养基入库统计和建立试剂台帐。 4． 2培养基储存干粉培养基应保留在阴凉干燥处，要避免阳光直射；开瓶后干粉培养基易吸湿，应注意防潮并在使用期或6个月内用完。应每个月对储存中培养基进行常规检验，如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物感官检验，假如培养基发生结块、颜色异常和其它变质迹象就不能再使用。开封脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检验，经过粉末流动性、均匀性、结块情况和色泽改变等判定培养基质量改变。若发觉培养基受潮或物理性状发生显著改变则不应再使用。即用性培养基根据产品标识要求进行储存。 4． 3培养基使用 4.3.1 配制培养基用水和玻璃器皿　　培养基制备用水应使用电阻率大于30万Ωcm蒸馏水或和其同质水，每七天检测电阻率，每三个月检测一次重金属离子含量。制备培养基所用玻璃器皿（如吸管、试管、烧杯等）新玻璃器皿（首次使用）和再次使用玻璃器皿按要求方法洗涤、干燥 4.3.2 称量　　称量时要用专用角匙，避免交叉污染而影响检验结果；干粉培养基易吸潮，如房间环境湿度较大时，应提升称量速度，完成后立即盖紧瓶盖。 4.3.3 复水　　复水时应注意以下事项： a）不得用铜锅或铁锅，以防有离子混入培养基中，影响微生物生长； b）容器大小需大于复水后培养基总体积2倍以上，避免在加热溶解过程中，培养基溢出； c）加热培养基时一定要进行搅拌，尤其是琼脂类培养基； d）为避免烧焦和沸腾溢出，对于少许培养基最好使用沸水浴进行加热； e）含有琼脂粉培养基，在加热溶解之前能够浸泡数分钟； f）对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热，最多只能加热两次，第二次再融化后仍未用完培养基应弃去； g）烧糊培养基营养物质被破坏，并可产生有毒物质，如发觉焦化，或未溶解均匀前培养基有溢出，该培养基即不能使用，应重新制备。 4.3.4 灭菌　　培养基采取高压蒸汽灭菌（湿热灭菌），通常是121℃15min，含糖或特殊培养基，根据国家标准或生产商提供说明灭菌。已配制好培养基必需在15分钟内灭菌，避免微生物生长繁殖而消耗养分，改变培养基酸碱度。为避免高温破坏培养基营养成份，降低琼脂凝胶强度，必需严格控制灭菌温度和时间，不可反复灭菌。 4.3.5 pH测定　　在首次使用每批培养基时，均需随同检测配制一个测试培养基，在灭菌或消毒后应在25℃温度下采取精密PH 试纸测试PH值，并判定是否符合要求；使用过程中，假如需要调整培养基pH，应用1mol/LNaOH或lmol/LHCL调整，注意不可反复调pH，不然会影响培养基渗透压。 4.3.6 配制好培养基标识和保留灭菌以后培养基应该快速冷却至所需温度，避免长时间保留在灭菌锅内，造成过分灭菌，影响培养基营养成份或选择性效果。同时填写配制统计。内容：名称、配制量、配方（比）、操作中关键参数（时间、压力、温度）、配制日期、配制者、截止使用日期。在每个已灭菌培养基容器外做好标识，注明名称、配制日期、使用期限和配制人。培养基保留注意事项： 1）环境条件：多种培养基均应在洁净一般冰箱内保留，以2-8℃左右为宜，不得冻结。 2）保留时限: 基础培养基应在30天内用完。判别培养基应在21天内用完。选择性分离判别培养基制成平板后当日用完,置保鲜膜(袋)密闭保留期限可延长至一周。从外单位购置培养基保留时限根据产品标注时限实施. 4．4培养基批号管理培养基批号由6位阿拉伯数字组成，批号为年、月、日，各取2位，年份取后2位，月和日不足2位时，分别在数字前加0，表明是本日配制批号。如6月4日配制培养基，批号为040604。 4.5质量检验购置同一批次培养基其质量检验应能经过无菌检验（制备好培养基经30～35℃培养48小时，真菌培养基经20～25℃培养72小时候后，应无菌生长）、新购不一样批次商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，经检验合格该批次培养基方准许使用，不然不准使用，做好检验统计。。成品培养培养基质量控制应包含物理指标和微生物指标测试，依据测试结果立即填写“试验室培养基质量控制性能测试统计及评定汇报 4.5 培养基性能测试新购不一样批次商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，包含物理指标和微生物指标测试，依据测试结果立即填写“试验室培养基质量控制性能测试统计及评定汇报，菌株选择参考SN/T 1538.2-《培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南》。 4．5．1物理指标控制 1）测试20℃～25℃pH值 2）琼脂层厚度；色泽；透明度和（或）是否存在肉眼可见杂质； 4．5．2微生物污染控制从每批制备好培养基中选择最少一个（或1%）平板或试管，置于35-37℃或按特定标准中要求温度培养48h应无菌生长，真菌培养基经20～25℃培养72小时候后，应无菌生长。 4．5．3微生物学指标控制可依据要求选择定量方法、半定量方法或定性方法（详见表1-表）对培养基性能进行测试，具体操作方法以下：（1）生长率将适量测试菌株工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中，每种培养基上菌株生长率应达要求最低限值。 1）定量方法生长率PR计算： PR = NS/NO NS：从一个或多个待测培养基平板上得到菌落总数。 N0：从一个或多个要求参考培养基平板上取得菌落总数（该菌落总数应≥100cfu ）。要求：非选择性培养基上目标菌生长率最低应为0.7，该类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目标菌生长率最低应为0.1；每平板（或每试管）接种水平为10CFU～100CFU。 2）半定量方法半定量方法采取生态测量技术在平板上划线，平板板连续划线区域得分总和即为生长指数G，G值不应超出标准要求许可范围。 3）定性方法定性方法采取划线法观察。 ①选择性将浓度为104CFU/mL～106CFU/mL非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中，培养基选择性应达成要求值。 ②定量方法选择因子SF： SF = DO - DS DO：能在参考培养基上生长最少10个菌落最高稀释度 DS：能在测试培养基上显示生长最高稀释度要求：非目标菌在选择性培养基上SF最少为2 ；半定量和定量法中，非目标菌应部分或全部被抑制。 ③生理生化特征（选择性和特异性）要求培养基基础特征，使用一套合适测试菌株对培养基上目标菌生理生化特征（菌落形态、大小等）和非目标菌被抑制程度进行测试。（2）性能评价和结果解释根据要求得到全部测试菌株性能均符合要求，则该批培养基品质优良；若只有物理指标和微生物指标符合要求，则该批培养基可被接收。表1 计数用选择性培养基培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应 Baird- Parker [S] 生长率 37℃24-48h 金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923 TSA 定量 PR≥0.5 黑色/灰色菌落，周围为一混浊带，其外有透明带选择性 37℃48h 大肠杆菌ATCC25922/8739 —— 定性全部抑制 —— 特异性 37℃24-48h 表皮葡萄球菌ATCC12228 —— 定性 —— 黑色/灰色菌落，周围为一混浊带，其外无透明带 MYP [S] 生长率 30℃24-48h 腊样芽胞杆菌ATCC11778 TSA 定量 PR≥0.7 具沉淀带粉色菌落选择性 37℃48h 大肠杆菌ATCC25922 —— 定性全部抑制 —— 特异性 37℃48h 枯草芽胞杆菌ATCC6633 —— 定性 —— 不具沉淀带粉色菌落培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应 VRBG（结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂） [S] 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922/8739 TSA 定量 PR≥0.5 带有或不带沉淀带粉红色或红色菌落鼠伤寒沙门菌ATCC14028 选择性 37℃20h 粪链球菌ATCC29212/19433 —— 定性全部抑制 —— VRBL（紫红胆汁乳糖） [S] 生长率 30℃20h 大肠杆菌ATCC25922/8739 TSA 定量 PR≥0.5 带有或不带沉淀带淡紫色菌落选择性 30℃20h 粪链球菌ATCC29212/19433 —— 定性全部抑制 —— 特异性 30℃20h 铜绿假单胞菌ATCC27853 —— 定性 -- 无色至浅棕色菌落 CT-SMAC（改良山梨醇麦康凯琼脂） [S] 生长率 37℃24h 大肠杆菌O157：H7 ATCC43894/43895 TSA 定量 PR≥0.5 透明菌落，表面淡黄棕色，菌落直径约1mm 选择性 37℃24h 金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923 定性全部抑制 —— 特异性 37℃24h 大肠杆菌ATCC11775/25922 —— 定性 —— 粉色菌落 BGBLB（煌绿乳糖胆盐肉汤） [L] 生长率 30℃24-48h 大肠杆菌ATCC25922/8739 TSA 半定量浊度2+，导管1/3产气产气并浑浊弗氏柠檬酸杆菌 ATCC25922/8739 选择性粪链球菌ATCC29212/19433 定性不生长 —— EC [L] 生长率 44℃24～48h 大肠杆菌ATCC25922 —— 半定量浊度2+，导气管1/3产气产气并浑浊选择性 44℃24～48h 铜绿假单胞菌ATCC27853b —— 定性不生长 —— EC-MUG/ LS-MUG [L] 生长率 44℃24～48h 大肠杆菌ATCC25922 —— 半定量浊度2+，导气管1/3产气产气并浑浊，产生荧光选择性 44℃24～48h 铜绿假单胞菌ATCC27853b —— 定性不生长 —— 乳糖胆盐发酵培养 [L] 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922 —— 半定量导气管1/3产气产气并变黄色选择性 37℃24h 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 —— 定性 —— 不产气、仍为紫色 LST（月桂酸肉汤） [L] 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922 —— 半定量导气管1/3产气 —— 选择性 37℃24h 福氏志贺氏菌CMCC51572 —— 定性 —— —— 表2 计数用非选择性培养基培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应 PCA（平板计数琼脂） [S] 生长率 30℃72h 大肠杆菌ATCC25922/8739 TSA 定量 PR≥0.7 —— 金黄色葡萄球菌ATCC6538 枯草芽孢杆菌ATCC6633 表3 选择性增菌培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应 EE [L] 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922/8739 半定量 VRBG上＞10CFU 粉红至红色菌落，有或没有沉淀带鼠伤寒沙门菌ATCC14028 选择性粪肠球菌ATCC29212 全部抑制 RVS [L] 生长率 41.5℃24h 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 半定量 XLD或其它选择性培养基上＞10CFU —— 肠炎沙门氏菌ATCC13076 铜绿假单胞菌ATCC27853 选择性 41.5℃24h 大肠杆菌ATCC25922 半定量 TSA上全抑制 —— 粪链球菌 ATCC29212 TSA上＜10CFU SC(亚硒酸盐胱氨酸) [L] 生长率 37℃24h 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 半定量 XLD或其它选择性培养基上＞10CFU 不一样培养基上菌落特征不一样（见标准） +大肠杆菌ATCC25922 +铜绿假单胞菌ATCC27853b 选择性 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922 半定量 TSA上＜10CFU —— 粪链球菌 ATCC29212 TTB(四硫磺酸钠煌绿增菌液) [L] 生长率 37℃24h 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 半定量 XLD或其它选择性培养基上＞10CFU 不一样培养基上菌落特征不一样（见标准）伤寒沙门菌CMCC50071 选择性 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922 TSA上＜10CFU —— 碱性蛋白胨水 [L] 生长率 37℃24h 霍乱弧菌CMCC16109 半定量 TCBS或其它选择性培养基上＞10CFU 不一样培养基上菌落特征不一样（见标准）副溶血性弧菌CMCC1 选择性 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922/8739 TSA上＜10CFU —— 福氏志贺氏菌CMCC51572 7.5%氯化钠肉汤[L] 生长率 37℃24h 金黄色葡萄球菌ATCC6538 半定量 B-P平板或其它培养基上＞10CFU 不一样培养基上菌落特征不一样（见标准）表4 非选择性增菌培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应 BHI 生长率 37℃24h 金黄色葡萄球菌ATCC6538 定性浊度1～2 —— 蛋白胨盐 [L] 稀释 20～25℃45min 大肠杆菌ATCC25922 定量 +/-50%菌落数/至（+/-50%原始菌落数 —— 金黄色葡萄球菌ATCC25923 表4 非选择性增菌培养基（续）培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应乳糖蛋白胨肉汤 [L] 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922 —— 定性导气管1/3产气选择性 37℃24h 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 —— 定性 —— SCDLP液体培养基 [L] 生长率 37℃24h 铜绿假单胞菌ATCC27853 定性浊度1～2 —— 大肠杆菌ATCC25922 金黄色葡萄球菌ATCC6538 液体沙氏培养基[L] 生长率 26℃5天白色念珠菌CMCC98001 定性浊度1～2 —— 真菌培养基[L] 生长率 26℃5天白色念珠菌CMCC98001 定性浊度1～2 —— 表5 选择性分离培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应亚硫酸酸铋琼脂（BS） [S] 生长率 37℃48h 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 定性良好生长(2) 菌落呈黑色，有金属光泽福氏志贺氏菌CMCC51572 菌落呈棕色选择性大肠杆菌ATCC25922/8739 全部或部分抑制（0～1）无经典菌落粪链球菌ATCC29212/19433 全部抑制（0） -- XLD [S] 生长率 37℃24h 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 定性良好生长(2) 菌落呈黑色福氏志贺氏菌CMCC51573 菌落呈无色选择性大肠杆菌ATCC25922/8739 全部或部分抑制（0～1）无经典菌落粪链球菌ATCC29212/19433 全部抑制（0） -- 血琼脂平板 [S] 生长率 37℃24～48h 金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923 定性良好生长 β溶血，透明溶血环粪链球菌ATCC29212 定性良好生长 α溶血,草绿色溶血环 TCBS [S] 生长率 37℃24～48h 霍乱弧菌CMCC16109 定性良好生长菌落较大，呈黄色副溶血性弧菌CMCC1 定性良好生长菌落较大，呈绿色 4号琼脂 [S] 生长率 37℃24～48h 霍乱弧菌CMCC16109 定性良好生长菌落较大、扁平透明、湿润、中心带有黑色非O1群霍乱弧菌CMCC17045 定性良好生长菌落较大、扁平透明、湿润、中心带有黑色选择性 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922/8739 定性全部或部分抑制（0～1） —— 表5 选择性分离培养基（续）培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应伊红美兰琼脂 [S] 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922/8739 定性良好生长菌落紫黑色带金属光泽鼠伤寒沙门菌ATCC14028 定性良好生长菌落灰白色半透明福氏志贺氏菌CMCC51573 定性良好生长菌落灰白色半透明 TSI(三糖铁琼脂) [S] 生长率 37℃24-48h 大肠杆菌ATCC25922/8739 定性良好生长斜面及底层均变黄，产气，硫化氢阳性一般变形杆菌 CMCC49001 定性良好生长斜面及底层均变黄，产气，硫化氢阳性福氏志贺氏菌CMCC51573 定性良好生长底层变黄，斜面变红，不产气，硫化氢阴性鼠伤寒沙门菌ATCC14028 定性良好生长底层变黄，斜面变红，产气，硫化氢阳性表6 非选择性分离培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应营养琼脂 [S] 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922 定性良好生长(2) -- 鼠伤寒沙门菌ATCC14028c 小肠耶尔森氏菌ATCC23715 8.管理 8.1.贮存培养基冰箱（或冰柜）内不得存放食品、饮料等无关物品。 8.2.使用前，须仔细检验培养基外观和效期，管理员应按要求时间检验制备好培养基外观：如失水、沉淀、过期、棉花塞松弛或脱落等异常情况，如发觉失水、沉淀等异常情况，则同一批号剩下全部培养基立即全部弃去，不得再用 8.3.对于过了效期、瓶塞松驰或脱落培养基一旦发觉立即弃去。 9、统计商品化培养基/成品培养基目录清单培养基试剂入库记录表培养基配制统计培养基质量控制性能测试统计及评定汇报培养基标签培养基制备用水检测统计 10引用标准 10.1 GB/T27405-.试验室质量控制规范食品微生物检测[S]. 10.2 SN/T1538.1-.培养基制备指南第1部分：试验室培养基制备质量确保通则[S]. 10.3 SN/T1538.2-.培养基制备指南第2部分：培养基性能测实用指南[S].

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