杏鲍菇栽培技术讲座—--标准.技术.doc

杏鲍菇栽培技术讲座杏鲍菇的栽培技术讲座 杏鲍菇一、 杏鲍菇概述A. 栽培现状杏鲍菇是一种优质食用菌，世界各国都非常重视杏鲍菇的开发。在意大利、法国、印度等国先后进行了杏鲍菇的栽培研究，Kalmar （1958）首次进行栽培试验，Henda （1970）在印度北部克什米尔高山上发现杏鲍菇并进行了段木栽培，Vessey （1971）分离培养出杏鲍菇菌种，Cailleux （1974）利用子实体上菌褶分离获得菌种，Ferri（1977）进行了商业栽培，但只得到有限的成功。我国三明真菌所从1993年开始对杏鲍菇菌株选育，生物学特性和栽培进行了系统研究，并向全国推广应用。1998年日本已正式将杏鲍菇列入可供商业栽培和销售的新菇种。近年来，泰国、美国、日本、我国的台湾省采用调温、调湿的自动化生产工艺进行生产，实现了工厂化生产。现在，杏鲍菇已推广应用到全国各地，开发出了不同的栽培方式方法，并已进行了反季节生产。我国生产的杏鲍菇鲜菇和盐渍菇产品已出口到海外。杏鲍菇个体肥大，肉质脆嫩可口，是味道最好的食用菌之一，有平菇王之称。因此，杏鲍菇是一种有着极大开发前景的食用菌。B. 经济价值杏鲍菇是一种优质食用菌，世界各国都非常重视杏鲍菇的开发。在意大利、法国、印度等国先后进行了杏鲍菇的栽培研究，Kalmar （1958）首次进行栽培试验，Henda （1970）在印度北部克什米尔高山上发现杏鲍菇并进行了段木栽培，Vessey （1971）分离培养出杏鲍菇菌种，Cailleux （1974）利用子实体上菌褶分离获得菌种，Ferri（1977）进行了商业栽培，但只得到有限的成功。我国三明真菌所从1993年开始对杏鲍菇菌株选育，生物学特性和栽培进行了系统研究，并向全国推广应用。1998年日本已正式将杏鲍菇列入可供商业栽培和销售的新菇种。近年来，泰国、美国、日本、我国的台湾省采用调温、调湿的自动化生产工艺进行生产，实现了工厂化生产。现在，杏鲍菇已推广应用到全国各地，开发出了不同的栽培方式方法，并已进行了反季节生产。我国生产的杏鲍菇鲜菇和盐渍菇产品已出口到海外。杏鲍菇个体肥大，肉质脆嫩可口，是味道最好的食用菌之一，有平菇王之称。因此，杏鲍菇是一种有着极大开发前景的食用菌。二、 生物学特征A. 形态学特征杏鲍菇，又叫雪茸，刺芹侧耳。学名：Pleurotus eryngii （DC.:Fr.） Qul英文名：Boletus of the Steppes; King Oyster Mushroom.杏鲍菇隶属于真核真菌界，真菌门，担子菌亚门，真担子菌纲，层菌亚钢，伞菌目，侧耳科，侧耳属。（一）菌丝杏鲍菇的一个担孢子萌发的菌丝称为单核菌丝，或称为一次菌丝，该菌丝体为白色，粗壮，单核菌丝在长势上有所差异，有的在生长快、慢上存在差异，有的则在菌落形态特征上形成差异，有的单核菌丝的菌落与双核菌丝的菌落无明显区别（如图形态特征2）；单核菌丝每个细胞内只有一个细胞核，并且无锁状联合（如图形态特征3），单核菌丝是不能结实的，即不能出菇，因此不能作菌种使用。两条不同交配型的单核菌丝生长接触后，通过细胞质融合，细胞核移动，形成双核菌丝后，才能结实；双核菌丝每个细胞内含有两个细胞核，并有锁状联合特征（如图形态特征4），双核菌丝生长浓密，粗壮，整齐，生长快（如图形态特征5）。（二）子实体形态特征子实体单生或群生，菌盖直径215厘米，菌盖初期为拱圆形，成熟后平展，后期菌盖边缘上翘，中部凹，似漏斗状，表面有丝光泽，不粘，幼时为灰黑色，成熟后为浅棕色，或黄白色；菌肉白色，厚；菌褶延生，密，白色，不等长，延长的部位交错呈网状；菌柄中生或偏生，直径0.53厘米，长413厘米，光滑，白色，中实，骨脆质，菌柄形状棒状至保龄球状；每个担子上着生4个担孢子，孢子印白色，孢子近纺锤形，平滑，大小为1014微米45微米。B. 生活史杏鲍菇的生活史是指从孢子萌发形成菌丝，菌丝生长发育成子实体，子实体再产生孢子的一个完整的生长过程。成熟的杏鲍菇子实体弹射出孢子，孢子在一定的温度、水分和营养条件下萌发形成初生菌丝。初生菌丝生长发育，菌丝相互接合形成次生菌丝，在一定的条件下菌丝扭结形成杏鲍菇原基，原基逐渐分化生长，最后形成完整的子实体。子实体成熟后又会产生孢子，孢子在适宜的条件下又萌发成菌丝，开始新的生活循环，即成熟的杏鲍菇子实体产生孢子孢子萌发形成菌丝形成子实体。这样周而复始地进行生活循环，就是杏鲍菇的生活史。C. 发育周期（一）菌丝生长期杏鲍菇播种后，菌丝在较适宜的温度条件下，菌丝体开始在培养料上由表面向深层发展，初生时菌丝生长较慢，菌丝体也较弱，经过一段时间后进入第一个生长高峰期，过后进入低潮期，随后又进入第二生长高峰期。不同温度下菌丝的生长速度不同。菌丝在630下都能生长，最适温度为25左右。杏鲍菇菌丝在生长温度范围内，温度高菌丝生长快，温度低菌丝生长慢，但在较低温度下单合菌丝不能粗壮。（二）菌蕾形成期杏鲍菇菌丝生长发育到一定阶段，菌丝生理成熟，由营养生长转入生殖生长，菌丝体开始扭结，形成许多锥状的小菌蕾，颜色乳白色，一般是单个发生，少量丛生。（三）菌柄生长期在适宜温度、湿度和通风条件下，菌蕾进一步生长发育，球状物逐渐伸长，形状呈圆锥形上面顶一小球，基部较大，菌柄较粗。（四）菌盖生长期随着菌柄的不断生长，菌盖逐渐成为半球形。菌盖表面较平，颜色土黄色或灰白色。随着菌盖的生长，其表面逐渐伸平，中间部分稍突起，中间深土褐色，较光滑。菌盖与菌柄中央生或偏心生。（五）菌褶生长期随着子实体的生长，菌褶也在不断生长，菌褶延生、密集、略宽、乳白色，边缘及两侧平滑，有小菌褶。成熟时为淡黄色。（六）杏鲍菇成熟期随着菌柄、菌盖的发育，菌盖不断扩大，当菌盖接近展平时，杏鲍菇已进入成熟期，在菌褶上会弹射出大量的孢子，呈灰白色。一般杏鲍菇应在成熟初期采收。D. 生活习性杏鲍菇广泛分布于德、意、法、捷、匈及印度、巴基斯坦等国。自然条件下，杏鲍菇生长在高山、草原、和沙漠地带，我国新疆及川西等地亦有野生分布，大多着生于朽死的刺芹、阿魏等植物根部及四周土层中，具一定寄生性。在不同地区引种或不同菌株中分离出的杏鲍菇有其特殊的习性，应在栽培实践中总结经验。E. 环境要求i. 温度杏鲍菇菌丝生长的温度范围为1535，最适生长温度为2530，在616和32时，菌丝也能够生长，但生长速度明显减慢，在10以下和35以上菌丝生长停止。温度是子实体形成和生长发育的重要条件。子实体原基形成的温度范围为1020，最适温度为1215。子实体生长发育的温度范围为822，但也有菌株的子实体生长温度可达到29；子实体生长发育的最适温度为1217，温度超过18时，子实体生长快，瘦长，菇体组织松软，品质差；在8以下时子实体生长缓慢，子实体菌盖颜色加深，呈灰黑色。总之，杏鲍菇子实体生长的温度范围较窄，并且对温度较敏感，错过原基形成的温度，将不再出菇。ii. 水分杏鲍菇菌丝生长的培养基含水量范围为4580，最适生长的含水量为6570；当含水量低于55时，将不出菇；含水量高于80时，菌丝生长速度减慢，并且不整齐。子实体生长发育期间，在适宜的空气相对湿度下才能健康地生长，原基形成期间，适宜的空气相对湿度为9095，子实体生长发育阶段，适宜的空气相对湿度为8090；在采收前，将空气相对湿度控制在7580之间，可降低子实体内水分，有利于保鲜和延长货架寿命。iii. 光照杏鲍菇菌丝生长期间，光照强度在700勒克斯以内对菌丝生长的影响不明显，当光照强度超过1000勒克斯时，就会使菌丝生长速度减慢。原基形成和子实体生长阶段，适宜的光照强度为5001000勒克斯，即保持菇房内明亮。iv. 营养杏鲍菇是一种木腐菌，具有较强的分解木质素、纤维素能力。杏鲍菇菌丝生长最适碳源为葡萄糖、蔗糖等，适宜生长的氮源为蛋白胨、酵母粉、玉米粉和麸皮等。栽培时，适宜用的原料为棉籽壳、木屑、玉米芯、蔗渣、豆秆和农作物秸秆等，其中以棉籽壳、玉米芯为好，在上述原料中加入含氮丰富的麸皮，或玉米粉，或米糠等组成栽培基质。此外，在培养基中加入含蛋白质高的棉籽粉、菜籽饼粉等可提高产量，使子实体增大。v. 空气杏鲍菇菌丝生长和子实体生长发育均较耐二氧化碳。在菌丝生长阶段，培养后期袋内或瓶内二氧化碳浓度增加，有利于菌丝生长速度加快。原基形成期间，需要在二氧化碳浓度低，空气新鲜的环境条件，否则在袋口或瓶口上长出大量的气生菌丝，原基在气生菌丝上形成，将会影响产量。子实体生长阶段，虽然较耐二氧化碳，但以空气新鲜，二氧化碳浓度低为好，以免遇到高温高湿时，受到病菌侵染。vi. 酸碱度杏鲍菇菌丝喜欢在偏酸性培养料中生长，pH范围为3.58，最适菌丝生长的pH为6.57.0为好，出菇时最适宜pH值为5.56.5。在生长时，则要将pH调到6.58为宜，其原因是在菌丝生长过程中代谢出有机酸类物质，降低培养基的pH。三、 品种介绍A. 保龄球形菌柄较粗，且长，长812厘米，中部膨大，两端较细，菌柄白色，肉质较疏松；菌盖黄褐色至灰褐色。其子实体商品性状好，是生产上常用菌株。B. 短柄形菌柄较短，长为46厘米，菌柄近基部膨大，白色，肉质较疏松；菌盖灰黑色或浅灰黑色。出菇温度范围广，较耐高温，但子实体商品形状较差。C. 鼓缒状形菌柄近基部膨大，上端渐细，长812厘米，白色，肉质较紧实；菌盖浅褐色至灰黑色。出菇温度范围较宽，也是生产上常用菌株。D. 棍棒形菌柄上下等粗，细长，长811厘米，白色，肉质紧实；菌盖浅黄褐色至灰褐色。该类菌株子实体生产温度范围较窄，子实体商品性状好，也是生产上常用菌株。E. 菌盖灰黑色形菌柄白色，长713厘米，粗壮，近基部膨大，肉质较紧实，菌盖灰黑色。四、 制种技术A. 菌种的分类杏鲍菇的菌种是人工培育的、供进一步繁殖用的纯菌丝体，一般分为三级，即母种、原种、栽培种。（一）母种利用杏鲍菇的子实体经组织分离或孢子分离培育而成，一般盛装在玻璃试管内。直接分离培育而成的称为一级母种，转管扩大1次而成的母种称为二级母种。生产中常用三级或四级母种。母种转扩次数的多少，从理论上讲，对食用菌自身的生活力影响不大。但实践证明，转扩次数太多，尤其是连续多次转扩，不仅影响菌丝生活力，而且也影响产量。所以，生产中母种应以转扩5代以内较为有利。1支母种可转扩3050支二级母种，1支二级母种又可转扩3050支三级母种。选购母种时一定要选择具有良好信誉的制种单位。（二）原种由母种转扩而成，容器一般选用标准菌种瓶、葡萄糖瓶或其他无色透明的容器。培养料有棉籽壳、玉米芯、木屑等再加进一些辅料。1支母种可以扩接45瓶原种。（三）栽培种由原种转扩而成，容器一般为塑料袋。生产中多采用聚丙烯或聚乙烯塑料袋作为菌种袋，其特点是成本低，使用方便，便于机械化操作。1瓶原种可扩接20袋左右的栽培种。从母种到栽培种，菌丝由弱到强，菌丝体的数量由少到多，菌丝的生命力也不断增强，生产上用栽培种直接播种，菌种用量因栽培模式的不同而有较大的差异，熟料栽培用种量一般为5%左右，生料栽培为10%15%。B. 生产时间安排杏鲍菇菌种生产时间的安排应根据栽培时间而决定。杏鲍菇出菇的最好温度是1015，因此应根据子实体出菇的温度来计算制种时间。母种应在原种制作前15天制作，原种制作应在栽培种制作期前40天左右进行，栽培种应在生产期前50天左右进行制作。C. 制种设备与设施a) 装料工具（一）计量用具台秤、天平、量筒、量杯。（二）容器铝锅、盆、盘、烧杯、铁桶。（三）工具镊子、小刀、拌料工具和接种用具等。（四）加热用具电炉、煤炉或其他加热用具。（五）生产机械拌料机、装袋机、接种机械b) 灭菌设备制种用灭菌设备分为高压灭菌设备和常压灭菌设备两大类。培养母种的培养基必须使用高压灭菌设备，才能达到灭菌的目的。常压灭菌设备容量大，一次性灭菌的料瓶和料袋多，有利于大规模生产菌种。（一）手提式高压灭菌锅手提式高压灭菌锅是一种小型灭菌设备，主要用于母种培养基的灭菌，一次可装150支（18毫米180毫米）试管装培养基，即1500毫升培养基。手提式高压锅根据加热方式分为煤加热和电加热两种，煤加热是将其放置在煤炉上加热，电加热是利用锅内电管加热。手提式高压锅由锅体、内桶和锅盖三部分组成，锅盖上安装有压力表，放气阀和安全阀；放气阀是用于手动排除锅内气体的阀门；安全阀是用于稳定压力的阀门，根据压力的高低自动排气和关闭阀门；压力表用来显示锅内气体的压力大小，内锅是用于盛装灭菌物的。（二）常压灭菌灶常压灭菌结构多种多样，体积大小也不一样。这里介绍一种用汽油桶制作的小型灭菌灶，其他大型常压灭菌灶将在后面介绍。汽油桶常压灭菌灶，体积较小，并且可以灵活增大，适合于小规模生产菌种。选一个完整的汽油桶，将顶盖环割去掉，在距桶底25厘米处制一个横隔，下层装水，上层装料瓶或料袋，在横隔处焊接一个细铁管，用于排放气体，另外还需准备一根厚为0.08厘米的塑料筒膜。若需要增加灭菌的料瓶或料袋数量，在上端再重叠半个汽油桶，或者圆形铁框。加热设施可制作烧块煤或烧蜂窝煤的灶，其中以蜂窝煤作燃料较为方便，一次性加足28个煤，煤烧结束后，即灭菌结束。c) 接种用具（一）接种工具组织分离和多孢分离菌种的工具主要为手术刀、镊子、酒精灯、接种钩和接种环等。母种扩大繁殖的工具为接种钩，接种钩由接种棒和铁钩组成，接种棒需购买，钩要自己制作，用一根1500瓦的电炉丝制作，将电炉丝拉直后剪成5厘米长的小节，在距前端0.5厘米处弯曲成直角状钩，并将前端磨尖，安装在接种棒上即成接种钩。此外，也可用自行车辐条制作，将一端敲扁平，另一端敲扁平后并弯曲成锄状或者成钩状。接种原种的工具也是自己制作的，取一根较粗的钢棒，或者用三轮车辐条制作，长为30厘米，将一端加热烧红变软后，敲扁平，再弯曲成直角，弯曲部分长为0.3厘米。接种栽培种和生产袋的接种工具其形状同原种接种工具，只是要粗一些，用直径为0.8厘米的钢筋或不锈钢棒制作，一端制成锄状，另一端弯曲成半月形，以便握着接种钩用力钩取菌种。（二）接种设备接种操作需在无菌环境条件下进行，为了使接种的环境达到无菌的目的，就需要相应的设备，如接种箱，接种室和超净工作台等。1、接种箱接种箱体积小，易消毒彻底达到无菌环境，并且操作人员接触消毒药物少，夏季还可免受高温，是食用菌菌种生产中常用接种设备。接种箱根据大小分为单人接种箱和双人接种箱。单人接种箱：单人接种箱体积较小，仅供1人操作。主要用于母种和原种的接种操作。接种箱用木方条、层板和玻璃等材料制作。先用木方条制作框架，再用层板制作箱底层和四周隔板。箱体下部分为长方体，上部分为梯形结构，上部分的一侧为斜面状，另一侧为垂直面。箱高70厘米，长125厘米，下层宽60厘米，顶部宽30厘米。斜面部位安装玻璃，制作成活动窗，便于开启放入接种工具、培养基和菌种等。在有斜面状的一侧下部分中心位置开两个圆孔，圆孔直径为20厘米，圆孔中心与中心之间相距36厘米，即两手肩间距离，在两个圆孔上钉上白布制作袖套。在接种箱内分别安装一盏紫外线灯和电灯。双人接种箱：双人接种箱体积较大，在两侧都开有接种操作孔，二人面对面操作接种，或一人分别在两侧接种操作。双人接种箱下部分为长方体，上部分为梯形，上部分两侧为斜面状，并安装上玻璃，为活动窗体结构。长160厘米，高75厘米，下部分宽76厘米，顶部宽50厘米。其他制作方法同单人接种箱。接种箱要求密封严，漏出气体少，才有利于用消毒剂熏蒸杂菌。箱体上缝隙较大的，需用不干胶布封严。2、超净工作台超净工作台主要用于母种的转接用接种设备。是利用鼓风机吹风，使空气通过预过滤器和高效过滤器后，除出空气中微生物，使操作区处于无菌状态。使用时，接通电源，开机30分钟后使用，但操作时，也要在酒精灯旁。超净工作台分为平流式和垂直流式两种，平流式超净工作台的风是从对面向外流动，垂直流式的风是从上向下流动。3、接种室接种室是指用一间房间专门用于接种的场所。接种室的体积较大，有利于大规模的菌种生产，但接种室的体积也不宜过大，一般长34米，宽23米，高为2.5米。接种室分为内外两部分，内为接种间，在内部设置操作平台，外为缓冲间，用于阻止空气直流和更换工作服。缓冲间宽为1米，入口处的门要错开，并且门要制作成平行移动门。在接种间和缓冲间均安装30瓦的紫外线灯。此外，生产者可用普通民房作接室，但要求密闭效果较好，若体积较大，密闭效果较差的，可用塑料薄膜来隔离改造。d) 培养设备菌种需在适宜的温度下培养，才能生长快，健壮。气温偏低时，又能加热升温；温度高时，又可散热降温，这就需要一个良好的培养设备和设施。（一）恒温培养箱恒温培养箱常用于母种的培养。恒温培养箱具有良好的保温和恒温效果，但不具备降温效果，适宜在冬季气温低时进行保温培养菌种。恒温培养箱是利用电来加热升温，可调节恒定在不同的温度下（ 右图:培养设备1）。此外，也可用木板来制作简易的保温培养箱，大小为长100厘米，高130厘米，宽80厘米，箱壁为双层结构，中间填充木屑等作保温层，在箱底部安装电热丝或2个100瓦的电灯泡作发热源，在顶部开一个小孔，用于放置温度计。（二）培养室培养室适宜原种和栽培种的保温发菌。培养室要求具有良好的调温、遮光和除湿效果。用砖和水泥制作一个小房间，或将一般的房屋改装成小型培养室。冬季保温用培养室不宜过大，以810平方米，高为1.82.0米为宜。培养室内安放培养架，培养架宽为50厘米，层间距为40厘米，高为1.6米。培养室内加热保温装置设施为，在室内放一个蜂窝煤炉，炉上放置一根铁管，铁管穿过墙体，利用铁管作烟道发热来升高室内温度（右图:培养设备2）。（三）电热毯保温生产的菌种数量较少时，可用电热毯来保温发菌，保持温度在2225之间。其做法是：先在桌面上铺一层棉絮，放上电热毯，再在其上铺一层棉絮，然后横卧排放好菌种，再在菌种上盖上一层棉絮，利用电热毯加热来保温。但要常检查温度，当温度上升到30以上时，要及时断开电源降温，防止出现40以上高温烧死菌种。e) 消毒用品杏鲍菇在制种过程中常用消毒药品有以下几种：（一）酒精酒精是常用的消毒剂，具有脱水作用，能使蛋白质变性或沉淀，致使菌体死亡。无水酒精杀菌力很低，一定浓度的酒精杀菌力较高。70%（以重量计算）或77%（以容积计算）的酒精杀菌效果最好。表面干燥的物品，用70%75%的酒精消毒效果较好；表面湿润的物品则需用80%90%的酒精才能起到较好的杀菌效果。工业酒精的浓度常为95%，用作消毒时要用水稀释至75%左右。（二）甲醛甲醛一般为36%40%的水溶液，也叫福尔马林，具有强烈的刺激味，一般呈白色或无色，有杂质时易聚合成白色结块沉淀于容器底部。甲醛能使微生物蛋白质变性，对菌丝和孢子有强烈的杀伤作用。接种箱和接种室常采用熏蒸法消毒，效果较好。常用量为1立方米空间用810毫升。使用时将甲醛溶液倒入一容器内，加热使甲醛挥发，利用甲醛气体杀灭微生物。也可用2份甲醛溶液加1份高锰酸钾发生反应产生的热量将甲醛挥发。甲醛气体对人体有一定的刺激作用，使用时应注意防护。（三）高锰酸钾高锰酸钾是一种强氧化剂，外观呈紫色针状结晶01%的高锰酸钾水溶液就有杀菌作用，常用于物品的表面消毒，配制的溶液不宜久效。常和甲醛配合使用，利用甲醛气体对接种箱或接种室进行杀菌消毒。（四）新洁尔灭新洁尔灭是一种有消毒作用的表面活性剂，一般使用浓度为025%的水溶液，用做皮肤和器具的消毒。（五）硫磺硫磺为淡黄色结晶或粉末，易燃，燃烧时发蓝色光，产生二氧化硫，对杂菌有杀伤能力。常用于培养室和接种室消毒，即每立方米空间用量15克左右，使用时增加环境湿度可提高杀菌效果。（六）石灰石灰分生石灰和熟石灰两种，生石灰对环境有一定的消毒作用，培养料中加入1%2%的生石灰粉对杂菌有抑制作用，3%5%的石灰水溶液可抑制多数霉菌的生长和繁殖。（七）多菌灵多菌灵是杏鲍菇生产中常用的杀菌剂，一般为50%或25%的可湿性粉剂。多菌灵为高效低毒的内吸杀菌剂，残效期长，能有效地防治多种杂菌。生产中通常使用01%的（含量为50%）多菌灵可湿性粉剂加入培养料中，对杂菌防治效果比较明显。（八）金星消毒液该品是一种液体消毒剂，接种室或接种箱常采用200300倍液喷雾，每瓶消毒液可拌250千克培养料。（九）克霉灵克霉灵是一种新型的食用菌专用杀菌剂，对多种霉菌的杀伤和抑制作用较强，是目前比较好的杀菌剂之一。D. 母种的制备技术a) 培养基制作任选一种培养基配方，根据配方中所需原料进行准备。下面以PDA培养基为例进行介绍。首先，将新鲜马铃薯去皮挖去芽眼，切成薄片，称取200克，放入铝锅内，加水1000毫升，加热煮沸，煮至马铃薯片熟而不烂为止，即煮沸1520分钟。然后用4层纱布过滤，去掉马铃薯片，取滤液使用。将滤液再装入铝锅内，加入琼脂20克，加热煮沸，边煮沸边搅拌，防止琼脂粘锅底和液体溢出，煮至琼脂完全溶化成液体为止。再加入20克葡萄糖，加热搅拌使其完全溶解并混合均匀。最后加水补足蒸发掉的水，补水至1000毫升，搅拌混合均匀后，趁机热分装入试管内。（三）分装及棉塞制作利用分液漏斗进行分装，将分液漏斗固定在木架上，漏斗下端用乳胶管和细玻璃管连接，用止水夹夹着乳胶管。在漏斗内装入配制好的培养基液体；然后将培养基分装入干净的试管内，每支试管内装入的培养基高度为试管的14。若试管口部位粘着有培养基的，用干净纱布擦去培养基后，再塞上棉塞，直立放入灭菌锅内桶内。此外，棉塞可事先制作好，经灭菌和固型后使用，这样有利于快速制作培养基。其做法是，先将试管洗净，倒置放入框内滴干水分，然后再制作棉塞，棉塞可用棉花和化纤棉制作。取一小团棉花平铺在桌面上，卷曲成柱状，再将两端向内折叠成短柱状后，塞入试管内。制作好的带棉塞试管，需经固型后使用，这样取出的棉塞才不松散开来，便于再次塞入试管内。棉塞固型的方法有两种，一种是干热固型法，即在140160的烘箱内保持23小时；另一种是湿热固型法，将棉塞在手提式高压锅内灭菌1小时，其做法同培养基的灭菌。经固型处理后，装入框内置于干燥处备用。（四）灭菌分装好的培养基要及时进行灭菌处理，不宜放置过久，否则培养基内会长出大量细菌，以当日制作的培养基，当天灭菌为妥。母种培养基的灭菌必须在高压锅内进行，在常压灭菌灶内是不能起到灭菌作用的。将装有培养基并带有棉塞的试管直立放入手提式高压锅内的内桶内，在表面盖上报纸或牛皮纸，放入高压锅内，盖严锅盖。加热烧开锅内水产生蒸汽升高压力。在灭菌过程中，首先要排除掉锅内冷空气，才能达到灭菌的目的。其做法是，当压力第一次上升到0.05兆帕时，停止加热，缓慢开启排气阀放出气体，当气体排完后关闭阀门，再加热升高压力，再次上升到0.05兆帕时，再排气一次。然后继续加热，当压力上升到0.147兆帕时，即安装阀自动排气后，开始计时，在此压力下维持40分钟，即可达到灭菌之目的。灭菌时间到后，停止加热，缓慢打开排气阀门排出气体，排气量切勿过大，否则出现减压过快，培养基喷出试管，打湿棉塞，甚至掀掉棉塞。当气体被完全排除，压力表指针回到0时，打开锅盖，揭去纸，稍冷却后，在培养基尚未凝固之前，取出制作成斜面培养基。（五）斜面培养基制作当培养基冷却到60左右，即不太烫手时，趁热制作成斜面培养基。一旦冷却凝固后就无法制作成斜面培养基，就需再次加热熔化后，再制作成斜面培养基。斜面培养基制作方法是：首先在桌面上放置一根厚为1厘米的木方条，以此作枕，然后将培养基试管上端放在枕木上，试管内液体就自然成倾斜状，如此一排一排地排放，边排放边调整斜面的长度，以斜面上端距棉塞1厘米左右；下端刚到试管底部为宜，切勿使棉塞与培养基接触，否则棉塞会受潮生长霉菌，经冷却后，就会凝固成斜面培养基。在未凝固之前，不要移动试管，以免斜面培养基变形，制作好的斜面培养基，需在20以上放置45天，待培养基上无细菌长出后使用，这样可避免培养基灭菌不彻底，就接上菌种，最后造成菌种报废。b) 母种的分离母种是通过菇体组织，或孢子分离获得的，或者通过育种手段选育出的优良菌种。杏鲍菇母种的分离方法有多孢分离法和组织分离法。（一）多孢分离法多孢分离技术是把杏鲍菇的许多孢子接种于同一培养基上，使它们萌发、自由交配来获得纯菌种的方法。此方法简单易行，生产上经常采用。1、培养基准备多孢分离法一般采用三角瓶分离法。在三角瓶内准备好培养基，灭菌冷却后备用。2、杏鲍菇的选择选择出菇早、朵形好、长势旺盛的杏鲍菇子实体，从中选择菌盖完整、接近成熟的单个菌盖，去掉菌柄。3、种菇消毒操作在接种箱内或无菌工作台上进行，用无菌水将杏鲍菇菌盖冲洗干净，再用75%酒精涂抹菌盖进行消毒。4、孢子采集在接种箱或无菌工作台上无菌操作。用小剪刀将杏鲍菇菌盖剪成2厘米见方的小块，取孢子的杏鲍菇要有菌褶。用细铁丝将杏鲍菇种块悬吊在三角瓶中，使杏鲍菇的菌褶朝下，弹射的杏鲍菇孢子能够落在三角瓶底部的培养基上。5、培养菌丝将处理好的三角瓶置于恒温培养箱中，设温度26左右，杏鲍菇的子实体块会产生大量的孢子，孢子在适宜的温度下开始萌发。正常情况下7天左右就会见到三角瓶内的培养基上有孢子开始萌发成菌丝，当菌丝生长到一定量时，可转接到母种试管上，试管上长好的菌丝即可作为杏鲍菇的母种，在生产中用于转扩或保存。（二）组织分离法组织分离方法是通过杏鲍菇菇体组织分离而获得纯菌种的方法。该方法操作方便，菌丝萌发快，后代不易发生变异，遗传性状稳定。目前生产中这种分离方法应用最为普遍。1、杏鲍菇的选择组织分离技术培养杏鲍菇菌种，种菇的选择要慎重。如选择某个品种时，要选择能代表该品种原有遗传特性的杏鲍菇个体，以长势好、菇形完整、刚进入成熟初期为标准。2、种菇的处理与消毒将挑选好的杏鲍菇去掉杂质，放置12小时，使菇体失去多余的水分，因为菇体含水量过大，不易分离成功。然后用75%的酒精对菇体表面彻底消毒。3、分离与移接将杏鲍菇种菇和母种培养基连同分离用的工具和用品一同放入接种箱中或净化工作台上，用紫外线灯或甲醛消毒30分钟后开始操作。将分离用的小刀和接种针在酒精灯焰上灼烧至发红，冷却后用小刀把种菇菌盖与菌褶从中间割开，在菌盖与菌褶交接处挑取绿豆块大小的菌肉组织，迅速放入母种培养基的斜面中间部位。4、菌丝培养将接过种菇组织块的试管培养基用橡皮筋捆扎好，放入恒温培养箱中培养。箱内设置温度为25左右。组织块经过5天左右即可萌发白色的杏鲍菇菌丝，继续生长57天，挑选菌丝生长健壮、浓密洁白、长势旺盛无杂菌污染的试管，再进行转接。菌丝满管后，就得到了所要的杏鲍菇母种。这样的杏鲍菇母种最好进行小范围的出菇试验，确认其菌丝生长良好、出菇正常时再应用于大面积生产。c) 母种的扩大繁殖我们保藏和引进的菌种数量是有限的，需经多次转管扩大繁殖来满足生长上所需菌种数量。一般一支母种一次可转接80100支，连续扩大繁殖后，可达到成千上万支母种。以1支母种一次扩大繁殖100支为例，连续扩大繁殖二次后，可生产出10000支母种。但连续无限地扩大繁殖，也会导致菌种退化，因此掌握好菌种的扩大繁殖是关键。（一）扩大繁殖代数控制由试管菌种转接到试管种繁殖一次叫繁殖1代。由于连续无限地扩大繁殖会导致菌种退化，因此在扩大繁殖过程中，要控制繁殖代数。其做法是：从保藏的菌种中取一部分菌种进行扩大繁殖，菌丝长满管后，取一部分菌种保藏起来，另一部分用于扩大繁殖，长满管攮和用于生产原种。每次都用最早繁殖的菌种来保藏和再次繁殖，这样就可控制繁殖代数，有效地避免菌种退化。（二）接种前准备与消毒接种需在接种箱或接种室内进行，也可在超净工作台内进行。将试管培养基、酒精灯、接种钩和75酒精棉球瓶放入接种场所内，接种箱和接种室在使用之前一天或晚上，用气雾消毒盒点燃熏蒸杀菌、或者用甲醛与高锰酸钾混合熏蒸杀菌处理。安装有紫外线灯的，要开启照射杀菌。利用超净工作台接种的，在使用前30分钟开机吹风。菌种是在接种时放入，切勿将菌种放入接种箱内进行熏蒸杀菌，否则会杀死菌种。（三）转接菌种操作首先点燃酒精灯，将接种钩和手用75酒精棉球擦洗消毒后，再将接种钩放在酒精灯火焰反复灼烧进行杀菌处理。左手握着菌种和培养基试管，试管口朝向酒精灯火焰旁，右手握着接种钩，将棉塞旋转轻轻取下放在右手指缝间。将冷却了的接种钩伸入菌种试管中，切取一小块菌种，大如绿豆粉，并略带有培养基，挑取出菌种块移到斜面培养基中部，稍压一下让菌种块与培养基粘贴。然后塞上棉塞取下。换上另一支试管培养基接种，一般一支母种可转接80余支菌种。（四）培养将接上菌种的试管，贴上标签装入框内，移置在培养室内或恒温箱内培养，保持温度在25左右，让菌丝生长并长满管。培养期间最高温度不得超过35，最低不得低于15，控制在2228之间为宜。此外，还要求湿度低，以空气相对湿度在80以下为宜；通风良好；遮光，使环境处于黑暗条件。避免高温高湿环境，引起棉塞受潮生长霉菌，造成菌种报废。培养34天后，检查一次菌种，将感染杂菌和长势弱的菌种拣出去掉。培养10天左右，菌丝就可长满斜面，即可用于生产原种，不以及时使用的，放入冰箱内在46下保藏，或在室内贮藏，在室内常温下贮藏最多不得超过1个月，否则培养基会失水萎缩，萌发生长不良。E. 原种的生产技术a) 培养基的配方原种又叫二级种，是指用母种作菌种，并在由农林副产物上组成的培养基上繁殖的菌种。原种为瓶装菌种，是用来扩大繁殖栽培种的菌种，也可直接用于生产菌袋和出菇。用于生产原种的接着基要求营养丰富，原料颗粒较粗，通透性良好，培养出的原种菌丝体才浓密、粗壮，萌发力强。常用的培养基配方有以下几种：配方1：棉籽壳87，麸皮10，蔗糖1，石膏1，石灰1。配方2：棉籽壳50，阔叶树木屑33，麸皮15，蔗糖1，石膏1，石灰1。配方3：玉米芯50，棉籽壳38，麸皮10，石膏1，石灰1。配方4：玉米芯50，阔叶树木屑33，麸皮15，石膏1，石灰1。以上培养基配方的含水量为65，pH67。b) 培养基的配制根据现有的原料选择培养基配方，或者自己设计出一种培养基配方。按配方比例称取原料，先将主料混合堆放在地面上，或者放入拌料机料槽内，然后加入辅料如麸皮、石膏和石灰等，辅料要事先混合拌匀后加入。使用玉米芯时，要先进行预湿处理，即将玉料芯放入水槽内浸泡沫45小时后使用，或者按料水比为1：1.21：1.3比例加水拌匀后，堆积起来并用塑料薄膜覆盖一夜或一天后使用。先将干料混合拌匀后，再加入水拌匀。使用蔗糖时，要将蔗糖加入水中溶解后加入。加水量按料水比为1：1.11：1.2进行，所用水要求清洁，不能使用池塘中污水或被污染了的水。用铁铲铲料来回翻动拌匀培养料，或者在拌料机内搅拌拌匀培养料。拌匀后的接种料要及时装瓶灭菌处理，不宜放置时间过久，特别是在夏季，要当日拌料，当天装瓶。避免放置时间过长后，培养料中细菌大量繁殖，培养料发酸，不易灭菌彻底。c) 装瓶用于生产原种的容器为玻璃瓶或塑料瓶，玻璃瓶为专用瓶，容积为750毫升。将洗净的玻璃瓶或塑料瓶，整齐地排放在地面上，然后将培养料铺在瓶口上，用木板来回推动，让培养料落入瓶内，最后再补加入培养料，装料至瓶颈部，并压实瓶口表面培养料。或者用手直接抓取培养料塞入瓶内进行装料。然后用一根木棒或铁棒在料中央打孔至瓶底，使料柱中央形成一个通气孔道，增加培养料的通透性。并用清水洗净瓶外壁和瓶口内壁上培养料。最后，在瓶口上用塑料薄膜封口，或者用棉花塞封口。装入培养料的瓶叫料瓶，料瓶要及时进行灭菌处理。d) 灭菌灭菌是指杀灭培养料中微生物，是生产菌种中不可缺少的。灭菌方式分为高压灭菌和常压灭菌两种，但最好是在高压灭菌灶内灭菌，这样才能杀灭培养料中细菌，培养的菌丝才浓密粗壮。也可利用土蒸灶进行灭菌。下面分别介绍高压灭菌和常压灭菌操作方法。（一）高压灭菌方法将料瓶装入灭菌层架上，送入灭菌柜内。或者直接装入灭菌锅内，料瓶要直立放置或者横卧排放，不可倒置排放，然后关闭好锅盖。通入蒸气，在0.15兆帕的压力下保持60100分钟，将培养料中的各种杂菌彻底杀死。棉籽壳及玉米芯料一般要求灭菌6080分钟，麦粒培养料灭菌时间则需100150分钟。高压灭菌锅的使用的操作要注意以下的操作规程：第一，装锅前加水至要求水位，切忌不加水或少加水，以防发生危险。第二，装锅时将菌种瓶码放整齐，装完后将锅盖上紧，防止漏气。第三，点火加热，电热灭菌设备要先检查电器部分，确认正常后，再打开通电开关。第四，打开放气阀，随着锅内温度的升高，进入锅体内的热蒸汽会推动冷空气排出锅外。高压灭菌锅的使用，冷空气的排放非常重要，冷空气排不尽，锅内即使达到了指定的压力，但温度达不到，造成假压现象，难以彻底灭菌。电热灭菌锅常设有压力表和温度表，从压力与温度的关系能够看出，当温度表达到100时再关闭放气阀，可保证锅内冷空气全部排出。自制的高压灭菌锅往往只有压力表而没有温度表，这种灭菌锅在使用时一定要等到排气孔热蒸汽的排放呈直线，而且蒸汽直线达到10厘米以上时再关闭排气阀，以确保冷气排尽，保证灭菌效果。第五，当压力达到0.15兆帕、温度达到126时开始计时，通过电控措施维持此压力此温60分钟，麦粒灭菌时维持120分钟。用煤柴的高压灭菌锅达到压力后通过调节火力，保持压力在0.15兆帕左右，防止压力过高，保持时间与电热锅相同。第六，灭菌时间达到后应断电或停火，让锅内压力自然下降，当压力降至零后，打开排气阀。注意灭菌完毕后，不可突然降压排气，否则会引起锅内瓶子破裂或发生危险。第七，锅内热蒸汽排完后，打开锅门，自然降温一段时间后，及时出锅。（二）常压灭菌方法在土蒸灶内常压下灭菌是生产者常用的方法，常压灭菌灶多种多样。由于生产时所需原种较少，因此一般利用小型常压灭菌灶，或者与生产料袋混合灭菌。这里介绍一种用汽油桶制作的小型土蒸灶。其做法是：选择一个完整无损的汽油桶，将顶盖环割去掉，在桶内距桶底25厘米处，安装一个用钢筋制作的横隔，为了增加灭菌料瓶的数量，可用钢筋制作两个圆柱形框，框的大小以能放入汽油桶内为宜，高度为重叠两个料瓶的高度，即43厘米，一般重叠2个框架，共装8层料瓶，每层为3536个料瓶，一次性可灭菌250个料瓶。根据料瓶多少来决定堆码高度。另外，在汽油桶的横隔上方安装一个排气管，用塑料管连接。将汽油桶放置在火炉上，火炉可制作成烧煤炭和烧蜂窝煤的灶，以蜂窝煤作燃料操作方便，一次性加足煤，煤燃烧结束后即灭菌结束。烧蜂窝煤的灶为圆形，一次可放28个煤，共排4个，重叠4层，在四周缝隙处加入分成块状的蜂窝煤。在桶内加足水后，装入料瓶，然后用一根桶状塑料薄膜罩上，上端用绳扎牢，下端用绳或摩托车内胎固定，再在上面罩上编织袋。或者在桶放入一个桶状塑料薄膜，在塑料薄膜内装入料瓶后，上部用绳扎紧，加大火力烧开桶内水，当蒸气大量产生后，使塑料薄膜鼓胀或气囊状时，将排气管放入盛有水的桶内，通过水的压力调节排气量，使塑料薄膜始终呈气囊门面，而又不被气体胀破，即桶内保持温度在100左右。煤燃烧结束后，或者灭菌15小时左右（