不同因素对桑枝多糖含量影响的研究_白华.pdf

不同因素对桑枝多糖含量影响的研究白华，白娟，方勇（安徽中医药科学院亳州中医药研究所，安徽 亳州 ；亳州职业技术学院，安徽 亳州 ；安徽省医学科学研究院，安徽 合肥 ）摘要：为了比较不同因素对桑枝多糖含量的影响，以葡萄糖为标准品，采用热水浸提法提取，使用苯酚硫酸法显色，利用紫外分光光度计测其吸光度（）值，将值代入标准曲线，得出多糖含量通过对样品多糖含量的比较，发现不同部位中，上段中段下段；不同地区中，浙江江苏和县云南亳州含山；不同组织结构中，形成层外组织结构形成层内组织结构；不同粗细程度的粉末，过号筛粉末过号筛粉末过号筛粉末过号筛粉末过号筛粉末，根据试验结果，得出多糖含量较高的桑枝样品条件为浙江上部形成层外组织过号筛粉末样品关键词：桑枝多糖；热水浸提法；苯酚硫酸法；不同因素中图分类号：文献标识码：文章编号：（）桑属植物全世界大约有 种，而中国桑属植物的资源有 种和个变种，是世界上桑树资源最为丰富的国家，其中作为药用的桑品种有：桑、鸡桑、吉隆桑、黑桑、华桑、长穗桑、蒙桑等 中国药典 中的桑源中药来源，为桑科多年生木本植物桑（.），其主要活性成分为多糖、黄酮类和生物碱等其中多糖具有降血脂，降血压，抗病毒，抗炎等多种药理作用，对小鼠糖尿病肾病纤维化具有一定的保护作用经查阅大量的文献后发现，在近几年内，人们研究的方向主要是桑叶、桑葚和桑白皮，对桑枝的研究很少，且大都是对整段枝条的研究，关于不同地区不同部位等因素对多糖含量影响的研究还鲜有报道故本次试验从产区、部位、组织结构和样品粉末粗细四个方面出发，考察各因素对桑枝多糖含量的影响，选择出多糖含量较高的桑枝样品实验材料 仪器与试剂电子分析天平（型号：）；数显恒温水浴锅（型号：）；电热鼓风干燥箱（型号：）；多功能粉碎机（型号：）；医用冷藏箱（型号：）；循环水式多用真空泵（型号：）；调速多用振荡器；紫外分光光度计（型号：）；苯酚（分析纯）；硫酸（分析纯）；葡萄糖粉末（分析纯）；饮用纯净水等 药材样品本实验所用药材桑枝，来源于含山县，和县，亳州和浙江金华，采集同一棵桑树上的粗细年份相近的枝条，采摘时间为 年初夏季节；外加从亳州康美中药城买来的江苏、云南 年初夏采摘的桑枝药材经专家鉴别均为桑科植物桑（.）的枝条，符合 中国药典 标准将采集来的新鲜桑枝先切成片，晒干，再放入电热鼓风干燥箱 烘 拿出放凉，放入粉碎机中打粉 打粉后根据需要部分不过筛直接留样，部分过号筛、号筛、号筛、号筛、号筛留样，其中未过号筛粗渣与过号筛粉末分别留样；各样品贴上标签，写上地区日期样品编号，放入 条件的医用冷藏冰箱中待用为确保实验结果的准确性，减少桑枝样品内水分，对多糖含量的影响，将采购于亳州康美中药城的江苏、云南桑枝，也放入电热鼓风干燥箱中，同等温度烘制同等时间，再过药筛，然后将样品粉末放入冰第 卷第期 菏泽学院学报 年月 收稿日期：基金项目：安徽省教育厅自然科学基金项目（）作者简介：白华（），女，安徽宿州人，副教授，研究方向：中医药基础DOI:10.16393/ki.37-1436/z.2023.02.013箱内保存实验方法 溶液配制 的苯酚溶液配制将固体苯酚在 水浴中加热溶解出液体，趁热用移液管吸取 的苯酚溶液加入 容量瓶中，加入适量纯净水，待其冷却至室温时，加水定容至 ，摇匀后置于棕色瓶中常温保存 标准葡萄糖溶液的配制取葡 萄 糖 粉 末 于 称 量 纸 上，连 纸 称 得 质 量 ，放入蒸发皿中，连同蒸发皿一起放入鼓风干燥机内，干燥温度为 ，后取出，放入干燥器内冷却 ，称得质量为 ，再放入烘箱，干燥，拿出放入干燥器内冷却，称得质量为 符合药典标准 取上述烘干过的葡萄糖粉末，精密称取 ，倒入 容量瓶中，加入纯净水溶解，再用胶头滴管定容至刻度线，得到 的标准葡萄糖溶液 样品多糖溶液制备精密称取“节”中各桑枝样品，将其放入具塞锥形瓶中采用热水浸提法，加入 纯净水，塞 好 玻 璃 塞；放 置 于 振 荡 器 上，振 荡 摇 匀 ，再放入超声仪中超声 后拿出，放入水浴锅中，水浴 （从水温达至 时开始计时）另取一个干净烧杯，倒入适量纯净水，用封口膜封口，于样品一同放入水浴锅内加热同样时间 后，将样品取出，趁热抽滤，滤渣用烧杯内的热水冲洗二到三次，再抽滤，合并滤液，将滤液收集到 容量瓶内，待其冷却至室温，再使用胶头滴管，定容至刻度线，塞紧塞子，摇匀，即为样品待测液 样品多糖含量的测定用移液管精密量取待测样液 ，加入具塞试管 中，再 加 纯 净 水，摇 匀 之 后 再 加 入 的苯酚溶液，再次摇匀，加入 浓硫酸，盖塞摇匀，置于试管架上显色，冷却至室温 另取一支洁净试管加入 纯净水，再加 苯酚溶液，摇匀，再加 浓硫酸，震荡摇匀，作为空白对照 一起静置 ，冷却至室温，当溶液颜色呈黄棕色或橙黄色时，再用紫外分光光度计，于 波长处测定吸光度值，计算各样品中桑枝多糖的含量 精密度试验精密称取江苏桑枝过号筛后样品，按照“节”下方法制备样品溶液，精密量取 ，采用苯酚硫酸法，按照“节”下条件进行测定，重复测定吸光度次，结果见表表精密度测试结果样品序号吸光度 质量浓度 多糖含量 平均含量 稳定性试验精密称取和县桑枝未过号筛粗渣样品、亳州桑枝仅过号筛样品，分别按照“节”下方法制备样品溶液，精密量取 ，采用苯酚硫酸法，按照“节”下条件分别间隔、进行测定，得出和县桑枝未过号筛粗渣样品溶液六次测量的吸光度值 ，；亳州桑枝仅过号筛样品溶液六次测量的吸光度值 ，实验结果证明，在 之内，桑枝样品溶液的吸光度值（），基本不变化 标准曲线图取六支 具塞试管，使用移液枪分别精密吸取 、的 葡萄糖标准品溶液加入，再分别加入纯净水至刻度，振荡混匀，同时做空白对照 每个试管内的葡萄糖质量浓度为、每个质量浓度设置个平行组，分别精密量取 ，按照“节”下条件进行测定，以吸光度值为纵坐标，葡萄糖质量浓度为横坐标，绘 制 标 准 曲 线，可 得 图，标 准 曲 线 为：.，.，说明了在 的质量浓度范围内，标准品葡萄糖质量浓度与对应的吸光度值（）呈现良好的线性关系，证明通过吸光度值计算多糖含量是可行的，年 菏泽学院学报 第期图葡萄糖标准品溶液的标准曲线实验结果分析 桑枝不同部位中多糖含量取含山地区桑枝，平均分成上、中、下三个部分，烘干打粉，部分不过筛直接留样，部分过号筛；未过号筛粗渣与过号筛粉末再分别留样，各样品按照“节”下 方 法 制 备 样 品 溶 液，精 密 量 取 ，采用苯酚硫酸法，按照“节”下条件分别进行测定，得到的多糖含量如图所示从图中可得样品仅过三号筛粉末的多糖含量最高，上中下三个部分，分别为 、上中下三部分的多糖含量平均值，见表从表中可得上中下三个部分中，上部多糖含量最高，其次是中部，最后 是 下 部，多 糖 含 量 平 均 值 分 别 为 、图桑枝不同部位多糖含量表不同部位桑枝多糖含量比较样品多糖平均含量 上段 中段 下段 不同地区桑枝多糖含量综合“节”结果分析，分别取含山，和县，亳州，浙江，江苏，云南，六地桑枝，直接烘干打粉，过号筛；各样品按照“节”下方法制备样品溶液，精密量取 ，采用苯酚硫酸法，按照“节”下条件分别进行测定，多糖含量比较如图所示 从图中数据结果，可以得出在不同地区的样品中，桑枝多糖含量存在明显差异其中浙江产的桑枝多糖含量最高，为 ；含山产的桑枝多糖含量最低，为由 于 云 南 有 两 个 样 品 故 取 平 均 值，为 综上所述，不同地区桑枝多糖含量的比较结果为浙江江苏和县云南亳州含山图不同地区桑枝样品仅过三号筛多糖含量图 桑枝不同组织结构多糖含量考虑不同组织结构多糖含量会存在差异，且形成层内外组织，在新鲜状态下，最好分离，形成层外组织干燥后质轻量少 故结合采集的桑枝样品量，综合“节、节”结果考虑，选取和县地区的桑枝分别取形成层内和形成层外两部分，烘干打粉，过号筛；各样品按照“节”下方法制备样品溶液，精密量取 ，采用苯酚硫酸法，按照“节”下条件分别进行测定，对形成层内外组织结构多糖含量进行比较，结果如图所示桑枝形成层外组织结构比形 成 层 内 组 织 结 构 的 多 糖 含 量 高，分 别 为 、图桑枝形成层内外组织结构多糖含量图 不同粗细桑枝粉末的多糖含量由“节”中图可得，桑枝过三号筛样品的多糖含量比不过筛样品和未过三号筛粗渣样品的多 年白华，等：不同因素对桑枝多糖含量影响的研究 第期糖含量要高，证明桑枝样品粒径的大小，会影响其多糖含量 实验选取含山与江苏桑枝，直接烘干打粉，分别过号筛、号筛、号筛、号筛、号筛，各样品按照“节”下方法制备样品溶液，精密量取 ，采用苯酚硫酸法，按照“节”下条件分别进行测定，含山与江苏桑枝过不同型号药筛样品多糖含量，分别如图、图所示 本次试验结果得出，在过号到号筛之间，样品粉末越细，其所含多糖含量越高 含山桑枝与江苏桑枝过号筛样品粉末多糖含量分别为 、图江苏样品过不同型号筛子多糖含量图图含山样品过不同型号筛子多糖含量图结论我国桑枝资源非常丰富，但目前有关桑枝的研究资料相对较少，对其利用主要局限于初级开发 因此，为了有效开发利用桑枝药材资源，本文从多方面研究桑枝多糖含量 采用热水浸提法提取桑枝中的多糖，利用苯酚硫酸法显色、分光光度法测定桑枝中多糖含量，该方法准确可靠，简便易行 实验结果表明，不同地区与不同粉末粗细程度，对其多糖含量影响最为明显，其次是不同部位与不同组织结构 桑枝样品粉末直径越小，其多糖含量越高；桑枝样品的不同部位中，上段多糖含量最高、中段其次、下段最低；形成层外组织结构多糖含量高于形成层内组织结构多糖含量 从而推测出一个多糖含量较高的桑枝样品条件，为浙江上部形成层外组织结构过号筛粉末桑枝样品 本次实验，以期为后期对桑枝多糖研究提供参考参考文献：张丽丽桑属植物资源性化学成分积累动态评价及桑叶适宜干燥 加 工 技 术 研 究南 京：南 京 中 医 药 大 学，国家药典委员会 中华人民共和国药典 北京：中国医药科技出版社，：郭美美，黄凌霞桑树主要活性物质的研究进展 蚕桑通报，（）：陶程，朱方容，李秋捷，等桑树主要活性物质提取技术的研究进展广西蚕业，（）：余文胜，黄飞，郑妮 桑枝多糖基于 信号通路调控 小鼠肾纤维化作用的研究浙江中西医结合杂志，（）：陈芳，林强，邱长玉，等桑枝不同枝段中多糖含量的差异性分析广东蚕业，（）：吴金松，耿广威，任聪，等超声辅助酶法提取山药皮水溶性多糖的工艺优化食品研究与开发，（）：余婉莎 桑枝多糖提取与结构分析及生物活性探究重庆：西南大学，陈亚洁桑枝多糖的分离纯化、结构特征和体外抗肿瘤作用研究杭州：浙江大学，谢玲娜，韩萍，杜志云银耳多糖超声波提取工艺优化及抗 细胞炎症的作用研究广东工业大学学报，（）：刘英，章碧忠，章可谓桑叶、桑枝、桑椹多糖的提取及含量测定医学信息，（）：厉博文，陈立，杨岚，等不同因素对紫萁总黄酮和多糖含量的影响 军事医学，（）：洪德志桑枝多糖降血糖作用及其机理的研究杭州：浙江大学，贺天珍桑枝皮多糖的制备、结构鉴定及其抗氧化活性分析苏州：苏州大学，孙莲，孟磊，阿布都许库尔吐尔逊气相色谱法测定新疆桑枝 多 糖 中 单 糖 组 成 及 含 量 安 徽 农 业 科 学，（）：张作法，金洁，时连根 桑枝多糖的含量测定方法 中国中药杂志，（）：（下转发第 页）年 菏泽学院学报 第期 ，（，）：，：；（责任编辑：徐慧）（上接第 页），（，；，；，）：，：；（责任编辑：徐慧）年 菏泽学院学报 第期