基于UPLC-QTRAP-MS_MS与网络药理学的苍降辟瘟香防治新型冠状病毒肺炎的潜在活性成分研究.pdf

Unive-MS/药理毒理21PharmacyandChineseMateriaMedica2023;14(6)中药与临床基于 UPLC-QTRAP-MS/MS 与网络药理学的苍降辟瘟香防治新型冠状病毒肺炎的潜在活性成分研究梁迪，薛清彩，刘江碧，陈思敏摘要】目的：对苍降辟瘟香四种主要配方成分（苍术、沉香、大叶降真香、龙肝香）防治新型冠状病毒肺炎的潜在活性成分进行鉴别与筛选。方法：应用Thermo Scientific vanquish超高效液相色谱-Thermo ScientificQ-Exactive Orbitrap离子阱质谱联用鉴定苍降辟瘟香燃烧后空气中挥发物的主要化学物质和药材来源，通过TCMSP数据库获取苍降辟瘟香的活性成分与相关靶点；通过Genecards数据库获取COVID-19的相关靶点，String数据库绘制蛋白质相互作用网络(PPI），Cy t o s c a p e 软件构建“化学成分/疾病-药物靶点-基因功能相互关系图”与“化学成分/疾病-药物靶点-代谢通路相互关系图”并使用Centiscape插件筛选核心靶点；David数据库对交集靶点进行GO与KEGG富集分析，Autodock1.5.7软件与Sailvina beta 2.0插件将筛选得到的活性成分与核心靶点进行分子对接验证，Pymol软件将分子对接结果进行可视化分析。结果：苍降辟瘟香燃烧后空气中挥发物共分离出110 7 个不同保留时间的一级质荷比，结合质谱一二级数据库和人工鉴定确认了其中56 种化合物结构，其类别主要为苯丙素、生物碱、黄酮、苷以及类；以OB值30%、DL值0.18 为筛选条件，获得苍降辟瘟香中药物活性成分共2 1个，药物-疾病交集靶点共46 个，核心靶点共10 个；GO与KEGG富集分析预测了37 9个GO功能富集条目与12 4条KEGG代谢通路；分子对接结果证实苍降辟瘟香中主要活性成分与核心靶点具有较为稳定的结合活性。结论：苍降辟瘟香可能通过多成分、多靶点及多通路参与COVID-19的防治。关键词】苍降辟瘟香；苍术；沉香；大叶降真香；龙肝香；UPLC-QTRAP-MS/MS；网络药理学；分子对接中图分类号 R285.5文献标识码 A文章编号 16 7 4-92 6 X(2023)06-005-014Study on the potential active components of CangJiangPiWen incense against COVID-19 based on UPLC-QTRAPMS and network pharmacology/LIANG Di,XUE Qing-cai,LIU Jiang-bi,CHEN Si-min/(School of Pharmacy,Chengdursity of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 611137,Sichuan)Abstract Objective:To identify and screen the potential active ingredients of four main ingredients of CangJiangPiWenincense(Cangzhu,Chenxiang,Dayejiangzhenxiang,Longganxiang)for prevention and treatment of COVID-19.Method:Thermo Scientific vanquish-HPLC-Thermo Scientific Q-Exactive Orbitrap Ion trap mass spectrometry was used to identifythe main chemical substances and sources of the volatile substances in the air after the burning of CangJiangPiWen incense.The active components and related targets of CangJiangPiWen incense were obtained through TCMSP database.The relevanttargets of COVID-19 was obtained through the Genecards database.Protein-protein interaction networks(PPIs)was drawnthrough string database.The Chemical Component/Disease-Drug Target-Gene Function Interaction Diagram and ChemicalComponent/Disease-Drug Target-Metabolic Pathway Interaction Diagram were constructed by cytoscape software,and thecentiscape plugin was used to screen core targets.GO and KEGG enrichment analysis on intersecting targets was conductedthrough the David database.Through Auto dock 1.5.7 software and the Sailvina beta 2.0 plug-in,the screened active ingredientswere verifed by macromolecular docking with the core target.Finally,the results of macromolecular docking were visualized byPymol software.Result:The results showed that a total of 1107 primary mass to charge ratios with different retention times wereseparated from the volatile compounds in the air after the combustion of CangJiangPiWen incense.56 compounds were confirmedin their structures by combining mass spectrometry primary and secondary databases and manual identification,with the maincategories being phenylpropanoids,alkaloids,flavonoids,glycosides,and terpenes.Using OB value30%and DL value0.18 asscreening conditions,a total of 21 active ingredients,46 drug disease intersection targets,and 10 core targets were obtained fromCangJiangPiWen incense.GO and KEGG enrichment analysis predicted 379 GO functional enrichment entries and 124 KEGGmetabolic pathways.The results of macromolecular docking confirmed that the main active components of CangJiangPiWen基金项目】成都市科技项目（2 0 2 2-YF05-01876-SN作者单位 成都中医药大学药学院，四川成都6 11137作者简介】梁迪，在读硕士研究生，主要从事中药药理学研究Tel:13135362582 Email:通讯作者 陈思敏（197 8-），副教授，主要从事中药药理学研究Email:chensimin 收稿日期 2 0 2 3-0 2-2 7incense had relatively stable binding activity with the coretarget.Conclusion:CangJiangPiWen incense may participatein the treatment of COVID-19 through multiple components,targets,and pathways.Key words CangJiangPiWen incense;Cangzhu;Chenxiang;Dayejiangzhenxiang;Longganxiang;liquidchromatography-mass spectrometry;network pharmacology;moleculardocking22Pharmacy andhinese Materia Medica2023;14(6)中药与临床2019年12 月湖北省武汉市出现不明原因的肺炎病例，后被证实为新型冠状病毒肺炎(Corona VirusDisease2019，CO VID-19)，又称“新冠肺炎”。根据现有病例资料显示，新冠肺炎是一种急性感染性肺炎，流行度极高，通过直接传播、接触传播以及气溶传播等方式作为其主要的传播途径。大部分感染者主要表现为发热、乏力、干咳以及呼吸困难等呼吸道症状，重症患者可能出现急性呼吸综合征、凝血功能障碍、代谢性酸中毒以及多器官功能衰竭等2-1。熏香疗法在我国有着悠久的药用历史。春秋时期，古人就常佩戴香囊以驱除移恶之气14。随着中医的理论体系和治疗手段的不断发展与完善，中医经书上记载了许多关于熏香方剂避邪防瘟的治疗方案，其中包括流行性感冒、支气管哮喘以及气管炎等呼吸系统疾病5。根据熏香疗法的现代研究，主要包括两类：一是通过自然挥发香气（挥发性物质），二是通过燃烧形成香气；相关研究表明，传统香囊配方中的挥发性成分通过呼吸道进入人体，并在口鼻周围形成高浓度的局部消毒环境，对细菌和病毒产生抑制或杀灭作用并调节机体的免疫系统，例如防感冒香袋能够预防流感病毒和呼吸道细菌的感染并促进体内免疫球蛋白的生成，并对于流感、麻疹和流行性脑膜炎有良好的辅助治疗效果；燃熏法主要通过形成药分子膜层，积聚在呼吸道病毒或细菌易侵人的鼻窦腔与咽喉处，阻断了病毒或细菌的传播途径5.7 ，同时，这些燃烧产生的挥发性物质具有抑制或杀灭病毒的能力，例如苍术燃烧时产生挥发性物质-苍术酮对甲型流感病毒H3N2亚型、乙型流感病毒以及高致病性禽流感病毒H5N1亚型株均有杀灭作用；艾叶燃烧产生的气体已被证实对流感病毒、副流感病毒、鼻病毒以及腺病毒具有高效抗病毒作用8-9。新冠肺炎在中医理论上属于“瘟疫”的范畴，其病机特点为：湿、热、毒、瘀，病位在肺，其次为脾胃，并累及肝5。在2 0 0 3年的非典期间，许多医院采用中药的熏香疗法进行防疫，如隶属北京大学的深圳医院采用苍术熏蒸法对医院内进行日常消毒，实现了院内医护人员零感染的成绩0。在现今的新冠肺炎的防治中，熏香疗法也发挥了重要的作用。在2 0 2 0 年武汉市出台的新型冠状病毒感染的肺炎中医药居家预防推荐方案中香薰疗法为三大推荐方案之一，在疫情高发区-湖北黄冈也采用熏香疗法进行防疫，例如黄冈市中医院在新冠肺炎期间采用艾条燃熏方式对医院内进行日常消毒，同样也实现了院内医护人员零感染的成绩。苍降辟瘟香采用苍术、沉香、大叶降真香、龙肝香等多种预防和治疗传染性疾病的中药成分所制成，其燃熏后产生的挥发性成分大部分具有宣散肺气、开通经等功效，后经口鼻、皮肤以及经络吸收后可作用于全身，从而达到驱邪、祛病以及强身等作用5-6 。UPLC-QTRAP-MS/MS（超高效液相三重四级杆线型离子阱串联质谱）能够同时测定多种成分，且分析时间短、灵敏度高以及专属性强，是可靠的中药材内在质量综合评价的检测方法12 。网络药理学采用虚拟计算机方法对整个生物系统进行可视化分析并有效预测相关靶点和通路，而分子对接基于受体结构的虚拟筛选方法,针对性的预测了配体蛋白与受体基因之间潜在的药物亲和力类型以及结合方式，是筛选或设计药物的一项重要的计算机辅助技术。本研究通过采用UPLC-QTRAP-MS/MS技术对苍降辟瘟香燃烧的挥发物进行了成分鉴定，并对应了每种鉴定物的配方来源（苍术、沉香、大叶降真香、龙肝香）；通过网络药理学初步预测了苍降辟瘟香主要的活性成分、作用靶点及信号通路，并通过分子对接技术预测苍降辟瘟香与核心靶点的可能作用机制，为苍降辟瘟香在新冠肺炎的临床应用中提供理论基础。1材料与方法1.1试剂与仪器苍降辟瘟香购自珠海临湾堂科技有限公司生产，批号2 0 2 2 110 7。经成都中医药大学药用植物教研室马云桐研究员鉴定苍术为茅苍术Atractylodeslancea（T h u n b.）D C的干燥根茎；沉香为白木香Aquilaria sinensis（L o u r.）G i l g 含有树脂的木材；大叶降真香为两粤黄檀DalbergiaBenthamii含有树脂的木材；龙肝香为滇黔黄檀DalbergiayunnanensisFranch 含有树脂的木材。Thermo Scientific Vanquish超高效液相色谱仪，ThermoScientificQ-ExactiveOr-bitrap四极杆轨道阱高分辨质谱仪。色谱质谱接口为Thermo Scientific H-ESI。1.2样品处理取线香于洁净通风橱里燃烧，在其上方5cm悬挂开口向下的洁净EP管，待燃烧5分钟后，取下EP管，称重，加入EP管增重重量的50 倍体积的甲醇，涡旋振荡5分钟，16 50 0 rpm高速离心10 min，分取上清，用于进样分析。各药材粉碎过10 0 目，23Pharmacy and Clinics f Chinese Materia Medica2023;14(6)中药与临床称取约50 mg，置EP管中，加入甲醇5mL，超声提取30 min，静置10 min，取上清16 50 0 rpm高速离心10min，分取上清，用于进样分析。1.3QTRAP高分辨质谱和化合物结构鉴定色谱条件：采用色谱柱（WatersAcquityUPLCC18，1.7 m）；流动相为乙腈（A）和超纯水（B），通过二元线性梯度洗脱，流动相梯度：0 45min（5%90%A），流速：0.4mLmin；进样量：1 L；柱温：35-40 C。质谱条件：lon SourceType：H-ESI；Sp r a y Vo l t-age:Static;Positive lon(V):3500;Negative lon(V):3500;Sheath Gas(Arb):35;Aux Gas(Arb):15;Sweep Gas(Arb):l;lon Transfer Tube Temp(C)：350；Va p o r i z e r T e mp（C)：350；扫描模式：FullMS/dd-MS2，正负离子同时扫描；一级分辨率：7 0 0 0 0；二级分辨率：17 50 0；扫描范围：m/z80150 0；碰撞能量梯度：2 0，40，6 0 eV。分子结构鉴定：化合物检索软件为compounddiscoverer3.2，二级碎片库采用本地mzvault数据库和在线的二级库mzcloud相结合的方式进行。程序鉴定完成后，对相应结果进行人工鉴定核对，主要采用 Pubchem(https:/pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)相应物质UPLC-ESI-QTRAP下的二级裂解规律为主要参考。1.4苍降辟瘟香化学成分的筛选将1.3部分所鉴定的苍降辟瘟香的化学成分导人到TCMSP数据库（中药系统数据库及分析平台，https:/ targets（对应的靶蛋白）、OB值（口服生物利用度，oralbioavailability）以及DL值（类药性，drug-likeproperties）的参数，并按照OB值30%；DL值0.18 的参数条件对化学成分进行筛选，最后将得到的化学成分进行归纳。将已筛选的化学成分的对应靶蛋白在Uniprot数据库（蛋白质数据库，https:/www.uniprot.org/）导人，得到对应靶蛋白的标准基因名称。1.5COVID-19疾病靶点的预测以检索词COVID-19在GeneCards数据库（疾病靶点预测数据库，www.genecards.org）进行检索，得到对应的靶蛋白基因。将上述与1.4部分得到的靶蛋白基因导人到Venny 2.1网站(https:/b.csic.es/tools/venny/），并绘制苍降辟瘟香与COVID-19的交集靶点。1.6PPI网络的建立将1.5部分得到的药物-疾病的交集靶点导人到String数据库（蛋白互作关系数据库，https:/cn.string-db.org/），在最低相关度得分的选项中选择0.40 0，其他设置默认，然后进行PPI（蛋白质一蛋白质相互作用网，protein-proteininteractionnetworks)分析。1.7GO与KEGG富集分析与核心基因的筛选将1.5部分得到的药物-疾病的交集靶点导人到Davids数据库（基因功能与通路富集分析数据库，https:/david.ncifcrf.gov/）进行GO（基因本体，geneontology）与KEGG（京都基因与基因组百科全书，kyoto encyclopedia of genes and genomes）富集分析，并通过微生信网站（http:/ 1-2.4.1软件转换为PDB格式；通过Autodock1.5.7软件中对配体进行预处理，包括加上极性氢、计算电荷以及确定可旋转键等操作，之后输出为PDBQT格式。受体的处理：在RSCBPDB数据库（蛋白质结构数据库，http:/www.rcsb.org/）下载核心靶蛋白的晶体结构的文件，然后导入到Pymol软件中，找出原配体并以PDB文件格式进行保存，然后去除原配体、水分子以及其它杂原子，最后以PDB文件格式进行保存；在Autodock1.5.7软件中处理受体文件，包括加上所有氢、计算电荷以及添加原子类型等操作，之后输出为PDBQT格式。分子对接：在Sailvinabeta2.0插件上中读取共晶体文件（原配体文件），确定共晶体文件的活性位点并输出为txt文件，然后输人receptor和ligand以完善txt文件；将配体文件的所有可旋转键设为柔性，对接的靶点蛋白设置为刚性，其他参数设置为默认值；通过Sailvinabeta2.0软件运行程序，以绝对值最大为标准选择最优构型的配体，并将最后的对接结果通过Pymol软件进行可视化分析。24Pharmacy andChinese Materia Medica2023;14(6)中药与临床2结果2.1超高效液相色谱-离子阱质谱联用的化学成分鉴定结果通过液质联用技术分析配方化学成分，按照1.3的色谱以及质谱条件，共分离110 7 个一级质荷比，并通过结合各色谱峰的分子离子峰及主要碎片峰的解析，共鉴定出56 种化学成分，详细结果见表1以及附加材料1，部分化合物的质谱解析图见图1与图2。表1四种主要配方成分的UPLC-QTRAP-MS/MS鉴定结果No.t/min化合物名称分子式化学结构准分子离子峰m/z特征离子碎片来源类别0.616脯氨酸C,H.NO2118.0865 M+H59.0736大叶降真香/沉香A0.639水苏碱C,Hi,NO,144.1019 M+H58.0658沉香A0.673尿酸C,H,N,O;167.0203 M-H124.0143苍术A1.628苯丙酰胺C,H.NO2166.0863 M+H120.0809苍术A2.041绿原酸Ci.HisO353.0878 M-H191.9544、8 5.0 2 8 4苍术B3.126羟基喹啉C,H,NO146.0602 M+H苍术A3.601犬尿胺酸C,oH,NO,190.0499 M+H162.0549苍术A447.2235、2 8 5.17 0 9、119.0 341、3.888苍术苷AC2H,O10493.2291 M+H苍术B101.0234、8 9.0 2 34、95.0 12 6、59.0 12 8193.0859、16 1.0 597、133.0 6 49、4.753刺五加苷BCi,H24O,390.1758 M+H沉香C105.0703191.0556、17 9.0 343、17 3.0 449,4.989隐绿原酸Ci.HisO353.0879 M-H苍术B135.0443、93.0 336、8 5.0 2 8 47,8-二羟基香5.280C,H,O4177.0187 M-H121.02856龙肝香D豆素7.1596-甲氧基-7-羟CioH,O4XY193.0497 M+H178.02609龙肝香D基香豆素7.532黄芩素Ci.H2O;285.0757 M+H270.0521、2 53.0 49 5、2 42.0 57 1龙肝香E257.0456、2 39.0 346、2 11.0 396、7.894漆黄素CisHioO.285.0405 M-H龙肝香E149.0236、12 1.0 2 8 6、10 9.0 2 8 5285.0756、2 7 0.0 52 3、2 50.0 8 12、8.600印度黄檀苷C.,H.,O1o447.1288 M+H大叶降真香B189.0523301.0707、2 7 3.0 7 56、2 45.0 8 0 88.798李属素Ci.Hi4O,319.0812 M+H龙肝香E213.0545.167.0339、12 3.0 442301.1072、2 8 3.0 96 8、2 55.10 14、9.057沉香四醇Ci,HO.319.1178 M+H沉香E227.1064、16 4.0 46 8、91.0 54710.356射干苷C.,H,Oil463.1236 M+H301.0705、2 8 6.0 47 1龙肝香B25Pharmacyand Clinics fChineseMateriaMedica2023;14(6)中药与临床169.0135、151.0 0 2 9、12 3.0 0 7 8、10.393柚皮素CisH,2O;271.0612 M-H龙肝香E119.0492、10 7.0 12 910.503乌药内酯CisHi.O245.1173 M+H227.1065、19 9.1116、17 1.116沉香C270.0524、2 57.0 8 0 7、2 2 9.0 8 59、大叶降真香/龙肝10.629毛蕊异黄酮CiHi2O,285.0759 M+HE197.0598香大叶降真香/龙肝11.048木犀草素CisHioO,271.0599 M+H225.0545、2 15.0 7 0 1、137.0 2 34E香11.696异鼠李素Ci6Hi20,317.0656 M+H3b02.0420、2 7 4.0 46 9、137.0 2 34龙肝香E315.0862 M+H-11.744芳香膜菊素Ci,Hi40300.0625、2 8 2.0 519、2 55.0 6 51龙肝香EH201*大叶降真香/龙肝12.622美迪紫檀素CiHi404271.0964 M+H137.0597E香286.0469、2 6 9.0 444、2 41.0 495、大叶降真香/龙肝12.694鸢尾黄素Ci.Hi20.301.0706 M+HE153.0182香270.0168、2 2 6.0 2 7 2、2 14.0 2 6 8、12.755膨菊内酯CiHioO,313.0356 M-H龙肝香E198.031612.984樱草素Ci6H4Os287.0911 M+H*167.0338、147.0 439、119.0 493、91.0 547龙肝香E314.0431、2 9 9.0 19 5、2 8 1.0 0 9 1、13.074鸢尾黄酮乙素C,H4O,287.0911 M-H大叶降真香E271.0247、2 43.0 2 9 6、12 3.0 0 7 8213.1273、18 5.132 5、157.10 12、13.4033去氢木香内酯CisHi:O329.0667 M-H沉香C143.0856、12 9.0 6 99、10 5.0 7 0 2215.1431、18 7.148 1、145.10 13、13.607异土木香内酯Ci,H200231.1381 M+H沉香C131.0856、10 5.0 7 0 1、8 1.0 7 0 4213.1274、18 5.132 5、17 1.116 7、13.973乌药醇Ci5HI:O2233.1537 M+H*沉香C143.0856、10 5.0 7 0 3、91.0 548大叶降真香/龙肝13.994甘草素CisHi204231.1381 M+H147.0440、12 3.0 441E香215.1429、17 7.0 9 13、145.10 11、大叶降真香/沉香14.068白术内酯ICisH20O,257.0807 M+HC131.0855、10 7.0 8 59、9 3.0 7 0 3、8 3.0 49 7/龙肝香14.432棕矢车菊素C,Hi4O7233.1537 M+H316.0574、16 7.0 338龙肝香E15.479白杨素CisHiO4331.0811 M+H209.0602、18 1.0 6 52、16 5.0 7 0 2龙肝香E大叶降真香/龙肝15.677刺槐素Ci.H,20;253.0505 M-H215.0701、18 7.0 7 53、151.0 38 8E香314.0431、2 9 9.0 19 6、2 7 1.0 2 49,15.714皮素Ci,H,4O7285.0758 M+H龙肝香E243.0297、2 31.0 2 9 615.864子黄素BCiHi:O7329.0669 M-H344.0889、32 9.0 6 52、30 1.0 7 0 3术E26：PharmacyChinese Materia Medica2023;14(6)anaClinic中药与临床16.236樱黄素Ci.Hi2O;359.1121 M+H*257.0806、2 2 9.0 8 57、197.0 595大叶降真香E大叶降真香/龙肝16.266松属素CisH,204257.0808 M+H153.0182、131.0 492、10 3.0 546E香219.1743M+H-16.292二氢青蒿酸Ci,H2,O2163.1117、12 1.10 13、10 7.0 8 59、8 3.0 49 7龙肝香/苍术CH2016.466山姜素Ci.Hi404271.0965 M+H*254.0582、16 5.0 18 5、149.9949、6 5.0 0 2 2大叶降真香E437.3419、40 9.346 3、2 47.16 9 2、17.603雷公藤内酯甲C.oH4.O,455.3519 M+H龙肝香/沉香C201.1637、19 1.17 9 4、9 5.0 8 59284.0325、2 31.0 6 59、2 16.0 42 5、大叶降真香/沉香17.690羟基芜花素Ci.Hi2O299.056 M-HE189.0552/龙肝香大叶降真香/龙肝17.750刺芒柄花素Ci.H,204269.0809 M+H254.0569、2 37.0 544、2 13.0 9 10E香18.076金腰乙素CiHisO:375.1073 M+H360.0838、345.0 6 0 2大叶降真香E大叶降真香/龙肝18.609大豆素CisH.oO4253.0506 M-H208.0526、18 0.0 57 5E香大叶降真香/龙肝18.745异樱花素Ci.Hi4Os287.0919 M+H153.0546、138.0 312E香二氢木蝴蝶素183.0289、153.0 547、131.0 493、19.211Ci.Hi4O;287.0914 M+H龙肝香EA103.0546235.1692 M+H-19.626青蒿酸CisH202189.1638、17 9.10 6 5、133.10 12龙肝香CH20120.421芜花素Ci.Hi20s285.0757 M+H270.0521、2 42.0 57 2沉香E20.511高良姜素CisHioO,269.0455 M-H213.0551、16 9.0 6 12龙肝香E20.597柳穿鱼黄素C.H,40315.0862 M+H300.0627、2 6 9.0 444、2 41.0 49 3龙肝香E大叶降真香/龙肝20.747鹰嘴豆芽素ACi.Hi,O,285.0755 M+H270.0523、2 2 9.0 8 59、17 0.0 2 0 9E香24.215紫檀素C,Hi,O4285.1119 M+H137.0597龙肝香E注：A为生物碱类；B为苷类；C为类；D为苯丙素类；E为黄酮类。27Pharmacy andChineseMateriaMedica2023;14(6)中药与临床刺槐素昇鼠李素木犀草素松属素柳穿鱼黄素榭皮素毛花异黄酮漆黄素甘草素羟基芜花素芜花素芳香膜菊素螺蝶菊内醋高良姜素鹰嘴豆芽素A黄茶素一级质谱图Thefirst ordermass spectrum图1苍降辟瘟香的部分化学成分的一级质谱图槐素异鼠李素木犀草素松属素柳穿鱼黄素榭皮素毛异黄酮漆黄素甘草素基芜花素荒花素芳香膜菊素螺蝶菊内酯高良姜素鹰嘴豆芽素A黄苓素二级质谱图The Secondarymass spectrum图2 苍降辟瘟香的部分化学成分的二级质谱图2.2苍降辟瘟香与COVID-19相关靶点交集将1.4部分的化学成分进行筛选，共计2 1个化学成分满足条件，具体信息见表2。在TCMSP数据中收集到对应化学成分的靶点共计93个（剔除重复靶点后的靶点数量）；在Genecards数据库中收集到相关疾病靶点共计12 7 37 个；将以上靶点导人到Venny2.1网站上并绘制韦恩图，最后得到46 个交集靶点，具体结果见图3。表2 已筛选的化学成分的相关信息OBMol ID化学成分DL来源(%)MOL002714Baicalein（黄芩素)33.520.21龙肝香MOL013179Fisetin(漆黄素)52.60.24龙肝香MOL010905Linderalactone(乌药内酯)69.580.18沉香大叶降真香/MOL000417Calycosin（毛蕊异黄酮）47.750.24龙肝香大叶降真香/MOL000006Luteolin（木犀草素）36.160.25龙肝香MOL000354Isorhamnetin（异鼠李素）49.60.31龙肝香MOL005016Odoratin（芳香膜菊素）49.950.3龙肝香大叶降真香/MOL002565Medicarpin（美迪紫檀素）49.220.34龙肝香MOL003404Wedelolactone（菊内酯)49.60.48龙肝香Isoalantolactone（异土木香内MOL01083653.430.18沉香酯）大叶降真香/MOL001792Liquiritigenin（甘草素）32.760.18龙肝香大叶降真香/MOL000044Atractylenolide II（白术内酯II)47.50.18沉香/龙肝香大叶降真香/MOL001689Acacetin（刺槐素）34.970.24龙肝香MOL000098Quercetin（皮素)46.630.28龙肝香大叶降真香/MOL002844Pinocembrin（松属素）64.720.18龙肝香Hydroxygenkwanin（羟基芜花大叶降真香/MOL00553036.470.27素）沉香/龙肝香大叶降真香/MOL000392Formononetin（刺芒柄花素）66.390.21龙肝香MOL005573Genkwanin（芜花素）37.130.24沉香MOL002563Galangin（高良姜素）45.550.21龙肝香MOL005842Pectolinarigenin（柳穿鱼黄素）41.170.3龙肝香大叶降真香/MOL000510BiochaninA（鹰嘴豆芽素A）30.150.24龙肝香Cangjiangpiwen IncenseCOVID-19934612737(0.7%)(0.4%)(98.9%)图3苍降辟瘟香与COVID-19的交集靶点的韦恩图2.3交集靶点的PPI构建将得到的交集靶点导人到String数据库中并构建PPI网络，共得到以下分析参数：节点数量：46；边数：38 3；平均节点度：16.7；平均局部聚28Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica 2023;14(6)中药与临床类系数：0.7 5；预期边数：12 3；PPI富集p值：1.010-16，具体结果见图4。INSRRBLIRAKAMMP1OP1VEGFAERBB2MDIMM1PCNA30CCNDALOLRIECRCDK2CDKITOP2AL1BCASPPARP2CCNA2MMPAKTICASP9NOSHMOXICREBUBAXXOH6CL2NCF2AHRPYGMGSTPIADCYBFOSL2KnownInteractionsPredictedInteractionsOthers:2Y图4苍降辟瘟香与COVID-19的交集靶点的PPI网络2.4交集靶点的GO与KEGG的富集分析以及核心靶点筛选将得到的交集靶点导入到David数据库中，共得到37 9个GO功能富集条目（其中生物过程285条；细胞组成32 条；分子功能6 2 条）与12 4条KEGG代谢通路。将GO与KEGG的富集结果按照P值大小进行排序，分别取排名前十名的条目导人到微生信网站上并绘制富集条形图与富集气泡图，具体结果见图5（A)、(B)。在GO的富集条形图中，Y值表示GO条目，X值表示基因数量，颜色越深代表P值越高；在KEGG的富集气泡图中，Y值表示KEGG通路，X值表示基因占比率，气泡大小表示基因数量，颜色越深代表P值越高。由图可知交集靶点可能参与了癌症通路（Pa t h w a y s i n c a n c e r）、脂质与动脉粥样硬化通路(Lipid and atherosclerosis）、PI 3K-A k t 信号通路（PI3K-A k t s i g n a l i n g p a t h w a y）、人巨细胞病毒感染通路（Human cytomegalovirus infection）、麻疹通路（Measles）、乙型肝炎通路（Hepatitis B）、肺结核通路（Tuberculosis）、EB病毒感染通路（Ep s t e i n-Ba r r v i r u s i n f e c t i o n）、人乳头瘤病毒感染通路（Human papillomavirus infection）以及前列腺癌通路（Prostate cancer）。将筛选的化学成分、交集靶点以及GO/KEGG的富集结果导人到Cytoscape3.7.2软件中并绘制“化学成分/疾病-药物靶点-基因功能”与“化学成分/疾病-药物靶点-代谢通路 的相互关系图，具体结果见图6（A)、（B)。通过Centiscape插件对核心靶点进行筛选，得到得到以下分析参数：Closeness阅值=0.0 1443456 7 12 2 536 6 17;