黄芪桂枝五物汤对冻伤、气虚冻伤模型大鼠的作用及其机理研究（方剂学）.pdf

硕士学位论文黄黄桂枝五物汤对冻伤、气虚冻伤模型大鼠的作用及其机理研 究中文摘要本研究是在方证相关理论的指导下，建立并采用冻伤及气虚冻伤大 鼠模型，从病理、免疫及血循环等方面，探查黄茂桂枝五物汤对两模型 的生物效应及作用机理，揭示并比较黄黄桂枝五物汤对两模型作用的异 同及相关程度的高低，从而为方证相关理论提供实证依据。研究分为冻 伤及气虚冻伤模型的建立及黄茂桂枝五物汤对冻伤、气虚冻伤模型大鼠 的作用及其机理研究两部分内容。实验一冻伤.气虚冻伤模型大鼠的建立方法：Wistar大鼠30只随机分为3组，每组10只，即正常对照组、冻伤模型组、气虚冻伤模型组。冻伤模型组采用低温乙醇和水混合浸泡法 进行制备；气虚冻伤模型组为在气虚模型基础上复加了冻伤的因素。气虚 模型采用过度疲劳+饮食失节的方法，造模2周后，再用低温乙醇和水混 合浸泡法进行冻伤模型的制备。正常对照组动物不施加任何刺激，自然饲 养。造模后第2天，各组动物开始给予蒸偏水，每日2次。连续3天后，测定各组大鼠血流变、TXB2.6-k-PGF】a和部分免疫细胞因子的变化及冻 伤局部病理改变。结果：冻伤模型和气虚冻伤模型复制中，大鼠全血粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数、TXB2/6-k-PGFia比值、IL-2、IL-6、TNF-|3显著升高，红细胞变形指数、6-k-PGFh显著降低；气虚冻伤模型中TXBz、IL-la也 显著升高，且TXB2、TXB2/6-k-PGFa比值显著高于冻伤模型组，TNF-P 显著低于冻伤模型组。结论：本冻伤模型和气虚冻伤模型造模3天均存在免疫应激和血栓易 形成状态，且冻伤模型和气虚冻伤模型在免疫和血循环方面有一定差异。实验:二 黄黄桂枝五物汤对冻伤、气虚冻伤模型大鼠的作用及其机 理研究方法：Wistar大鼠50只随机分为5组，每组10只，即正常对照组;冻伤模型组；气虚冻伤模型组；冻伤+黄黄桂枝五物汤组；气虚 冻伤+黄黄桂枝五物汤组。组和组采用低温乙醇和水混合浸泡法制备 大鼠冻伤模型，组和组气虚冻伤模型为在气虚模型基础上复加了冻伤 的因素。造模后第2天，各组动物开始绐药，组和组黄茂桂枝五物汤 按相当于生药材4.7g/（kgd）体重给予灌胃，每日2次，连续3天。组、组和组分别给予等量蒸俺水。绐药3天后，测定各组大鼠血流变、TXB2.6-k-PGFa和部分免疫细胞因子的变化及冻伤局部病理改变。结果：黄茂桂枝五物汤可显著降低冻伤模型和气虚冻伤模型全血粘度（低切）、红细胞聚集指数、IL-la、TNF-p的水平，能显著升高红细胞 变形指数、6-k-PGF1a的水平；能显著降低气虚冻伤模型组全血粘度（高 切）、血浆粘度、TXB2 IL-6的水平。结论：黄荏桂枝五物汤对冻伤和气虚冻伤均有一定的作用，且对气虚 冻伤模型各指标的影响更明显，其可能的机理为通过对免疫与血循环的影 响而达到益气活血疗伤的目的。主题词黄黄桂枝五物汤；冻伤；气虚冻伤；动物模型；方证相关ABSTRACTEffects and Meehan i sm Research of Huangq i Gu i zh i wuwu Decoct i on on Model of Frostbite Rats and Qi Df iciency-Frostbite RatsSpecial ity:Chinese medical formulas Author:Yun BAITutor:Assoc.ProfL Yan-yan LIUnder the guidance of TCM theory,to establish models of frostbite and qi deficiency-frostbite rats and to explore the effects and mechanism of Huangqi Guizhiwuwu Decoction(HGD)on them from pathology,immunity and blood circulation.Compare similarities and differences between the two models after givin HWD.The research is divided into two parts,one is establishment of models of frostbite and qi deficiency frostbite rats,the other is to explore the effects and mechanism of HGD on two models.1.Establishment of Models of Frostbite and Qi Deficiency Frostbite Rats Methods:30 Wistar rats were divided into 3 groups randomly,normal control group,model of frostbite group,model of qi deficiency frostbite group.The model of frostbite group was made by soaked rats feet in hypothermia ethanol-water mixture.The model of qi deficiency frostbite rats was prepared by the method of overstrain and irregular diet 2weeks combined with soaking feet in hypothermia ethanol-water mixture.All rats were given equal volumes of distilled water after model established by two times one day.After 3 days,the levels of hemorheology and the contents of TXB2,PGFla and some cytokines in serum of rats were determined by enzyme-linked immunosorbent assay method.Results:Levels of blood viscosity,plasma viscosity,gathering index of red cell,TXB2/6-k-PGFIL-2,IL-6,TNF-。were significantly higher,and levels of erythrocyte deformability,6-k-PGFla were lower in model of jfrostbite ingroup and qi deficiency frostbite group than those in the normal control group.Levels of TXB2,IL-lawere also significantly higher in qi deficiency frostbite group,and TXB2,TXBi/b-k-PGF 1 a was significant higher and TNF-pwas significantly lower than frostbite model.Conclusion:Models of frostbite and qi deficiency-frostbite rats has inflammatory response,immunologic dysfunction and a state of forming thrombus easily.Two models have some differences in pathology,immunity and blood circulation.2.Effects and Mechanism Research of HGD on Models of Frostbite Rats and Qi Dficiency-Frostbite RatsMethods:50 Wistar rats were divided into 5 groups randomly,normal control group,model of frostbite group(F),model of qi deficiency frostbite group(QDF),F+HGD group and QDF4-HGD group.The model of frostbite group was made by soaked rats feet in hypothermia ethanol-water mixture.The model of qi deficiency frostbite rats was prepared by the method of overstrain and irregular diet 2weeks combined with soaking feet in hypothermia ethanol-water mixture.HGD were given by 4.7g/(kg-d),normal control group,F group and QDH group were given equal volumes of distilled water after model established by two times one day.After 3 days,the levels of hemorheology and the contents of TXB2,PGFia and some cytokines in serum of rats were determined by enzyme-linked immunosorbent assay method.Results:Levels of blood viscosity,gathering index of red cell,IL-la,TNF-P were significantly decreased,and levels of erythrocyte deformability,6-k-PGFia were increased after given HGD in models of frostbite rats and qi dficiency-frostbite rats.Beside,levels of plasma viscosity,TXB?,and IL-6 were also significantly decreased after given HGD in the Model of Qi Dficiency-Frostbite Rats.Conclusion:HGD have effects on models of frostbite rats and qi IVdficiency-frostbite rats,inhibiting immunological stress,improving blood circulation and pathological injury.And HGD played a better role in model of qi dficiency frostbite rats than in models of frostbite rats.Keywords Huangqiguizhiwuwu Decoction;Frostbite;Qi DeficiencyFrostbite;Animal models;Correlation Between Syndrome and Decoction刖 S方证相关的理论和临床经验表明，不同的方剂有其适应的病证，而 特定的病证需要有特定的方药进行治疗，“一方一证”、“方随证变”等反 映了方剂与其主治病证之间有高度密切的关系，即“方证相关:若将方 与证结合起来研究，探求其相关程度的大小，有助于加深对方剂制方原 理和配伍关系的理解，有助于揭示其主治病证的作用机理，有助于拓展 古方的运用范围，有助于提高临床用方的针对性，也是创新现代方剂理 论的重要途径。经典方剂具有用药精专，配伍严谨，疗效卓著的特点，选择具有重 要配伍意义和较高临床运用价值的古代名方，建立与其主治病证或药效 相关的病理模型，以探讨方剂配伍规律与作用机制为目标，作为探讨中 医方-证关系的切入点不仅具有理论上的合理性，也具有技术上的可操作 性。本课题拟从黄甚桂枝五物汤和冻伤及气虚冻伤入手，研究二者之间 的相关性。黄茂桂枝五物汤出自金匮要略血痹虚劳病脉证并治，是一首既振 奋阳气.温运血行，又调畅营卫的代表方剂。其临床运用非常广泛，除 血痹证“肌肤麻木不仁”外，凡气血虚弱，寒客脉道，气滞血瘀，脉络瘀 滞，肌肤、四肢失于荣养的病证皆可应用。现代研究表明黄黄桂枝五物 汤可用于糖尿病周围神经病变、微循环障碍、雷诺症、末梢神经炎、类 风湿关节炎、痹症、肩关节周围炎等多种疾病。冻伤是由寒冷所致的末梢部局限性炎症性皮肤病，主要症状是手指、足趾、足缘、耳廓处，因受寒冷刺激，出现紫红色水肿性红斑，边界不 清，边缘常呈鲜红色，压之褪色、遇热剧痒。严重者在红斑的基础上伴 有水疱，糜烂或溃疡。中医理论认为，冻伤乃由皮肤肌肉受寒邪侵袭，经络阻滞，气血运行不畅，血凝气滞，肌肤失养所致。而黄黄桂枝五物 汤证的病机在于阳气不足，寒邪凝滞，血行不畅。根据黄茂桂枝五物汤vn的功效及所治病证的病机，如在冻伤模型基础之上复加气虚因素，则与 黄黄桂枝五物汤所治病证从理论上来说更加合拍。所以本课题拟采用中 医过度疲劳+饮食失节所致气虚证和寒邪伤阳所致冻伤病的中医证病复 合模型气虚冻伤模型。通过建立冻伤和气虚冻伤大鼠模型，研究黄 黄桂枝五物汤配伍机制及作用于冻伤和气虚冻伤两种不同模型产生作用 的同异，分析其作用机理，对于从实证意义上发现“方证相关”的证据和 探察方证相关的科学内涵具有理论上和技术上的可行性。同时研究所获 得的有关实验证据将为黄黄桂枝五物汤组方配伍机制及作用机理提供科 学的解释，有益于更好的指导临床选方用药，为后续的新药研究奠定基 础。其学术意义包括对目前中医复方研究思路及方法的调整，推进学科 的建设和发展及为日后新药研究提供前期基础工作。vin英文缩略词表英文缩写英文全称中文名称IL-lainterleukin-la白细胞介素laIL-2interleukin-2白细胞介素2IL-6interleukin-6白细胞介素6TNF-Ptumor necrosis fector-p肿瘤坏死因子ptxb2thromboxane B2血栓戊烷B26-k-PGFlo6-ketone-prostaglandin Flo6-酮-前列腺素F”ELISAenzyme-linked immunosorbent assay酶联免疫吸附测定黄英桂枝五物汤对冻伤、气虚冻伤模型大鼠的作用及其机理研究正 文本研究在方证相关理论的指导下，建立冻伤及气虚冻伤模型，研究并 比较黄茂桂枝五物汤对冻伤模型大鼠和气虚冻伤模型大鼠的作用及其机 理。主要技术路线图如下。黄黄等药材鉴定湖北中医药大学2010届硕士学位论文第一部分冻伤、气虚冻伤模型大鼠的建立以往的冻伤模型，多采用在动物麻醉的状态下，或将双后肢置于-20 七的95%乙醇中，使组织温度分别冻至0、-10和-20口，或将在液 氮(-196)中将致冷的银元紧贴去毛皮肤5s致伤，或在无菌条件下将 要作用的肌肉游离，用经液氯冷冻后的金属条直接放压在游离的肌肉表面 90s(3o这些模型操作较为复杂，均需麻醉动物(对动物呼吸及血循环有 一定影响)，且冷冻温度过低，造成重度冻伤，又无湿冷因素参与，与临 床实际相差较远。根据冻伤的实际和发病机制，本研究采用低温乙醇和水混合浸泡法制 备大鼠冻伤模型，实验过程中，使用低温恒温槽控制冷冻温度。此方法造 模无需麻醉，冷冻温度低，时间短，有湿冷因素参与，操作简便可靠，有 利于对冻伤进行实验研究。气虚冻伤模型为在气虚模型基础上复加了冻伤的因素，气虚模型采用 过度疲劳+饮食失节的方法。气虚冻伤模型为中医劳累过度和饮食失节所 致气虚证和寒邪伤阳所致冻伤病的中医证病复合模型，其建立可以为中医 气虚冻伤的研究提供模型基础。1材料与方法1.1 主要试剂大鼠白 细胞介素 la(interleukin-la,IL-la)、白细胞介素 2(interleukin-2,IL-2)、白细胞介素 6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子P(tumor necrosis factor-p,TNF-p)血栓戊烷B2(thromboxane B2.TXB2)大鼠 6-酮-前列 腺素 Fla(6-ketone-prostaglandin Fia,6-k-PGFla)酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒，均购自中国人民 解放军总医院科技开发中心放免研究所(批号：20060725)1.2 主要仪器DC-2006低温恒温槽(宁波新芝生物科技股份有限公司)，Spectramax 190连续光谱酶标仪(美国分子仪器公司)，SA-6000血流变检2黄爱桂枝五物汤对冻伤、气虚凉伤模型大鼠的作用及其机理研究测仪（北京赛科希德科技发展有限公司），CX21光学显微镜及成像系统（日本奥林巴斯公司）。13实验动物SPF级Wistar大鼠30只，打3各半，体重（23010）g,动物合格证号 为SCXK（京）2004-0002,中国医学科学院实验动物研究所提供。所有动 物提前一周购入，分笼饲养，5只/笼。光照节律12L：120（6:00-18:00）,室温192,室内保持安静。1.4 动物分组适应性饲养一周后，将30只大鼠随机分为3组，每组10只，即正常 对照组、冻伤模型组、气虚冻伤模型组.冻伤模型组和气虚冻伤模型组动 物参照L5方法制备动物模型，正常对照组动物不施加任何刺激，自然饲 养。造模后第2天，各组动物开始给予蒸镭水，每日2次，连续3天。1.5 动物模型制备1.5.1 冻伤模型制备采用自创实验性动物冻伤模型制备方法叫 将大鼠四肢浸入800ml水 和400ml无水乙醇混合的-2的低温恒温槽内，冷冻L5 min后取出，1次 冷冻即可造成冻伤模型。实验过程中，使用DC-2006低温恒温槽控制冷冻 温度。1.5.2 气虚冻伤模型制备气虚冻伤模型为在气虚模型基础上复加了冻伤的因素。气虚模型采用 过度疲劳+饮食失节的方法。实验前全部动物进行预游泳，剔除游泳时间 少于10分钟、大于20分钟的大鼠。合格造模大鼠于每天上午10:00置于 盛有温水（221）的大塑料桶中游泳10分钟，隔日喂食（隔日禁食，隔日足量给食），连续2周。再按冻伤模型的制备方法进行。1.6 指标检测给药3天后，各组大鼠用20%乌拉垣100mgKg体重腹腔注射麻醉 后，下腔静脉取血5ml,取2ml肝素抗凝，用SA-6000血流变检测仪检测 3湖北中医药大学20】。届硕士学位论文全血粘度、血浆粘度、血细胞比容、红细胞聚集指数及红细胞变形指数等 指标；剩余血液3000rpm离心15min,分离血清，照ELISA试剂盒说明书 操作，检测大鼠 IL-la、IL-2、IL-6,TNF-。、TXB?和 6-k-PGFg含量。并 取冻伤局部皮肤做病理切片，常规HE染色，光学显微镜观察。1.7 统计学兼理各组所得数据均以表示，用SPSS 17.0统计软件进行处理。多组间 均数比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)。2结果2.1 冻伤模型的制备冷冻后，大鼠受冻肢体与正常肢体相比局部皮肤初期呈白色，足趾挛 缩，随后皮肤渐变为紫红色，继而受冻部位肢体开始肿胀，出现水泡，18h 后可见有个别大鼠足趾出现变黑坏死现象。从其冷冻史及外观可以看出，冻伤造模成功。见图1-1和图1-2。图1-1造模用DC-2006低温恒温槽图1-2模型大鼠造模1 d时之冻伤足2.2 病理组织学变化病理切片结果可见正常对照组基底层完好，细胞排列整齐，毛囊完好,结缔组织中胶原纤维排列有序，毛细血管内皮完整；冻伤模型组表皮表面 有坏死，毛细血管扩张，出血；气虚冻伤模型组表皮表面坏死组织较冻伤 模型组少，毛细血管扩张、充血，无明显出血，组织间隙可见明显炎细胞4黄豆桂枝五物汤对冻伤、气虚冻伤模型大鼠的作用及其机理研究浸润。(见后面附图)2.3 冻伤与气虚冻伤模型大鼠血流变的变化表1“冻伤与气虚冻伤模型大鼠血流变的变化(三5,klO)全血粘度切变率(1/s)血浆粘度 红细胞压积1(mPa.S)200(mPa.S)(mPa.S)(L/L)红细胞 变形指数红细胞 聚集指数正常对照组52.199.123.790.671.660.370.390.036.23i0.681.540.39冻伤模型组76.817.04#6.081.242.600.580.400.039.420.911.03i0.18*气虚冻伤 模型组83.25i21.037.231.563.241.25 柳0.420.0610.281.23 府0.830.14 榭注：与正常对照组比较，*尸0.05,捌PV0.01.冻伤与气虚冻伤模型大鼠血流变的改变结果见表1-1和图1-3,由表 1-1和图1-3可见，造模后第3天，与正常对照组相比，冻伤模型组和气 虚冻伤模型组大鼠全血粘度(高切、低切)、血浆粘度、红细胞聚集指数 显著性升高(P0.05或尸0.01),红细胞变形指数显著性降低(P0.01)。(S4省)图1-3-1 大鼠全血粘度切变率(低切)的变化图1-3-2 大鼠全血粘度切变率(高切)的变化图1-3-3大鼠血浆粘度的变化图1-34大鼠红细胞压积的变化5湖北中医药大学2010届硕士学位论文42086420图1-3-5大鼠红细胞聚集指数的变化图13W大鼠红细胞变形指数的变化H3图1-3 冻伤模型组、气虚冻伤模型组血流变的变化1为正常对照组，2为冻伤模型组，3为气虚冻伤模型组 注：与正常对照组比较，#P0.05,楣尸vo.01.2.4 冻伤与气虔冻伤模型大鼠TX&、Qk-PGFg的变化冻伤与气虚冻伤模型大鼠TXBz、6-k-PGF】a的变化结果见表1-2和图 1-4,从表1-2和图1-4可见，造模后第3天，与正常对照组相比，冻伤模 型组和气虚冻伤模型组6-k-PGFg显著降低（尸0.01）,TXB2/6-k-PGFla 比值显著升高（尸0.01）；气虚冻伤模型组TXB2显著升高（尸0.01）,且 TXB2.TXB2/6-k-PGFia比值显著高于冻伤模型组。表12 冻伤与气虚冻伤模型大鼠TXBz、6-k-PGFg的变化（X5,n=10）分 组 TXB2（pg-mL-1）6-k-PGFia（pgmL）TXB2/6-k-PGFlo正常对照组 192.3829.67 5.271.09 38.16i10.68冻伤模型组 241.2043.07 2.690.19*90.04il6.20*气虚冻伤模型组 359.6844.60#*2.45i0.26 捌 148.82i26.77*注：与正常对照组比较，睇产0.01；与冻伤模型组比较，*P0.01.6黄关桂枝五物汤对冻伤、气虚冻伤模型大鼠的作用及其机理研究尽bosss450.00400.00350.00300.00250.00200.00150.00100.0050.000.002 31 I L*1-一 o o o o o o O o o o o o o O 7.6.5,4.3.2.L(w/8d)D 1号+9图1Y-1 大鼠TXB2的变化图152 大鼠6-k-PGF】a的变化23D Ifedli/SXJ200.00180.00160.00140.00120.00100.0080.0060.0040.0020.000.00#*图1-4-3 大 鼠TXB2/6-k-PGF】a比值的变化图14 冻伤模型组、气虚冻伤模型TXBz、6-k-PGF。的变化1为正常对照组，2为冻伤模型组，3为气虚冻伤模型组注：与正常对照组比较，捌尸0.01；与冻伤模型组比较，尸0.01。2.5冻伤与气虔冻伤模型大鼠IL-la.IL-2.IL-6和TNF-p的变化冻伤与气虚冻伤模型大鼠IL-la、IL-2、IL-6和TNF-0的变化结果见 表1-3和图1-5,从表1-3和图1-5可见，造模后第3天，与正常对照组相 比，冻伤模型组和气虚冻伤模型组IL-2、IL-6、TNF-B含量显著升高（P0.05 或P0.01）;气虚冻伤模型组IL-la含量显著升高（尸0初）,且TNF-P 含量显著低于冻伤模型组（尸0.01）。7湖侪修衣学2010届硕士学位论文注：与正常对照组比较，#P0.05,蟀尸V0.01；与冻伤模型组比较，*尸4大鼠TNF-p的变化图1-5 冻伤模型组、气虚冻伤模型组细胞因子的变化1为正常对照蛆，2为冻伤模型组，3为气虚冻伤模型蛆注：与正常对照组比较，#P0.05,附尸V0.01;与冻伤模型组比较，*尸 TXB2.6-k-PGFIaELISA试剂盒，均购自 中国人民解放军总医院科技开发中心放免研究所（批号：20060725）.1.3 主要仪器DC-2006低温恒温槽（宁波新芝生物科技股份有限公司），Spectramaxl90连续光谱酶标仪（美国分子仪器公司），SA-6000血流变检 测仪（北京赛科希德科技发展有限公司）,CX21光学显微镜及成像系统（日 本奥林巴斯公司）。1.4 实验动物SPF级Wistar大鼠50只，各半，体重（230i10）g,动物合格证号 为SCXK（京）2004-0002,中国医学科学院实验动物研究所提供。所有动 物提前一周购入，分笼饲养，5只/笼。光照节律12L：12D（6:00-18:00）,室温19i2,室内保持安静。10黄民桂枝五物汤对冻伤、气虚法伤模型大鼠的作用及其机理研究1.5 动物分组适应性饲养一周后，将50只大鼠随机分为5组，每组10只，即正 常对照组；冻伤模型组；气虚冻伤模型组；冻伤+黄黄桂枝五物汤 组；气虚冻伤+黄茂桂枝五物汤组。-组动物参照L6方法制备动物 模型，正常对照组动物不施加任何刺激，自然饲养。造模后第2天，各组 动物开始给药，组和组黄黄桂枝五物汤按相当于生药材4.7g/(kg-d)体 重给予灌胃，每日2次，连续3天。、和组分别绐予等量蒸镭水。1.6动物模型制备1.6.1 冻伤模型制备采用自创实验性动物冻伤模型制备方法叫 将大鼠四肢浸入800ml水 和400ml无水乙醇混合的-2的低温恒温槽内，冷冻1.5 min后取出，1次 冷冻即可造成冻伤模型。实验过程中，使用DC2006低温恒温槽控制冷冻 温度。1.6.2 气虚冻伤模型制备气虚冻伤模型为在气虚模型基础上复加了冻伤的因素。气虚模型采用 过度疲劳+饮食失节的方法。实验前全部动物进行预游泳，剔除游泳时间 少于10分钟、大于20分钟的大鼠。合格造模大鼠于每天上午10:00置于 盛有温水(22irc)的大塑料桶中游泳10分钟，隔日喂食(隔日禁食，隔日足量绐食)，连续2周。再按冻伤模型的制备方法进行。1.7 指标检测绐药3天后，各组大鼠用20%乌拉坦lOOmgKg体重腹腔注射麻醉 后，下腔静脉取血5mL 取2ml肝素抗凝，用SA-6000血流变检测仪检测 全血粘度、血浆粘度、血细胞比容、红细胞聚集指数及红细胞变形指数等 指标；剩余血液3000rpm离心15min,分离血清，照ELISA试剂盒说明书 操作，检测大鼠IL-la、IL-2、IL-6、TNF-氏 TXB2和 6-k-PGFi.含量。并 取冻伤局部皮肤做病理切片，常规HE染色，光学显微镜观察。1.8 统计学处理各组所得数据均以嚏为表示，用SPSS 17.0统计软件进行处理。多组间11湖北中医药大学2010届硕士学位论文均数比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)。2结果2.1黄黄桂枝五物汤对冻伤模型大鼠的作用及其机理研究2.1.1病理组织学变化病理切片结果可见冻伤模型组表皮表面有坏死，毛细血管扩张，出血;冻伤+黄黄桂枝五物汤组可见上皮细胞增生明显，毛囊数量明显增加，未 见毛细血管扩张，组织间也未见出血。(见后面附图)2.1.2黄茂桂枝五物汤对冻伤模型大鼠血流变的影响黄黄桂枝五物汤对冻伤模型大鼠血流变的影响见表2-1和图2-1,由 表2-1和图2-1可见，造模后第3天，与冻伤模型组相比，冻伤+黄黄桂 枝五物汤组大鼠全血粘度(低切)、红细胞聚集指数显著性降低(P0.05),红细胞变形指数显著性升高(尸V0.05),说明黄茂桂枝五物汤对于冻伤模 型在血流变方面有一定的改善作用。表2-1黄黄桂枝五物汤对冻伤模型大鼠血流变的影响片10)全血粘度切变率(l/s)血浆粘度 红细胞压积 红细胞1(mPa.S)200(mPa.S)(mPa.S)(IVL)聚集指类红细胞 变形指数组别正常对照组52.199.123.790.671.660.370390.036.230.681.540.39冻伤模型组76.817.046.081.242.600.580.400.039.42=b0.911.030.18冻伤+黄黄桂枝 五物汤组64.2310.87，5.2X1.262.21 0.390.400.018.030.79*1.350,22*注:与冻伤模型组比较，*尸0.05。(S.BdE)耳运裕赵耳妈盘铝却100.0090.0080.0070.0060.0050.0040.0030.0020.0010.000.00(SW%)建裁8.OO7.OO6.OO5.OO4.003.002.OD1.OO0.OO图21-1 大鼠全血粘度切变率(低切)的变化图2-1-2大鼠全血粘度切变率(高切)的变化12黄黄桂枝五物汤对冻伤、气虚冻伤模型大鼠的作用及其机理研究图2-1-3 大鼠血浆粘度的变化图2-1S大鼠红细胞压积的变化12.00图2-1-5大鼠红细胞聚集指数的变化2.50图2-1-6大鼠红细胞变形指数的变化图2-1 黄黄桂枝五物汤对冻伤模型大鼠血流变的影响1为正常对照组，2为冻伤模型组，3为冻伤+黄黄桂枝五物汤蛆注:与冻伤模型组比较，*P0.05.2.1.3 黄茂桂枝五物汤对冻伤模型大鼠TXB2、6-k-PGFia的影响黄茂桂枝五物汤对冻伤模型大鼠TXB2.6-k-PGFh的影响结果见表 2-2和图2-2,从表2-2和图2-2可见，造模后第3天，与冻伤模型组相比,冻伤+黄黄桂枝五物汤组6-k-PGFg的水平显著升高(尸0.05),TXB2/6-k-PGFia比值显著降低(P 6-k-PGFk的变化1为正常对照组，2为冻伤模型组，3为冻伤十黄黄桂枝五物汤蛆 注：与冻伤模型组比较，*P0.05,*尸0.012.1.4 黄黄桂枝五物汤对冻伤模型大鼠IL-la、IL-2、IL-6和TNF-0的影响 黄茂桂枝五物汤对冻伤模型大鼠ILla、IL-2、IL-6和TNF-B的影响 结果见表2-3和图2-3,从表2-3和图2-3可见，造模后第3天，与冻伤模】4黄英桂枝五物汤对冻伤、气虚冻伤模型大鼠的作用及其机理研究型组相比，冻伤+黄黄桂枝五物汤组IL-la.TNF-p的水平显著降低（P0.05 或尸0.01），说明黄黄桂枝五物汤对于冻伤在细胞因子方面有一定的改善 作用。表2-3黄黄桂枝五物汤对冻伤模型大鼠IL-la、EL-2、IL-6和TNFB的影响（三出，n=10）分组正常对照组冻伤模型组冻伤+黄黄桂枝 五物汤组IL-la(pgmL)48.98=t4.0060.5412.1243.36i9.17*IL-2(pgml)69.955.2390.15i8.5173.446.59IL-6(pgmL-1)63.06 13.98208.2547.49161.50i34.53TNF-P(pg-mL)2.230.4013.883.912.850.98*注：与冻伤模型组 比较，*尸0.05,*P0.01.cuybod)IlI图2-31 大鼠IL-1 a的变化0.00图23-2大鼠IL-2的变化(w/8d)9-d(W M)Z L I图2-3-3 大鼠IL-6的变化图2-3”大鼠TNF-P的变化图2-3 黄黄桂枝五物汤对冻伤模型大鼠细胞因子的影响1为正常对照组，2为冻伤模型组，3为冻伤+黄黄桂枝五物汤组 注：与冻伤模型组比较，尸0.05,*P0.0115湖北中医药大学20】0届硕士学位论文2.2黄黄桂枝五物汤对气虚冻伤模型大鼠的作用及其机理研究2.2.1 病理组织学变化病理切片结果可见气虚冻伤模型组表皮表面有坏死，毛细血管扩张,充血，无明显出血；气虚冻伤+黄茂桂枝五物汤组可见上皮细胞增生明显,毛囊数量增加，毛细血管未见异常变化，组织间白细胞浸润较气虚冻伤模 型组少。（见后面附图）2.2.2 黄茂桂枝五物汤对气虚冻伤模型大鼠血流变的影响表2d 黄黄桂枝五物汤对气虚冻伤模型大鼠血流变的影响（工=10）组另11全血粘度切变率（1/S）血浆粘度红细胞压积红细胞红细胞1(mPa.S)200(mPa.S)(mPa.S)(L/L)聚集指数变形指数正常对黑组52.199.123.790.671.660.370.32.036.230.681.540.39气虚冻伤 模型组83.2521.037.231.563.241.250.420.0610.28il.230.830.14气虔冻伤+黄黄自任 H 乂 CZ.366.8313.40*5.060.99*1.82i0.43*0.390.037.833 59*1.120.20*注：与气虚冻伤模型组比较，*P0.05,*P0.01.黄黄桂枝五物汤对气虚冻伤模型大鼠血流变的影响结果见表24和图 2-4,由表2-4和图2-4可见，造模后第3天，与气虚冻伤模型组比较，气 虚冻伤+黄黄桂枝五物汤组大鼠全血粘度（低切、高切）、血浆粘度、红细 胞聚集指数显著性降低（PV0.05或尸V0.01）,红细胞变形指数显著性升高（P0.01）,说明黄黄桂枝五物汤对于气虚冻伤在血流变方面有一定的改 善作用。(s d%)图2-4-2大鼠全血粘度切变率（高切）的变化图2Y-1 大鼠全血粘度切变率（低切）的变化16黄芟桂技五物汤对冻伤、气虚冻伤模型大鼠的作用及其机理研究i ss图25”大鼠红细胞压积的变化0.00图2Y-6 大鼠红细胞变形指数的变化图2-4-5大鼠红细胞聚集指数的变化图2-4黄黄桂枝五物汤对气虚冻伤模型大鼠血流变的影响1为正常对照组，2为气虚冻伤模型组，3为气虚冻伤十黄黄桂枝五物汤组 注：与气虚冻伤模型组比较，尸0.05,*P0.01.223黄黄桂枝五物汤对气虚冻伤模型大鼠TXBz、6-k-PGFg的影响黄黄桂枝五物汤对气虚冻伤模型大鼠TXBz、6-k-PGFh的影响结果见 表2-5和图2-5,从表2-5和图2-5可见，造模后第3天，与气虚冻伤模型 组相比，气虚冻伤+黄黄桂枝五物汤组6-k-PGFh的水平显著升高（尸0.05）,TXB2的水平、TXB2/6-k-PGFia比值显著降低（?0.01）。说 明黄黄桂枝五物汤对于气虚冻伤在TXB2.6-k-PGFia方面有一定的改善作 用。17湖北中医药大学2010届硕士学位论文表2-5 黄黄桂枝五物汤对气虚冻伤模型大鼠TXB2.6-k-PGFia的影响(x k=10)分 组 TXB2（pgmL）6-k-PGFMpgmL）TXB2/6-k-PGFla正常对照组192.3829.675271.0938.1610.68气虚冻伤模型组359.68i44.602.450.26148.8226.77气虚冻伤+黄黄桂枝五物汤组251.836535*3.650.87*73.7429.22*注：与气虚冻伤模型组比较，*P0.05,*P0.0U图2-5-2 大鼠