沙眼衣原体质粒编码蛋白3的致病性及免疫保护性研究.pdf

Chin J Dermato Venerol Integ Trad W Med 2024,Vol.23 No.1基金项目：国家自然科学基金（编号：31770194）；天津市自然科学基金（编号：18JCYBJC92500）；天津市医学重点学科（专科）建设项目（编号：TJYXZDXK-057B）。通信作者：侯淑萍，E-mail：housp_沙眼衣原体质粒编码蛋白3的致病性及免疫保护性研究邓晗1，程瑞琴2，陈土地1，宋雅欣1，梁银迎1，李平露1，赵婉星1，马璟玥1，王惠平1，侯淑萍1（1.天津医科大学总医院，天津300052；2.天津河西区瑞普眼科医院，天津300204）摘要：目的探索沙眼衣原体（CT）质粒编码蛋白3（Pgp3）的致病性及免疫保护性。方法CT L2构建株（GFP）、野生株（WT）和质粒缺失株（PF）分别感染Hela细胞，蛋白质免疫印迹法（Western blotting）和间接免疫荧光法（IFA）检测Pgp3蛋白表达水平；L2 GFP、WT和PF菌株经阴道分别感染C3H小鼠，感染后不同时间点经IFA评估生殖道包涵体形成单位（IFU）数量；组氨酸标记的Pgp3（His-Pgp3）体外刺激人输卵管上皮细胞，24 h后经Hoechst 33 528染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况；L2 WT体外感染L929和L929-Pgp3细胞，在感染后30、60及80 h固定细胞并计算IFU和细胞核数量。L2 GFP和WT菌株经阴道分别感染C3H小鼠，50 d后各组均以L2 WT菌株攻毒，攻毒后不同时间点评估生殖道IFU数量。结果L2 GFP Pgp3蛋白表达水平高于L2 WT，L2 PF无Pgp3蛋白表达；小鼠感染后第3、7、10和14天，L2 GFP感染组IFU数量显著高于L2 WT和L2 PF感染组，且L2 GFP组感染周期最长；Pgp3体外干预组细胞凋亡率显著低于空白组，L2 WT体外感染L929和L929-Pgp3细胞60 h和80 h后，L929-Pgp3组IFU值显著高于L929组，且宿主细胞消亡数量显著低于L929组；动物实验显示L2 GFP组经L2 WT菌株攻毒后下生殖道IFU数量显著低于L2 WT组，且L2 GFP组感染周期显著短于L2 WT组。结论Pgp3可抑制宿主细胞凋亡并促进CT在细胞间播散感染；内源性Pgp3有良好的免疫保护性。关键词：沙眼衣原体；质粒编码蛋白3；致病性；免疫保护性中图分类号：R374.1文献标识码：A文章编号：（24）01-0066Pathogenicity and Immune Protection of Chlamydia Trachomatis Plasmid-encoded 3Deng Han1，Cheng Ruiqin2，Chen Tudi1，Song Yaxin1，Liang Yinying1，Li Pinglu1，Zhao Wanxing1，Ma Jingyue1，WangHuiping1，Hou Shuping11.Tianjin Medical University General Hospital，Tianjin 300052，China；2.Ruipu Eye Hospital in Hexi District，Tianjin300204，ChinaAbstract:ObjectiveIn order to investigate pathogenicity and immune protection of Chlamydia trachomatis（CT）plasmid-encodedprotein3（Pgp3）.MethodsHela cells were infected with Chlamydia trachomatis L2 green fluorescent protein（GFP），wild type（WT）and plasmid free（PF）strains respectively，and Pgp3 protein expression was detected by Western blottingandindirectimmunofluorescence assay（IFA）.C3H mice were infected respectively with L2 GFP，WT and PF strains vaginally.After infection，the number of reproductive inclusion body forming unit（IFU）was assessed by IFA at different time points.Human tubal epithelial cells were stimulated with His-Pgp3 in vitro，and Hoechst 33 528 staining as well as flow cytometrywere used to detect cell apoptosis after 24 h.L929 and L929-Pgp3 cells were infected by L2 WT strain in vitro.The number ofIFU and nuclei were calculated by fixed cells at 30，60 and 80 h after infection，respectively.C3H mice were respectivelyinfected with L2 GFP and WT strains vaginally.After 50 days，each group was challenged with L2 WT strains.Afterchallenged，the number of IFU in lower reproductive tract of mice was evaluated at different time points.ResultsTheexpression level of Pgp3 protein in L2 GFP was higher than that in L2 WT，and no Pgp3 protein was expressed in L2 PF.On3，7，10 and 14 d after infection，the number of IFU in L2 GFP group was significantly higher than that in L2 WT and L2 PFgroups，and the L2 GFP group had the longest infection period.The apoptosis rate of Pgp3 intervened cells was significantlylower than that of blank group.After L929 and L929-Pgp3 cells was infected by L2 WT strain for 60 h and 80 h，the numberof IFU in L929-Pgp3 group was significantly higher than that in L929 group，and the number of host cell loss was significantlylower than that in L929 group.Animal experiments showed that the number of IFU in the lower reproductive tract of L2 GFP论著6中国中西医结合皮肤性病学杂志2024年第23卷第1期group was significantly lower than that of L2 WT group，and the infection period of L2 GFP group was significantly shorter thanthat of L2 WT group.ConclusionPgp3 can inhibit the apoptosis of host cells and promote the spread of CT among cells.Endogenous Pgp3 has good immune protection.Key words:Chlamydia trachomatis；Plasmid-encoded protein 3；Pathogenicity；Immune protection沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，CT）是一种专性细胞内寄生的革兰阴性致病菌，是性传播疾病的主要原因之一1。据估计全球每年有1.27亿人感染CT，CT已成为世界性的公共卫生问题2。CT根据主要外膜蛋白（Major outer membrane protein，MOMP）变化分为多种血清型，血清AC型 可引起沙眼、致盲；血清DK型 可引起性传播疾病，并可导致不孕症、异位妊娠和盆腔炎等并发症；血清L1L3可从生殖道扩散至淋巴系统，导致性病性淋巴肉芽肿3，其中L2型 进一步被分为L2a、L2b型，且L2b型 在男性行为者中高度流行4。CT含有1个长度约为7.5 kb的隐性质粒，编码8个开放阅读框，通常称为质粒编码蛋白1-8（Pgp1-8），不同质粒蛋白在其生命周期和致病机制中发挥不同的作用5。Pgp3是唯一分泌到宿主胞质中的质粒编码蛋白，已被鉴定为CT感染的关键毒力蛋白之一6。Pgp3是一种稳定的三聚体，通过其M段与人抗菌肽多肽-37（LL-37）结合形成稳定的复合物，从而抑制LL-37的抗衣原体活性7，并利用LL-37增强其自身的促炎活性发挥致病作用8。另外，CT为了维持其胞内生存周期，通过多种途径来改善宿主细胞的生存状态，其中抑制细胞凋亡是CT延长宿主细胞寿命的重要策略之一。有研究表明，Pgp3可通过上调帕金森病蛋白（DJ-1）表达激活细胞外调节蛋白激酶（ERK 1/2）信号通路来抑制宿主细胞凋亡9，还可能通过激活核因子相关因子2/醌氧化还原酶（Nrf2/NQO1）信号通路调节氧化应激反应，其诱导的抗氧化作用促进CT的传染性10。Pgp3是衣原体优势抗原，有研究表明，Pgp3 DNA疫苗可以抑制D型CT感染并且产生免疫保护作用11；重组D型Pgp3蛋白疫苗能抑制鼠肺炎衣原体（Chlamydia muridarum，CM）上行感染，减少输卵管积水的发生12。本课题组 前期的研究表明，L2构建株（GFP）Pgp3蛋白表达水平高于L2野生株（WT），其余蛋白表达水平差异均无统计学意义。另外L2型CT与D型CT在小鼠体内致病性相似，且L2型CT体外更易培养，因此本研究将L2 GFP作为研究对 象，旨在探索内源性Pgp3的致病性及免疫保护性。1资料与方法1.1一般资料1.1.1细胞株和菌株Hela细胞株和人输卵管上皮细胞株保存于天津市性传播疾病研究所；L929细胞株、L929-Pgp3细胞株（转染Pgp3的L929细胞）、L2 GFP、L2 WT和L2 PF菌株均由美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心钟光明教授提供。1.1.2主要试剂及仪器兔抗CT抗体购自美国Bio-Rad公司；鼠抗Pgp3mAb和MOMPmAb实验室保存；辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗鼠免疫球蛋白（IgG）和Alexa Fluor 594标记的山羊抗鼠IgG购自中山金桥公司；异硫氰酸荧光素（FITC）标记的山羊抗兔IgG购自美国Abcam公司；4，6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）及二苯甲亚胺（Hoechest）33258购自北京索莱宝公司；磷脂结合蛋白标记的藻红蛋白（PE-Annexin V）细胞凋亡试剂盒购自美国BD公司；组 氨酸标记的Pgp3（His-Pgp3）蛋白购自北京爱必信生物技术有限公司；胎牛血清及DMEM细胞培养基购自美国赛默飞世尔科技（中国）有限公司；荧光显微镜购自德国蔡司公司，化学发光成像仪购自美国伯乐公司，流式细胞仪购自美国贝克曼库尔特公司。1.1.3小鼠饲养及实验分组56周龄雌性无特定病原（SPF）级C3H小鼠购于北京华阜康生物科技有限公司质量合格编号：SCXK（京）2019-0008，饲养于天津瑞普生物技术股份有限公司空港分公司实验动物中心（实验动物许可证号：SYXK2021-0004），按照 实验随机分5组，每组5只，包括感染组：L2GFP组、L2 WT组、L2 PF组；攻毒组：L2 GFP组 和L2 WT组。伦理编号：IRB2022-DWFL-129。1.2方法1.2.1细胞培养及CT培养将1105个/mL Hela细胞、L929细胞和L929-Pgp3细胞接种至24孔板，待细胞生长密度至80%时，弃掉培养基。30 g/mL的二乙氨乙基葡聚糖（DEAE-D）液处理30 min，换不含血清的DMEM培养基，将各菌株接种于24孔板，细胞孵箱放置1 h，32，离心半径为7.6 cm，7Chin J Dermato Venerol Integ Trad W Med 2024,Vol.23 No.11 500 r/min离心1 h，更换含10%胎牛血清和放线菌酮（终浓度为1 g/mL）的DMEM培养基，37 孵箱中继续培养。1.2.2Pgp3蛋白表达水平检测蛋白质免疫印迹法（Western blotting）测定L2 GFP、WT和PF中Pgp3蛋白表达。各菌株按照 上述方法感染Hela细胞，培养24 h和44 h时分别收集细胞，4，离心半径为9.8 cm，10 000 r/min离心5 min，取上清经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离蛋白样品，转移至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，5%脱脂牛 奶 室 温 封 闭2 h，加 入 鼠 抗Pgp3mAb和MOMPmAb，4 孵育过夜后，加入HRP标记的山羊抗鼠IgG，37 下孵育1 h，洗膜显色。间接免疫荧光法（IFA）检测L2 GFP、WT和PF菌株中Pgp3蛋白的表达。各菌株感染Hela细胞36h后经预冷的4%多聚甲醛固定，磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤3次，0.1%聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100）室温处理10 min，PBS洗涤3次；用含10%胎牛血清的DMEM封闭处理1 h；兔抗CT（12 000稀释）和鼠抗Pgp3mAb（12 000稀释）抗37 孵育1 h，PBS洗涤3次后加入异硫氰酸荧光素（FITC）标记的山羊抗兔IgG（绿色，1300稀释）、Alexa Fluor594标记的山羊抗鼠IgG（红色，1300稀释）抗和DAPI染色，37 避光孵育1 h；PBS洗涤3次，在荧光显微镜下观察Pgp3表达。1.2.3小鼠生殖道L2感染模 型 建立C3H小鼠在感染前5 d皮下注射2.5 mg孕酮，以促进小鼠对CT的易感性，将2105包涵体形成单位（IFU）的菌株悬浮于10 L蔗糖-磷酸-谷氨酸（SPG）缓冲液中，经阴道接种于小鼠下生殖道。每隔3 d或7 d用医用拭子收集阴道脱落细胞，每个拭子浸入500 L冷蔗糖-磷酸-谷氨酸（SPG）中，玻璃珠涡旋振荡并稀释，接种到单层HeLa细胞中，经IFA计算IFU数量，并以Log10表示。1.2.4细胞凋亡检测His-Pgp3刺激人输卵管上皮细胞24 h后固定细胞，每孔加入200 L二苯甲亚胺（Hoechest）33258，避光染色5 min后用PBS清洗，荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。接种人输卵管上皮细胞的24孔板，加入不含血清的DMEM培养基，50 g/mL的His-Pgp3刺激细胞，放入孵箱培养24 h后胰酶消化收集细胞，加入100 L结合缓冲液重悬细胞，调整细胞数为1105个/mL，取100 L细胞悬液转移至流式管中避光加入5 L PEAnnexin V和5 L 7-氨基放线菌素（7-ADD），染色15 min后加入400 L 1结合缓冲液，1 h内流式上机检测凋亡情况。1.2.5免疫荧光检测IFU和细胞核将拭子收集的小鼠阴道脱落细胞接种至Hela细胞，36 h后Hela细胞经预冷的4%多聚甲醛固定，PBS洗涤3次，0.1%聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100）室温处理10 min，PBS洗涤3次；用含10%胎牛血清的DMEM封闭处理1 h；兔抗CT 抗（12 000稀释）37 孵育1 h，PBS洗涤3次后加入FITC标记山羊抗兔IgG 抗（绿色，1300稀释）和DAPI染色，37避光孵育1h；PBS洗涤3次，在荧光显微镜下计数包涵体数量。L929和L929-Pgp3细胞感染L2 WT后，按照 上述方法分别在30、60和80 h固定细胞，计数细胞核和IFU数量。1.2.6内源性Pgp3免疫保护性检测以2105IFU的L2 GFP和WT经阴道感染小鼠，每隔3 d或7 d测定下生殖道IFU数量。感染50 d后，以1106IFU的L2 WT菌株再次攻毒小鼠，攻毒后在不同时间点评估小鼠下生殖道IFU数量。1.3统计学分析应用GraphPad Prism 8软件进行数据分析，符合正态分布的计数资料用均数标准差（）表示，组 间比较采用t检验，多样本均数间比较采用单因素ANOVA方法，P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1L2 GFP Pgp3表达水平高于L2 WT和PFL2GFP、WT、和PF菌株分别感染Hela细胞，提取细胞总蛋白做Western blotting分析，结果显示：在不同时间点，L2 GFP和WT均在28 ku（Pgp3）出现条带，L2 PF则无条带显示，且L2 GFP菌株Pgp3蛋白表达水平始终高于L2 WT菌株，见图1A。L2 GFP、WT和PF菌株感染Hela细胞36 h后荧光染色，结果显示：L2 GFP比L2 WT表达更多Pgp3蛋白而L2 PF无Pgp3蛋白表达，见图1B，这与Western blotting结果一致。2.2小鼠下生殖道L2GFP感染力高于WT和PF将等量L2 GFP、WT和PF经阴道感染C3H/HeJ小鼠，不同时间点评估各菌株在小鼠下生殖道的生长增殖情况。结果显示：在感染后第3、7、10和14天，L2GFP组 生殖道载菌量始终高于L2 WT和PF组；L2 WT8中国中西医结合皮肤性病学杂志2024年第23卷第1期图 1不同 L2 菌株 Pgp3 表达情况A：Western blotting检测不同菌株Pgp3表达水平；B：IFA检测不同菌株Pgp3表达水平，蓝色荧光为Hela细胞核，红色荧光为Pgp3蛋白，绿色荧光为包涵体AB28 ku45 ku和PF组 在下生殖道感染持续时间明显短于L2 GFP组，L2 GFP组 感染时间持续至第35天，L2 PF组 持续到第10天，L2 WT组 感染时间持续至第14天，见图2。2.3Pgp3抑制宿主细胞凋亡并促进CT在细胞间播散感染重组 的His-Pgp3刺激人输卵管上皮细胞24 h，Hoechst 33258染色，见图3A，及流式细胞术，见图3B，均显示Pgp3刺激组 细胞凋亡率低于空白组（P0.05），见图3C；在荧光显微镜下观察CT包涵体及宿主细胞核并计数，见图4A，感染后30 h，L929-Pgp3与L929细胞中IFU数量差异无统计学意义；感染后60 h和80 h，L929-Pgp3细胞中IFU高于L929细胞中包涵体数量（P0.05，P0.01），见图4B，且在L929-Pgp3细胞中CT形成子代感染并产生较大菌斑；感染后80 h，L929-Pgp3细胞中宿主细胞消亡数量显著低于L929细胞（P0.000 1），见图4C。表明外源性和内源性Pgp3均可抑制宿主细胞凋亡且内源性Pgp3可促进CT在细胞间的播散感染。2.4内源性Pgp3蛋白免疫保护性评估小鼠感染L2GFP和WT50d后，经L2WT攻毒，攻毒后第3天，L2 GFP组 小鼠生殖道IFU数量显著低于L2 WT组，且L2 GFP组 感染周期明显短于L2 WT组，L2 GFP组 仅在第3天培养阳性，而L2 WT组 感染持续至第14天，见图5。3讨论L2 GFP菌株是将重组 的GFP标记的质粒转化到L2 PF菌株，理论上，除表达绿色荧光外，L2 GFP与L2 WT差异无统计学意义。但课题组 前期研究显示，L2 GFP中Pgp3蛋白表达水平高于L2 WT，但其他质粒编码蛋白表达水平差异均无统计学意义13。CT感染往往倾向于持续性，且Pgp3在CT持续感染中发挥至关重要的作用14；PF15以及Pgp3无效突变株16在小鼠生殖道感染模 型 中均表现出减弱的感染能力，且诱导输卵管积水以及炎性浸润的能力高度减弱，这与笔者的研究结果相似，L2 GFP菌株因表达更多Pgp3在小鼠下生殖道持续感染时间显著长于其他菌株。CT为在宿主体内持续感染，必须调节细胞凋亡。因此，CT可通过多种机制抑制宿图 2不同时间点小鼠下生殖道感染情况图 3外源性 Pgp3 刺激细胞凋亡情况A：Hoechst 33258染色图；B：细胞凋亡流式图（右上象限表示晚期凋亡的细胞比率，右下象限表示早期凋亡的细胞比率）；C：Hoechst 33258染色细胞凋亡比较。蓝色荧光为细胞核，亮蓝色荧光为细胞凋亡ABC9Chin J Dermato Venerol Integ Trad W Med 2024,Vol.23 No.1图 4L2 WT 菌株感染 L929 和 L929-Pgp3 细胞情况A：荧光显微镜观察L2 WT感染L929和L929-Pgp3细胞情况；B：比较L929和L929-Pgp3细胞在不同时间点IFU的差异；C：比较L929和L929-Pgp3细胞在不同时间点细胞核数量的差异。蓝色荧光为细胞核，绿色荧光为包涵体图 5再次攻毒后不同时间点小鼠下生殖道感染情况50 d后小鼠经L2 WT攻毒，不同时间点取生殖道分泌物经IFA计算IFU，结果用Log10表示主凋亡，如可能通过激活磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1（PDPK1-MYC）和增强己糖激酶的线粒体结合17以及可能通过丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶（MAPK/ERK）生存途径诱导抗凋亡蛋白基因（Bag-1）18来抑制宿主细胞凋亡。Pgp3作为CT持续感染的重要毒力因子也有抑制宿主细胞凋亡作用，已有研究表明Pgp3可能通过磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶（PI3K-AKT）介导的鼠双微体基因2-p53（MDM2-p53）轴19以及可能通过增强抗凋亡蛋白（Bcl-2）降低胱天蛋白酶-3（Caspase-3）和促凋亡蛋白（Bax）的表达来抑制肿瘤坏死因子-（TNF-）诱导的细胞凋亡20。为研究Pgp3抗凋亡作用，本研究将重组Pgp3体外刺激人输卵管上皮细胞，结果显示干预组 细胞凋亡率显著低于对 照 组；进一步选用稳定转染Pgp3的L929细胞，在感染L2 WT 80 h后，笔者认为L929-Pgp3细胞消亡数量显著低于对照 组，说明外源性Pgp3和内源性Pgp3均可抑制宿主细胞凋亡。Pgp3在宿主体内有促进衣原体播散感染的作用。衣原体可从下生殖道通过宫颈屏障进入子宫内膜腔，再通过子宫输卵管连接处进入输卵管，诱导输卵管积水，因此上行感染输卵管需要衣原体通过细胞裂解从一个细胞扩散到另一个细胞21。有研究显示Pgp3缺失的CM株不能从生殖道播散到胃肠道22。课题组 前期的研究表明Pgp3在体外可以促进巨噬细胞和树突状细胞的吞噬功能，这可能有助于CT在宿主体内的播散感染23。本研究显示在感染L2 WT的L929-Pgp3细胞中，CT包涵体数量显著高于L929细胞组，且在感染后期形成较大的菌斑，提示内源性Pgp3可促进CT在细胞间播散感染。CT有许多免疫性蛋白，如多态膜蛋白（Pmps）、MOMP和衣原体蛋白酶样活性因子（CPAF），均被选为优势抗原24-26。目前CT疫苗研究大多数集中在CTMOMP上，但有研究表明单独使用MOMP应用于衣原体感染的动物模 型 中，效果欠佳，需要有效的载体传递系统或者高效的佐剂来辅助免疫应答27。Pgp3是CT一种分泌型 蛋白，有良好的免疫原性28，已有研究表明小鼠接种重组 的Pgp3蛋白，其血清可产生针对Pgp3的特异性IgG抗体，以及辅助型T细胞1（Th1）免疫反应，如产生干扰素-（IFN-）12。有研究表明，使用鼠衣原体WT免疫小鼠，56 d后WT再次攻毒小鼠生殖道，发现WT可诱导小鼠生殖道产生免疫保护作用，且衣原体感染周期较前缩短29。为了探究内源性Pgp3的免疫保护作用，本研究用L2 WT攻毒小鼠，发现L2 GFP组 小鼠生殖道衣原体的载菌量比L2 WT组 的载菌量低，且L2GFP组 感染周期比L2 WT组 感染周期更短，提示内源性的Pgp3可诱发较好的免疫保护作用。因此内源性Pgp3是否可作为潜在疫苗的研究对 象呢？在之后的小鼠感染模 型 中，应进一步检测小鼠血清的抗体水平及各种细胞因子水平，明确内源性Pgp3是如何产生免疫保护机制，为衣原体的疫苗研发提ABC10中国中西医结合皮肤性病学杂志2024年第23卷第1期供更坚实的基础。另外，Pgp3可以促进CT的传播，造成CT的持续感染，那么Pgp3在小鼠体内通过何种途径促进CT的感染呢？在之后的研究中，不仅要评估小鼠下生殖道的衣原体载量，还要评估输卵管的衣原体载量及其病理变化，进一步阐明Pgp3促进CT感染的致病机制，为衣原体疾病的预防及治疗提供新的思路和策略。综上所述，本研究探索了CT Pgp3的致病性及免疫保护性，通过研究确定了Pgp3抑制宿主凋亡及促进CT在细胞间播散感染，且内源性Pgp3蛋白有良好的免疫保护性。参考文献：1LausenM，ChristiansenG，BouetGuldb覸kPoulsenT，etal.Immunobiology of monocytes and macrophages during Chlamydiatrachomatis infectionJ.Microbes Infect，2019，21：73-84.2RowleyJ，VanderHoornS，KorenrompE，etal.Chlamydia，gonorrhoea，trichomoniasis and syphilis：Global prevalence andincidence estimates，2016J.Bull World Health Organ，2019，97：548-562.3Kuo CC，Wang SP，Holmes KK，et al.Immunotypes of Chlamydiatrachomatis isolates in Seattle，WashingtonJ.Infect Immun，1983，41：865-868.4de Vries HJC，de Barbeyrac B，de Vrieze NHN，et al.2019 European guideline on the management of lymphogranuloma venereumJ.J Eur Acad Dermatol Venereol，2019，33：1 821-1 828.5Zhong G.Chlamydial plasmid-dependent pathogenicityJ.TrendsMicrobiol，2017，25：141-152.6Li Z，Chen D，Zhong Y，Wang S，et al.The chlamydial plasmid-encoded protein Pgp3 is secreted into the cytosol of Chlamydia-infected cellsJ.Infect Immun，2008，76：3 415-3 428.7Hou S，Dong X，Yang Z，et al.Chlamydial plasmid-encoded virulence factor Pgp3 neutralizes the antichlamydial activity of humancathelicidin LL-37J.Infect Immun，2015，83：4 701-4 709.8Hou S，Sun X，Dong X，et al.Chlamydial plasmid-encoded virulence factor Pgp3 interacts with human cathelicidin peptide LL-37to modulate immune responseJ.Microbes Infect，2019，21：50-55.9Luo F，Shu M，Gong S，et al.Antiapoptotic activity of Chlamydiatrachomatis Pgp3 protein involves activation of the ERK1/2 pathwaymediated by upregulation of DJ-1 proteinJ.Pathog Dis，2019，77：ftaa003.10 Shu M，Lei W，Su S，et al.Chlamydia trachomatis Pgp3 proteinregulates oxidative stress via activation of the Nrf2/NQO1 signalpathwayJ.Life Sci，2021，277：119 502.11 Donati M，Sambri V，Comanducci M，et al.DNA immunization withPgp3 gene of Chlamydia trachomatis inhibits the spread ofchlamydial infection from the lower to the upper genital tract inC3H/HeN miceJ.Vaccine，2003，21：1 089-1 093.12 Luan X，Peng B，Li Z，et al.Vaccination with MIP or Pgp3 inducescross-serovar protection against 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