miR-129用于前列腺癌诊治及预测临床预后的研究_赵晓东.pdf

NJA中华男科学杂志National Journal of AndrologyZhonghua Nan Ke Xue Za Zhi2022，28(11):996 1005http:/www androl cn论著Clinical esearch(临床研究)mi-129 用于前列腺癌诊治及预测临床预后的研究赵晓东1，唐子璐1，王祖恒1，董杰2，许松1，2(1 南京医科大学金陵临床医学院，江苏 南京 210002;2 南京大学医学院附属金陵医院/东部战区总医院泌尿外科，江苏 南京 210002)【摘要】目的:通过观察 mi-129 与前列腺癌(PCa)进展的相关关系，探究 mi-129 在 PCa 诊治及预测临床预后中的价值。方法:回顾性分析 2014 年 1 月至 2022 年 1 月于东部战区总医院泌尿外科就诊的 310 例男性患者。其中健康对照组 80 例，BPH 组 80 例，PCa 组 150 例(均接受根治性前列腺切除术，未接受化疗、放疗或雄激素剥夺治疗)。留取受试者的血液标本，采用实时荧光定量 PC 检测 310 名受试者的血清 mi-129 表达水平并分析其有无统计学差异。收集 150 例 PCa 患者的原发性 PCa 组织和对应的癌旁前列腺组织(距离病灶3 cm)样本，所有 PCa 组织的病理学分级均由经验丰富的病理学家完成。记录每位患者的人口学数据和临床参数，包括年龄、体质指数(BMI)、临床分期、Gleason 评分、手术边缘状态、血管淋巴浸润状态、精囊浸润状态和生化复发(BC)情况。采用 T-qPC 测定组织样本中的 mi-129 含量，分析其与上述人口学数据和临床参数的关系。选用 PC-3 和 DU-145 细胞系并分别转染 mi-129 precursor 或 mi-129 scramble。通过细胞增殖测定和蛋白质印迹分析评估各组细胞系的增殖能力及相关蛋白的表达水平，比较分析其结果。结果:与健康男性和 BPH 患者相比，PCa 患者的血清 mi-129 表达水平显著降低(P 0 01);与癌旁前列腺组织相比，PCa 组织中 mi-129 表达水平显著降低(P 均 0 01)。mi-129 的表达水平与术前血清特异性抗原(PSA)水平(P 0 001)、组织学分级(P 0 001)、病理分期(P 0 001)、Gleason 评分(P 0 001)、淋巴结转移(P=0 02)、血管淋巴侵袭(P=0 021)和生化复发(P=0 001)均呈负相关。Kaplan-Meier 分析表明，PCa 组织中低 mi-129 表达水平与较低的无 BC 生存率密切相关。多变量生存分析表明，mi-129 表达水平可能是 PCa 患者无 BC 生存率的独立预后指标(P 0 001)。高水平的mi-129 可能通过调控细胞周期调节蛋白的表达显著抑制 PCa 细胞的生长。结论:mi-129 水平在 PCa 患者的血清及 PCa 组织中均显著下调。mi-129 水平的降低在 PCa 细胞的增殖、肿瘤进展中有重要作用，并与低无 BC生存率密切相关。因此，mi-129 可被认为是一种新的 PCa 诊治及预测临床预后的生物标志物。【关键词】mi-129;前列腺癌;诊断和治疗;预测预后;生化复发中图分类号:737 25文献标识码:Adoi:10 13263/j cnki nja 2022 11 005mi-129 in the diagnosis，treatment and prediction of clinical prognosis of prostate cancerZHAO Xiao-dong1，TANG Zi-lu1，WANG Zu-heng1，DONG Jie2，XU Song1，21 Jinling School of Clinical Medicine，Nanjing Medical University，Nanjing，Jiangsu 210002，China;2 Depart-ment of Urology，General Hospital of Eastern Theater Command/Jinling Hospital Affiliated to Nanjing UniversitySchool of Medicine，Nanjing，Jiangsu 210002，China【Abstract】Objective:To explore the value of mi-129 in the diagnosis，treatment and prediction of the clinical prognosis ofPCa by observing the correlation between mi-129 and the progression of the malignancyMethods:This retrospective analysis in-699作者简介:赵晓东(1998-)，男，安徽淮北市人，硕士研究生，从事泌尿外科专业。唐子璐(1997-)，女，江苏连云港市人，硕士研究生，从事外泌体的临床诊疗应用研究。赵晓东和唐子璐对本研究有同等贡献，为共同第一作者。通讯作者:许松，Email:1930306530 qq com;董杰，Email:smiledongjie163 comcluded 310 male patients who visited the Department of Urology of the General Hospital of Eastern Theater Command from January 2014to January 2022，80 as normal healthy men，80 with BPH，and the other 150 with PCa treated by radical prostatectomy without chemo-therapy，radiotherapy or androgen-deprivation therapy We determined the mi-129 expression in the serum and prostatic tissue of allthe subjects by real-time quantitative PC(T-qPC)，performed pathological grading of the primary cancerous and pericancerous(3 cm from the focus)prostate tissues from the 150 PCa patients，collected the demographic and clinical data on all the subjects，and analyzed the correlation of their demographic data with the clinical parameters We selected and transfected PC-3 and DU-145 celllines with mi-129 precursor or mi-129 scramble，assessed the proliferation ability of each cell line and detected the expression levelsof related proteins by cell proliferation assay and Western blotesults:The expression of mi-129 was significantly decreased inthe serum of the PCa patients compared with that in the normal healthy men and BPH patients(P 0 01)，so was it in the PCa tissuein comparison with that in the pericancerous prostatic tissue(P 0 01)，and it was negatively correlated with the preoperative serumPSA level(P 0 001)，histological grade(P 0 001)，pathological stage(P 0 001)，Gleason score(P 0 001)，lymphnode metastasis(P=0 02)，angiolymphatic invasion(P=0 021)and biochemical recurrence(BC)(P=0 001)Kaplan-Meier analysis showed a strong correlation of down-regulated mi-129 expression with a lower BC-free survival rate，while multivariatesurvival analysis indicated that the expression of mi-129 was an independent prognostic indicator of BC-free survival of the PCa pa-tients(P 0 001)Highly expressed mi-129 significantly inhibited the proliferation of PCa cells by regulating the expressions ofcell cycle-regulatory proteinsConclusion:The expression of mi-129 is significantly down-regulated in PCa tissues，which plays animportant role in inhibiting the proliferation of PCa cells and tumor progression and improving BC-free survival Therefore，mi-129can be considered as a new independent biomarker for the diagnosis，treatment and prediction of the clinical prognosis of PCa【Key words】mi-129;prostate cancer;diagnosis;treatment;prognosis prediction;biochemical recurrenceCorrespondence to:XU Song，email:1930306530 qq com;DONG Jie，email:smiledongjie163 comeceived:July 25，2022;accepted:October 10，2022前列腺癌(PCa)是男性生殖系统常见的恶性肿瘤，发病率在所有的男性恶性肿瘤中位居第二位1。我国的 PCa 发病率低于欧美国家，但近年发病率呈明显上升趋势，死亡率也居高不下2。目前，PCa 的主要血清学诊断标志物是血清前列腺特异性抗原(PSA)。PSA 是由恶性和非恶性上皮细胞产生的丝氨酸蛋白酶抑制剂。使用 PSA 作为筛查指标在一定程度上增加了 PCa 的早期检出率，降低了转移性疾病的发病率和相关死亡率3。但 PSA不是 PCa 的特异性指标，前列腺组织的炎症或增生均可引起不同程度的 PSA 水平波动。PSA 水平与PCa 之间的相关性差，过度依赖 PSA 检测结果容易导致过度诊疗，增加患者不必要创伤和焦虑4。前列腺组织穿刺活检术仍是 PCa 诊断的金标准，但穿刺活检存在一定操作风险，术后出血、感染等并发症无可避免5。因此，临床上迫切需要寻找一种新型生物标志物以辅助 PCa 的早期诊疗和预后评估。测序技术和生物信息学的发展检测出大量非编码 NA(non-coding NAs，ncNAs)，包括 Micro-NA(miNA)、lncNA 和环状 NA6。其中 miNA是一类长度为 18 25 个核苷酸的非编码短链NA，在某些生物学过程和病理改变中具有关键作用7。miNA 通过与其靶 mNA 互补的方式调节蛋白质表达水平，从而调控细胞增殖、细胞生长、细胞分化、细胞凋亡、细胞代谢、细胞内信号传导和癌变等生物过程8。迄今为止，已经鉴定了 1400 多个人类 miNA 序列，其中许多与癌症发病机理有关9。其中一些可能充当促进肿瘤生长和迁移并减少凋亡的癌基因，而另一些可能通过靶向下游基因来抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭而充当抑癌基因。在各种 miNA 中，mi-129 已被证明在肿瘤发生、发展和细胞增殖中起关键作用10。Catto 等11 研究发现:mi-129 在 PCa 中差异表达，但其具体作用仍不明确。本研究探究了 mi-129 的表达水平与 PCa患者的临床病理特征和预后之间的关系。1资料与方法1 1一般资料共纳入 2014 年 1 月至 2022 年 1月于东部战区总医院泌尿外科就诊的 310 例男性患者。其中健康对照组 80 例，BPH 组 80 例，PCa 组150 例。所有的 PCa 患者均接受了根治性前列腺切除术，且未接受化学治疗、放射治疗或雄激素剥夺治疗。留取 310 例受试者的空腹晨血各 5 ml 于促凝管中，室温下凝固0 5 h，3 000 r/min离心10 min，放置 80 冰箱保存，所有抽血均在接受治疗之前完成。收集 150 例 PCa 患者的原发性 PCa 组织(所有病例样本的组织病理均由经验丰富的病理学家通过苏木精伊红染色切片进行，以确定诊断和前列腺癌799中华男科学杂志2022 年 11 月第 28 卷 第 11 期Natl J Androl，Vol 28，No 11，November 2022细胞含量 70%)和对应的癌旁前列腺组织(距离病灶3 cm)，将 PCa 组织样本置于 10%的福尔马林中，然后进行梯度脱水，蜡浸泡和包埋。将每个样品切片(5 m 厚)放在载玻片上，脱蜡、脱水并用苏木精-伊红染色，所有 PCa 样本的病理学分级均由经验丰富的病理科医师完成，标本使用前通过液氮冷冻(80)储存。记录每位患者的人口学数据和临床参数，包括年龄、体质指数(BMI)、临床分期、Gleason 评分、手术切缘状态、血管淋巴浸润状态、精囊浸润状态和生化复发情况。表 1 列出了所有受试者的年龄、BMI、PSA 和 mi-129 水平，表2 列出了所有 PCa 患者的临床病理特征。患者死亡为随访终点，当手术治疗后患者血清中的 PSA 0 2 g/L时，生化复发(biochemical recurrence，BC)是替代终点。随访期从接受根治性前列腺切除术当日开始，随访过程中任何因 PCa 以外的事件或疾病而死亡的患者已被排除在研究之外。本研究方案获得了东部战区总医院伦理委员会的批准。表 1310 例受试者的临床资料Table 1 Clinical data on the 310 male subjectsHealthy control(n=80)BPH(n=80)PCa(n=150)Age(yr)7165 7 577018 74170 78 601BMI(kg/m2)2422 3 242382 32824 18 313PSA(g/L)199 1 25456 15731 37 16 70mi-129343 0 62340 0750 83 0511 2方法1 2 1NA 分离测定使用 TIzol 试剂(ThermoFisher Scientific，Waltham，MA，USA)依照说明书的步骤提取310 例受试者的血清及150 例 PCa 患者前列腺组织中的 NA。在260 nm 和280 nm 光密度下测量 NA 的浓度和纯度。严格按照说明书采用PrimeScript T-qPC 试剂盒(Takara Bio Inc，Otsu，Japan)进行逆转录操作。以所获得的逆转录产物cDNA 作为模板、U6 作为内参基因，通过荧光定量试剂盒 SYB Premix Ex TaqTM(Takara Bio Inc)和 StepOnePlus 实时荧光定量 PC 测试仪(AppliedBiosystems;Thermo Fisher Scientific，Inc)进 行qPC 检测。PC 循环的过程如下:95 初始变性，5 min;94 变性，45 s，50 退火，1 min，共计40个循环;72 延伸，1 min。每个独立样本重复分析3 次，并使用 2 cq法计算目的基因的相对定量表达水平。引物序列如下:mi-129 上游引物:5-GATACTCACTTTTTGCGGTCT-3;下游引物 5-GTG-CAGGGTCCGA GGT-3。U6 上 游 引 物:5-CGCT-TCGGCAGCACATATAC-3;下 游 引 物:5-CAGGGGCCATGCTAATCTT-3。1 2 2细胞培养和转染 PCa 细胞系PC-3 和DU145 均购自中国科学院细胞库(中国上海)。细胞均在含有 10%胎牛血清(Gibco;Thermo FisherScientific，Inc)、1%青霉素/链霉素(Gibco;ThermoFisher Scientific，Inc)、1%非必需氨基酸(Gibco;Thermo Fisher Scientific，Inc)和 1%(1 mg/ml)丙酮酸钠(Gibco;Thermo Fisher Scientific，Inc)的PMI 1640 培养基(Gibco;Thermo Fisher Scientific，Inc)中培养。培养基置于 37、CO2含量为 5%的加湿培养箱中保存。转染前 1 天，将 PC-3 和 DU-145 细胞(2 106)接种到六孔板中，并根据制造商的使用说明，应用 Lipofectamine 2000 转染试剂(In-vitrogen;Thermo Fisher Scientific，Inc)瞬时转染mi-129 precursor(mi-129 前体，用于上调 mi-129的表达水平)或 mi-129 scramble(与 mi-129 无关的 mi 序列，对 mi-129 水平无影响，用于排除转染过程 对 实 验 的 影 响)(Ambion，Carlsbad，CA，USA)，转染时间持续 48 h。空白对照组细胞仅用转染试剂处理。1 2 3细胞增殖试验根据制造商的建议，使用细胞计数试剂盒-8 检测(Cell Counting Kit8 assay，CCK-8;Molecular Technologies，Inc，Kumamoto，Ja-pan)并评估细胞增殖能力。在转染后第 1、2 和 4 天测量并记录细胞在 450 nm 波长处的吸光度。在转染后 96 h，收集细胞并测定增殖细胞核抗原(proliferatingcell nuclear antigen，PCNA)和磷酸化组蛋白 H3(phos-phorylated histone H3，P-H3)的蛋白质表达水平。899中华男科学杂志2022 年 11 月第 28 卷 第 11 期Natl J Androl，Vol 28，No 11，November 2022表 2mi-129 表达与 150 例 PCa 患者临床病理特征的相关性Table 2 Correlation of the mi-129 expression with the clinicopathological characteristics of the 150 PCa patientsVariableCases，n(%)mi-129 expression，n(%)LowHigh2PAge65 yr91(60 7)47(516)44(484)02510 61665 yr59(39 3)28(475)31(525)BMI24 kg/m288(58 7)45(511)43(489)01100 74024 kg/m262(41 3)30(484)32(516)Histological gradeG1+G282(54 7)28(341)54(659)181850 001G368(45 3)47(691)21(309)Preoperative PSA4 g/L6(3 7)0(0)6(100)401780 0014 10 g/L37(24 8)4(108)33(892)10 g/L107(71 5)71(664)36(336)Pathological stageI+II97(64 6)37(381)60(619)154350 001III+IV53(35 4)38(717)15(283)Gleason score749(32 4)13(265)36(735)268860 001762(41 6)30(484)32(516)739(26 0)32(821)7(179)Lymph node metastasisNegative133(88 6)62(466)71(534)53740 02Positive17(11 4)13(765)4(235)Surgical margin statusNegative126(84 2)65(516)61(484)07940 373Positive24(15 8)10(417)14(583)Angiolymphatic invasionNegative105(70 2)46(438)59(562)53650 021Positive45(29 8)29(644)16(356)Biochemical recurrenceNegative112(74 8)47(420)65(580)114190 001Positive38(25 2)28(737)10(263)1 2 4Western 印迹检测PCa 细胞系 PC-3 和DU-145 用 mi-129 precursor 或 mi-129 scramble 转染 96 h 后，使用添加蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA，Pierce;Thermo Scientific，Inc)的裂解缓冲液(Beyotime Institute of Biotechnology，Haimen，Chi-na)收集细胞。使用 BCA 蛋白分析试剂盒(bicin-choninic protein assay kit，Pierce;Thermo Scientific，Inc)对上清液的总蛋白浓度进行定量测定。从每个样品中取等量的蛋白质(40 g)装载到 8%或10%SDS 凝胶上，然后转移到聚偏氟乙烯膜上(EMDMillipore，Billerica，MA，USA)。将膜与下列抗体在4 时孵育过夜:兔抗 PCNA 抗体(1200;编号:sc-9857-)、小鼠抗 P-H3 抗体(1 200;编号:sc-374669)和小鼠抗 GAPDH 抗体(1 200;编号:sc-999中华男科学杂志2022 年 11 月第 28 卷 第 11 期Natl J Androl，Vol 28，No 11，November 202247724)，均购自 Santa Cruz Biotechnology，Inc(Dal-las，TX，USA);兔抗周期蛋白 E 抗体(11 000;编号:20808、兔抗周期蛋白 D1 抗体(11 000;编号:2978)、兔抗 p21(11 000;编号:2947)和兔抗 p27 抗体(11 000;编号:3686)，购自 Cell Signaling Tech-nology，Inc(Danvers，MA，USA)。将膜与抗兔抗体(1 200;编号:sc-2385;Santa Cruz Biotechnology，Inc)或抗小鼠抗体(1 200;编号:sc-2380;SantaCruz Biotechnology，Inc)一起孵育。随后将膜与抗兔或抗鼠的辣根过氧化物酶耦连二级抗体共同在室温下孵育 1 h。通过使用增强的化学发光检测试剂盒(Thermo Fisher Scientific，Inc)观察蛋白质条带。使用 Image J 软件148 版(National Institutes of Health，Bethesda，MA，USA)测量条带的光密度，分析并将其标准化为 GAPDH 的条带强度。1 3统计学分析使用 SPSS 26 0 软件进行统计分析。计量资料以 x s 表示。两组之间的差异比较使用两独立样本 t 检验，小样本量的比较采用Fisher 精确检验，分类变量采用 2检验。单因素或多因素方差分析和事后 Bonferroni 检验用于多重比较。采用 Kaplan-Meier 法进行生存分析，采用 Cox回归模型进行多变量分析。P0 05 时认为差异具有统计学意义。2结果2 1mi-129 表达水平分析结果通过 T-qPC测量分析 310 例受试者的血清 mi-129 水平及 150例配对 PCa 组织和癌旁前列腺组织中的 mi-129 表达水平。结果表明，对照组健康男性及 BPH 患者之间的血清 mi-129 水平无明显差异(P=0 766;表3)，而与对照组健康男性及 BPH 患者相比，PCa 患者血清 mi-129 水平显著降低(P 0 01;图 1)。与癌旁前列腺组织相比，mi-129 在 PCa 组织中的表达显著降低(P 0 01;图2)。在150 例 PCa 组织中 mi-129 相对表达量的中位数为 1 18。因此，低mi-129 表达(1 18)的 PCa 患者为 75 例，高mi-129 表达(1 18)的 PCa 患者为 75 例。2 2mi-129 表达与 PCa 患者临床参数的相关性mi-129 在 PCa 组织中的表达水平与患者年龄、BMI和手术切缘状态等临床因素之间未见明显相关性(P 均 0 05);但其在 PCa 组织中的表达水平与多项侵袭性临床病理参数密切相关:包括组织学分级(P 0 001)、术前 PSA 水平(P 0 001)、病理分期(P 0 001)、Gleason 评分(P 0 001)、淋巴结转移情况(P=0 020)、血管淋巴浸润情况(P=0 021)和 BC 情况(P=0 001)。见表 2。表 3T 检验结果Table 3 esults of t-test for the male subjects in the normal control，BPH and PCa groupsGroupsAgeBMIPSAmi-129Normal controls vs BPH patients0215044300010766Normal controls vs PCa patients034209180001001BPH patients vs PCa patients050404260001001图 13 组血清 mi-129 表达水平比较与对照组和 BPH 比较，:P 0 01Figure 1 Expression of mi-129 in the three groups of male sub-jects:P 0 01 versus the control and BPH groups图 2PCa 患者肿瘤组织和癌旁前列腺组织中的mi-129表达水平与癌旁前列腺组织相比，:P 001Figure 2 Expression of mi-129 in the PCa and pericancerousprostatic tissues:P 001 versus the pericancerous prostatic tissue0001中华男科学杂志2022 年 11 月第 28 卷 第 11 期Natl J Androl，Vol 28，No 11，November 20222 3mi-129 表达与无 BC 生存期之间的相关性绘制 150 例 PCa 患者中高或低 mi-129 表达水平和无 BC 生存率的 Kaplan-Meier 曲线(图 3)。与高mi-129 表达水平的 PCa 患者相比，低 mi-129 表达水平的 PCa 患者表现出显著更短的无 BC 存活期(P 0 001)。Cox 单变量生存分析显示:mi-129表达水平(P 0 001)、Gleason 评分(P 0 001)、组织学分级(P=0 001)，病理分期(P 0 001)、淋巴结转移情况(P=0 003)和血管淋巴侵袭情况(P=0 004)均与根治性前列腺切除术后的无 BC 生存期显著相关(表 4)。Cox 多变量分析进一步证实了mi-129 的表达水平(P 0 001)、组织学分级(P=0 003)、病理分期(P 0 001)、淋巴结转移情况(P 0 001)和血管淋巴侵袭情况(P 0001)均可能是 PCa 患者无 BC 生存期的独立预后指标(表5)。图 3mi-129 高或低表达的两组 PCa 患者的 Kaplan-Meier无 BC 生存曲线mi-129 高表达与 mi-129 低表达比较，P 0001Figure 3 Kaplan-Meier BC-free survival of the PCa patientswith lowly or highly expressed mi-129P 0 001 the high mi-129 versus the low mi-129表 4150 例 PCa 患者无 BC 生存的单变量生存分析Table 4 esults of univariate survival analysis of the 150 PCa patients without biochemical recurrenceVariableBC-free survivalExp(B)95%CIPAge(60 yr vs 60 yr)10790825 13120 736Histological grade(G1+G2 vs G3)22510257 14320 001Preoperative PSA(10 g/L vs 10 g/L)11090923 14920 413Pathological stage(T1 2 vs T3 4)42370914 22130 001Gleason score(4 6 vs 7 10)34370702 16970 001Lymph node metastasis(negative vs positive)20150192 12430 003Surgical margin status(negative vs positive)11030734 22120 938Angiolymphatic invasion(negative vs positive)18031341 20150 004mi-129 expression(high vs low)56721138 114120 001BC:biochemical recurrence;PSA:prostate-specific antigen表 5150 例 PCa 患者无 BC 生存的多变量生存分析Table 5 esults of multivariate survival analysis of the 150 PCa patients without biochemical recurrenceVariableBC-free survivalExp(B)95%CIPHistological grade(G1+G2 vs G3)21340283 11980 003Pathological stage(T1 2 vs T3 4)37980766 20050 001Lymph node metastasis(negative vs positive)44921003 20320 001Angiolymphatic invasion(negative vs positive)36010752 21060 001mi-129 expression(high vs low)32170568 14930 001BC:biochemical recurrence1001中华男科学杂志2022 年 11 月第 28 卷 第 11 期Natl J Androl，Vol 28，No 11，November 20222 4mi-129 对 PCa 细胞增殖的影响将 mi-129precursor 或 mi-129 scramble 分别转染 PCa 细胞系到 PC-3 和 DU-145 中，以探究 mi-129 在体外对PCa 细胞增殖能力的影响。CCK-8 分析显示:在转染后第 2 天和第 4 天，过度表达的 mi-129 有效地抑制了 PC-3 和 DU-145 细胞系的增殖(表 6，图 4)。转染后第 4 天，与空白对照组和 mi-129 scramble组相比，转染 mi-129 precursor 的 PC-3 和 DU-145细胞系中细胞增殖标记物 PCNA 和 P-H3 的表达水平显著降低(图 5)。2 5mi-129 对细胞周期调节蛋白表达水平的作用与空白对照组和 mi-129 scramble 组相比，转染 mi-129 precursor 后，PC-3 和 DU-145 细胞中细胞周期蛋白 Cyclin E 和细胞周期蛋白 Cyclin D1 的表达水平均显著降低(P 0 01;图 6);p27 和 p21的表达水平显著增加(P 0 01;图 6)。这表明，mi-129 可能通过调节细胞周期蛋白的表达调控PCa 细胞的增殖。表 6CCK-8 检测转染 mi-129 precursor 或 mi-129 scramble 的 PCa 细胞系 PC-3 和 DU-145 的生长(n=6)Table 6 esults of CCK-8 assay for the proliferation of the PC-3 and DU-145 cell lines transfected with mi-129 precursor or mi-129scramble(n=6)Cell lineIndicated transfectionOD4500 d1 d2 d4 dPC-3mi-129 scramble0 212 00180534 00430832 00811229 0 102mi-129 precursor0 227 00210512 00540619 00680818 0 087DU-145mi-129 scramble0 218 00230654 00760946 00921425 0 109mi-129 precursor0 211 00270645 00670722 00440929 0 108与 mi-129 scramble 比较，:P 0 01:P 0 01 versus mi-129 scramble图 4CCK-8 法检测 PC-3(左)和 DU-145(右)细胞增殖活性:P 001Figure 4 esults of CCK-8 assay for the proliferative activity of the PC-3 and DU-145 cell lines transfected with mi-129 precursor ormi-129 scramble:P 0012001中华男科学杂志2022 年 11 月第 28 卷 第 11 期Natl J Androl，V