香椿中黄酮类物质提取工艺条件的研究模板.doc

江 西 理 工 大 学本 科 毕 业 设 计（论文）题 目：香椿中黄酮类物质提取工艺条件研究 摘 要 本文以香椿为原料，采取碱提酸析法和微波辅助提取法成功地提取了香椿中黄酮类物质。经HCL镁粉反应和红外光谱判定，提取物为黄酮类物质。另外，利用紫外分光光度法，以芦丁为对照品，NaNO2-Al(NO3)3-NaOH体系为显色剂测定香椿中总黄酮含量。并利用L9（34）正交试验设计，确立了香椿中黄酮最好提取条件及其产率。结果表明，最好提取工艺条件为硼砂浓度0.5，料液比1：40，提取30min，温度60。结论：本试验可为香椿深入研究和资源开发利用提供一定科学依据。关键词:香椿；黄酮类物质；提取；测定ABSTRACT In this paper，flavonids were extracted from Chinese mahogany successfully，by using the method of“dissolved in alkali and separated out in acid”and microwaveassisted methodFlavonids were identified by reacting with magnesium-hydrochloric acid and IR character- izationIn addition，all the flavonids in Chinese mahogany were determined by UV-spectrophotometry with rutin as the standard，the quantities of flavonoids componentes were measured with at 360 nm.And use L9（34）orthogonal test design.Result showed that the optimum extracting conditions were determined with 0.5% (MV) Na2B4O7.10H2O as extractor with the ratio of material to liquid at 1：40，and extracting for 30mintime and the separation temperature is 50：This study provided scientific basis for Chinese mahogany，development and utilization of gardenia.Keywords：Chinese mahogany；Flavonids；Extraction；Determination目 录 序言7 第一章 文件综述8 1.1 香椿概况8 1.2 香椿研究进展8 1.2.1 香椿产地和品种8 1.2.2 香椿化学成份研究8 1.2.3 药理学研究9 1.3 香椿开发前景10 1.4 黄酮类化合物概况10 1.4.1 黄酮类化合物分布及其存在形式10 1.4.2 黄酮类化合物介绍11 1.4.3 黄酮类化合物性质11 1.5 黄酮类化合物研究意义11 1.6 黄酮类化合物研究进展12 1.6.1 黄酮类化合物结构及其分类12 1.6.2 黄酮类化合物生理功效和人类健康12 1.6.3 黄酮类化合物提取工艺15 1.6.4 黄酮类化合物定性和定量检测16 1.7 黄酮类化合物开发和应用17 1.7.1 市场前景17 1.7.2 黄酮资源开发18 第二章 试验部分19 2.1 试验原料和仪器19 2.1.1 原料19 2.1.2 试剂19 2.1.3 仪器19 2.2 黄酮含量测定原理和方法19 2.2.1 测定原理19 2.2.2 测定方法19 2.2.3 香椿中黄酮单原因提取试验21 2.2.4 确定香椿中黄酮最好提取工艺条件正交试验21 2.2.5 黄酮判定23 2.2.6 香椿总黄酮测定25 第三章 结果和讨论26 3.1 重现性试验26 3.2 测定波长选择26 3.3 最好提取条件选择27 3.3.1 正交试验结果及直观分析27 3.3.2 方差分析28 第四章 结论29 参考文件30 致谢32 外文资料33 汉字翻译42 前 言香椿这一天然资源伴伴随中国悠久历史，一直显示着多方面药用和保健价值。据日华子本草1记载香椿有补虚壮阳固精、补肾养发生发、消炎止血止痛、行气理血健胃等作用。所以对香椿研究和从中提取药理性物质就有了一定必需性。我们黄酮类物质对人类健康相关键作用，近几年研究证实它含有特殊生物效能。黄酮类物质是一个自由基清除剂，它能够还原一生育酚自由基，使其再生，所以起到单重态氧清除剂作用。黄酮类物质还对过敏、感染、高血压、肿瘤和AIDS等疾病含有辅助诊疗作用。市场调查显示，多年来上市保健食品中，相当部分是以类黄酮作为功效因子，涵盖了抗氧化、增强免疫力、改善睡眠、缓解体力疲惫、提升缺氧耐受力、辅助降血脂、辅助将血压、辅助将血糖、辅助改善记忆、清咽、去痤疮、祛黄褐斑、改善皮肤水分等方方面面，黄酮类化合物作为天然甜味剂、天然抗氧化剂、天然风味增强剂和天然色素进军食品添加剂领域，在现代化食品工业中发挥着越来越关键作用。为愈加好地挖掘香椿这一宝贵天然资源，为愈加好地挖掘黄酮类物质使其广泛应用于保健食品，为了充足利用香椿和黄酮类物质药用和保健价值，开始了从香椿中提取黄酮类物质研究。第一章 文件综述1.1香椿概况 香椿是高大乔木树木，原产中国。大家食用香椿久已成习，汉代就遍布大江南北。古代农市上把香椿称椿，把臭椿称为樗2。香椿为楝科，落叶乔木，雌雄异株，叶呈奇数羽状复叶，圆锥花序，两性花白色，果实是椭圆形蒴果，翅状种子，种子能够繁殖。树体高大，除供椿芽食用外，也是园林绿化优选树种.香椿是多年生落叶乔木，树木可高达10多米。叶互生，为偶数羽状复叶，小叶610对，叶痕大，长40厘米，宽24厘米，小叶长椭圆形，叶端锐尖，长1012厘米，宽4厘米，幼叶紫红色，成年叶绿色，叶背红棕色，轻披蜡质，略有涩味，叶柄红色。圆锥花序顶生，下垂，两性花，白色，有香味，花小，钟状，子房圆锥形，5室，每室有胚珠3枚，花柱比子房短，朔果，狭椭圆形或近卵形，长2厘米左右，成熟后呈红褐色，果皮革质，开裂成钟形。6月开花，1011月果实成熟。种子椭圆形，上有木质长翅，种粒小，发芽率低，含油量高，油可食用。1.2香椿研究进展1.2.1香椿产地和品种中国香椿品种很多，依据香椿初出芽苞和子叶颜色不一样，基础上可分为紫香椿和绿香椿两大类。属紫香椿有黑油椿、红油椿、焦作红香椿、西牟紫椿等品种；属绿香椿有青油椿、黄罗伞等品种3。香椿品种不一样，其特征和特征也不一样。紫香椿通常树冠全部比较开阔，树皮灰褐色，芽孢紫褐色，初出幼芽紫红色，有光泽，香味浓，纤维少，含油脂较多；绿香椿，树冠直立，树皮青色或绿褐色，香味稍淡，含油脂较少。香椿又称白椿、香椿芽。香椿属楝科植物，在中国已经有两千多年栽培历史。明代李时 珍所著本草纲目4记载：“椿木皮细而赤，嫩叶香甘可茹”。香椿是特有 以嫩叶入菜入药树种，其嫩叶呈深褐色，它质脆醇香，味道鲜美，生拌、热炒、 腌制，均别具风味。香椿之所以成为大家青睐时令佳品，是因为它物美价廉、 营养丰富。香椿含钙及蛋白质列群蔬前茅，还含有磷、胡萝卜素、维生素B1、维生素C等营养物质。1.2.2香椿化学成份研究初步研究表明香椿嫩叶、种子中含有酚类、鞣质、生物碱、皂甙、甾体类、挥发油及其油脂等活性成份。在嫩枝、嫩叶中还含有蒽醌及其甙、黄酮及其甙、内酯、香豆素及其甙，在种子中含有强心甙。种子挥发油含有醛、酮、芳香族、硫醇、多元醇、叔醇等成份。香椿有独特香味，采取水蒸气蒸馏，气相色谱质谱联用技术，从同时蒸馏萃取和水蒸汽蒸馏提取香椿芽挥发油中分别判定出42种和36种化学成份，从香椿茎中判定了30种化学成份。对照研究表明香椿茎和叶挥发性成份绝大多数是相同，仅有少数成份略有不一样。它们是二氧杂环己烷，2一乙氧基丁烷，乙二醇单硝酸酯，2，5一二甲基噻吩，樟脑，龙脑，3，4一二甲基葵烷5，乙酸龙脑酯，8一丁香烯，a一蛇麻烯，2一乙基1一葵醇，榄香醇，2，6一二甲基一4一乙基一苯酚，6一甲基一十三烷；Acnphyllene，雪松醇，3，6一二甲基十一烷，合金欢醇，2，7辛二烯一1一醇一乙酸酯，邻苯二甲酸二甲氧基乙酯等。二十种化合物含量中挥 陆成份总量7814，而且它们关键为单萜、倍半萜和倍半萜醇类。研究发觉香椿叶中含有一定量黄酮类化合物6。有些人为了寻求楝科植物中杀虫药用活性成份，从香椿叶乙醇提取物中分离得到6，7，8，2，一四甲氧基一5，6 一二羟基黄酮、5，7一二羟基一8甲氧基黄酮、山柰酚、3一羟基一5，6一环氧一7megastigmen一9一酮、没食子酸乙酯、东莨菪素等六种化合物。其中3羟基一5，6一环氧一7一megastigmen一9一酮为首次分离得到。1.2.3药理学研究现代药理学研究表明，香椿部分成份含有杀菌、抗炎、镇痛、抗癌、抑制血小板聚集、抗氧化、降血糖等作用。1抗菌作用香椿煎剂对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、伤寒杆菌、甲型付伤寒杆菌、绿脓杆菌、费氏痢疾杆菌有较强抑制作用7。椿皮煎剂对福氏、宋内氏痢疾杆菌和大肠杆菌有抑制作用。朱育凤等采取琼脂平板稀释法对香椿皮水提取物和醇提取物进行了体外抗菌试验研究。结果发觉香椿皮水、醇提取物对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌全部有抑制作用。抗菌作用可能和香椿叶中黄酮化合物、萜类化合物、蒽醌、鞣质、皂甙等相关。2抗炎作用采取稀乙醇提取、聚酰胺柱分离制得总黄酮，经过初步药效学试验发觉其含有化痰、抗炎和增强免疫作用。抗炎作用可能和香椿叶中黄酮化合物、萜类化合物等相关。3. 镇痛作用在止痛方面也于动物模式中发觉，口服香椿叶水萃取物能够缓解醋酸及热所诱发疼痛程度，降低小白鼠扭体试验中扭体次数，及延长热板试验、光辐射热甩尾试验之潜伏时间，而展现出镇痛效果。镇痛作用可能和香椿叶中黄酮化合物相关8。4降血糖作用研究表明，香椿嫩叶能降由Attoxan所诱发之糖尿病鼠血糖，且只降低糖尿病鼠血糖值，并不会影响正常鼠血糖。会改善糖尿病鼠胰岛素之分泌，增加脂肪组织之GLUT4(葡萄糖转运装置)蛋白表现等作用。椿叶水萃取液能降低糖尿病病人之血糖值，甚至对通常降血糖药品所未能改善之高血糖症状之病人亦有效，而且对糖尿病所伴随慢性并发症：四肢麻木、全身酸痛及血压不稳定全部有改善。香椿嫩叶降血糖作用可能和萜类化合物相关。5. 抗癌作用香椿嫩叶可抑制一些癌细胞生长(肺癌：A549、H226；直肠癌：Co10205；骨癌：U一20S；肝癌：C3A)。已研究出香椿抑制A549肺癌细胞株机转，现在已经进行到动物试验，结果发觉香椿粗萃取粉有显著抗癌效果。不一样香椿浓度对人类肝癌细胞(HepG2)，以MT及Methyleneblue方法测定其对细胞生长之调整或毒杀作用，发觉香椿对HepG2之生长有抑制作用，但以浓度10 mgmL为分界，予更高浓度100 mgmL时似有显著回升现象。其50抑制生长浓度(IC50)分别为(0517 4-001)mgmL(MTr)及(053004)mgmL(Methylene blue)。抗癌作用可能和香椿叶中皂甙、生物碱等相关9。6. 降血压作用经初步试验结果显示桩叶粗萃取液细分成多个成份中，55在低剂量就会降低血管平滑肌细胞A7r5细胞内钙离子浓度，而52会抑制50 mM KC12所诱发细胞内钙离子浓度增加，显示香椿叶可能能够用来降低血压。降压作用可能和香椿叶中蒽醌、鞣质、皂甙等相关。7. 抗氧化作用香椿萃取液进行体外抗氧化活性分析结果显示香椿萃取液在亚麻油酸乳化系统中含有很好抗氧化性及清除DPPH 自由基、螫合亚铁离子、还原力及清除超氧阴离子能力。而且，抗氧化能力伴随香椿萃取汁液浓度增加而增加。香椿萃取液可降低LDL之过氧化程度，包含降低丙二醛生成量、避免Apoprotein B蛋白裂解、预防胆固醇氧化及抑制LDL electrophoretic movility改变。而且，保护功效随著香椿萃取液浓度增加而增加。由结果可知，香椿萃取液含有抗氧化能力，可能含有开发防自由基相关疾病之抗氧化剂潜力。抗氧化作用可能和香椿叶中黄酮化合物等相关10。1.3香椿开发前景香椿为中国特有、含有天然香味木本蔬菜，常为皇家贡品和寺庙长老养生专用具。它不仅营养价值高、口感好，而且有显著食补养生功效，显著清除人体有害物功效，常食用有显著增强体质、延缓衰老功效。 多年来安徽、山东、江苏等香椿芽进入了北京、上海、南京等大城市，并有少许出口销往日本、韩国及东南亚国家和地域，大受欢迎，往往销售一空而缺货。依据农业科技部门估计，香椿品种经过高新技术转化为产业化规模生产后，可望成为中国进入WTO后外贸出口一项创汇拳头产品。因其含有独特芳香味挥发油，不仅口感香脆多汁，而且营养和药用价值也很高。据测定，香椿芽中蛋白质、钙、铁、磷、维生素C、胡萝卜素含量是其它蔬菜不能相比。所以，民间古有“食用香椿，不染杂病”之说。据业内人士分析，中国未来蔬菜业正在向营养型和保健型转化。香椿芽作为一个名、稀、特、药食兼用新型蔬菜，备受大家青睐。所以，利用设施进行反季节栽培香椿芽将成为俏销商品，其经济效益和社会效益十分显著。1.4黄酮类化合物概况1.4.1黄酮类化合物分布及其存在形式黄酮类化合物是一类低分子量广泛分布于植物界天然植物成份，为植物多酚类代谢物，大多有颜色。它们广泛存在于植物各个部位，尤其是花、叶部位，从植物系统学角度， 植物体产生黄酮能力和植物体木质化性质亲密相关11。所以黄酮类化合物关键分布在维管束植物中，而在其它较低等植物类群中分布较少，关键存在于芸香料、唇形科、豆科、伞形科、银杏科和菊科中。黄酮类化合物在植物体内大部分和糖结合成苷类或碳糖基形式存在，也有以游离形式存在。1.4.2黄酮类化合物介绍黄酮类化合物（flavonoids）又名生物类黄酮（bioflavonoids）。黄酮是植物体内关键呈色物质，是植物次生代谢产物，是一大类以色原酮为基础，含有C6一C3一C6结构酚类化合物，其生物合成前体是苯丙氨酸和丙二酸单酰辅酶A(malonglCoA) 12。自然界中大约存在4 000多个黄酮类物质，膳食中黄酮物质大多是以糖苷形式存在，按其结构大致可分为花色苷(anthocyaninin)、黄烷醇(flavano1)、黄酮(flavone)、黄烷酮(flavanone)和黄酮醇(flavono1)。黄酮类物质几乎在每一个植物体内全部能够发觉。文件估量约有20%中草药中含有黄酮类化合物，可见其资源之丰富。1.4.3黄酮类化合物性质铁盐等形成颜色较深络合物。黄酮类化合物多为晶形固体，少数（如黄酮苷类）为无定形粉末，有较高熔点。分子结构中，大多带有酚性羟基，所以含有酚类化合物通性。另外分子中还常带有吡酮环或羰基，组成了生色团基础结构，依据羰基数目、结构位置和交叉共轭体系，组成了黄酮类化合物呈色。通常来说黄酮及黄酮醇和其昔类多呈灰黄到黄色13。黄酮类化合物溶解度，因结构及存在状态（苷及苷元，单糖苷，双糖苷或三糖苷）不一样而有很大差异。通常游离苷元难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂及稀碱液中，而黄酮苷通常易溶于水、甲醇、乙醇等。极性溶剂，难溶于苯、氯仿等有机溶剂。黄酮类化合物多含有强荧光，在紫外灯照射下呈亮黄、黄绿、亮蓝、暗棕等颜色。黄酮类化合物对盐酸镁粉或钠汞齐呈鲜红、紫色或黄色反应，结构中带有3OH、5OH或邻位羟基者，均能和金属盐类试剂如铝盐、镁盐、锡盐1.5黄酮类化合物研究意义黄酮类化合物有很好降血脂、降低毛细血管渗透性、软化血管、保护血管作用14。糖尿病患者大多伴有高脂血症，血管老化速度比正常人快，很轻易引发循环障碍、脑血栓、心脏病，出现心脑血管系统并发症。花粉降血脂，改善血液循环，抗氧化作用，能有效地控糖尿病人视力下降，预防血管系统并发症出现5。依据中国医药报记载黄酮属于酚类化合物，其保健作用有：抗菌、消炎、增强血管扩张力、调整血脂、降低胆固醇、降血糖、降低血栓，并能护肝抗癌、有效活化细胞、增强人体免疫力、抗氧化、延缓衰老等作用，另外对心脑血管疾病有预防和改善微循环作用，天然起源生物黄酮分子量小，能被人体快速吸收，能经过血脑屏障，能深入脂肪组织15。很多研究已表明，黄酮类化合物含有多个生物活性，除了利用其抗菌、消炎、抗突变、降压、清热解毒、镇静、利尿等作用外，在抗氧化、抗癌、防癌、抑制脂肪酶等方面也有显著效果。黄酮类化合物能够直接从食物中获取，如大豆、橙类、洋葱，也能够从富含黄酮类化合物植物中提取，作为膳食补充剂制成多种保健食品及食品。黄酮类物质对人类健康相关键作用，近几年研究证实它含有特殊生物效能13。黄酮类物质是一个自由基清除剂，它能够还原一生育酚自由基，使其再生，所以起到单重态氧清除剂作用16。黄酮类物质还对过敏、感染、高血压、肿瘤和AIDS等疾病含有辅助诊疗作用。异黄酮及其代谢物和人类雌激素结构类似，含有更为特殊功效，如防治骨质疏松、抗肿瘤等。实际上，黄酮类化合物已成为人类膳食中一个不可或缺抗氧化营养因子。市场调查显示，多年来上市保健食品中，相当部分是以类黄酮作为功效因子，涵盖了抗氧化、增强免疫力、改善睡眠、缓解体力疲惫、提升缺氧耐受力、辅助降血脂、辅助将血压、辅助将血糖、辅助改善记忆、清咽、去痤疮、祛黄褐斑、改善皮肤水分等方方面面，黄酮类化合物作为天然甜味剂、天然抗氧化剂、天然风味增强剂和天然色素进军食品添加剂领域，在现代化食品工业中发挥着越来越关键作用。1.6黄酮类化合物研究进展1.6.1黄酮类化合物结构及其分类黄酮类化合物(Flavonoids)简称为黄酮，又称生物黄酮(Bioflavonoids)或植物黄酮。黄酮类化合物是一类低分子天然植物成份，广泛存在于植物界，含有C6一C3 C6基础构型。黄酮类化合物泛指拥有15个碳原子多元酚化合物，其中两个芳环(A环、B环)之间以一个三碳链相连，其骨架可用C6一C3 C6表示17。通常黄酮类化合物依据C环结构分类，关键是以六元C环氧化情况和B环所连接位置不一样为依据分为：黄酮及黄酮醇类，如芹菜素、槲皮素；双黄酮类，如银杏素；二氢黄酮及二氢黄酮醇类，如橙皮甙；查耳酮类，如红花甙；黄烷醇类，如儿茶素；花色素类，如飞燕草素；异黄酮类，如葛根素；其它黄酮类，如异芒果素。黄酮类化合物含有多个苯环和酚羟基结构，苯环为疏水基团，而酚羟基为亲水基团。采取分子轨道近似方法MNDO进行量子化学计算，结果表明，黄酮类物质在水溶液中最好构象是苯并吡喃环(A环、C环)在一个平面上，而另一个苯酚环(B环)和这一平面垂直。其中A环多为间苯三酚型结构，组成直键型聚合物，单元问连接键较不稳定而易于断裂A环C6、C8为亲核反应中心，8位亲核活性高于6位。B环常含有邻位酚羟基结构，酚羟基是活泼H供体。C环为吡喃环，杂环上C2、C3原子是手性碳原子，可形成4个立体异构体。黄酮及黄酮醇类C4位上有一个羰基，羰基可强烈地降低A环亲核性质18。生物黄酮实际上是一个庞大家族。现已确定其化学结构生物黄酮类物质最少有40005000种，其中包含广为人知老产品芦丁、茶多酚(以“儿茶素”为代表)、大豆异黄酮(以黄豆苷、染料木素为代表)、橙皮苷和槲皮素等。生物黄酮是一涵盖面极广总名称。实际上生物黄酮物质化学分类极为复杂。最近，西方有学者提出：按其化学结构相同程度可将植物起源生物黄酮大致分为四大类，即：原花青素类；槲皮素类；柑桔生物黄酮类、绿茶多酚类19。1.6.2黄酮类化合物生理功效和人类健康人体正常摄取生物类黄酮关键起源于饮料、茶、果酒、啤酒、蔬菜、水果、大豆及其制品等。最初，这类物质粗制品仅作为染料应用，20世纪20年代，国外把槲皮素、芦丁用于临床后，才引发大家关注。60年代末，大家发觉黄酮类化合物有抗炎、抗病毒、利胆、强心、镇静和镇痛等作用。到70年代，又发觉它们有抗氧化、抗衰老、免疫调整和抗肿瘤等作用。1.6.2.1抗氧化及抗自由基作用自由基性质活泼，有极强氧化反应能力， 对人体有很大危害性，在体内自由基和脂质过氧化作用使多个大分子成份， 如核酸、蛋白质产生氧化变性，DNA交联和断裂， 造成细胞结构改变和功效破坏，而引发癌症、衰老及心血管等退变性疾病20。生物体内常见自由基有超氧自由基(O2-)、羟自由基(OH)、烷氧自由基(R0)。黄酮类化合物含有清除自由基和抗氧化能力，其作用机理在于它阻止了自由基在体内产生三个阶段：(1)和O2-反应阻断自由基引发连锁反应；(2)和金属离于鳌合阻断自由基生成；(3)和脂质过氧基(ROO)反应阻断脂质过氧化过程。1.6.2.2对心血管系统作用 对血压影响黄酮类化合物对高血压引发头痛、项强、头晕、耳鸣等症状有显著疗效，尤以缓解头痛、项强为显著。葛根素对正常和高血压动物全部有一定降压作用，静注葛根素能使正常麻醉犬血压短暂而显著地降低，也能显著降低清醒自发性高血压大鼠(SHR)血压21。 抑制血小板凝集作用黄酮类化合物对凝血因于含有较强抑制作用， 故表现出很好抗凝血作用。试验表明不一样浓度黄酮类化合物能够不一样程度地抑制二磷酸腺苷(ADP)诱导大鼠血小板凝集，对5一羟色胺和ADP联合诱导家免和绵羊血小板凝集也有一样抑制作用22。另外黄酮类化合物还可降低血管内皮细胞羟脯酸代谢，使内壁胶原或胶原纤维含量相对降低， 利于预防血小板粘附凝集和血栓形成，有利了防治动脉粥样硬化。 对外周血管影响静注黄酮类化合物于麻醉犬后，全部动物脑血流量增加且血管阻力对应降低，还能使乙酸胆碱引发脑内动脉扩张和去甲肾上腺素引发收缩减弱，使处于异常状态下血管功效恢复上常水平23。另外还能够改善异丙肾上腺素引发小鼠微循环障碍，使毛细血管前小动脉管径增加，流速加紧。1.6.2.3抗肿瘤、抗癌作用黄酮类化合物含有较强抗癌防癌作用，通常可经过以下三种路径：(1)对抗自由基；(2)直接抑制癌细胞生长；(3)对抗致癌促癌因于。陈晓莉等24用MTT快速测定法及流式细胞仪分析黄酮类化合物对靶细胞人肝癌SMMC一7721细胞抗癌药效表明，这类物质有较强抗癌活性，和丝裂霉素(MMC)联适用药抗癌活性显著增强，流式细胞仪分析细胞分裂周期各时象DNA改变显示，这类物质可使S期细胞显著降低，增殖指数降低，并诱导凋亡。1.6.2.4对平滑肌作用葛根对小鼠、大鼠离体肠管含有罂粟碱样解痉作用。多个异黄酮成份可能是舒张平滑肌成份，收缩成份可能是胆碱、乙酚胆碱和卡塞因R 等物质。1.6.2.5抗炎、抗菌、抗病毒作用黄酮类化合物含有显著消炎、抗溃疡作用。白凤梅等25研究表明天然黄酮对小鼠急性肖溃疡有显著消退作用，肯定了高剂量黄酮提取物(200mgm1)能使胃粘液增加而且减轻胃损伤。另外研究表明芦丁黄酮类化合物含有抗流感病毒、脊髓灰质炎病毒感染和复制能力。1.6.2.6雌激素作用黄酮类化合物含有雌激素双重调整作用。当雌激素水平较低时，表现为雌激素作用， 反之表现为抗雌激素作用。张荣庆26经试验发觉大豆黄酮能提升正常大鼠及未交配过雌性正常大鼠乳腺重量和乳腺细胞DNA含量， 并能促进其乳腺发育和泌乳量。但同时也可使正常雄鼠血清睾酮、雌二醇、生长激素等水平显著升高。1.6.2.7降血糖作用黄酮类化合物能够促进胰岛细胞恢复，降低血糖和血清胆固醇，改善糖耐量，对抗肾上腺素升血糖作用，并能抑制醛糖还原酶。1.6.2.8对中枢神经系统作用 对神经系统保护作用谷氨酸(GIu)是中枢神经系统中关键兴奋性神经递质， 但过分释放会造成兴奋性神经毒性损伤，引发多个神经变性疾病。韩喻美等27采取大鼠脑分区切片培养，加入活性黄酮提取物发觉，这类物质有效地抑制培养切片上由K+引发Glu释放，抑制效应随浓度增加而增加。另外黄酮类化合物可作为钙离子通道桔抗剂，能抑制KCl、去甲肾上腺素、5一羟色胺等引发Ca2+增高，从而对神经系1起到保护作用。 对记忆影响经过避暗和迷宫法证实黄酮影响小鼠记忆行为，这类物质对亚硝酸钠、乙醇、N2吸入及颈总动脉阻断再灌流造成小鼠记忆障碍全部有改善作用，对D二分之一乳酸所致急性衰老小鼠记忆功效也有改善作用28。1.6.2.9抗辐射电辐射作用于生物体引发产生自由基使细胞结构和功效损坏，黄酮类化合物因为含有抗自由基作用所以含有抗辐射能力。1.6.3黄酮类化合物提取工艺1.6.3.1有机溶剂萃取法利用黄酮类化合物和混入杂质极性不一样，选择不一样溶剂萃取可达成精制纯化目标。溶剂萃取法就是将复合物载体中一些可溶物由固体转移到液体当中去，从而得到含有溶质浸提液，所以浸提液实质是由固相转为液相传质过程。工业生产中选择有机溶剂基础标准是收率高、能耗低、溶耗小、无重金属残留。1.6.3.2碱性水提法黄酮苷类有一定极性，溶于水，易溶于碱性水，难溶于酸性水，故可用碱性水进行提取，再将碱性提取液调成酸性，黄酮苷类即可沉淀析出。1.6.3.3超声提取法超声波萃取是利用超声波辐射压强产生强烈空化效应、机械振动、扰动效应、高加速度、乳化、扩散、击碎和搅拌作用等多级效应，增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而加速目标成份进入溶剂，促进提取进行。超声波对固体样品预处理很有利，它能促进和加速提取过程，如分散、均化、雾化、洗涤和衍生等过程，还可避免高温对F标成份破坏，操作简单、副产品少、目标产物易分离，能达成比常规提取更理想结果，对生物活性成份提取尤具优势。超声波空化作用对细胞膜破坏有利于黄酮类化合物释放和溶出，超声波使提取液不停震荡，有利于溶质扩散，同时超声波热效应使水温基础在57 ，对原料有水浴作用。1.6.3.4微波法微波萃取本质是微波对萃取溶剂和物料加热作用。微波加热机理有别于常规加热，它能够穿透萃取溶剂和物料使整个系统均匀加热，这么省去常规加热由表及里热传导所需时间，使萃取体系快速升温，萃取速率显著高于常规加热方法。利用磁控管所产生每秒245亿次超高频率快速震动，使内分子问相互碰撞、挤压利于有效成份浸出，含有反应高效性和强选择性等特点。1.6.3.5大孔树脂吸附法吸附树脂是一类有机高分子聚合物吸附剂，含有物理化学稳定性高、吸附选择性独特、不受无机物存在影响、再生简便、解吸条件温和，使用周期长、节省费用等优点。1.6.3.6超临界萃取法超临界C02 流体萃取(SFE)分离过程原理是利用超临界流体溶解能力和其密度关系，即利用压力和温度对超临界流体溶解能力影响而进行。在超临界状态下，将超临界流体和待分离物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小成份依次萃取出来。超临界流体萃取是利用流体在超临界状态时含有密度大、粘度小、扩散系数大等优良传质特征而成功开发。它含有提取率高、产品纯度好、步骤简单、能耗低、无有机溶剂残留等优点，但对设备要求较高。超临界CO2萃取技术以液态CO2为溶剂进行提取，提取率和提取温度、提取压力、CO2消耗量等原因相关。1.6.4黄酮类化合物定性和定量检测1.6.4.1定性分析 颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈淡黄色，在紫外光下呈淡蓝色并有荧光斑点。浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏05 min，立即在紫外光下观察，呈极显著黄褐色荧光斑点。三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1 三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1 乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。盐酸-镁粉或锌粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴(1次加入)，在泡沫处呈紫红色。 纸层析取样品溶液10点在滤纸上。用正丁醇：醋酸：水：4：1：5为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。 紫外分光光度法利用黄酮分于结构中羟基和芳环形成较强共轭体系，对紫外光(250lnm)有较强特征吸收，且性质稳定。 薄层层析一比色法利用黄酮分于结构中酚羟基，能和磷钨酸一磷钼酸试剂产生颜色反应，在700 nm波优点有最大吸收特征进行比色测定。 络合一分光光度法将样品用3O 乙醇溶解，经NaNO3、Al(NO3)3。络合后，在UV510 nm处作紫外分光比色测定。1.6.4.2定量检测 高效液相色谱法(HPLC)将样品溶解在有机溶剂中，直接经高效液相色谱进行分离测定，用归一法可测出总黄酮含量。但设备要求严格，操作较复杂。汪静端等29利用反向HPLC成功对银杏叶中6种黄酮成份： 槲皮素、异鼠醇素、山奈酚、白果黄素、银杏黄素、西阿多黄素进行了分析。 气相色谱法(GC)将样品用衍生化试剂(如双三甲基硅烷基三氟乙酸氨)制成黄酮衍生物，然后经气相色谱分离测定。 超临界流体色谱法(SFC)综合了气相色谱(GC)和高效液相色谱(HPLC)特点新分离技术。 高效毛细管电泳法(HPCE法)该法简便快捷，分析周期短，消耗溶剂少，费用低，抗污染能力强，含有良好精密度，回收率呈线性关系等优点，适适用于葛根及其制剂中葛根素快速定量分析。 导数脉冲极谱法将原料用95 乙醇回流提取2h，取出放冷后称重，补充失去乙醇量，摇匀，加塞后放置澄清，上清液注入1 硫酸铵底液，置极谱池中，通氮气进行极谱测定。1.7黄酮类化合物开发和应用1.7.1市场前景伴随食品工业发展和消费水平不停提升，大家越来越重视强身键体，改善饮食习惯，提升生活质量。于是保健食品以其天然性、食效性等特点在世界范围内成为大家追逐目标。因为葛根黄酮保健作用确有实效，东南亚及欧美各国最近掀起以葛根黄酮为代表开发应用热潮。据报道，国际市场上葛根黄酮含量40为300 元kg左右，含量达80 以上为2500-4000 元kg，含量90 以上为10000-15000 元kg。据不完全统计，2O1O年中国保健品市场销售额将达1000 亿元。在众多天然活性成份中黄酮类化合物是极有应用潜力资源之一。黄酮类化合物在人体不能直接合成，只能从食品中取得，而黄酮类化合物广泛存在于植物体中，所以近十多年来各国科学家全部主动关注着从植物体中提取纯度高、活性强天然黄酮成份，并深入加工成含有抗癌、抗衰老、调整内分泌等特异功效保健食品和药品等产品。这些产品对于调整人体生理功效，提升生命运动质量，为食用者带来健康体魄。现在黄酮类化合物通常可采取以下两种利用方法：(1)直接应用含黄酮植物提取液制成保健品食品；(2)将含黄酮植物提取液经浓缩、分高纯化、干燥等精制步骤，制取高纯度黄酮类化合物。1.7.2黄酮资源开发1.7.2.1抗心血管病药品黄酮类化合物在预防心脑血管疾病方面发挥了关键作用。自80年代起,中国外前后研制开发了以银杏叶提取物制成多种银杏制剂，内含24 黄酮(关键由异鼠李素、山奈酚等组成)，适适用于脑功效障碍，智力功效衰退，末梢血管血流障碍并伴随肢体血液不畅。临床上用于诊疗冠心病、心绞痛、脑血管疾病等全部有良好疗效30。利用沙棘总黄酮开发天然药品是诊疗心绞痛、预防动脉粥样硬化、心肌梗塞、脑血栓理想药品，对诊疗心绞痛总有效率为97。另外利用山楂叶中芸香甙、牡荆素等提取总黄酮制成“益心酮”片，对诊疗冠心病总有效率为90 。1.7.2.2抗肝脏毒药品从紫花水飞蓟种子中提取总黄酮，内含水飞蓟素(Silybin)、异水匕蓟素(Silydianin)、次水飞蓟素(Silychvistin)是常见抗肝素药“益肝宁”“利肝隆”和国外“Silimarit”关键有效成份。含有刺激新肝细胞形成，抗脂质过氧化作用，用于诊疗肝炎、肝硬化，并能支持肝自愈能力，改善健康情况31。1.7.2.3止咳平喘药80年代中国研制124种预防气管炎植物药中就有69种主成份是黄酮类化合物，包含黄酮醇、双氢黄酮及其甙，大多是很好消炎、止咳、平喘活性成份。1.7.2.4天然抗氧化剂黄酮类化合物作为合成抗氧剂如BHT、BHA等替换品含有高效、低毒、廉价、易得特点，日益受到重视。大量研究表明，茶多酚能够有效地抑制油脂过氧化物形成和多烯脂肪酸分解，从而延长了油脂货架期。茶多酚已在保健食品、鱼油、食用油中得到广泛应用。如从法国桦树皮和葡萄籽中提取总黄酮制成食用保健品“碧罗芷” 被美国FDA认可，经研究表明其含有很好抗氧自由基作用， 比VE强50倍，比VC强20倍，而且能经过血脑屏障， 预防中枢神经系统疾病32。1.7.2.5无公害农药化学合成农药生产和使用日益受到环境和商业压力，开发含有特异性功效、靶标专一性较安全无公害农药显示了宽广市场潜力。比如豆科植物中异黄酮类化合物，鱼藤酮(rotenone)及类鱼藤酮(rotenoids)均已制成植物类杀虫剂，在农业生产中得以广泛使用33。第二章 试验部分2.1试验原料和仪器2.1.1原料 香椿（购于赣州市章贡区三康庙和卫府里菜场）2.1.2试剂乙醇(50)、NaNO2(50 gL)、A1(NO3 )3(50 g/L) 、NaOH(40 gL)、石油醚、硼砂、石灰乳、HC1(2mol/L)、镁粉、浓盐酸、芦丁对照品（色谱纯）:中国药品生物检定所，试剂均为分析纯。2.1.3仪器LAMBDA一35型紫外一可见分光光度仪（美国PE企业）；FT-IRAVATAR350型傅立叶变换红外光谱仪（美国热电企业）；7200型紫外一可见分光光度计（上海尤尼柯）；微波合成仪（环球分析仪器）；真空干燥箱（上海跃进医疗器械厂）2.2黄酮含量测定原理和方法2.2.1测定原理黄酮类化合物含有特定紫外吸收带，其结构中肉桂酰环产生I带在300400nm内。2.2.2测定方法采取分光光度法。先用黄酮对照品芦丁配制标准溶液，于360 nm波优点测吸光度。制备标准曲线，求出回归方程，然后依据样品吸光度求出黄酮含量。2.2.2.1标准曲线制作正确称取芦丁标准品100 mg，置于100ml容量瓶中，加5