雌性大鼠性早熟对糖脂代谢的影响.pdf

第 45卷 第2期2024 年 3月Vol.45 No.2March 2024中山大学学报（医学科学版）JOURNAL OF SUN YATSEN UNIVERSITY（MEDICAL SCIENCES）雌性大鼠性早熟对糖脂代谢的影响林小雅，黄宝江，张军，郭松，马华梅，李燕虹，杜敏联，陈秋莉（中山大学附属第一医院儿科，广东 广州 510080）摘要：【目的】探究雌性大鼠性早熟对糖代谢和脂代谢的影响。【方法】将60只两天龄的雌性大鼠随机分为性早熟组和正常组两组，分别在5天龄时给予达那唑（300 g/只）或溶剂大豆油进行皮下注射，从21天龄起每天观察大鼠的阴道开口状况。建模成功的两组按照阴道开口顺序分别于阴道开口后3 d、7周龄和12周龄进行处死，处死前空腹 12 h。【方法】测量麻醉后的体重和鼻肛长，通过酶联免疫吸附试验测量葡萄糖、胰岛素、血脂、雌二醇、瘦素和脂联素的浓度，病理切片观察肾周脂肪、子宫和卵巢的变化。【结果】通过正常组和早熟组两组3个时间点对比，早熟组在阴道开口3 d时体质量和鼻肛长小于正常组，但是不影响后续生长发育，7周龄和12周龄时两组体质量和鼻肛长差异无统计学意义。两组的胰岛素浓度对比在阴道开口后3天内有统计学意义（P=0.001），早熟组存在高胰岛素血症，且早熟组此时的肾周脂肪细胞增多，在7和12周龄差异无统计学意义，两组3个时间点的雌二醇、瘦素和脂联素浓度差异均无统计学意义，两组卵巢和子宫与体质量的比重差异无统计学意义。【结论】通过两组大鼠的对比，性早熟使机体提前跨越发育的时间窗，不能适应内环境的骤变，产生的一系列变化只是暂时性且可逆性，至成年期会恢复。关键词：性早熟；糖代谢；脂代谢；胰岛素抵抗；雌性大鼠中图分类号：R725.8 文献标志码：A 文章编号：1672-3554（2024）02-0233-10DOI：10.13471/ki.j.sun.yat-sen.univ（med.sci）.20240305.005Effect of Precocious Puberty on Glucose and Lipid Metabolism in Female RatsLIN Xiaoya，HUANG Baojiang，ZHANG Jun，GUO Song，MA Huamei，LI Yanhong，DU Minlian，CHEN Qiuli（Department of Pediatrics，The First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510080，China）Correspondence to：CHEN Qiuli；E-mail：Abstract：【Objective】To explore the effect of precocious puberty on glucose metabolism and lipid metabolism in female rats.【Methods】Sixty two-day-old female rats were randomly divided into 2 groups.When aged 5 days，the precocious puberty group and normal group were given a single subcutaneous injection of danazol and solvent soybean oil respectively.The vaginal opening of rats was monitored from their 21 days of age.After 12 hours of fasting，all successful modeling rats were randomly executed within 3 days after vaginal opening，when aged 7 and 12 weeks.Then we measured the rats body weight and length，determined the concentrations of glucose，insulin，blood lipids，estradiol，leptin and adiponectin with enzyme-linked immunosorbent assay and observed the pathological changes of perirenal fat，uterus and ovary.【Results】For body weight and length，rats in the precocious puberty group were smaller than those in the normal group within 3 days after vaginal opening，but which did not affect their subsequent growth and development，and there was no 基础研究 收稿日期：2023-11-06 录用日期：2024-02-21基金项目：广东省科技创新战略专项资金（2018A030310266）作者简介：林小雅，第一作者，研究方向：儿童内分泌，性早熟，E-mail：；陈秋莉，通信作者，博士，副主任医师，E-mail：第45卷中山大学学报（医学科学版）significant difference between the two groups at 7 and 12 weeks of age.Within 3 days after vaginal opening，insulin levels had significant difference between the two groups（P=0.001），the precocious group showed hyperinsulinemia and increased number of perirenal adipocytes.At three execution times，no significant difference was noted in estradiol，leptin and adiponectin levels between the two groups.The same was true in the ratios of ovary or uterus to body weight between the two groups.【Conclusions】Precocious puberty makes earlier onset of pubertal development and allows body maladaptation to the sudden changes of the internal environment.However，the changes due to precocious puberty are temporary and reversible，and they may become normal in adulthood.Key words：precocious puberty；glucose metabolism；lipid metabolism；insulin resistance；female ratJ SUN Yatsen Univ（Med Sci），2024，45（2）：233-242性早熟是女孩在生殖年龄提前进入青春期的生理现象1，与正常发育女孩相比，性早熟女孩更容易出现体脂积聚的倾向，并且其体质指数标准分数（body mass index standard deviation score，BMISDS）明显升高2。早初潮可能会增加成年期肥胖3、2型糖尿病4、高血压5、缺血性心脏病6和中风7的风险。早初潮的女性成年后心血管疾病的风险增加可能与儿童期脂肪积聚过多有关8-9，最近的研究还提示早熟女性在青春期和成年早期可能会积聚更多的脂肪10-11。然而，大部分相关研究都是回顾性研究，考虑到从青春期到成年期的时间跨度较大，影响因素众多，包括饮食习惯、遗传因素（特别是肥胖易感基因的差异）和环境因素等，这些人际差异都可能影响成年期的糖脂代谢或代谢综合征的发生率。动物实验具有控制多种因素的优势，除了研究因素即是否性早熟的不同外，动物实验还能消除遗传背景的多样性、饮食结构和环境因素的干扰，从而更好地反映和解释性早熟对生理影响的程度。此外，动物实验还能够进一步探究性早熟伴随的内分泌-脂代谢调控异常对相关组织形态学的改变。然而，截至目前，尚未有相关动物实验报告关于性早熟对糖脂代谢影响的研究。因此，本研究旨在通过建立雌性SD大鼠性早熟模型，研究性早熟对大鼠青春期的早期、中后期以及成年期体脂积聚、糖代谢和脂代谢的影响。这将有助于更全面地理解性早熟的生理效应，为相关疾病的预防和治疗提供重要参考。1 材料与方法1.1实验动物本研究已获中山大学实验动物伦理委员会批准，批准编号为IACUC-2022-000982，符合伦理规范和法规的要求。我们使用清洁级Sprague-Dawley（SD）大鼠，这些动物由中山大学东校区动物实验中心 许可证号SCXK（粤）2021-0029 供应。正常SD大鼠是通过自然交配获得的，雌性大鼠产下幼仔后，我们选择了生后 2天龄的雌鼠，共分为 6窝，每只窝中有10只幼仔。这些大鼠在中山大学北校区动物实验中心的动物房 许可证号 SYXK（粤）2019-0209 中进行饲养。母鼠被提供标准饲料，可以自由进食，幼仔在生后3周龄时断乳。断乳后，每只幼鼠被分别安置在笼中，每个笼子中有4只幼鼠。这些幼鼠继续接受标准饲料，也是自由进食的。每周，我们测量幼鼠的体质量和鼻肛长，以监测它们的生长和发育情况。1.2材料达那唑（Danazol）：美国 LKT 公司。注射用大豆油：湖北盛天恒创生物科技有限责任公司；雌二醇：美国雅培公司，ARCHITECT Estradiol试剂盒。胰岛素：北京北方生物技术研究所，碘125I 胰岛素放射免疫分析药盒。血清胆固醇测定试剂盒、甘油三酯测定试剂盒：北京豪迈生物工程有限公司。高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒：日本积水医疗株式会社。瘦素：美国 RayBiotech 公司，Raybio Rat Leptin（OB）ELISA试剂盒。脂联素：Abno234第2期林小雅，等.雌性大鼠性早熟对糖脂代谢的影响va，Abnova Adipoq（Rat）ELISA试剂盒。1.3方法1.3.1 模型制备方法及分组 在雌性SD大鼠生后第5天，所有雌鼠按随机区组（同窝）设计，即同窝按随机数5只注射达那唑、5只注射溶剂大豆油最终分为2组（30只/组）：正常发育对照组（以下简称C组或正常组）：皮下注射精制大豆油0.1 mL；性早熟模型组（以下简称PM组或早熟组）：皮下注射达那唑300 g/只12（达那唑溶于精制大豆油中，300 g/0.1 mL）。从第21天起每天观察阴道开口情况。早熟组中以小于正常组开口时间的-2SD纳入研究；若早熟组大鼠阴道开口超过正常组开口时间的-2SD，则视为造模失败者，弃去。两组中按窝号和开口顺序匹配的原则随机分为3批，分别于阴道开口后 3 d 内（vaginal open day3，Vod3，青春早期）、满7周龄（青春中后期）和满12周龄（成年期）处死，每批至少包括16只大鼠，每组至少包括8只。1.3.2标本采集及处理所有大鼠在处死前一天禁食12 h，处死当天早上，称重和麻醉，测量麻醉后体质量和鼻肛长。取血立即测定葡萄糖浓度，及测定胰岛素、血脂（Chol、TG、HDL-c、LDL-c）、雌二醇、leptin、adiponectin。取血后立即处死、开腹，取出双肾周全部脂肪，称重；完整分离子宫卵巢，称重。将肾周脂肪、子宫卵巢置于40 g/L多聚甲醛固定。48 h后石蜡包埋，超薄切片（4 m）后HE 染色，显微镜下观察组织结构。12 周龄大鼠处死前一天行OGTT（Oral Glucose Tolerance Test），禁食12 h 后开始实验，通过灌胃给予2 g/kg含水葡萄糖口服，分别于0，30，60，90，120 min剪尾取血检测微量血糖。1.3.3各指标检测及计算 Lee 指数（Lee index）=1 000体质量（g）-1/3/体长（cm）；OGTT葡萄 糖 曲 线 下 面 积（glucose area under the curve，AUC）的计算：AUC=0.25（0 h血糖值）+0.5（0.5 h血糖值）+0.75（1 h血糖值）+0.5（2 h血糖值）.胰岛素抵抗与胰岛敏感性评定指标：胰岛素抵抗指数（homeostasis assessment model for insulin resistance，HOMA-IR）=胰岛素（U/mL）血糖（mmol/L）/22.5；胰岛素敏感指数（homeostasis assessment model for insulin sensitive index，HOMA-ISI）=100/胰 岛素（U/mL）血糖（mmol/L）；肾周脂肪细胞直径测量：应用研究级正置荧光显微镜（BX 51），随机选取肾周脂肪 HE 染色切片的高倍视野（物镜40），应用Image-Pro Plus专业软件，测量每个视野中脂肪细胞最大径与最小径，计算其直径平均值；同时计算相同单位面积内脂肪细胞数。所有数值均计算3个高倍视野取平均值。1.4统计方法所有定量数据经过正态性检验。符合正态分布的定量数据以均值标准差表示，均值之间的比较采用t检验。对于那些离散度较大，不符合正态分布的数据，采用对数转换后再次进行正态性检验。早熟组内两个变量之间的相关性分析采用Pearson相关分析进行。显著性水平为P0.05时，认为具有统计学意义。数据分析采用 SPSS 13.0（SPSS，version13.0 SPSS Inc，Chicago，IL，USA）。2 结 果2.1正常组和早熟组体格生长情况符合条件并纳入统计的正常组共30只，早熟组共25只（其中5只大鼠的阴道开口时间超过正常组开口时间的-2SD，被排除，剩余 25 只进入早熟组）。研究期间，正常组和早熟组从生后第5 d开始至12周每周的身长、体质量和Lee指数均无统计学显著差异。两组生长曲线几乎完全重叠，表明性早熟对大鼠的体格生长没有明显影响。2.2阴道开口情况正常组的阴道开口时间是（36.133.45）（3142）d，早熟组阴道开口时间是（24.792.04）（2329）d，两组间有显著性差异（P0.001），造模成功。2.3两组于处死的3个时间点身长、体质量和Lee指数的比较两组在处死的3个时间点（Vod3、7周龄、12周龄）的身长、体质量和Lee指数如表1所示。由于早熟组的雌鼠性成熟较早，其阴道开口时间也较早，因此Vod3时的雌鼠日龄显著小于正常组的雌鼠。在Vod3时，早熟组的身长、体质量和Lee指数也显著小于正常组。然而，这些差异并没有对后续的生235第45卷中山大学学报（医学科学版）长产生显著影响，两组在7周龄（青春中后期）和12周龄（成年期）的身长、体质量和Lee指数无统计学显著差异。2.4两组于处死的3个时间点雌二醇（E2）的比较两组在处死的3个时间点（Vod3、7周龄、12周龄）雌二醇的比较如表2所示。三个时间点两组间的雌二醇均无统计学显著差异，提示同一处死时间节点性发育状态接近。2.5两组于处死的3个时间点子宫卵巢的比较两组在处死的3个时间点（Vod3、7周龄、12周龄）卵巢质量与体质量比值及子宫质量与体质量比值均无统计学显著差异，进一步说明两组在性发育程度上无差别。同一组别内7周龄与12周龄时子宫与体质量的比值较Vod3明显增加，提示随着年龄和性发育的进展，子宫相对体质量逐渐增大，而卵巢则相对变化不大（图1）。表1Vod3的身长、体质量和Lee指数Table 1Body length，weight and Lee index for VOD3 GroupsCPMt/t/ZPDay of death/d38.02.427.51.2-3.32b0.001Vod3-Ht/cm15.440.3612.230.72*-10.14a 0.001Vod3-Wt/kg105.228.0150.8311.18*-11.02 0.001Vod3-Lee index305.54.4301.16.6*-1.63a0.143*P0.05 Normal group vs precocious group；a is t test；b is Wilcoxon rank sum test.Vod3：vaginal open day 3.Ht：body length，height；Wt：body weight，weight.There were 10 rats in the normal group and 8 rats in the precocious group.C：control group；PM：precocious puberty group.表2两组间3个处死时间雌二醇和Leptin的比较Table 2Comparison of estradiol and Leptin at three times of execution between the two groups GroupsCPMt/t/ZPVod3-E225.65.634.56.4-1.72b0.0877w-E257.829.240.36.4-1.13b0.27812w-E244.410.541.313.6-0.53a0.653Vod3-Leptin92.922.7144.9 128.8-0.13b0.9427w-Leptin147.675.8178.094.2-0.82b0.42712w-Leptin306.3316.6202.4115.2-0.14b0.935Vod3：vaginal open day 3；E2：estradiol；a is ttest；b is Wilcoxon rank sum test.There were 10 rats in the normal group and 8 rats in the precocious group at each time point.w：week.C：control group；PM：precocious puberty group.A：HE40 of Vod3 ovaries in the normal group；B：HE40 of Vod3 ovaries in the precocious group.Blue arrows are primordial follicles，red arrows are primary follicles，yellow arrows are secondary follicles，green arrows are mature follicles，and black arrows are corpus luteum.图1两组间阴道开口3天时卵巢的比较Fig.1Comparison of ovaries at 3 days of vaginal opening between the two groups 236第2期林小雅，等.雌性大鼠性早熟对糖脂代谢的影响卵巢的镜下病理如图1所示。从镜下来看，早熟组阴道开口3 d时卵巢原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡多，未见黄体；在正常组的卵巢中，有更多的成熟卵泡，伴随着增多的纤维间质，还可以观察到个别黄体的存在。这表明，早熟组的卵巢发育成熟程度明显低于正常组。在7周龄时，两组的卵巢中都含有较多的黄体和成熟卵泡，卵巢间质呈疏松和水肿状态，两组之间的成熟程度相似。到了12周龄，两组的卵巢都含有更多的黄体，以黄体为主，同时仍可见原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡。这表明，两组的卵巢在发育成熟程度上趋于一致。2.6两组于处死的3个时间点肾周脂肪的比较2.6.1肾周脂肪质量Vod3时早熟组肾周脂肪较正常组显著轻，但由于其体质量亦轻，故肾周脂肪与体质量的比值无统计学差异。其余两个时间点两组间的肾周脂肪质量及其与体质量比值也均无统计学差异。2.6.2肾周脂肪直径三个时间点两组间的肾周脂肪细胞平均直径的差异均无统计学显著差异。2.6.3肾周脂肪数量两组在处死的三个时间点（Vod3、7周龄、12周龄）单位面积内脂肪细胞数量的比较如表3所示，Vod3脂肪组织镜下病理如图2所示。阴道开口3 d 时早熟组脂肪细胞数目比正常组显著增多，提示早熟组Vod3脂肪细胞增殖明显，但至7周时和12周时脂肪细胞数目之间无统计学差异。2.7两组于处死的3个时间点血脂的比较阴 道 开 口 3 天，早 熟 组 胆 固 醇（1.350.10）mmol/L 较正常组（1.690.13）mmol/L 低（t=4.533，P=0.001），低 密 度 脂 蛋 白 早 熟 组（0.340.05）mmol/L亦较正常组（0.460.06）mmol/L低（t=3.544，P=0.005）。但至 7 周龄和 12 周龄时两组间血脂无统计学显著差异。2.8两组于处死的3个时间点脂肪因子的比较3个时间点Leptin和Adiponectin两组间无统计学显著差异。Leptin和adiponectin数值的离散度较表3两组间3个时间单位面积内肾周脂肪细胞数量的比较Table3Comparison of the number of perirenal adipocytes per unit area at three times between the two groups GroupsCPMt/t/ZPVod3126.116.1153.511.3*-2.37b0.0187 weeks111.818.6118.814.5-0.870.39812 weeks71.838.586.432.2-0.850.406b is Wilcoxon rank sum test.There were 10 rats in the normal group and 8 rats in the precocious group at each time point.*P3.5），而正常组无一例 HOMA-IR3.5。因胰岛素值个体差异较大，呈非正态分布，予对数处理后转变为正态分布后进行 t检验，早熟组胰岛素和 HOMA-IR 仍显著高于正常组。同时，HOMA-ISI则显著低于正常组。以上2参数至7周龄回落，并与正常对照组无差异；至12周龄有所回升，但仍低于Vod3，并与正常组无统计学显著差异。血糖和OGTT则两组间各时段均无统计学差异（表4和表5）。早熟组内比较，早熟组胰岛素测值和HOMA-IR与Vod3时比，于7周龄时呈有显著统计学意义的回落（P=0.026；P=0.046），与 12周龄比较亦然。12周龄时（成年）虽较7周有升高，但差异不显著。HOMA-ISI的改变显示相同变化规律。正常组内比较，胰岛素和 HOMA-IR 随年龄有逐步升高趋势，HOMA-ISI有下降趋势，组间比较均统计显著（P0.05）。2.10雌二醇与体格、糖代谢、脂肪代谢指标相关性分析如表6所示，在各个时间点，雌二醇与子宫卵巢质量、子宫卵巢比体质量、体质量、身长、血糖、HOMA-IR 呈 正 相 关，与 HOMA-ISI、Chol、TG、HDL、LDL呈负相关，与Lee指数、肾周脂肪质量和大小、肾周脂肪比体质量、胰岛素、Leptin、Adiponectin不相关。表4两组间3个处死时间血糖、胰岛素的比较Table4Comparison of blood glucose and insulin at three execution times between the two groups GroupsCPMt/t/ZPVod3-Glu/（mmol/L）5.110.285.630.731.67a0.1457w-Glu/（mmol/L）6.230.925.760.74-1.130.27812w-Glu/（mmol/L）5.650.885.600.90-0.100.926Vod3-insulin/（U/mL）6.082.0731.3817.61*5.76 0.0017w-insulin/（U/mL）8.292.5310.191.751.720.10612w-insulin/（U/mL）12.983.0314.897.320.590.567*Normal group vs precocious group P0.05；a is the t test.There were 10 rats in the normal group and 8 rats in the precocious group at each time point.w：week.表5两组间3个处死时间HOMA-IR、HOMA-ISI的比较Table 5Comparison of HOMA-IR and HOMA-ISI at three execution times between the two groups GroupsCPMt/t/ZPVod3HOMA-IR1.370.467.595.08*5.79 0.0017w-HOMA-IR2.250.702.600.491.120.28212w-HOMA-IR3.310.433.871.860.58a0.587Vod3HOMA-ISI3.781.990.760.37*-2.940.0137w-HOMA-ISI2.220.951.770.34-0.68b0.49512w-HOMA-ISI1.230.391.380.610.780.451*Normal group vs precocious group P0.05.a is the t test；b is Wilcoxon rank sum test.HOMA-IR：Homeostasis assessment model for insulin resistance；HOMA-ISI：Homeostasis assessment model for insulin sensitive index.There were 10 rats in the normal group and 8 rats in the precocious group at each time point.238第2期林小雅，等.雌性大鼠性早熟对糖脂代谢的影响此外，Leptin 与肾周脂肪质量呈正相关（r=0.342，P=0.029），与 血 LDL 水 平 呈 负 相 关（r=-0.358，P=0.025）。Leptin 的逐步回归分析显示，Lee指数、胰岛素、雌二醇、肾周脂肪/体质量比是其独立影响因素，复相关系数0.796。胰岛素的逐步回归分析显示，HOMA-IR、血糖、Leptin、TG是其独立影响因素，复相关系数0.997。HOMA-IR的逐步回归分析显示，胰岛素、血糖、Leptin和TG是其独立影响因素，复相关系数0.997。HOMA-ISI的逐步回归分析显示，HOMA-IR 和 TG 是其独立影响因素，复相关系数0.773。3 讨 论3.1主要发现尽管人类和大鼠的生长和青春发育模式并不完全相同，但它们之间存在一定的可比性。青春发动的激活从中枢信号到HPGA激活都是一个网络的关系，代谢与HPGA间也是网络的关系，并非直接的因果和受体-配体的关系，青春期的性发育、生长和代谢间是一个综合的平衡调控过程。3.2性早熟大鼠体格生长情况从两组大鼠生后追踪至成年发现，两组间的身长、体质量和Lee指数并无统计学显著差异，正常组和早熟组的生长曲线在身长、体质量和Lee指数方面都近乎重叠。体质量变化方面，与正常组比较，早熟组 BMI SDS 并未出现相对体质量增加倾向。同时，身长的改变从出生到开口后3天期间直至6周龄，几乎是呈线性模式生长，从7周开始生长衰减，未显示青春期的加速，符合以往已有概念：青春期的线性生长加速是人类所特有生长模式，是进化的结果。大鼠无青春期性激素相关的生长加速，这可能是性早熟并不影响大鼠生长曲线的原因。3.3性早熟大鼠雌激素水平及子宫卵巢大小的改变阴道开口是大鼠青春发育的常用标志。前期研究发现大鼠于阴道开口前2周（生后3周龄）卵巢已开始发育，且正常组阴道开口3 d已见到代表排卵后的黄体，因此阴道开口3 d大致相当于人类初潮后即青春中晚期，开口 12 周即进入动情周期12-13，此时卵巢发育基本成熟。7周龄大致相当于青春期至成年期的过渡时期，12周进入成年期。阴道开口3 d时，由于早熟组开口日龄明显比正常组早10 d左右，身长、体质量和Lee指数均较正常组小；同时，虽然早熟组血清雌二醇水平与正常组相当，但从镜下观察早熟组卵巢均未见黄体，正常组卵巢可见12个黄体，早熟组卵巢发育的成熟程度不如正常组，提示早熟组刚开口时卵巢功能未成熟，其成熟的节奏迟于正常，这与已知的人类发育规律类似，人类初潮时是无排卵月经，早熟者更是如此。表6雌二醇与体格、糖代谢、脂肪代谢指标相关性Table 6Correlation between estradiol and physical，glucose metabolism，and fat metabolism indicators E2rPE2rPE2rPUterine and ovarian weight0.5440.001LDL-0.3150.004Lee index-0.0780.460Uterine ovarian specific gravity0.4410.001Chol-0.2740.011Perirenal fat0.1870.076Weight0.4200.001TG-0.2670.014Perirenal fat percentage-0.0820.436Height0.3350.002HDL-0.2420.027Insulin0.1910.081HOMA-IR0.2640.016HOMA-ISI-0.2780.010Leptin0.1880.091Adiponectin0.0020.984Glu0.2450.022HOMA-IR：Homeostasis assessment model for insulin resistance；HOMA-ISI：Homeostasis assessment model for insulin sensitive index；Chol：Cholesterol；TG：Triglyceride；HDL：High density lipoprotein；LDL：Low density lipoprotein；Glu：blood glucose.w：week.239第45卷中山大学学报（医学科学版）3.4性早熟对大鼠内脏脂肪量、血脂及脂肪因子的影响结果显示，早熟组肾周脂肪细胞数量在阴道开口3 d时较正常组显著增多，提示早熟组有体脂急剧增加的趋势。尽管早熟组体脂剂量参数（肾周脂肪质量及其与体质量的比值、肾周脂肪细胞平均直径）在青春早期、后期和成年期较正常组相比均无显著增加。这可能受整体脂肪量少，单纯用肾周脂肪称重难以反映整体体脂的增加。雌激素是较强的促丝裂原物质，故推测该脂肪细胞增殖增加与雌激素的提前暴露有关联，与人类临床研究相似。至成年期，两组大鼠脂肪各项指标均无差异，提示这种体脂积聚增加的趋势已经渐稳定，未呈现早熟可致成年期肥胖的不良影响。阴道开口3 d时，早熟组的血脂Chol、LDL均降低，可能与雌激素的作用有关，但两组的血脂在成年期无差异，与临床研究早熟对发育早期和成年血脂无明显影响的结论基本一致14。早熟组大鼠脂肪因子 Leptin 和 Adiponectin 在青春中后期和成年期与正常组相比均无统计学意义的差异。这与人类临床研究一致15。3.5性早熟对大鼠胰岛素调控的影响阴道开口 3 d 时，早熟组胰岛素和 HOMA-IR较正常组显著升高，而在 7周龄和 12周龄时则回落；显示早熟组在青春期早期会发生高胰岛素血症和胰岛素抵抗，但到青春后期和成年期时能恢复正常。提示性早熟对胰岛素调控可能具负面影响，推测可能与体脂较快速积聚增加有关，但这种负面影响是仅限于青春期的暂时性、可逆性的影响，至成年期恢复正常，与体脂的改变一致。青春发动开始后，激素内环境发生一系列改变，代谢内环境亦伴同发生一系列相应改变。人类女性青春期发动后，雌激素、血清Leptin浓度（较早发生上调的与发育相关的主要激素和代谢因子）、体脂含量、体脂率、BMI指数、均有随年龄增长和青春期进程而增高的趋势16。已有研究表明，雌二醇可通过ER对代谢尤其是糖代谢产生正性的活性调控17。相反，血清Leptin水平与代谢综合征、肥胖和胰岛素抵抗呈正相关18，提示Leptin对糖代谢呈负性调控。雌二醇及Leptin两者可能是共同参与青春期糖代谢调控的重要因子。本研究中，大鼠的Leptin有随时间而升高的趋势，提示其青春期改变规律与人类相似。阴道开口3 d时，早熟组雌二醇及Leptin均较正常组高，虽无统计学显著差异，但可能有一定关系。机体代谢平衡的调控是多因子的综合影响，雌激素和Leptin与糖、脂代谢间并非简单的因果关系。早熟青春期的糖代谢，还有其他影响因素，如早熟的机体对Leptin和雌二醇的敏感性不一致，或早熟机体对胰岛素的敏感性更低，或尚有其他影响糖代谢因子（如 IGF-1 等）的差异19等等，有待进一步实验验证。作者既往在青春期女孩相关临床研究中发现，早初潮女孩发生胰岛素抵抗比例同样较正常初潮组高15，与本研究中大鼠的结果一致。由此可见，从动物在体试验到人类临床研究均提示性早熟对糖代谢有负面影响，可能与胰岛素抵抗有关；但动物实验提示这是仅限于青春期的暂时性可逆性的影响，至成年期能恢复正常。人类和其他哺乳类动物的每一生长发育阶段都具有其固有的程序性“时间窗”。上述早熟发生的发育早期的胰岛素抵抗，推测可能是因为早熟者机体体格生长、性激素改变和全身代谢突然提早跨越了发育的“时间窗”，此时体脂的积聚、激素的变化的突然冲击（E/leptin/其他因子参与的胰岛素正-负平衡调节），可能与早熟的幼年个体内环境的失平衡有关。早初潮者性成熟经历时间短，内环境改变过速，更易致代谢失衡。但随发育期进展和时间推移，至成年期激素水平趋于稳定，内环境亦随之逐渐稳定，机体经过自我调节，大多数可使胰岛素恢复正常的平衡。3.6雌激素水平与糖代谢、脂肪代谢的关系多元回归分析显示，雌二醇是Leptin的独立影响因素之一，而Leptin又是HOMA-IR和胰岛素的独立影响因素。此结果可以喻示雌二醇对青春发育个体糖代谢的负面影响，有可能与 Leptin 有关联。推测可能Leptin-雌二醇在糖代谢的调节平衡中，Leptin的负性调节占上风。以往研究已显示，人类青春期的生理性胰岛素抵抗与青春期特有的240第2期林小雅，等.雌性大鼠性早熟对糖脂代谢的影响GH-IGF-1 轴激素急剧上调伴生长加速有关20。已有研究显示，Leptin在青春期的分泌增加早于雌激素21，也早于生理性体脂堆积前，它是青春发动的允许因子22而非启动因子。它虽然是脂肪因子，但其血清水平却不完全是体脂堆积的结果。本研究结果显示了青春早期Leptin-雌二醇的改变与代谢改变的关系，提示他们有可能也同时参与、激活了青春期特有代谢特征的调控过程。更重要的是，Leptin也属于生长因子家族，与其他生长因子共享受体后信号通路。由于鼠类没有人类青春期GH-IGF-1轴相关的生长突增（本研究鼠的在体研究所见生长模式已再次证实），因此本研究以上结果可能更能凸显Leptin在参与青春早期代谢调控和生理性胰