超高效液相色谱-串联质谱法同时测定人血中12种抗抑郁药.pdf

中国司法鉴定 2024年第1期（总第132期）超高效液相色谱-串联质谱法同时测定人血中12种抗抑郁药徐 峰1，宣 宇2，卓晓聪1，富利祥1，陈 峰1，王斌杰3，郭狄飞4，余鹏飞5（1.杭州市公安局萧山区分局 刑事科学技术室，浙江 杭州 311200；2.浙江省公安厅刑侦总队 浙江省刑事科学技术应用研究重点实验室，浙江 杭州 310009；3.浙江警察学院 刑事科学技术系，浙江 杭州 310053；4.杭州海康威视电子有限公司质量检测中心，浙江 杭州 311500；5.绿城农科检测技术有限公司，浙江 杭州 310052）摘要：目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法同时测定人血中吗氯贝胺、安非他酮等12种抗抑郁药的分析方法。方法 血液样品经乙腈（含内标普罗地芬）沉淀蛋白后进样测定。采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱性（2.1 mm100 mm，1.8 m）进行分离，以2 mmol/mL甲酸铵和0.1甲酸的水溶液-2 mmol/mL甲酸铵和0.1甲酸的乙腈溶液体系进行梯度洗脱，流速0.35 mL/min。以电喷雾离子源正离子和多反应监测模式进行检测，内标法定量。结果 在相应质量浓度范围内，12种抗抑郁药的相关系数均大于0.999，检出限为0.050.2 ng/mL，定量限为0.51 ng/mL；在低、中、高不同添加浓度条件下，准确度为-7.1%11.7%，日内精密度为0.1%11.5%，日间精密度为1.9%9.4%，提取回收率为85.7%113.5%，基质效应为-18.2%10.2%；各成分在不同添加水平和不同环境下的稳定性为-9.30%11.30%。综上均符合生物样品分析及法医毒物分析要求。结论 该方法选择性强、重现性好、精密度高，可同时检测人血中12种抗抑郁药，可适用于法医毒物检验鉴定，对非正常死亡案（事）件中死者死因分析具有重要意义。关键词：法医毒物学；超高效液相色谱-串联质谱法；抗抑郁药；人血中图分类号:DF795.1 文献标志码:Adoi:10.3969/j.issn.1671-2072.2024.01.008文章编号:1671-2072-（2024）1-0053-08Simultaneous Determination of 12 Antidepressants in Human Blood by UHPLC-MS/MSXU Feng1,XUAN Yu2,ZHUO Xiaocong1,FU Lixiang1,CHEN Feng1,WANG Binjie3,GUO Difei4,YU Pengfei5（1.Department of Criminal Science and Technology,Xiaoshan District Branch of Hangzhou Public Security Bureau,Hangzhou 311200,China;2.Zhejiang Key Laboratory of Forensic Science and Technology,the Criminal Investigation Department of Public Security Bureau of Zhejiang Province,Hangzhou 310009,China;3.Department of Criminal Science and Technology,Zhejiang Police College,Hangzhou 310053,China;4.Quality Inspection Center,Hangzhou Hikvision Electronics Co.,Ltd,Hangzhou 311500,China;5.Greentown Agrotech Testing Technology Co.,Ltd,Hangzhou 310052,China）Abstract:Objective To establish an analytical method for the simultaneous determination of 12 antidepressants including moclobemide and bupropion in human blood by ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UHPLC-MS/MS).Methods Blood samples were purified through protein precipitation with acetonitrile that contained internal standard(proadifen),then the samples were injected into the UHPLC-MS/MS.The separation was performed on an ACQUITY UPLC HSS T3 column(2.1 mm100 mm,1.8 m)using gradient elution with a flow rate of 0.35 mL/min.The mobile phase consisted of water solution and acetonitrile solution that both contained 2 mmol/mL ammonium formate and 0.1%formic acid.The analytes were detected using multiple reaction monitoring mode.The electrospray ionization source was performed in positive mode.The internal standard method was used for quantification.Results The correlation coefficients of the 12 antidepressants were better than 0.999 in the corresponding concentration ranges,and the limits of detection ranged from 0.05 ng/mL to 0.2 ng/mL,the limits of quantification ranged from 0.5 ng/mL to 1 ng/mL.At different spiked concentrations(low,medium and high),the accuracy ranged from-7.1%to 11.7%,the intra-day precision ranged 鉴定科学Forensic Science收稿日期：2023-05-30作者简介：徐峰（1987），男，主要从事公安司法鉴定理化毒化检验分析工作。E-mail: 53Chinese Journal of Forensic Sciences，2024，No.1 Total No.132from 0.1%to 11.5%,the inter-day precision ranged from 1.9%to 9.4%,the extraction recoveries ranged from 85.7%to 113.5%,and the matrix effect ranged from-18.2%to 10.2%.The stability of each component at different levels of concentration and under different environment conditions ranged from-9.30%to 11.30%.All of the above results meet the requirements for biological sample analysis and forensic toxicology analysis.Conclusion The method is selective,reproducible and precise.The simultaneous determination of 12 antidepressants in human blood can be applied in forensic toxicology practice and it will be of great use in the analysis of the cause of death in unnatural death cases.Keywords:forensic toxicology;ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UHPLC-MS/MS);antidepressant;human blood抑郁症又称忧郁症，是当今社会十分常见的一种心理疾病，主要症状有情感缺失、情绪低落不稳定、睡眠障碍、注意力不集中、经常自怨自艾或者自卑自责。近年来研究发现，抑郁症患者往往具有较差的生理功能、较高的复发风险，甚至存在极高的自杀倾向1。根据世界卫生组织预测，2030年抑郁症将超过心脑血管疾病、癌症等各大疾病，成为全球疾病负担第一位的疾病。抑郁症严重损害了人类的身心健康和生活质量，每年有超100万人因抑郁症自杀身亡2。吗氯贝胺、安非他酮、文拉法辛、曲唑酮、米安色林、艾司西酞普兰、瑞波西汀、帕罗西汀、氟伏沙明、氟西汀、舍曲林、伏硫西汀12种常见抗抑郁药，因其疗效显著、副作用小、可长期使用等特点，是当今常用的抗抑郁药物。目前，国内外针对以上抗抑郁药的检测方法主要有高效液相色谱-荧光法、高效液相色谱-紫外法、高效液相色谱-串联质谱法等，且大多要采用液液萃取、固相萃取等较繁琐的前处理方法3，常应用于医学领域的临床应用及药物代谢研究，但在公安司法鉴定领域涉及较少。至今还没有可同时检测分析以上12种抗抑郁药的分析方法。对于公安司法鉴定部门而言，由于每个非正常死亡案（事）件中涉毒案（事）件的性质、对象及其发生、发展和结果各不相同，因而法医毒物鉴定具有分析目标物的不确定性、检验材料的复杂性、鉴定方法的综合性以及鉴定时限的紧迫性等特点4，所建立的分析方法需具有一定的典型性及实用性，能够满足公安部门日常司法鉴定的需要。本文基于超高效液相色谱-串联质谱法（ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UHPLC-MS/MS），根 据法医毒物分析方法验证通则（SF/T 00632020）5，结合 中华人民共和国药典6中生物样本定量分析方法验证指导原则，并参考文献7-13建立了一种能够同时检测上述12种常见抗抑郁药的分析方法，对相关非正常死亡案（事）件的快速定性具有重要意义。1 材料与方法1.1 仪器与试剂LCMS-8050 型超高效液相色谱-质谱联用仪（日本岛津公司）；Advanced Vortex Mixer型涡旋混合器（美国Henry Troemner公司）；MiniSpin 5452型高速离心机（德国 Eppendorf公司）；Purelab Flex型超纯水系统（英国ELGA公司）；XS205型电子分析天平（美国梅特勒公司）；M10、M100、M200、M1000移液器（德国Eppendorf公司）。氟西汀（批号S084865，纯度98.7%）、盐酸舍曲林（批号 S106639，纯度 99.9%）、盐酸曲唑酮（批号S076203，纯 度 99.9%）、盐 酸 文 拉 法 辛（批 号S057685，纯度98%）、伏硫西汀（批号S084841，纯度99.2%）、盐 酸 米 安 色 林（批 号 S025201，纯 度99.7%）、甲 磺 酸 瑞 波 西 汀（批 号 S037209，纯 度99.9%）、氟伏沙明（批号S077545，纯度97%）、吗氯贝胺（批号 S097389，纯度 99.5%）、盐酸安非他酮（批号 S073985，纯度 99.9%）、盐酸普罗地芬（批号S085829，纯度99.6%）标准品均购自阿尔塔科技有限公司，草酸艾司西酞普兰（批号 100885-202003，纯度 99.5%）、帕罗西汀（批号 100357-202105，纯度97.3%）标准品购自中国食品药品检定研究院等有证标准品；乙腈、甲醇均为质谱级（美国 Supelco公司）；甲酸铵、乙酸铵、甲酸均为质谱级（美国Fisher公司）；实验用水均为超纯水。1.2 溶液的配制 标准溶液的配制：分别移取适量12种抗抑郁药标准品，用甲醇稀释，使其质量浓度为1 g/mL，置 54中国司法鉴定 2024年第1期（总第132期）于4 条件下避光保存。内标工作液配制：准确移取盐酸普罗地芬标准品适量体积，用乙腈稀释配制成质量浓度为12.5 ng/mL的普罗地芬内标工作液，置于4 条件下避光保存。1.3 方 法1.3.1 仪器工作条件色谱条件 ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱（2.1 mm100 mm，1.8 m）；流动相A为2 mmol/mL甲酸铵和0.1甲酸的水溶液，流动相B为2 mmol/mL甲酸铵和0.1甲酸的乙腈溶液；流速为0.35 mL/min；柱温40。二元高压梯度洗脱程序详见表1。质谱条件 电喷雾离子源（electrospray ion source，ESI），电离模式为正离子模式；扫描模式为多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）模式；雾化气、干燥气、加热气均为氮气，流量分别为3、10、10 L/min；碰撞气为氩气；接口电压4 kV，接口温度300；脱溶剂管（desolvent tube，DL）温度250；喷针位置“+1”。根据以上条件优化质谱参数，12种抗抑郁药与内标的定性、定量离子对等信息详见表2。表1 二元高压梯度洗脱程序Tab.1 Binary high-pressure gradient elution procedure时间/min0.011.008.008.509.009.0112.00流动相A/%909040559090流动相B/%10106095951010表2 12种抗抑郁药与内标的MRM分析参数Tab.2 MRM parameters of 12 antidepressants and internal standard编号 12345678910111213化合物吗氯贝胺安非他酮文拉法辛曲唑酮米安色林艾司西酞普兰瑞波西汀帕罗西汀氟伏沙明氟西汀舍曲林伏硫西汀普罗地芬保留时间/min4.2375.6295.7055.8356.5106.5996.6576.9957.2587.6587.7978.0328.678前体离子质荷比/（m/z）269.0 240.0 278.05372.05265.05325.15314.10329.95318.95310.10305.90299.05354.40产物离子质荷比/（m/z）182.10*，139.05184.15*，131.15 58.10*，260.20176.15*，148.10208.15*，58.15109.10*，262.15176.15*，91.1070.10*，192.1571.10*，258.1044.10*，148.10159.00*，275.00150.00*，109.0591.10*，167.25Q1 Pre偏差电压/V-10，-10-28，-29-15，-11-20，-20-14，-10-12，-12-12，-10-25，-13-13，-13-23，-12-12，-11-11，-11-18，-18碰撞能量/V-19，-33-13，-26-21，-13-25，-38-21，-25-28，-21-13，-30-21，-29-16，-12-15，-9-28，-13-24，-40-45，-30Q3 Pre偏差电压/V-19，-25-19，-24-11，-27-20，-18-22，-10-11，-18-19，-18-20，-13-28，-18-18，-27-16，-19-16，-11-17，-11 注：带“*”离子为定量离子。1.3.2 样品前处理准确移取血液样品 200 L 于 2.5 mL 离心管中，加入 800 L 乙腈（含内标普罗地芬），涡旋1 min，并以8 000 r/min的转速离心2 min，取上清液并经过0.22 m有机/尼龙微孔滤膜，取1 L过滤液进行上机进样分析。55Chinese Journal of Forensic Sciences，2024，No.1 Total No.1321.4 方法学验证1.4.1 选择性取10份空白血液样品与添加标准品血液样品开展对照实验，按“1.3.2节”方法处理后比较两者色谱图。1.4.2 线性关系、检出限与定量限系列质量浓度添加样品配制：向空白血液样品中添加适量12种抗抑郁药物标准物质，配制标准曲线，使吗氯贝胺、安非他酮、文拉法辛、曲唑酮、米安色林、瑞波西汀、氟伏沙明、氟西汀、舍曲林、伏硫西汀质量浓度分别为0.5、2、5、10、25、50、100 ng/mL；艾司西酞普兰、帕罗西汀质量浓度分别为 1、2、5、10、25、50、100 ng/mL，每个浓度点的添加样品独立重复5次。取已配制的标准曲线系列混合工作液，采用优化后的条件，按“1.3.2节”方法处理后上机检测。以目标物的质量浓度（X）为横坐标，以目标物与内标物峰面积的比值（Y）为纵坐标进行线性回归。以 3 倍信噪比响应值相对应的添加样品质量浓度计为检出限（limit of detection，LOD），以 10倍信噪比响应值相对应的添加样品质量浓度计为定量限（limit of quantification，LOQ）。实验进一步考察了定 量 限 处 的 准 确 度 和 精 密 度，具 体 方 法 详 见“1.4.3”节。1.4.3 准确度与精密度取空白血液样品，分别添加适量的混合标准物质，使其质量浓度分别为低（1.0 ng/mL）、中（25.0 ng/mL）、高（100.0 ng/mL），按“1.3.2节”方法处理，测得各目标物的质量浓度。连续5 d进行同样的操作，根据结果考察其准确度和精密度。1.4.4 提取回收率与基质效应首先用乙腈作为溶剂，添加适量的混合标准物质，使其质量浓度分别为低（1.0 ng/mL）、中（25.0 ng/mL）、高（100.0 ng/mL），上机检测，重复进样 6 次，将各浓度目标物的峰面积均值记为A；其次取空白血液样品 6份，先按“1.3.2节”方法处理，再分别添加适量的混合标准物质，作为提取后系列混合工作液，上机检测后得到的各目标物的峰面积均值记为B；最后取6份空白血液样品，分别添加适量的混合标准物质，并以同样质量浓度作为提取前系列混合工作液，按“1.3.2节”方法处理后上机检测，将得到的各目标物的峰面积均值记为C。提取回收率等于C除以B再乘以100%，基质效应等于B减去A除以A再乘以100%。1.4.5 稳定性移取空白血液样品，独立添加适量的混合标准物质，分为低（1.0 ng/mL）、中（25.0 ng/mL）、高（100.0 ng/mL）三组，分别在室温下放置8 h、反复冻融5次以及-18 冰箱冷冻保存7 d后，再按“1.3.2节”方法处理后进样，以考察不同添加水平的样品在不同环境下的稳定性。稳定性为各目标物与内标物峰面积比值与相应浓度新配制添加样品进行比较。2 结果与分析2.1 方法优化2.1.1 色谱条件为提高该方法目标化合物的响应，优化峰形以及出峰时间，实验考察了乙腈和甲醇这两种常见的有机试剂作为流动相体系中的有机相对实验结果的影响。结果显示，乙腈、甲醇都能较好地洗脱目标化合物，但使用乙腈洗脱时，出峰时间更合理且峰形更完美，响应更佳。因此，实验选择乙腈作为有机相。实验进一步对不同水相（纯水，1、2 mmol/mL甲酸铵水溶液，1、2 mmol/mL乙酸铵水溶液）和与之对应质量浓度的乙腈溶液作为流动相体系进行研究。结果显示：甲酸铵水溶液体系的响应均高于对应质量浓度的乙酸铵溶液及纯水体系，在使用乙酸铵流动相体系时，伏硫西汀、帕罗西汀、氟伏沙明、安非他酮响应急剧下跌。同时，与1 mmol/mL甲酸铵水溶液/甲酸铵乙腈溶液体系相比，在2 mmol/mL甲酸铵水溶液/甲酸铵乙腈溶液体系下，各目标物的响应更高且峰形更好。因此，实验选择甲酸铵作为流动相缓冲盐。实验分别向含1、2 mmol/mL的甲酸铵水溶液/甲酸铵乙腈溶液中加入适量甲酸，使其含0.05%、0.1%、0.2%的甲酸，结果发现，随着酸度的增加，各目标物的离子化程度增强，响应呈不同程度地升高趋势，但考虑到酸度增加会缩短色谱柱的使用寿命，实验选择甲酸含量为0.1%。综上，实验最终选择 2 mmol/mL 甲酸铵和含0.1甲酸的水溶液作为流动相A，以2 mmol/mL甲 56中国司法鉴定 2024年第1期（总第132期）酸铵和0.1甲酸的乙腈溶液作为流动相B。2.1.2 质谱条件实验采用电喷雾离子源正离子（ESI+）和MRM模式测定血液中12种抗抑郁药的含量。通过仪器自动优化，确定定量/定性离子对、碰撞能量、Q1 Pre偏差电压、Q3 Pre偏差电压、雾化器流量等参数，并着重研究了不同喷针位置（-3、-2、-1、0、+1、+2）对目标物离子化难易程度的影响。结果显示，喷针越靠近离子源，帕罗西汀离子化程度相对增强，提高了响应值，但其余目标物的响应却有不同程度的降低或基本没变化。综合各方面因素，实验最终选择喷针位置为“+1”处。2.1.3 预处理方法实验主要选择蛋白沉淀法作为预处理方法，原理是在待测液上机分析前，先沉淀血红蛋白，从而避免上机检测过程中蛋白质沉积，影响色谱柱寿命14。实验以乙腈和甲醇作为蛋白沉淀剂，结果发现，乙腈和甲醇都能够起到沉淀蛋白的作用。但考虑到流动相相似性，实验最终选择乙腈作为蛋白沉淀剂。2.2 方法学验证结果2.2.1 方法选择性 空白血液中均未检出 12 种抗抑郁药的特征色谱峰，而添加标准品血液中 12 种抗抑郁药与内标物均能有效检出且分离度良好，出峰时间合理，峰形好，说明该方法选择性较好。空白血液色谱图和 50 ng/mL 添加标准品血液的 MRM 色谱图如图1所示。（113依次分别为吗氯贝胺、安非他酮、文拉法辛、曲唑酮、米安色林、艾司西酞普兰、瑞波西汀、帕罗西汀、氟伏沙明、氟西汀、舍曲林、伏硫西汀、普罗地芬）（a）空白血液样品的MRM色谱图 （b）质量浓度为50 ng/mL血液样品的MRM色谱图图1 12种抗抑郁药与内标化合物的MRM色谱图Fig.1 MRM chromatograms of 12 antidepressants and internal standard2.2.2 线性关系、检出限与定量限12 种抗抑郁药的线性参数、检出限、定量限与定量限的准确度和精密度结果如表 3 所示。由表 3 可知，艾司西酞普兰、帕罗西汀在 1100 ng/mL，其他目标物在 0.5100 ng/mL 范围内，均呈良好的线性关系，相关系数均大于 0.999。12 种抗抑郁药的检出限为 0.050.2 ng/mL，定量限为 0.51 ng/mL，准确度为-11.316.2，日内精密度为0.3%8.1%，日 间 精 密 度 为 2.3%12.3%，均 符 合要求。2.2.3 准确度、精密度、提取回收率与基质效应12种抗抑郁药在不同添加水平下的准确度、精密度、回收率及基质效应结果详见表 4。由表 4可知：12种抗抑郁药在低、中、高三个质量浓度条件下的准确度为-7.1%11.7%，日内精密度为 0.1%11.5%，日间精密度为 1.9%9.4%，提取回收率为85.7%113.5%，基 质 效 应 为-18.2%10.2%，准 确度、精密度均符合要求，基质效应不明显。57Chinese Journal of Forensic Sciences，2024，No.1 Total No.132表3 12种抗抑郁药的线性参数、检出限和定量限Tab.3 The linearity,limit of detection and limit of quantification of 12 antidepressants（n=5）编号123456789101112化合物吗氯贝胺安非他酮文拉法辛曲唑酮米安色林艾司西酞普兰瑞波西汀帕罗西汀氟伏沙明氟西汀舍曲林伏硫西汀线性回归方程Y=0.241 864X-0.306 124Y=0.132 541X-0.156 217Y=0.208 568X-0.226 361Y=0.154 492X-0.172 363Y=0.065 035X-0.061 669Y=0.130 685X-0.154 553Y=0.246 199X-0.286 281Y=0.022 433X-0.026 371Y=0.056 536X-0.068 037Y=0.078 696X-0.095 617Y=0.097 084X-0.125 892Y=0.092 829X-0.113 278相关系数0.999 40.999 40.999 50.999 50.999 70.999 40.999 50.999 60.999 50.999 50.999 40.999 5线性范围/（ng/mL）0.51000.51000.51000.51000.510011000.510011000.51000.51000.51000.5100检出限/（ng/mL）0.20.050.10.10.20.20.050.20.10.10.20.2定量限/（ng/mL）0.50.50.50.50.510.510.50.50.50.5准确度/%5.46.1-11.33.14.91.82.69.35.33.4-4.816.2精密度RSD/%日内5.21.60.80.71.04.30.78.10.30.80.81.5日间7.36.56.35.87.09.55.612.35.22.34.610.8表4 12种抗抑郁药在不同添加水平下的准确度、精密度、提取回收率和基质效应Tab.4 The accuracy,precision,spiked recoveries and matrix effects of 12 antidepressants at different spiked levels（n=6）化合物吗氯贝胺安非他酮文拉法辛曲唑酮米安色林艾司西酞普兰添加水平/（g/L）1.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.0准确度/%3.93.4-6.04.60.34.211.70.7-3.82.70.64.15.20.1-7.16.73.77.6精密度RSD/%日内2.71.83.90.60.13.10.30.74.10.70.33.911.51.52.50.90.43.9日间5.66.94.94.46.42.81.95.63.04.66.43.79.48.56.25.47.15.4提取回收率/%89.598.6100.295.197.5102.3110.5106.3107.5105.1111.7107.592.5103.9113.586.5112.5108.6基质效应/%-18.2-4.84.4-6.07.23.2-1.01.40.7-7.710.25.1-5.28.64.20.2-4.54.4化合物瑞波西汀帕罗西汀氟伏沙明氟西汀舍曲林伏硫西汀添加水平/（g/L）1.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.0准确度/%1.41.64.08.01.9-6.2-1.43.2-3.5-4.60.5-1.3-6.93.8-1.9-2.81.62.9精密度RSD/%日内0.20.62.00.50.61.62.72.31.71.21.20.42.62.50.81.90.50.6日间4.86.55.96.96.74.65.46.63.56.67.03.77.08.45.25.55.95.7提取回收率/%106.496.899.2113.3108.9101.886.988.2101.388.985.795.6108.2100.1105.3106.995.997.9基质效应/%-17.5-6.7-3.9-14.0-5.86.57.6-3.65.3-11.42.99.1-15.85.24.5-17.0-11.13.3 58中国司法鉴定 2024年第1期（总第132期）2.2.4 稳定性12 种抗抑郁药在不同添加水平和不同环境下的稳定性结果见表5。由表5可知，在室温下放置8 h、反复冻融5次、-18 冰箱冷冻保存7 d条件下，各目标物的稳定性为-9.30%11.30%，均在允差范围内，即认定各目标物在不同添加水平和不同环境下的稳定性良好。表5 12种抗抑郁药在不同添加水平和不同环境下的稳定性Tab.5 The stability of 12 antidepressants at different spike levels and in different environments(n=6)化合物吗氯贝胺安非他酮文拉法辛曲唑酮米安色林艾司西酞普兰 添加水平/（ng/mL）1.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.0室温下放置8 h/%-0.400.710.520.301.280.352.321.090.691.591.16-0.526.151.210.671.410.750.23反复冻融5次/%1.261.212.451.54-0.802.781.821.301.732.660.761.707.08-1.471.888.89-1.082.80-18 冷冻保存7 d/%1.041.47-0.902.51-1.070.473.371.031.272.561.841.08-3.972.241.258.24-1.50-1.15化合物瑞波西汀帕罗西汀氟伏沙明氟西汀舍曲林伏硫西汀添加水平/（ng/mL）1.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.01.025.0100.0室温下放置8 h/%4.56-0.81-0.222.95-1.390.576.090.680.59-2.221.301.43-1.280.880.077.091.73-0.39反复冻融5次/%7.321.92-2.159.36-0.234.01-8.510.64-1.50-4.330.971.9611.300.432.78-9.30-1.431.26-18 冷冻保存7 d/%8.261.120.88-6.65-1.69-0.50-4.950.40-0.451.30-1.05-0.77-3.871.29-0.403.431.741.332.3 案例应用2022年4月8日，在杭州某地居民小区附近河道内发现一具轻微腐败的中年女尸，经办案民警侦查，死者为该小区独居住户沈某某。法医委托送检其死后血液，并进行常规理化毒化筛查。利用本研究建立的 UHPLC-MS/MS 方法在死者血液中检出曲唑酮成分，质量浓度为32.6 ng/mL。2022年 11月 27日，王某报警称其妻童某和仅8个月大小的孩子不见了，随后民警在某车内发现了该两人，均已无生命体征，车内还有已熄灭的炭盆，初步判定一氧化碳中毒死亡。法医委托送检童某和小孩王某的死后血液，在两人血液中均检出达到致死量的碳氧血红蛋白。又根据本文建立的UHPLC-MS/MS方法，在死者童某的血液中检出舍曲林成分，质量浓度为53.5 ng/mL。3 结 论本单位所在地为本市人口最多的行政区，拥有常住人口200余万，非正常死亡案（事）件频发。近两年，每年受理量超350起，其中共检出以上抗抑郁药34起，占总数的4.8。本研究从实际检案需求出发，选用12种常见的抗抑郁药物为目标物。值得注意的是，艾司西酞普兰为西酞普兰的 S 型异构体，是人体内发挥药效的主要成分。在该实验条件下，S-西酞普兰和R-西酞普兰的母离子、子离子、保留时间高度一致，无论是通过自动优化，还是手动优化，均无法区分西酞普兰的构型。本研究建立了一种可同时检测血液中12种抗 59Chinese Journal of Forensic Sciences，2024，No.1 Total No.132抑郁药的 UHPLC-MS/MS 方法。该方法前处理简单便捷，在优化的实验条件下，12种抗抑郁药在各线性范围内线性关系良好，线性相关系数均大于0.999，方法最低定量限为 0.51 ng/mL。在不同添加浓度下，12种抗抑郁药的准确度、精密度均符合要求，且在不同环境下稳定性良好，故可将该方法应用于因患抑郁症自杀等相关非正常死亡案（事）件快速检验筛查和法医学检验鉴定等领域。参考文献：1 高贵元，黄 捷，刘 丹，等.抑郁症的发病机制及抗抑郁药物的研究进展J.中国医药导报，2021，18（1）：52-55.2 刘杰，朱晓玲，彭青枝，等.HPLC-TOF/MS测定保健食品中19种抗抑郁药物J.食品与机械，2021，37（7）：63-68.3 于盼盼，刘军，杨忠杰，等.HPLC-MS/MS 法同时测定人血浆中种抗抑郁药的浓度J.中国医院药学杂志，2020，40（5）：494-500.4 向平，沈敏.法医毒物学的发展与挑战J.中国司法鉴定，2016（1）：51-61.5 中华人民共和国司法部司法鉴定科学研究院.法医毒物分析方法验证通则：SF/T 00632020S.北京：中国标准出版社，2020.6 国家药典委员会.中华人民共和国药典M.北京：中国医药科技出版社，2015.7 中华人民共和国司法部司法鉴定管理局.血液、尿液中 238 种毒（药）物的检测 液相色谱-串联质谱法：SF/ZJD01070052016S.北京：中国标准出版社，2016.8 中华人民共和国公安部.法庭科学 230种药（毒）物液相色谱-串联质谱筛查方法：GA/T 15302018 S.北京：中国标准出版社，2018.9 MAARTEN D，ALEXANDER L N N，KRISTOF E M.Validation of a simple，fast liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for the simultaneous quantification of 40 antidepressant drugs or their metabolites in plasmaJ.Clinica Chimica Acta，2018，485：243-257.10 MA W P，GAO X，GUO H，et al.Determination of 13 antidepressants in blood by UPLC-MS/MS with supported liquid extraction pretreatmentJ.Journal of Chromatography B，2021，1171：122608.11 L H Y，CHEN B B，XU X Z，et al.Rapid simultaneous determination of 14 antidepressants and 13 antipsychotics in human 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