不同高脂饲料配方对建立非酒精性脂肪肝大鼠模型的影响.pdf

基础研究摘要目的：比较3种不同配方高脂饲料构建非酒精性脂肪肝大鼠模型的差异，提高高脂饲料建立非酒精性脂肪肝大鼠模型的成功率，为非酒精性脂肪肝病的研究提供稳定可靠的动物模型。方法：将SPF级雄性SD大鼠随机分为普通饲料对照组、高脂饲料1组（HFD1组）、高脂饲料2组（HFD2组）、高脂饲料3组（HFD3组）。各组大鼠分别给予相应饲料8周。造模期间记录大鼠一般情况、体质量和摄食量。喂养8周后，采用腹部超声、计算机断层扫描（CT）、核磁共振成像（MRI）对大鼠肝脏进行检查。取血和肝脏，检测肝功能指标（丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶）、血脂指标（甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇）和炎症指标（IL-1、IL-6、TNF-）的变化。肉眼观察肝脏大体形态，计算其肝指数和Lee s指数。比较上述指标在各组间的差异，综合评估不同配方高脂饲料对非酒精性脂肪肝大鼠模型的影响。结果：与对照组大鼠相比，HFD1组、HFD2组、HFD3组大鼠精神变差、活动减少、脱毛现象加重、摄食量减少、体质量明显升高，肝指数、Lee s指数显著提高，肝脏体积增大，边缘较钝，可见脂肪变性和沉积，且以HFD3组大鼠变化最为明显；HFD1组、HFD2组、HFD3组大鼠血清谷丙转氨酶、天门冬氨酸氨基转移酶、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和IL-1、IL-6、TNF-水平均显著升高，高密度脂蛋白胆固醇显著降低，且HFD3组更为明显；HFD1组、HFD2组、HFD3组大鼠肝脏肿大，实质回声增强，肝内管状结构显示欠清，肝和脾的CT值比值明显降低，同/反相位图上肝脏实质信号差别明显，且HFD3组对于大鼠影像学变化影响更大。结论：三种高脂饲料喂养SD大鼠8周后，均可建立非酒精性脂肪肝大鼠模型，但HFD3组诱导非酒精性脂肪肝大鼠模型优于其他两组，病变相对严重，预计维持时间也更长，更适于非酒精性脂肪肝病的机制研究和降脂药物的筛选。关键词非酒精性脂肪肝病；高脂饲料；动物模型；放射学；SD大鼠中图分类号：R575.5；R965.2文献标志码：A文 章 编 号：1009-2501(2024)05-0543-11doi：10.12092/j.issn.1009-2501.2024.05.009长期经常性高脂饮食，能量摄入超过消耗，会导致脂质代谢紊乱，引发代谢综合征1。非酒精 性 脂 肪 肝（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）以甘油三酯在肝脏蓄积和肝脂肪变性为特征，是代谢综合征在肝脏的局部表现2-3。NAFLD的患病人数约占全球总人口的四分之一，我国NAFLD患病率高达29.2%，为第一大肝病，还可发展为肝硬化甚至肝癌，对人类生命健康造成了极大的困扰4-5。NAFLD 一般从病史、临床表现、影像学、血清学和组织病理学进行诊断6，但发病机制复杂且尚不清楚，其治疗大多以进行生2023-12-28 收稿2024-02-07 修回河北省自然科学基金-生物医药联合基金培育项目资助项目（H2021208003）赵梓硕，女，硕士研究生，研究方向：药物评价和药物新剂型开发。E-mail：谢英花，通信作者，女，博士，硕士生导师，副教授，研究方向：药物评价和药物新剂型开发。E-mail：不同高脂饲料配方对建立非酒精性脂肪肝大鼠模型的影响赵梓硕1，朱玉光2，马燕山3，李志伟1，景永帅1，谢英花11河北科技大学化学与制药工程学院，石家庄 050018，河北；2石家庄市中医院检验科，石家庄 050051，河北；3石家庄市中医院放射科，石家庄 050051，河北中国临床药理学与治疗学中国药理学会主办CN 34-1206/R，ISSN 1009-2501http:/2024May;29(5):543-553543Chin J Clin Pharmacol Ther 2024 May;29(5)活方式干预为主，目前还未有特效药物7。动物模型是疾病发病机制研究、治疗药物研发及防治策略寻找的重要工具8。建立稳定、理想的NAFLD模型是研究疾病的重要基础，也是降脂新药研发所需要的。目前NAFLD动物模型的建立方法主要分为化学物质诱导模型、基因编辑诱导模型、饮食诱导模型等9。NAFLD发病率因饮食习惯改变而增加，肥胖人群增长与NAFLD患病率呈正相关10。高脂饮食（high fat diet，HFD）诱导的NAFLD模型操作简便、死亡率低、成本较低，与人类患病的病理生理方面较为相似11，故成 为 NAFLD 动 物 模 型 最 基 础 且 最 广 泛 的 方法12-16，大鼠、小鼠、仓鼠、豚鼠、猴、兔等实验动物均适用17。但目前的文献报道中，关于这一模型评价的研究仍然比较缺乏，且大鼠的高脂饲料配方种类众多，建模效果也不稳定18-21。基于此，本研究通过探索在饲料中添加不同比例的胆固醇、猪油、胆盐等常用造模剂，考察不同配方高脂饲料诱导大鼠NAFLD模型的效果，希望找到一个能诱导稳定NAFLD模型的大鼠高脂饲料配方，为改善NAFLD的造模方法提供更多的实验依据。1材料与方法1.1实验动物SD 大鼠，SPF 等级，雄性，56周，体质量180 g左右，购于河北伊维沃生物科技有限公司，动物许可证号：SCXK（冀）2022-002。饲养温度为2026，昼夜光照节律，设定自由摄食、饮水。普通饲料：购于小黍有泰（北京）生物科技有限公司，组成：酪蛋白、蛋氨酸、玉米淀粉、麦芽糖糊精、蔗糖、纤维素、大豆油、碳酸钙、磷酸二氢钾、重酒石酸胆碱等。高脂饲料：于小黍有泰（北京）生物科技有限公司定制，成分含量以质量分数表示。高脂饲料1（HFD1）：10%猪油、10%蛋黄粉、1%胆固醇、0.2%胆酸钠、78.8%普通饲料。高脂饲料2（HFD2）：15%猪油、蔗糖20%、1.2%胆固醇、0.2%胆酸钠、63.6%普通饲料。高脂饲料 3（HFD3）：20%猪油、蔗糖10%、2%胆固醇、0.5%胆酸钠、67.5%普通饲料。1.2试剂和仪器丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒，天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒（美国西门 子 医 学 诊 断 股 份 有 限 公 司，批 号 分 别 为628337、628380）；甘油三酯（TG）试剂盒，总胆固醇（TC）试剂盒，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂盒，低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）试剂盒（美康生物科技股份有限公司，批号分别为230321201、230904101、230530101、230705201）；白介素-1（IL-1）试剂盒，白介素-6（IL-6）试剂盒，肿瘤坏死因子（TNF-）试剂盒（四川沃文特生物技术有限公司，批号分别为304021、309031、301012）。ADVIA Chemistry XPT 型全自动生化分析仪（美国西门子医学诊断股份有限公司）；LA2000全自动化学发光免疫分析仪（四川沃文特生物技术有限公司）；Centrifuge5417R型低温离心机（德国Eppendorf公司）；精密电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；全数字化高端彩色多普勒超声诊断仪（飞利浦公司）；全功能64排128层CT（美国 GE 公司）；1.5T 高场强磁共振（德国西门子公司）。1.3实验动物分组及造模适应性喂养SD大鼠2周后，将40只大鼠随机分为4组（n=10），分别为对照组、HFD1组、HFD2组、HFD3组。对照组给予普通饲料，HFD1组、HFD2组、HFD3组分别给予相应配方的高脂饲料，连续饲喂8周。实验期间每天记录大鼠摄食量、体质量，并观察各组大鼠基本情况。1.4标本采集及处理造模8周结束后，大鼠禁食不禁饮12 h，腹主动脉采血，分离血清，冷冻保存；动物处死后，迅速取出新鲜肝脏，用冷生理盐水漂洗、吸水纸吸干水分后，观察各组大鼠肝脏外观并称量肝湿重。1.5检测指标1.5.1一般情况观察及记录实验期间，每日观察各组大鼠体质量、摄食量、精神状态、活动情况、毛发情况、粪便、对外界刺激的反应及有无死亡等。1.5.2肝功能、血脂水平及炎症因子的测定取大鼠血清，检测血清AST、ALT、TG、TC、HDL-C、LDL-C的含量及炎性细胞因子IL-1、IL-6、TNF-水平。1.5.3肝指数、Lee s 指数的测定称取每组大鼠的体质量、体长（从大鼠鼻端至肛门间的长度）、肝质量。分别按式（1）、式（2）计算其肝指数、Lee s指数。544中国临床药理学与治疗学 2024 May;29(5)肝指数=肝质量/g体质量/g100%（1）Lee s指数=肝质量/g 10003体长/cm（2）1.5.4影像学检查第8周末，每组大鼠禁饮食12 h，腹腔注射2%戊巴比妥钠（0.3 mL/100 g）麻醉，仰卧位四肢固定后，行超声、计算机断层扫描（CT）、核磁共振成像（MRI）等影像学检查。1.5.4.1超声检查各组大鼠腹部备皮，涂上耦合剂，超声波探头探查肝脏的不同部位。主要检查大鼠的肝脏实质回声情况、肝脏包膜情况、肝脏门静脉及其他血管情况，观察肝脏声像图，根据检查结果进行诊断22。1.5.4.2CT检查肝脏CT扫描范围从膈顶至肝右叶下缘，扫描参数：80 kV，自动mA，层厚0.625mm，束宽40 mm，螺距0.985:1，旋转时间0.4 s。CT值大小代表组织密度的高低，正常人体肝脏CT值约为60 HU，脂肪CT阈值为-25030 HU。肝脏CT值与脂肪沉积量为明显负相关。正常个体的肝CT值可能差异较大，但总体较高于脾脏，而脾脏CT值相对恒定，因此临床上常用肝/脾CT值比值来判断是否患有脂肪肝。诊断依据为：0.7肝/脾 CT 值比值1.0 时，为轻度 NAFLD；0.5肝/脾CT值比值0.7时，为中度NAFLD；肝/脾CT值比值0.5时，为重度NAFLD。1.5.4.3MRI检查MRI扫描采用动物专用线圈，扫描范围为膈顶至肝下缘，扫描序列名称：t1-fl2d-opp-in-tra-p2-mbh。具体参数，FOV：164；Slice thickness：6 mm；TR：120 ms；TE：3.09 ms。MRI检查无电离辐射，无创伤性，具有极高的软组织分辨力，且可多方位成像，对脂肪肝诊断具有重要意义。利用磁共振特有的同反相位扫描序列进行脂肪肝的研究。同相位图像（in-phase），肝细胞内的水和脂肪信号相加；反相位图像（out-of-phase），肝细胞内水和脂肪信号相减。当肝细胞内有一定量的脂肪组织时，同相位和反相位信号强度出现比较明显的差异；脂肪含量越多这种信号差异就越明显。通过观察磁共振图像中同一层面、同一位置肝脏的信号高低差异来认定有没有脂肪肝，以及脂肪肝的轻重程度。1.5.5大鼠肝脏大体形态观察解剖后取各组大鼠肝脏，肉眼观察其大小、颜色、形状等形态特征。1.6统计学处理采用SPSS 24.0软件进行数据处理，实验数据以均数标准差（x s）表示。组间比较采用方差分析，以P0.05 为差异有统计学意义。2结果2.1不同高脂饲料配方对大鼠一般情况的影响实验期间，对照组大鼠精神状态良好，毛发光亮，反应敏捷，灵活好动。与对照组比较，HFD1组、HFD2组、HFD3组大鼠腹部肿胀、精神萎靡、毛发日渐疏松且无光泽、反应迟钝；对照组大鼠大便呈正常黑褐色，而HFD1组、HFD2组大鼠大便呈黄褐色，HFD3 组大鼠大便呈淡绿色且有脂肪堆积。2.2不同高脂饲料配方对大鼠体质量的影响造模前各组大鼠体质量无明显差异。与对照组大鼠相比，造模1周后开始，持续至8周，HFD2组、HFD3组大鼠体质量明显增加（P0.01）；造模3周后开始，持续至8周，HFD1组大鼠体质量明显增加（P0.05或P0.01）。与HFD1组、HFD2组大鼠相比，HFD3组大鼠体质量增加更明显，如Tab.1所示。2.3不同高脂饲料配方对大鼠摄食量的影响造模前各组大鼠摄食量无明显差异。饲养8周期间，由Fig.1可知，各组大鼠摄食量变化趋势相似，但对照组大鼠摄食量基本高于各高脂饲料组，HFD1组、HFD2组、HFD3组大鼠摄食量依次减少，可能与高脂饲料中掺入了猪油、胆固醇等油腻性成分，热量较高，饲料变软、有异味等原因有关。35302520150 7 14 21 28 35 42 49 56Time(day)Food omtake(g)Control groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 groupFig.1The daily food intake of rats in each group(x s,n=10)545Chin J Clin Pharmacol Ther 2024 May;29(5)Tab.1The rat body weight per week in each group(x s,n=10)Peroid(week)012345678Control group(g)201.147.60255.785.03302.947.01335.783.42364.984.48389.104.79408.133.76424.733.16440.343.78HFD1 group(g)198.951.38266.911.86e317.891.63f356.746.46bf393.212.14cf419.274.04cf441.727.66cf463.536.41cf480.944.70cfHFD2 group(g)197.232.52280.184.35c329.453.42ce370.956.21cf409.558.56cf438.474.24cf463.163.01cf485.797.75cf506.348.82cfHFD3 group(g)198.485.91287.189.59c347.5711.93c394.048.66c440.9310.41c472.078.67c500.5212.34c527.377.15c545.429.67cbP0.05,cP0.01,compared with control group;eP0.05,fP0.01,compared with HFD3 group.2.4不同高脂饲料配方对大鼠肝功能水平的影响ALT和AST水平可反映肝细胞受损程度，是目前临床上最常用的肝功能检测指标。当肝损伤发生时，ALT、AST水平会显著升高。由Fig.2可知，与对照组相比，HFD1组大鼠血清ALT、AST水平均显著升高（P0.05），HFD2组、HFD3组显著或极显著升高（P0.05，P0.01）。此外，HFD1组、HFD2组大鼠血清 ALT 水平显著低于 HFD3 组（P0.05），AST 水平显著或极显著低于 HFD3 组（P0.05，P0.01）。说明HFD3高脂饲料诱导的NAFLD大鼠模型肝损伤程度更重。Control groupHFD1 groupbebecebfccABHFD2 groupHFD3 groupControl groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 group806040200200150100500ALT(U/L)AST(U/L)Fig.2Levels of ALT(A)and AST(B)of rats in different groups(x s,n=10)bP0.05,cP0.01,compared with control group;eP0.05,fP0.01,compared with HFD3 group.2.5不同高脂饲料配方对大鼠血脂水平的影响脂质代谢紊乱是引起NAFLD的重要因素，长期高脂饮食会引起大鼠体内脂质代谢紊乱，导致大鼠血清中TG、TC、LDL-C含量升高，HDL-C含量降低。由Fig.3可知，与对照组相比，HFD1组、HFD2组、HFD3 组大鼠血清 TG 含量均极显著升高（P546中国临床药理学与治疗学 2024 May;29(5)0.01）；HFD1 组大鼠血清 TC 含量显著升高（P0.05），HFD2组、HFD3组大鼠血清TC含量极显著升高（P0.01）；HFD2组大鼠血清HDL-C含量显著降低（P0.05），HFD3组大鼠血清HDL-C含量极显著降低（P0.01）；HFD1组、HFD2组大鼠血清LDL-C含量显著升高（P0.05），HFD3组大鼠血清LDL-C含量极显著升高（P0.01）。此外，HFD1组大鼠血清 TG 水平显著低于 HFD3 组（P0.05）；HFD1 组、HFD2 组大鼠血清 TC 水平显著或极显著低于HFD3 组（P0.05，P0.01）；HFD1 组、HFD2 组大鼠血清 HDL-C 水平显著或极显著高于 HFD3 组（P0.05，P0.01）；HFD1组、HFD2组大鼠血清LDL-C水平显著低于HFD3组（P0.05）。说明HFD3高脂饲料诱导的 NAFLD 大鼠模型脂质代谢异常更为明显。Control groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 groupcecc43210TG(mmol/L)43210Control groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 groupcebfcTC(mmol/L)86420Control groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 groupbefcHDL-C(mmol/L)1.51.00.50.0Control groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 groupbebecLDL-C(mmol/L)0.80.60.40.20.0ABCDFig.3Levels of TG(A),TC(B),HDL-C(C),and LDL-C(D)of rats in different groups(x s,n=10)bP0.05,cP0.01,compared with control group;eP0.05,fP0.01,compared with HFD3 group.2.6不同高脂饲料配方对大鼠血清炎性细胞因子的影响非酒精性脂肪肝状态下，肝脏受损，激活炎性反应，进而导致炎症因子的产生。由Fig.4 可知，与对照组相比，HFD1 组、HFD2 组、HFD3 组大鼠血清 TNF-含量均极显著升高（P0.01）；HFD1组大鼠血清IL-1、IL-6含量显著升高（P0.05），HFD2组、HFD3组大鼠血清IL-1、IL-6含量极显著升高（P0.01）。此外，HFD1组、HFD2组大鼠血清TNF-水平显著或极显著低于HFD3组（P0.05，P0.01）；HFD1组、HFD2组大鼠血清IL-1水 平 显 著 或 极 显 著 低 于 HFD3 组（P0.05，P0.01）；HFD1组、HFD2组大鼠血清IL-6水平显著低于HFD3组（P0.05）。说明HFD3高脂饲料诱导的NAFLD大鼠模型肝脏炎症更为严重。Control groupcfcecHFD1 groupHFD2 groupHFD3 group250200150100500TNF-(pg/mL)bfcecControl groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 group1209060300IL-1(pg/mL)bececControl groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 group1209060300IL-6(pg/mL)ABCFig.4Levels of TNF-(A),IL-1(B),and IL-6(C)of rats in different groups(x s,n=10)bP0.05,cP0.01,compared with control group;eP0.05,fP0.01,compared with HFD3 group.547Chin J Clin Pharmacol Ther 2024 May;29(5)2.7不同高脂饲料配方对大鼠Lee s指数、肝指数的影响与对照组相比，HFD2组大鼠的Lee s指数显著升高（P0.05），HFD3组大鼠的Lee s指数极显著升高（P0.01）；HFD1组、HFD2组大鼠的肝指数均显著升高（P0.05），HFD3组大鼠的肝指数极显著升高（P0.01）。此外，HFD1组、HFD2组大鼠肝指数显著低于HFD3组（P0.05）。如Tab.2所示，说明 HFD3 高脂饲料诱导的 NAFLD 大鼠模型肥胖状态，肝组织的异常改变更为明显。Tab.2The liver index and Lees index of rats in each group(x s,n=10)GroupControl groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 groupLees index321.8511.24361.3815.65379.6114.82b394.5814.07cLiver index(%)2.250.183.160.27be3.320.22be4.210.34cbP0.05,cP0.01,compared with control group;eP0.05,compared with HFD3 group.2.8不同高脂饲料配方大鼠影像学检查2.8.1不同高脂饲料配方大鼠超声检查超声影像学显示，对照组大鼠肝脏体积正常，被膜光滑，实质回声均匀，肝内管状结构显示尚清。HFD1组大鼠肝脏体积稍增大，被膜尚光滑，实质回声细腻，肝内管状结构显示尚清。HFD2 组大鼠肝脏体积稍增大，被膜尚光滑，实质回声增强，肝内管状结构显示欠清。HFD3组大鼠肝脏体积增大，被膜尚光滑，实质回声增强，后方回声衰减，肝内管状结构显示不清。见Fig.5。不同配方高脂饲料大鼠超声诊断情况如Tab.3所示，与对照组相比，HFD3 组差异具有统计学意义（P0.01）。与HFD3组相比，HFD1组、HFD2组差异均具有统计学意义（P0.05，P0.01）。提示HFD3高脂饲料诱导的NAFLD大鼠模型肝脏病变程度更为严重。ABCDFig.5Ultrasound image of rat livers in each groupA:control group;B:HFD1 group;C:HFD2 group;D:HFD3 group.Tab.3Ultrasound Diagnostic of rats in each group(n=10)GroupControl groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 groupNormal10430Mild NAFLD0662Moderate NAFLD0015Severe NAFLD0003Molding success rate(%)060f70e100ccP0.01,compared with control group;eP0.05,fP0.01,compared with HFD3 group.2.8.2不同高脂饲料配方大鼠CT检查对大鼠CT图像进行分析，见Fig.6A，得到其CT值及肝/脾CT 值比值。与对照组比较，HFD1 组、HFD2 组、HFD3组大鼠肝脏CT值显著降低或极显著降低（P0.05，P0.01），且 HFD1 组、HFD2 组大鼠肝脏 CT值显著或极显著高于 HFD3 组（P0.05，P0.01），见 Fig.6B。与对照组比较，HFD1 组、HFD2 组、HFD3 组大鼠肝/脾 CT 值比值均极显著降低（P0.01），且HFD1组、HFD2组大鼠肝/脾CT值比值显著或极显著高于 HFD3 组（P0.05，或P0.01），见Fig.6C。提示HFD3高脂饲料诱导的NAFLD大鼠模型脂肪肝更为严重。548中国临床药理学与治疗学 2024 May;29(5)ABCControl groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 groupControl groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 group100806040200Liver CT value(Hu)bfcecControl groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 group1.61.20.80.40.0Liver/spleen CT ra?oncfcecFig.6The CT image(A),CT value(B)and the ratio of CT values of the liver and the spleen(C)of rats in each group(x s,n=10)bP0.05,cP0.01,compared with control group;eP0.05,fP0.01,compared with HFD3 group.2.8.3不同高脂饲料配方大鼠 MRI 检查不同配方高脂饲料大鼠MRI检查采用磁共振“双回波同反相位（in-out phase）”序列扫描，通过观察肝实质同反相位图像是否有不一致的信号强度，来对各组大鼠做出NAFLD程度的判断。NAFLD时，反相位图像与同相位图像相比，肝脏信号减低，脂肪肝越严重，信号减低越明显。由Fig.7可知，与对照组比较，HFD1 组、HFD2 组、HFD3 组大鼠同/反相位图上肝脏实质信号差别明显，其中HFD3组大鼠信号减低最为明显。提示HFD3高脂饲料诱导的NAFLD大鼠模型脂肪肝程度更重。ABCDEFGHFig.7The MRI of rats in each groupA,B:control group;C,D:HFD1 group;E,F:HFD2 group;G,H:HFD3 group.2.9不同高脂饲料配方大鼠肝脏外观如Fig.8所示，对照组大鼠肝脏体积较小、外观红润、表面光滑、色泽鲜亮、边缘锐利、无脂肪变性。HFD1组大鼠肝脏表面光滑，较空白组光泽度差、有轻微脂肪变性。HFD2 组大鼠肝脏体积肥大、颜色较浅、光泽度差，表面粗糙凹凸不平，脂肪变性较HFD1组明显。HFD3组大鼠肝脏体积肥大、颜色不均、光泽度差，表面粗糙凹凸不平、边缘钝化、549Chin J Clin Pharmacol Ther 2024 May;29(5)易碎、出现土黄色局灶性脂肪沉积，包膜紧张且与周围组织有粘连。提示HFD3高脂饲料诱导的NAFLD大鼠模型脂肪变性程度更高。Control groupHFD1 groupHFD2 groupHFD3 groupFig.8Morphology of liver of rats in different groups3讨论我国NAFLD的发病率逐年上升，且趋向于年轻化，对其进行研究具有重大意义，而其动物模型的制作对研究NAFLD极为重要。NAFLD患病率的增加主要与食物数量及成分改变有关，多为高热量、高脂肪特征的西方膳食模式23。喂饲HFD诱发大鼠NAFLD是常用的动物模型建立方法，其病因、发病背景方面与此类似，且要求低、简便，实验条件易于控制、重复性好、采血量大24-25。HFD的配方是影响大鼠NAFLD模型成功建立的关键。近年众多研究表明，大鼠的HFD配方种类多样，但未见对其造模效果对比的研究报道。NAFLD建模所用HFD一般的配比为普通饲料60%88%，猪油 10%20%，胆固醇 1%2%，胆盐0.2%0.7%，及蛋黄粉、豆油等其他成分。HFD中胆固醇的添加使大鼠外源性胆固醇摄入增加，导致其累积在细胞内或血管内，从而脂肪肝形成。猪油主要由饱和脂肪酸甘油酯与不饱和脂肪酸甘油脂组成26。两者的含量对模型建立效果影响较大。因此本实验考察了 HFD1（普通饲料78.8%、猪油 10%、蛋黄粉 10%、胆固醇 1%、胆盐0.2%）、HFD2（普通饲料 63.6%、猪油 15%、蔗糖20%、胆固醇 1.2%、胆盐 0.2%）、HFD3（普通饲料67.5%、猪 油 20%、蔗 糖 10%、胆 固 醇 2%、胆 盐0.5%）3 种不同配方 HFD 建立 NAFLD 大鼠模型的效果，对造成大鼠NAFLD模型的HFD配方进行了筛选，其主要区别在于饲料中猪油和胆固醇的含量。综合起来，HFD3 组（基础饲料 67.5%、猪油20%、蔗糖 10%、胆固醇 2%、胆盐 0.5%）在各方面均有优势，提示对于建立稳定的大鼠 NAFLD 模型，HFD3组饲料为佳。NAFLD发生通常会出现不同程度的脂代谢紊乱和肝损伤27，本研究结果显示，HFD1组、HFD2组、HFD3组大鼠精神变差、活动减少、脱毛现象加重、摄食量减少、体质量明显升高、肝指数、Lee s指数显著提高，肝脏体积增大，边缘较钝，可见脂肪变性和沉积，且以HFD3组大鼠变化最明显。肝脏损伤，血清中的转氨酶水平显著上升，ALT和AST是反映肝细胞受损程度最灵敏的指标28，而TC、TG、HDL-C和LDL-C体现机体脂质水平29。此外，典型的炎症反应也是NAFLD的主要病理表现。实验结果显示 HFD1 组、HFD2 组、HFD3 组大鼠血清 ALT、AST、TC、TG、LDL-C 水平均显著升高，而HDL-C水平明显下降；促炎细胞因子IL-1、IL-6、TNF-含量显著增加，且HFD3组更为明显，表明HFD已造成大鼠血脂异常、肝脂质堆积以及肝损伤，HFD3 对于大鼠血清相关生化指550中国临床药理学与治疗学 2024 May;29(5)标、炎症因子水平影响更大，更利于构建 NAFLD模型30。目前国内研究大多以体质量、肝指数、Lee s指数、生化指标、肝脏病理等作为判定NAFLD建模是否成功的标准，存在创伤大、标本量取样不足等弊端，其中肝脏病理学检查是NAFLD评估的金标准，但由于其具有侵入性、采样变异性，且可重复性差等不足，选择活体筛查的方法很有必要。而B超、MRI和CT等无创影像学检查是临床脂肪肝的常规评估手段，操作简便、重复性好、敏感性相对较高，可依据其信号特征间接的判断肝脏病理学变化，且不经剖腹或处死动物便可进行随访31-32。本研究选择了B超、CT及MRI筛查的方法，判断大鼠NAFLD模型建立成功与否，结果显示HFD1组、HFD2组、HFD3组大鼠肝脏体积增大，肝实质回声增强，后方回声衰减，肝内管状结构显示不清；肝和脾的CT值比值明显降低；与同相位MRI相比，反相位图上肝脏信号明显减低，且HFD3对于大鼠影像学变化影响更大，更利于构建 NAFLD 模型。表明 HFD 可造成明显大鼠影像学肝组织脂肪性病变，B超、CT及MRI筛查结果与血清学等其他检测结果趋势一致，可能成为活体筛选NAFLD大鼠的理想指标，也为其他模型制备评价提供了新思路。综上所述，三种高脂饲料喂养 SD 大鼠 8 周后，均可建立非酒精性脂肪肝大鼠模型，但HFD3组诱导非酒精性脂肪肝大鼠模型优于其他两组，病变相对严重，预计维持时间也更长，更适于非酒精性脂肪肝病的机制研究和降脂药物的筛选。参考文献1 余远,陶飞燕,纪雪莹,等.藜麦皂苷的抗氧化活性及基于代谢组学探究其改善非酒精性脂肪肝的作用机制 J/OL.现代食品科技,2023-12-25.https:/doi.org/10.13982/j.mfst.1673-9078.2023.12.1615.2 马池发.营养与氧化应激在非酒精性脂肪肝发生机制中的作用D.北京:北京协和医学院,2021.3 马言,田高鹏,石兴文,等.探讨T2DM人群中25(OH)D与代谢相关性脂肪肝的相关性J.中国临床药理学与治疗学,2023,28(9):1018-1026.4 钱方方,戴梅清,赵丽,等.血清碱性磷酸酶与2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病的相关性分析J.临床肝胆病杂志,2023,39(1):83-88.5Stefan N,Cusi K.A global view of the interplay be-tween non-alcoholic fatty liver disease and 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